Name: a modified simple method for induction of myocardial infarction in mice
Uploaded: 2021-12-03T13:00:00
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この研究は、中国国家自然科学基金会(81930007、81625002、81800307、81470389、81500221、81770238)、上海優秀学術指導者プログラム(18XD1402400)、上海市科学技術委員会(201409005200)、上海浦江人材プログラム(2020PJD030)、中国ポスドク科学基金会(2020M671161、BX20190216)からの助成金によって支援されました。

動物実験は、上海交通大学医学部仁済病院の実験動物福祉倫理委員会(R52021-0506)から必要なすべての承認を得て実施されます。この研究には、8〜10週齢の雌雄のC57BL / 6Jマウスが使用されました。
1.簡易麻酔器の準備(オプション)
注:これはオプションの術前セットアップであり、セクション2で説明したように滴定可能な麻酔に置き換えるこ?...

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	<li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+efficient+method+for+in+vivo+cardiac-specific+gene+manipulation+by+intramyocardial+injection+in+mice.">A simple and efficient method for in vivo cardiac-specific gene manipulation by intramyocardial injection in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57074 (2018).</li><li>Pell, S., Fayerweather, W. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141 (9), 139 (2020).</li><li>Cahill, T. J., Choudhury, R. P., Riley, P. 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Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50318 (2013).</li><li>Johns, T. N., Olson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+myocardial+infarction.+I.+A+method+of+coronary+occlusion+in+small+animals.">Experimental myocardial infarction. I. A method of coronary occlusion in small animals.</a> Annals of Surgery. 140 (5), 675-682 (1954).</li><li>Ahn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+C57BL/6+mice.">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in C57BL/6 mice.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 286 (3), 1201-1207 (2004).</li><li>Gao, E., Koch, W. 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本報告は、Gao16によって報告された方法から修正された、容易に入手可能な材料を用いたマウスにおけるMI誘導のための簡単なプロトコルを実証した。マウスMIモデルは、MI後の機能障害とリモデリングのメカニズム探索と薬物スクリーニングに不可欠です12。心筋梗塞誘導の既存の技術の中で、冠動脈結紮術が最も一般的に行われているものです。冠動脈結...

心筋梗塞(MI)は、世界中の死亡および障害の重要な原因の1つです1,2,3,4,5。タイムリーな再灌流にもかかわらず、現在、MI後の心臓リモデリングを治療するための効果的な治療法が不足しています。これに対応して、MI 6,7,8 のメカニズムの探索と治療の活用にかなりの努力が払われてきました。注目すべきは、MIモデルの確立がこれらの目的を達成するための前提条件であることです。
小動物にMIモデルを誘導するために、いくつかの方法(例えば、イソプロテレノール治療、凍結傷害、冠動脈結紮術など)が提案されている。イソプロテレノール治療は、心筋梗塞を誘導する簡便な方法であるが、標的部位の梗塞を誘発することはできない9。凍結傷害は、直接的な虚血ではなく、氷晶の生成と細胞膜の破壊を介して心筋壊死を引き起こします10。対照的に、冠動脈結紮術は、閉塞部位と梗塞領域の範囲を正確に制御し、梗塞後のリモデリング応答を忠実に再現します11,12。冠動脈結紮術は通常、挿管、人工呼吸器、開胸術の後に行われますが、これは技術的に困難です13,14。冠動脈結紮術のためのいくつかの修正されたプロトコル(例:.、換気なし)が報告され、MIの誘導を増強したが、詳細な視覚的実証が不足している15,16,17。これらの問題は、MIモデルを用いた研究に従事したいグループにとって、財政的および技術的に大きな障壁となっています。本報告では、マウスにおける心筋梗塞誘導のアプローチについて紹介する。現在の方法は簡単で時間を節約でき、ほとんどの検査室ですぐに見られる手術器具や機器を使用します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>T8877-25G</td>
			<td>TTC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>YUANKANG</td>
			<td>4-0</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave</td>
			<td>HIRAYAMA</td>
			<td>HVE-50</td>
			<td>Sterilization for the solid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Qinghai Pharmaceutical FACTORY Co., Ltd.</td>
			<td>H10940181</td>
			<td>reduce post-operative pain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugation tube</td>
			<td>Biological Hope</td>
			<td>1850-K</td>
			<td>15ML</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>ZIKER BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>ZK-L2701</td>
			<td>Depilation agent for laboratory animals</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F12028</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas filter</td>
			<td>ZHAOXIN</td>
			<td>SA-493</td>
			<td>Operator protection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD</td>
			<td>20071302</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Beijing PDV</td>
			<td>LG-150B</td>
			<td>Operating lamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-mosquito hemostat</td>
			<td>FST</td>
			<td>13011-12</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>BINXIONG</td>
			<td>42180104</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle and the 6-0 silk suture</td>
			<td>JIAHE</td>
			<td>SC086</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>ShangHaiJZ</td>
			<td>J32030</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>ShangHaiJZ</td>
			<td>J32010</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine swabs</td>
			<td>SingleLady</td>
			<td>GB26368-2010</td>
			<td>Skin disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>CNSTRONG</td>
			<td>JYJ1030</td>
			<td>Surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile eye cream</td>
			<td>Shenyang Xingqi Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>H10940177</td>
			<td>prevent corneal dryness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-high resolution ultrasound imaging system for small animals</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 2100</td>
			<td>Echocardiographic analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified simple method for induction of myocardial infarction in mice

心筋梗塞(MI)は、主要な死因の1つです。心筋梗塞モデルは、心筋梗塞後のリモデリングの病態メカニズムの調査や新規治療法の評価に広く用いられています。心筋梗塞を誘発するために、さまざまな方法(例、イソプロテレノール治療、凍結傷害、冠動脈結紮術など)が用いられてきた。 イソプロテレノール治療および凍結傷害と比較して、冠動脈結紮術は、心筋梗塞後の虚血反応および慢性リモデリングをよりよく反映している可能性がある。しかし、マウスにおける冠動脈結紮術の従来の方法は技術的に困難である。現在の研究は、容易に入手可能な材料を用いてマウスにMIを誘導するための単純で効率的なプロセスについて説明しています。マウスの胸部皮膚は安定した麻酔下で切り開かれた。心臓は、大胸筋と小胸筋を鈍く分離した後、肋間腔を介して直ちに外在化されました。左前下行枝(LAD)は、その起点から3mmの6-0縫合糸で結紮されました。LADライゲーション後、2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド(TTC)で染色すると、心筋梗塞の誘導が成功し、心筋梗塞後の瘢痕サイズの経時的変化が示されました。一方、生存解析の結果は、心筋梗塞後7日以内の明白な死亡率を示しており、これは主に心臓破裂によるものであった。さらに、心筋梗塞後の心エコー検査評価では、収縮機能障害の誘導と心室リモデリングの成功が示されました。習得すると、すぐに入手できる材料を使用して、2〜3分以内にマウスでMIモデルを確立できます。

実験プロトコルといくつかの重要なステップを 図1に示します。簡易麻酔装置は麻酔を誘発した。 図2Aに示すように、誘発された麻酔は、通常の呼吸数(試験されたマウスでは90〜107呼吸/分)に反映されるように安定していました。冠動脈結紮術後、TTC染色解析により、心筋梗塞の誘発に成功し、心筋梗塞後の瘢痕サイズの経時的変化が示されました...

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A Modified Simple Method for Induction of Myocardial Infarction in Mice

適切な麻酔下で、マウスの心臓を肋間腔から外在化し、ほとんどの検査室で容易に入手できる材料を使用して左前下行動脈(LAD)を結紮することにより、心筋梗塞の誘発に成功しました。

マウスにおける心筋梗塞の誘導のための改良簡便法

Myocardial infarction (MI) represents one of the leading causes of death. MI models are widely used for investigating the pathomechanisms of post-MI ...

本報告では、マウスにおける心筋梗塞の誘発に関する独自のアプローチを提示する。現在の方法は簡単で時間を節約でき、ほとんどの検査室ですぐに見られる手術用チューブと機器を使用します。心筋梗塞モデルの確立は、心筋梗塞後のリモデリングの過去のメカニズムと新規治療法のバリエーションを調査するための前提を提供します。脱毛クリームをマウスの胸に塗り、1分間待ちます。次に、脱毛クリームと髪を濡れたガーゼでやさしく拭き取ります。マウスを手術台に仰臥位で固定します。本文に記載されているように手術部位を消毒します。次に、消毒された領域の周囲に滅菌ドレープを置きます。剣状突起と脇の下をつなぐ線に沿って0.5センチの皮膚を切り、鉗子を使って大胸筋と小胸筋を鈍く分離します。マイクロモスキート止血剤を使用して4番目の肋間スペースを開きます。左手の人差し指で心臓を第4肋間腔に押し込むことで、心臓を外在化します。左手で心臓を固定し、左前下行枝をその起点から3mmの6/0縫合糸で結紮します。心臓を胸腔にすばやく戻します。胸腔を軽く押して、胸腔から空気を排出します。術後の疼痛管理のために、術後最大72時間、4〜6時間ごとにブプレノルフィンを皮下注射します。.マウスを加熱パッドの上に置いて、麻酔から回復します。安楽死させたマウスを手術台に仰臥位で固定します。上腹部を約3〜4センチ切開します。胸腔の両側から肋骨を切り取り、横隔膜を取り除きます。脳室内注射により、10ミリリットルの低温4°C1X PBSで心臓を灌流します。次に、大動脈根を切り落として心臓を採取し、すぐに摂氏マイナス80度で保管します。凍った心臓を氷の上でカミソリの刃を使って厚さ1ミリの部分にスライスします。調製したハートスライスを、1X PBS1本に溶解した1%TTC溶液中で、摂氏37度で10〜15分間インキュベートします。次に、デジタルカメラを使用してスライスを撮影します。冠動脈結紮術後、TTC染色解析により、心筋梗塞の誘発に成功し、心筋梗塞後の瘢痕サイズの経時的変化が示されました。生存解析の結果、雄および雌のC57BL/6Jマウスにおいて心筋梗塞後7日以内の明白な死亡率が示された。心室破裂は、心筋梗塞後の死亡の一般的な理由であった。心筋梗塞後の心エコー検査評価では、収縮機能障害と心室リモデリングの誘導が成功したことが示されました。心臓を外在化しようとするときは、まず胸腔を押さえず、抵抗に追従して、加重された賞賛に対して方向を調整する必要があることを示します。この手順に続いて、ウイルスベクターまたは細胞の心筋内注射を実施して、心臓病の問題における遺伝子治療または細胞療法の有効性を試験することができる。

Research

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