Name: technique for obtaining mesenchymal stem cell from adipose tissue and stromal vascular fraction characterization in long-term cryopreservation
Uploaded: 2021-12-30T16:00:00
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हम उन रोगियों को धन्यवाद देते हैं जिन्होंने स्वेच्छा से भाग लिया और अस्पताल साओ पाउलो के चिकित्सा और नर्सिंग कर्मचारियों को धन्यवाद दिया। इस अध्ययन को फंडाको डी एम्पारो ए पेसक्विसा डो एस्टाडो डी साओ पाउलो (एफएपीईएसपी) और कॉन्सेलो नेशनल डी डेसेनवोल्विमेंटो साइंटिफिको और टेक्नोलोगिको (सीएनपीक्यू), ब्राजील द्वारा समर्थित किया गया था।

वर्तमान अध्ययन को यूएनआईएफईएसपी की आचार समिति (प्रोटोकॉल संख्या: 0029/2015 सीएएई: 40846215.0.0000.5505) द्वारा अनुमोदित किया गया है, जो हेलसिंकी की घोषणा (2004) के अनुसार रोगियों से लिखित सूचित सहमति प्राप्त करने के बाद किया...

अलगाव उपज यह अच्छी तरह से स्थापित है कि क्रायोप्रिजर्वेशन प्रक्रिया, अक्सर सेलुलर थेरेपी में आवश्यक होती है, जिसके परिणामस्वरूप महत्वपूर्ण सेल हानि होती है, कभी-कभी 50% 29,30,35 से अधिक ह...

मानव मेसेनकाइमल स्टेम सेल बुनियादी और लागू अनुसंधान दोनों में फायदेमंद हैं। इस वयस्क सेल प्रकार का उपयोग नैतिक मुद्दों को पार करता है - भ्रूण या अन्य कोशिकाओं के उपयोग की तुलना में- ऑटोलॉगस ऊतक पुनर्जनन इंजीनियरिंग और सेल थेरेपी1 में अध्ययन के सबसे आशाजनक क्षेत्रों में से एक है, जैसे कि नियोप्लास्टिक क्षेत्र, अपक्षयी रोगों का उपचार, और पुनर्निर्माण सर्जरी क्षेत्र 2,3,4 में चिकित्सीय अनुप्रयोग। 5. यह पहले बताया गया है कि वसा ऊतक 6,7 के स्ट्रोमल संवहनी कोशिका अंश में मेसेनकाइमल मल्टीपोटेंट और प्लुरिपोटेंट स्टेम कोशिकाओं का एक प्रचुर स्रोत है। इन एडीएससी को सेल थेरेपी और प्रत्यारोपण / जलसेक में उपयोग के लिए महान उम्मीदवार माना जाता है क्योंकि विस्तार के लिए मजबूत क्षमता वाली कोशिकाओं की काफी संख्या को न्यूनतम इनवेसिव प्रक्रिया 5,8 से उच्च उपज के साथ आसानी से प्राप्त किया जा सकता है।
यह भी प्रदर्शित किया गया था कि वसा ऊतक दो अन्य स्रोतों (अस्थि मज्जा और गर्भनाल ऊतक) की तुलना में मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं को प्रदान करने की अधिक क्षमता प्रस्तुत करता है। खराब इम्युनोजेनिक होने और मेजबान ऊतक में एकीकृत करने और आसपासके ऊतकों के साथ बातचीत करने की उच्च क्षमता होने के अलावा, एडीएससी में सेल लाइनों में भेदभाव की एक बहुशक्तिशाली क्षमता है, जिसमें उचित संस्कृति स्थितियोंके तहत चोंड्रोजेनिक, ओस्टोजेनिक और मायोजेनिक भेदभाव की रिपोर्ट है, और कोशिकाओं में, जैसे अग्नाशय, हेपेटोसाइट्स, और न्यूरोजेनिक कोशिकाएं 14,15,16।
वैज्ञानिक समुदाय इस बात से सहमत है कि मेसेनकाइमल स्टेम सेल का इम्यूनोमॉड्यूलेटरी प्रभाव उनके भेदभाव गुण की तुलना में सेल थेरेपी 17,18,19 के लिए कार्रवाई का एक अधिक प्रासंगिक तंत्र है। एडीएससी उपयोग के सबसे महत्वपूर्ण गुणों में से एक ऑटोलॉगस इन्फ्यूजन या ग्राफ्टिंग की संभावना है, जो कई बीमारियों के लिए एक वैकल्पिक उपचार बन गया है। पुनर्योजी चिकित्सा के लिए, एडीएससी का उपयोग पहले से ही यकृत क्षति, हृदय की मांसपेशियों के पुनर्निर्माण, तंत्रिका ऊतक के उत्थान, कंकाल की मांसपेशी समारोह में सुधार, हड्डी पुनर्जनन, कैंसर चिकित्सा और मधुमेह उपचार20,21 के मामलों में किया गया है।
इस तारीख तक, एडीएससी की क्षमता के मूल्यांकन के लिए 263 पंजीकृत नैदानिक परीक्षण हैं, जो संयुक्त राज्य अमेरिका के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान22 की वेबसाइट पर सूचीबद्ध हैं। वसा ऊतक की कटाई के लिए विभिन्न प्रोटोकॉल स्थापित किए गए हैं, लेकिन नैदानिक उपयोगके लिए एडीएससी को अलग करने के लिए एक मानकीकृत विधि के बारे में साहित्य में कोई आम सहमति नहीं है। सर्जरी के दौरान और बाद में लिपोएस्पिरेट प्रसंस्करण विधियां सीधे सेल व्यवहार्यता, अंतिम सेलुलर उपज25, और एडीएससी आबादी की गुणवत्ता को प्रभावित कर सकतीहैं। सर्जिकल पूर्व-उपचार के संबंध में, यह अच्छी तरह से स्थापित नहीं है कि कौन सी सर्जिकल पूर्व-उपचार तकनीक अलगाव के बाद व्यवहार्य कोशिकाओं की अधिक महत्वपूर्ण संख्या उत्पन्न करती है या क्या वसा ऊतक में इंजेक्ट किया गया एनेस्थेटिक समाधान सेल उपज और इसके कार्यों को प्रभावित करताहै। इसी तरह, वसा कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए तकनीकों के बीच अंतर व्यवहार्य एडीएससी 20 की संख्या में70% तक की कमी का कारण बन सकता है। साहित्य के अनुसार, अल्ट्रासाउंड सहित उच्च व्यवहार्यता के साथ सेल आबादी प्राप्त करने के लिए यांत्रिक उपचार से बचा जाना चाहिए, क्योंकि वे वसा ऊतक20 को तोड़ सकते हैं। हालांकि, सिरिंज के साथ मैनुअल वसा आकांक्षा विधि कम हानिकारक है, जिससे कम सेल विनाश होता है, जिसमें ट्यूमसेंट लिपोसक्शन सबसे अच्छी गुणवत्तावाले कोशिकाओं की एक महत्वपूर्ण संख्या उत्पन्न करता है।
यह तकनीक लिडोकेन और एपिनेफ्रीन के साथ एक खारा समाधान का उपयोग करती है जिसे लिपोसक्शन क्षेत्र में इंजेक्ट किया जाता है। इंजेक्शन के प्रत्येक 3 एमएल वॉल्यूम के लिए, 1 एमएल एस्पिरेटेड है। इस अध्ययन में, गीला लिपोसक्शन तकनीक का प्रदर्शन किया गया था, जिसमें प्रत्येक 1 एमएल एड्रेनालाईन और खारा घोल इंजेक्ट करने के लिए, 0.2 एमएल वसा ऊतक एस्पिरेटेड होता है। पाचन एंजाइमों, विशेष रूप से कोलेजनेज का उपयोग, एडीएससी को अलग करने की प्रक्रिया के लिए आम है।
प्रयोगशाला में पहले अलगाव चरण के बाद, अंतिम गोली को स्ट्रोमल संवहनी अंश (एसवीएफ) कहा जाता है। इसमें एंडोथेलियल अग्रदूत कोशिकाओं, एंडोथेलियल कोशिकाओं, मैक्रोफेज, चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं, लिम्फोसाइटों, पेरिसाइट, प्री-एडिपोसाइट्स और एडीएससी सहित विभिन्न सेल प्रकार27 शामिल हैं, जो आसंजन में सक्षम हैं। एक बार इन विट्रो संस्कृतियों से अंतिम अलगाव समाप्त हो जाने के बाद, प्लास्टिक का पालन नहीं करने वाली कोशिकाओं को मध्यम आदान-प्रदान में समाप्त कर दिया जाता है। आठ सप्ताह के विस्तार, मध्यम परिवर्तन और मार्ग के बाद, एडीएससी फ्लास्क20 में अधिकांश सेल आबादी का प्रतिनिधित्व करते हैं। संभावित भविष्य की चिकित्सा के लिए पृथक वसा-व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं का उपयोग करने के सबसे महत्वपूर्ण लाभों में से एक क्रायोप्रिजर्वेशन की संभावना है। यह प्रदर्शित किया गया था कि क्रायोप्रिजर्व्ड लिपोएस्पिरेट ठंड28 के 6 सप्ताह के बाद भी एसवीएफ कोशिकाओं का एक संभावित स्रोत है, क्रायोप्रिजर्वेशन29 के 2 साल बाद भी जैविक गतिविधि के साथ, और संस्कृति30 में बढ़ने और अंतर करने की पूरी क्षमता है। हालांकि, पिघलने की प्रक्रिया के दौरान, कोशिकाओं का काफी प्रतिशत आमतौर परखो जाता है 31। इसलिए, लिपोएस्पिरेट हटाने की प्रक्रिया और सेल अलगाव के निम्नलिखित तरीकों को उच्चतम सेल उपज सुनिश्चित करनी चाहिए।
यह अध्ययन एडीएससी को इकट्ठा करने और अलग करने के लिए एक तेज पद्धति का वर्णन करता है, जो सेलुलर चिकित्सीय की बेहतर दक्षता के लिए उच्च सेलुलर उपज और व्यवहार्यता का प्रदर्शन करता है। इसके अलावा, दीर्घकालिक एसवीएफ क्रायोप्रिजर्वेशन के बाद इस बेहतर तकनीक के प्रभाव का मूल्यांकन किया गया था।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.8 mL cryovials</td>
			<td>Nunc Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>340711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>150 mL polyvinyl chloride transfer bag</td>
			<td>JP FARMA</td>
			<td>80146150059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2% Alizarin Red S Solution, pH 4.2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adrenaline (1 mg/mL)</td>
			<td>Hipolabor</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>1,01,647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic 100x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCalibur Flow Cytometer using BD CellQues Pro Analysis</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride 10%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine gluconate 4%</td>
			<td>VIC PHARMA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase, Type I, powder</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17018029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11966025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS no calcium, no magnesium (Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline Gibco Cell Therapy Systems)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1285801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS with calcium (Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline Gibco Cell Therapy Systems)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1285601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 4%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>1,00,496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted light microscope</td>
			<td>Nikon Eclipse TS100</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live and Dead Cell Assay</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>01-3333-41 | 01-3333-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal antibody: CD105</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>745927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal antibody: CD11B</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>746004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal antibody: CD19</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>745907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal antibody: CD34</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>747822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal antibody: CD45</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>M0701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal antibody: CD73</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>746000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal antibody: CD90</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>553011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal antibody: HLA-DR</td>
			<td>BD BioSciences</td>
			<td>340827</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mr. Frosty Freezing Container</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (phosphate buffered saline) 1x pH 7.4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>&#160;10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Adipogenesis Differentiation Kit</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1007001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1007101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Osteogenesis Differentiation Kit</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1007201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile connector with one spike with needle injection site</td>
			<td>Origen Biomedical Connector, USA</td>
			<td>NA</td>
			<td>Code mark: IBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue solution 0.4%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>93595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 0.25% 1x, phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

technique for obtaining mesenchymal stem cell from adipose tissue and stromal vascular fraction characterization in long-term cryopreservation

वसा ऊतक से प्राप्त मानव मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाएं तेजी से आकर्षक हो गई हैं क्योंकि वे उचित विशेषताएं दिखाते हैं और पुनर्योजी नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए एक सुलभ स्रोत हैं। वसा-व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए विभिन्न प्रोटोकॉल का उपयोग किया गया है। यह लेख एडीएससी की अधिक महत्वपूर्ण मात्रा प्राप्त करने के लिए एक बेहतर समय-बचत प्रोटोकॉल के विभिन्न चरणों का वर्णन करता है, जिसमें दिखाया गया है कि संस्कृति विस्तार के लिए व्यवहार्य कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए एडीएससी को क्रायोप्रिजर्व और पिघलाना कैसे है। नौ रोगियों के पेट क्षेत्र से 26 सेमी तीन-छेद और 3 मिमी कैलिबर सिरिंज लिपोसक्शन का उपयोग करके एक सौ मिलीलीटर लिपोएस्पिरेट एकत्र किया गया था, जो बाद में वैकल्पिक एब्डोमिनोप्लास्टी से गुजरे थे। स्टेम सेल अलगाव को डलबेको के फॉस्फेट बफर्ड सलाइन (डीपीबीएस) समाधान के साथ धोने की एक श्रृंखला के साथ किया गया था, जो कैल्शियम और कोलेजनेज के उपयोग के साथ पूरक था। स्ट्रोमल संवहनी अंश (एसवीएफ) कोशिकाओं को क्रायोप्रिजर्व किया गया था, और इम्यूनोफेनोटाइपिंग द्वारा उनकी व्यवहार्यता की जांच की गई थी। एसवीएफ सेलुलर उपज 15.7 x 105 कोशिकाओं / एमएल थी, जो 6.1-26.2 कोशिकाओं / एमएल के बीच थी। अनुगामी एसवीएफ कोशिकाएं औसतन 7.5 (±4.5) दिनों के बाद संगम पर पहुंचीं, जिसमें औसत सेलुलर उपज 12.3 (± 5.7) x 105 कोशिकाएं / एमएल थीं। 8 महीने, 1 वर्ष और 2 वर्षों के बाद पिघले हुए एसवीएफ की व्यवहार्यता 47.7% (±24.64) के औसत के साथ 23.06% -72.34% के बीच थी, जिसमें सबसे कम व्यवहार्यता दो साल की ठंड के मामलों के साथ संबंधित थी। कोलेजनेज पाचन के कम समय के साथ वसा वर्षा के लिए कैल्शियम और बैग आराम के समय के साथ पूरक डीपीबीएस समाधान के उपयोग के परिणामस्वरूप स्टेम सेल अंतिम सेलुलर उपज में वृद्धि हुई। व्यवहार्य स्टेम कोशिकाओं की उच्च पैदावार प्राप्त करने के लिए विस्तृत प्रक्रिया पिछले अध्ययनों की तकनीकों की तुलना में समय और सेलुलर उपज के बारे में अधिक कुशल थी। क्रायोप्रिजर्वेशन की लंबी अवधि के बाद भी, एसवीएफ में व्यवहार्य एडीएससी कोशिकाएं पाई गईं।

अध्ययन किए गए नौ व्यक्तियों के लक्षण वर्णन, उनकी उम्र, वजन, ऊंचाई और बीएमआई सहित, तालिका 1 में दिखाए गए हैं।
शुरू में प्रस्तुत सेलुलर उपज के अनुसार, संस्कृति में टीका लगाए गए सेल वॉल्यूम ?...

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Technique for Obtaining Mesenchymal Stem Cell from Adipose Tissue and Stromal Vascular Fraction Characterization in Long-Term Cryopreservation

वर्तमान प्रोटोकॉल एडीएससी अलगाव के लिए एक बेहतर पद्धति का वर्णन करता है जिसके परिणामस्वरूप साहित्य की तुलना में समय लाभ के साथ जबरदस्त सेलुलर उपज होती है। यह अध्ययन दीर्घकालिक क्रायोप्रिजर्वेशन के बाद अपेक्षाकृत बड़ी संख्या में व्यवहार्य कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए एक सीधा तरीका भी प्रदान करता है।

दीर्घकालिक क्रायोप्रिजर्वेशन में वसा ऊतक और स्ट्रोमल संवहनी अंश लक्षण वर्णन से मेसेनकाइमल स्टेम सेल प्राप्त करने की तकनीक

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible ...

यहां, हमने चिकित्सीय चरणों के उपयोग के लिए अच्छी और व्यवहार्य कोशिकाओं को प्राप्त करने और संरक्षित करने के लिए प्रोटोकॉल का प्रदर्शन किया है, जैसे कि प्लुरिपोटेंट मेसेनकाइमल कोशिकाओं का जलसेक। इसका मुख्य लाभ, कि इस तकनीक का उपयोग करके, हम एकत्रित ऊतक से कोशिकाओं के अलगाव चरण में प्राप्त व्यवहार्य सेल वॉल्यूम बनाम समय प्राप्त कर सकते हैं। इस तकनीक को उन सभी बीमारियों या स्थितियों की ओर बढ़ाया जा सकता है जहां हेटेरोजेनिक दवा और सेल थेरेपी लागू की जाती है।इस विधि को दवा परीक्षण जैसे क्षेत्रों में साइटोजेनोमिक स्थिरता परीक्षण के लिए भी लागू किया जा सकता है, जहां दीर्घकालिक सेल संस्कृतियों को प्रोत्साहित किया जा सकता है। जब भी जीवित कोशिकाओं में हेरफेर करें, शांत और आश्वस्त रहें। सेप्सिस के साथ अत्यधिक सावधानी बरतें और किसी भी प्रतिकूल ता का निरीक्षण करने और अच्छे निर्णय लेने के लिए एक वैज्ञानिक की आंखों के साथ लगातार सतर्क रहें।बैग का वजन करके और डिजिटल गैर-संपर्क अवरक्त नैदानिक थर्मामीटर के साथ तापमान का आकलन करके शुरू करें। बैग को लामिनार प्रवाह कक्ष के अंदर पांच मिनट के लिए छोड़ दें ताकि चिकना परतों को अवक्षेपित किया जा सके और कोशिकाओं वाले ऊतक को अलग किया जा सके। ट्रांसफर बैग में कैल्शियम के साथ 100 मिलीलीटर डीपीबीएस इंजेक्ट करें और इसे हाथों से मिलाएं।इसे पांच मिनट के लिए छोड़ दें। फिर अधिकांश बेसल तरल को छोड़ने के लिए बैग एडाप्टर से जुड़े 60 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें। इस प्रक्रिया को दो बार दोहराएं।बैग में 100 मिलीलीटर पाचन समाधान जोड़ें, और इसे धीमी गति से हिलाने के तहत 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर छोड़ दें। फिर सभी बैग की सामग्री को चार 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूबों में स्थानांतरित करें और उन्हें 22 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए 400 जी पर सेंट्रीफ्यूज करें। सुपरनैटेंट को छोड़ दें और सेल पेलेट में 20% भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक डीएमईएम कम ग्लूकोज के 5 मिलीलीटर जोड़ें।पांच मिनट के लिए 10 माइक्रोलीटर सेलुलर सस्पेंशन के साथ आसुत जल में 0.05% पर ट्राइपैन ब्लू के 10 माइक्रोलीटर का एक ताजा घोल मिलाएं। 20X आवर्धन पर एक उल्टे प्रकाश माइक्रोस्कोप का उपयोग करें और न्यूबॉयर सेल गिनती कक्ष में व्यवहार्य कोशिकाओं की गणना करें। सेल पेलेट को क्रायो-सुरक्षात्मक माध्यम में 1 मिलियन कोशिकाओं प्रति मिलीलीटर की एकाग्रता पर निलंबित करें।फिर इस मिश्रण का 1 मिलीलीटर क्रायो शीशियों में रखें। 1 डिग्री सेल्सियस प्रति मिनट की शीतलन दर के साथ एक फ्रीजिंग कंटेनर का उपयोग करें और एक वर्ष के लिए 80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। एक वर्ष के बाद, इसे तरल नाइट्रोजन वाष्प चरण में डूबे मानक कैसेट बक्से में स्टोर करें।नौ रोगियों से प्रक्रिया के विभिन्न चरणों से डेटा इस तालिका में प्रस्तुत किया गया है। प्रारंभिक सेलुलर उपज के अनुसार, प्रत्येक नमूने के लिए कोशिकाओं की एक चर मात्रा निर्धारित की गई थी। उच्च सेलुलर उपज वाले नमूनों का 1 मिलीलीटर, मध्यवर्ती सेलुलर उपज वाले नमूनों के लिए 1.1 मिलीलीटर और कम सेलुलर उपज वाले नमूने के लिए 2 मिलीलीटर।ट्रिप्सिनाइजेशन से पहले एक ही संगम देखे जाने पर भी मार्ग से पहले सेलुलर उपज मोटे तौर पर भिन्न होती है। इसलिए, यहां कोशिकाएं परतों में बढ़ी हो सकती हैं। प्रतिनिधि छवि प्रकाश माइक्रोस्कोपी पर अलगाव के बाद पहले मार्ग पर प्लास्टिक-अनुयायी मेसेनकाइमल एडीएससी को दिखाती है।कोशिकाएं प्लास्टिक-और फाइब्रोब्लास्ट जैसी आकृति विज्ञान के लिए आसंजन दिखाती हैं। ट्रिपैन ब्लू परख में न्यूबॉयर कक्ष में गिने जाने वाले व्यवहार्य कोशिकाओं को यहां दिखाया गया है। छह रोगियों से प्रवाह साइटोमेट्री डेटा इस तालिका में प्रस्तुत किए गए हैं।इन सीडी 45 नकारात्मक कोशिकाओं से, स्टेम सेल मार्करों के विभिन्न संयोजनों के साथ एडीएससी का प्रतिशत निर्धारित किया गया था। प्रतिनिधि छवियां क्रायो-संरक्षण के आठ महीने बाद केस नौ के एसवीएफ में स्टेम सेल से जुड़े मार्करों के लिए सकारात्मक कोशिकाओं की उप-जनसंख्या दिखाती हैं। यहां, आर 1 आगे स्कैटर बनाम साइड स्कैटर प्लॉट में विश्लेषण किया गया कुल सेलुलर क्षेत्र है।और आर 2 सीडी 45 नकारात्मक क्षेत्र है। सीडी 73, सीडी 90, और सीडी 105 आबादी इस क्षेत्र में सकारात्मक हैं। चोंड्रोसाइट्स, ओस्टियोसाइट्स और एडिपोसाइट्स में एडीएससी भेदभाव यहां दिखाया गया है।इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, धीरे-धीरे हिलाना याद रखें, अधिमानतः हाथों से, जबकि आसंजन और फफोले का निरीक्षण करने के लिए 30 मिनट के लिए 37 सेल्सियस डिग्री पर छोड़ दें। वर्क रूम का तापमान 25 सेल्सियस डिग्री के आसपास रखें, और बहुत बड़े तापमान पर किसी भी थर्मल झटके से बचें। हमने यहां जो तकनीक दिखाई है, उसका उपयोग प्लुरिपोटेंट मेसेनकाइमल कोशिकाओं को अन्य ऊतकों से सफलतापूर्वक अलग करने के लिए किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Cardiomyocyte Nuclei from Post-mortem Tissue

Cardiomyocyte नाभिक का पोस्टमार्टम ऊतक से अलगाव

Identification of cardiomyocyte nuclei has been challenging in tissue sections as most strategies rely only on cytoplasmic marker proteins1. Rare events ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

मानव दंत लुगदी स्टेम सेल के अलगाव विशेषता, और तुलनात्मक भेदभाव दो अलग अलग तरीकों का उपयोग करके स्थायी दांत से व्युत्पन्न

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Surgical Placement of Catheters for Long-term Cardiovascular Exercise Testing in Swine

स्वाइन में लंबे समय तक हृदय व्यायाम परीक्षण के लिए कैथेटर के सर्जिकल प्लेसमेंट

This protocol describes the surgical procedure to chronically instrument swine and the procedure to exercise swine on a motor-driven treadmill. Early ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

एक गैर-diathermy विधि के माध्यम से चमड़े के नीचे पेट वसा ऊतक बायोप्सी के लिए एक तकनीक

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

रोगसूचक अंत-neuromata के उपचार के लिए Stromal संवहनी अंश-समृद्ध वसा भ्रष्टाचार

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

वसा ऊतक के प्रत्यारोपण-व्युत्पन्न स्टेम सेल शीट एक चूहा मॉडल में आंशिक Colectomy के बाद रिसाव को कम करने के लिए

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

प्रवाह Cytometry का उपयोग करके मानव वसा ऊतक में प्रतिरक्षा कोशिकाओं का लक्षण वर्णन

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration

वसा ऊतक के उत्पादन के नैदानिक प्रोटोकॉल-संभावित उपास्थि पुनर्जनन के लिए Stromal संवहनी अंश व्युत्पंन

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the ...

An Enzyme-free Method for Isolation and Expansion of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells

मानव Adipose-व्युत्पन्न मेसेनचिमल स्टेम सेल के अलगाव और विस्तार के लिए एक एंजाइम मुक्त विधि

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of multipotent cells that can be isolated from various adult and fetal tissues, including adipose tissue. ...

Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping

आरएनए विश्लेषण और मैक्रोफेज फेनोटाइपिंग के लिए उपयुक्त मानव आंत वसा ऊतक से व्यवहार्य एडिपोसाइट्स और स्ट्रोमल संवहनी अंश का अलगाव

Visceral adipose tissue (VAT) is an active metabolic organ composed mainly of mature adipocytes and stromal vascular fraction (SVF) cells, which release ...