Name: measurement of protein import capacity of skeletal muscle mitochondria
Uploaded: 2022-01-07T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Protein Import Capacity of Skeletal Muscle Mitochondria at JoVE.com

Yazarlar, mcgill üniversitesinden Dr. G.C. Shore'a, Washington Tıp Fakültesi'nden Dr. A. Strauss'a ve La Trobe Üniversitesi'nden Dr.M.T. Ryan'a bu araştırma için kullanılan ifade plazmidlerinin orijinal bağışları için teşekkür eder. Bu çalışma, Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendisliği Araştırma Konseyi'nden (NSERC) D. A. Hood'a fon sağlanmasıyla desteklendi. D. A. Hood aynı zamanda Hücre Fizyolojisi'nde Kanada Araştırma Başkanı'nın sahibidir.

Bu deneylerde kullanılan tüm hayvanların bakımı York Üniversitesi'ndeki hayvan bakımevindedir. Deneyler, York Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi'nin onayıyla Kanada Hayvan Bakımı Konseyi yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilir (İzin: 2017-08).
1. İskelet kasından subsarkolemal ve intermyofibriller mitokondrilerin fonksiyonel izolasyonu
<ol><li>Reaktif hazırlama:<ol>
<li>Tablo 1'de belirtildiği gibi tüm arabellekleri ve ortamları hazırlayın.</li>
	...

<ol>
	<li>Kirkwood, S. P., Munn, E. A., Brooks, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+reticulum+in+limb+skeletal+muscle.">Mitochondrial reticulum in limb skeletal muscle.</a> The American Journal of Physiology. 251 (3), 395-402 (1986).</li><li>Glancy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Power+grid+protection+of+the+muscle+mitochondrial+reticulum.">Power grid protection of the muscle mitochondrial reticulum.</a> Cell Reports. 19 (3), 487-496 (2017).</li><li>Vincent, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+3D+mapping+of+the+human+skeletal+muscle+mitochondrial+network.">Quantitative 3D mapping of the human skeletal muscle mitochondrial network.</a> Cell Reports. 26 (4), 996-1009 (2019).</li><li>Ogata, T., Yamasaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-high-resolution+scanning+electron+microscopy+of+mitochondria+and+sarcoplasmic+reticulum+arrangement+in+human+red,+white,+and+intermediate+muscle+fibers.">Ultra-high-resolution scanning electron microscopy of mitochondria and sarcoplasmic reticulum arrangement in human red, white, and intermediate muscle fibers.</a> Anatomical Record. 248 (2), 214-223 (1997).</li><li>Hood, D. A., Tryon, L. D., Carter, H. N., Kim, Y., Chen, C. C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+mechanisms+regulating+muscle+mitochondrial+biogenesis.">Unravelling the mechanisms regulating muscle mitochondrial biogenesis.</a> Biochemical Journal. 473, 2295-2314 (2016).</li><li>Perry, C. G. R., Kane, D. A., Lanza, I. R., Neufer, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+assessing+mitochondrial+function+in+diabetes.">Methods for assessing mitochondrial function in diabetes.</a> Diabetes. 62, 1032-1036 (2013).</li><li>Holloszy, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+adaptations+in+muscle.">Biochemical adaptations in muscle.</a> The Journal of Biological Chemistry. 242 (9), 2278-2282 (1967).</li><li>Cogswell, A. M., Stevens, R. J., Hood, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+skeletal+muscle+mitochondria+from+subsarcolemmal+and+intermyofibrillar+isolated+regions.">Properties of skeletal muscle mitochondria from subsarcolemmal and intermyofibrillar isolated regions.</a> The American Journal of Physiology. 264, 383-389 (1993).</li><li>Koves, T. R., Noland, R. C., Bates, A. L., Henes, S. T., Muoio, D. M., Cortright, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subsarcolemmal+and+intermyofibrillar+mitochondria+play+distinct+roles+in+regulating+skeletal+muscle+fatty+acid+metabolism.">Subsarcolemmal and intermyofibrillar mitochondria play distinct roles in regulating skeletal muscle fatty acid metabolism.</a> American Journal of Physiology - Cell Physiology. 288, 1074-1082 (2005).</li><li>Bizeau, M. E., Willis, W. T., Hazel, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+responses+to+endurance+training+in+subsarcolemmal+and+intermyofibrillar+mitochondria.">Differential responses to endurance training in subsarcolemmal and intermyofibrillar mitochondria.</a> Journal of Applied Physiology. 85 (4), 1279-1284 (1998).</li><li>Krieger, D. A., Tate, C. A., McMillin-Wood, J., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Populations+of+rat+skeletal+muscle+mitochondria+after+exercise+and+immobilization.">Populations of rat skeletal muscle mitochondria after exercise and immobilization.</a> Journal of Applied Physiology: Respiratory, Environmental and Exercise Physiology. 48 (1), 23-28 (1980).</li><li>Calvo, S. E., Clauser, K. R., Mootha, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MitoCarta2.0:+An+updated+inventory+of+mammalian+mitochondrial+proteins.">MitoCarta2.0: An updated inventory of mammalian mitochondrial proteins.</a> Nucleic Acids Research. 44 (1), 1251-1257 (2016).</li><li>Wiedemann, N., Pfanner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+machineries+for+protein+import+and+assembly.">Mitochondrial machineries for protein import and assembly.</a> Annual Review of Biochemistry. 86 (1), 685-714 (2017).</li><li>Backes, S., Herrmann, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+translocation+into+the+intermembrane+space+and+matrix+of+mitochondria:+mechanisms+and+driving+forces.">Protein translocation into the intermembrane space and matrix of mitochondria: mechanisms and driving forces.</a> Frontiers in Molecular Biosciences. 4, 83 (2017).</li><li>Harbauer, A. B., Zahedi, R. P., Sickmann, A., Pfanner, N., Meisinger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+protein+import+machinery+of+mitochondria+-+A+regulatory+hub+in+metabolism,+stress,+and+disease.">The protein import machinery of mitochondria - A regulatory hub in metabolism, stress, and disease.</a> Cell Metabolism. 19 (3), 357-372 (2014).</li><li>Jin, S. M., Lazarou, M., Wang, C., Kane, L. A., Narendra, D. P., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+membrane+potential+regulates+PINK1+import+and+proteolytic+destabilization+by+PARL.">Mitochondrial membrane potential regulates PINK1 import and proteolytic destabilization by PARL.</a> The Journal of Cell Biology. 191 (5), 933-942 (2010).</li><li>Matsuda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PINK1+stabilized+by+mitochondrial+depolarization+recruits+Parkin+to+damaged+mitochondria+and+activates+latent+Parkin+for+mitophagy.">PINK1 stabilized by mitochondrial depolarization recruits Parkin to damaged mitochondria and activates latent Parkin for mitophagy.</a> The Journal of Cell Biology. 189 (2), 211-221 (2010).</li><li>Fiorese, C. J., Schulz, A. M., Lin, Y. -. F., Rosin, N., Pellegrino, M. W., Haynes, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+ATF5+mediates+a+mammalian+mitochondrial+UPR.">The transcription factor ATF5 mediates a mammalian mitochondrial UPR.</a> Current biology. 26 (15), 2037-2043 (2016).</li><li>Quiros, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-omics+analysis+identifies+ATF4+as+a+key+regulator+of+the+mitochondrial+stress+response+in+mammals.">Multi-omics analysis identifies ATF4 as a key regulator of the mitochondrial stress response in mammals.</a> The Journal of Cell Biology. 216 (7), 2027-2045 (2017).</li><li>Takahashi, M., Hood, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+import+into+subsarcolemmal+and+intermyofibrillar+skeletal+muscle+mitochondria.+Differential+import+regulation+in+distinct+subcellular+regions.">Protein import into subsarcolemmal and intermyofibrillar skeletal muscle mitochondria. Differential import regulation in distinct subcellular regions.</a> The Journal of Biological Chemistry. 271 (44), 27285-27291 (1996).</li><li>Hood, D. A., Memme, J. M., Oliveira, A. N., Triolo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+skeletal+muscle+mitochondria+in+health,+exercise,+and+aging.">Maintenance of skeletal muscle mitochondria in health, exercise, and aging.</a> Annual Review of Physiology. 81, (2019).</li><li>Joseph, A., Hood, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrion+plasticity+of+TOM+complex+assembly+in+skeletal+muscle+mitochondria+in+response+to+chronic+contractile+activity.">Mitochondrion plasticity of TOM complex assembly in skeletal muscle mitochondria in response to chronic contractile activity.</a> Mitochondrion. 12 (2), 305-312 (2012).</li><li>Singh, K., Hood, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+denervation-induced+muscle+disuse+on+mitochondrial+protein+import.">Effect of denervation-induced muscle disuse on mitochondrial protein import.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 300 (1), 138-145 (2011).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+mitochondrial+morphology+and+defective+protein+import+reveal+novel+roles+for+Bax+and/or+Bak+in+skeletal+muscle.">Altered mitochondrial morphology and defective protein import reveal novel roles for Bax and/or Bak in skeletal muscle.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 305 (5), 502-511 (2013).</li><li>Lai, N., Kummitha, C., Rosca, M., Fujioka, H., Tandler, B., Hoppel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mitochondrial+subpopulations+from+skeletal+muscle:+optimizing+recovery+and+preserving+integrity.">Isolation of mitochondrial subpopulations from skeletal muscle: optimizing recovery and preserving integrity.</a> Acta Physiologica. 25 (2), 13182 (2019).</li><li>Nargund, A. M., Pellegrino, M. W., Fiorese, C. J., Baker, B. M., Haynes, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+import+efficiency+of+ATFS-1+regulates+mitochondrial+UPR+activation.">Mitochondrial import efficiency of ATFS-1 regulates mitochondrial UPR activation.</a> Science. 337 (6094), 587-590 (2012).</li><li>Picard, M., Taivassalo, T., Gouspillou, G., Hepple, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria:+Isolation,+structure+and+function.">Mitochondria: Isolation, structure and function.</a> Journal of Physiology. 589 (18), 4413-4421 (2011).</li><li>Kras, K. A., Willis, W. T., Barker, N., Czyzyk, T., Langlais, P. R., Katsanos, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subsarcolemmal+mitochondria+isolated+with+the+proteolytic+enzyme+nagarse+exhibit+greater+protein+specific+activities+and+functional+coupling.">Subsarcolemmal mitochondria isolated with the proteolytic enzyme nagarse exhibit greater protein specific activities and functional coupling.</a> Biochemistry and Biophysics Reports. 6, 101-107 (2016).</li><li>S&#225;nchez-Duarte, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nicorandil+affects+mitochondrial+respiratory+chain+function+by+increasing+complex+III+activity+and+ROS+production+in+skeletal+muscle+mitochondria.">Nicorandil affects mitochondrial respiratory chain function by increasing complex III activity and ROS production in skeletal muscle mitochondria.</a> Journal of Membrane Biology. 253 (4), 309-318 (2020).</li><li>I&#241;igo, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor-&#945;+in+female+skeletal+muscle+is+not+required+for+regulation+of+muscle+insulin+sensitivity+and+mitochondrial+regulation.">Estrogen receptor-&#945; in female skeletal muscle is not required for regulation of muscle insulin sensitivity and mitochondrial regulation.</a> Molecular Metabolism. 34 (2020), 1-15 (2020).</li><li>Newsom, S. A., Stierwalt, H. D., Ehrlicher, S. E., Robinson, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate-specific+respiration+of+isolated+skeletal+muscle+mitochondria+after+1+h+of+moderate+cycling+in+sedentary+adults.">Substrate-specific respiration of isolated skeletal muscle mitochondria after 1 h of moderate cycling in sedentary adults.</a> Medicine and Science in Sports and Exercise. 53 (7), 1375-1384 (2021).</li><li>Takahashi, M., Chesley, A., Freyssenet, D., Hood, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+activity-induced+adaptations+in+the+mitochondrial+protein+import+system.">Contractile activity-induced adaptations in the mitochondrial protein import system.</a> The American Journal of Physiology. 274 (5), 1380-1387 (1998).</li><li>Kravic, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+mammalian+skeletal+muscle,+phosphorylation+of+TOMM22+by+protein+kinase+CSNK2/CK2+controls+mitophagy.">In mammalian skeletal muscle, phosphorylation of TOMM22 by protein kinase CSNK2/CK2 controls mitophagy.</a> Autophagy. 8627, 01-65 (2017).</li><li>Opali&#324;ska, M., Meisinger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+control+via+the+mitochondrial+protein+import+machinery.">Metabolic control via the mitochondrial protein import machinery.</a> Current Opinion in Cell Biology. 33, 42-48 (2015).</li><li>Gerbeth, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-induced+regulation+of+protein+import+receptor+tom22+by+cytosolic+and+mitochondria-bound+kinases.">Glucose-induced regulation of protein import receptor tom22 by cytosolic and mitochondria-bound kinases.</a> Cell Metabolism. 18 (4), 578-587 (2013).</li></ol>

Mitokondriler, hücreler içindeki sentezleri ve genişlemeleri için hem nükleer hem de mitokondriyal genomların ifade ve koordinasyonuna benzersiz bir şekilde bağlıdır. Bununla birlikte, nükleer genom mitokondriyal proteomun büyük çoğunluğunu (%99) kodlar ve bu, protein ithalat makinelerinin mitokondriyal biyogenezin desteklenmesindeki öneminin altını çizmektedir. İthalat aynı zamanda önemli bir sinyal olayı olarak hizmet eder, çünkü ithalat başarısızlığı, katlanmış protein yanıtının v...

Mitokondriler, farklı hücre tiplerindeki karmaşık morfolojilerde bulunan ve hücresel sağlık için kritik olan artan bir işlev dizisine sahip olduğu kabul edilen organellerdir. Bu nedenle, artık sadece enerji üreten organellere indirgenemezler. Mitokondriler, temel metabolik düzenleyiciler, hücre kaderinin belirleyicileri ve işlevleri genel hücresel sağlığın yararlı göstergeleri olarak hizmet edebilecek sinyal merkezleridir. İskelet kas hücrelerinde elektron mikroskopi çalışmaları, şu anda iskelet kası aktivite düzeylerindeki değişikliklerin yanı sıra yaş ve hastalıkla birlikte son derece dinamik ve uyarlanabilir olduğu kabul edilen bir bağlantı derecesi sergileyen coğrafi olarak farklı subsarkolemal (SS) ve intermyofibriller (IMF) mitokondrilerin varlığını ortaya koymaktadır. Kastaki mitokondriyal içerik ve fonksiyon çok sayıda şekilde değerlendirilebilir5,6 ve hücresel milieu7,8'in etkisinden farklı mitokondrilerin solunum ve enzimatik kapasitelerini (Vmax) daha iyi anlamak için geleneksel organel izolasyon yöntemleri uygulanmıştır. Özellikle, bu geleneksel yöntemler, subsarkolemal ve intermiyofibriller bölgelerden izole edilen mitokondriler arasındaki ince biyokimyasal ayrımları ortaya çıkarmış ve bu hücre altı bölgelerde metabolizma için olası fonksiyonel etkileri ortaya çıkarmıştır8,9,10,11.
Mitokondri biyogenez, hem nükleer hem de mitokondriyal DNA'dan gen ürünlerinin katkısını gerektirmede benzersizdir. Bununla birlikte, bunların büyük çoğunluğu çekirdekten türetilmiştir, çünkü mtDNA transkripsiyonu sadece 13 proteinin sentezine yol açar. Mitokondri normalde çeşitli metabolik yollarda yer alan >1000 proteinden oluştuğundan, organel biyogenez, uygun stoichiometry ve fonksiyonu korumak için sitozolden çeşitli mitokondriyal alt bölmelere öncül proteinlerin sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir ithalat ve montaj aracı gerektirir12,13. Mitokondrilere yönelik nükleer kodlanmış proteinler normalde onları organellere hedefleyen ve alt bölümler arası lokalizasyonlarını kolaylaştıran bir mitokondriyal hedefleme dizisi (MTS) taşırlar. Matrise bağlı proteinlerin çoğu bölünebilir bir N-terminal MTS içerirken, dış veya iç mitokondriyal membran için uygun olanlar genellikle iç hedefleme alanlarına sahiptir14. İthalat işlemi, organel13'e giriş için birden fazla yol sağlayan bir dizi farklı kanal tarafından gerçekleştirilir. Dış membran (TOM) kompleksinin translokazı, sitozolden iç zar (Tİm) kompleksinin translokazı tarafından tanındıkları intermembran uzayına öncüller. Bu kompleks, proteazların N-terminali hedefleme ön sırasını ayırdığı matrise nükleer kodlanmış öncüllerin içe aktarıcılarından sorumludur. Dış zara yönelik proteinler tom kompleksi aracılığıyla doğrudan bu zara yerleştirilebilirken, iç zara yönelik olanlar bir TIM proteini, özellikle TIM22 tarafından yerleştirilir. İthalatlarından sonra, proteinler yerleşik proteazlar ve refakatçiler tarafından daha fazla işlenir ve genellikle elektron taşıma zincirinde bulunanlar gibi daha büyük kompleksler oluşturmak için birleştirilir.
Mitokondriyal protein ithalatının kendisi de mitokondriyal sağlığın bir ölçümü olarak hizmet eder, çünkü bu işlem membran potansiyelinin varlığına ve ATP15 şeklinde bir enerji kaynağına dayanır. Örneğin, membran potansiyeli dağıldığında, protein kinaz PINK1 organel tarafından alınamaz ve bu, mitophagy16,17 adı verilen bir yoldan organeldeki bozulmanın başlangıcını tetikleyen fosforilasyon sinyallerine yol açar. Benzer durumlarda, ithalat engellendiğinde, ATF5 proteini organel içine giremez ve daha sonra UPR gen ekspresyonunun yukarı regülasyonu için bir transkripsiyon faktörü olarak hizmet ettiği çekirdeğe yer değişir18,19. Bu nedenle, protein ithalat verimliliğini ölçmek organel sağlığı hakkında kapsamlı bir içgörü sağlarken, gen ekspresyon yanıtı çekirdeğe retrograd sinyal verme derecesini belirtmek için kullanılabilir.
Mitokondri biyogenezinin ve genel olarak hücresel sağlığın bariz önemine rağmen, memeli mitokondrilerinde ithalat yolu dikkat çekici bir şekilde yetersizdir. Bu raporda, öncül proteinlerin iskelet kası mitokondrilerine ithalatının ölçülmesinde yer alan belirli adımları açıklar ve ithalat sisteminin kas ve disuse değişikliklere adaptif tepkisini göstermek için veriler sağlayarak, protein ithalatının iskelet kasının adaptif plastisitesine katkısını gösterir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2% BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35S-methionine</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>NEG709A500UC</td>
			<td>Purchase requires a valid radioisotope permit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blotting paper; Whatman 3MM CHR Paper</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>05-714-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cassette for film</td>
			<td>Kodak</td>
			<td>Kodak Xomatic</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugation Tube</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>3138-0050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>C298-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9779-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>EDT002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E4378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Dryer</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>Model 583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Drying Kit</td>
			<td>Sigma or BioRad</td>
			<td>Z377570-1PAK or OW-GDF-10</td>
			<td>Various options are commercially available through many companies, these are just as few examples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Caledon Laboratory Chemicals</td>
			<td>5350-1-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Avanti J-25 Centrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>IKA</td>
			<td>T25 Digital Ultra Turrex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoamylalcohol, or 3-methylbutanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I9392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAc</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>POA301.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M7G</td>
			<td>New England Biolab</td>
			<td>S1404S</td>
			<td>Dilute with 1000ul 20mM HEPES to make 1mM stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>MAG510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>M65-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>MOP001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SOD001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NTP</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>R0191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT Plasmid</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Donated from Dr. G. C. Shore, McGill University, Montreal, Canada; alternative available through Addgene, plasmid #71877</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pGEM4Z/hTom40 Plasmid</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Donated from Dr. M. T. Ryan, La Trobe University, Melbourne, Australia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pGMDH Plasmid</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Donated from Dr. A. Strauss, Washington University School of Medicine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol:Chloroform:Isoamyalcohol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3803</td>
			<td>Can also be made with the ratio provided</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphorus Film</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>BAS-IP MS 2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit reticulocyte lysate</td>
			<td>Promega</td>
			<td>L4960</td>
			<td>Avoid freeze-thaw; aliquot lysate upon arrival; amino acids are provided in the kit as well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAsin</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotor for High Speed Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>JA-25.50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SDS001.500</td>
			<td>Caution: harmful if ingested or inhaled, wear a mask.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>SAA 304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Carbonate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium salicylate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>106601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorbitol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP6 RNA Polymerase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>Nanodrop 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spermidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-2626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 RNA Polymerase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P2075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tabletop Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AccuSpin Micro 17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic acid</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A322-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>TRS001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of protein import capacity of skeletal muscle mitochondria

Mitokondri, enerji arzını ve hücrenin genel sağlığını belirleyen önemli metabolik ve düzenleyici organellerdir. İskelet kasında mitokondri, küçük oval organellerden geniş, retikülum benzeri bir ağa kadar bir dizi karmaşık morfolojide bulunur. Mitokondriyal retikülün enerji talebindeki değişiklikler gibi çeşitli uyaranlara yanıt olarak nasıl genişlediğini ve geliştiğini anlamak uzun zamandır bir araştırma konusudur. Bu büyümenin veya biyogenezin önemli bir yönü, başlangıçta nükleer genom tarafından kodlanan, sitozolde sentezlenen ve çeşitli mitokondriyal alt bölmelere dönüştürülen öncül proteinlerin ithalatıdır. Mitokondri, protein ithalat makineleri (PIM) olarak bilinen birçok seçici iç ve dış zar kanalını içeren bu ithalat süreci için sofistike bir mekanizma geliştirmiştir. Mitokondryona ithalat, uygulanabilir membran potansiyeline ve oksidatif fosforilasyon yoluyla organel türevi ATP'nin mevcudiyetine bağlıdır. Bu nedenle ölçümü organel sağlığının bir ölçüsü olarak hizmet edebilir. PIM ayrıca iskelet kasında hücrenin enerji durumuna sıkıca bağlı yüksek düzeyde adaptif plastisite sergiler. Örneğin, egzersiz eğitiminin ithalat kapasitesini artırdığı, kas disuse'un ise mitokondriyal içerik belirteçlerindeki değişikliklerle çakıştığı gösterilmiştir. Protein ithalatı mitokondrilerin biyogenezinde ve genişlemesinde kritik bir adım olmasına rağmen, iskelet kasında süreç yaygın olarak incelenmemektedir. Bu nedenle, bu makale, ilgili yöntemlerin daha iyi anlaşılmasını ve egzersiz, sağlık ve hastalıkta organel ciro için yolun öneminin takdirini teşvik etmek için protein ithalat kapasitesini ölçmek için iskelet kasından izole edilmiş ve tamamen işlevsel mitokondrilerin nasıl kullanılacağını özetlemektedir.

Bu protokolün fonksiyonel ve sağlam izole iskelet kası mitokondrilerine ithalat oranını belirlemek için geçerli bir test olduğunu kapsamlı bir şekilde gösterdik. Tedavi edilmeyen koşullara kıyasla, malat dehidrogenaz (MDH) gibi tipik öncül proteinlerin matrise ithal edilmesi membran potansiyeline duyarlıdır, çünkü bir solunum zinciri uncoupler olan valinomycin tarafından inhibe edilebilir (Şekil 2A). Triton X-100 deterjanı varlığında mitokondriyal i...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Protein Import Capacity of Skeletal Muscle Mitochondria at JoVE.com

Measurement of Protein Import Capacity of Skeletal Muscle Mitochondria

Mitokondri, iskelet kasında yüksek düzeyde fenotipik plastisite gösteren anahtar metabolik organellerdir. Sitozolden protein ithalatı, retikülün genişlemesi ve mitokondriyal fonksiyonun sürdürülmesi için gerekli olan organel biyogenez için kritik bir yoldur. Bu nedenle, protein ithalatı hücresel sağlığın barometresi olarak hizmet eder.

İskelet Kas Mitokondrilerinin Protein İthalat Kapasitesinin Ölçümü

Mitochondria are key metabolic and regulatory organelles that determine the energy supply as well as the overall health of the cell. In skeletal muscle, ...

Mitokondriler, kendi DNA'larına sahip olmalarına rağmen nükleer genoma büyük ölçüde güveniyorlar. Bu nedenle, son derece düzenlenmiş bir ithalat mekanizması gereklidir. Bu yöntem, sürecin ve dış uyaranlara nasıl uyum sağlayabileceğinin incelenmesine yardımcı olur.Bu, mitokondrilerin çeşitli alt bölmelerine protein ithalatını nicel olarak değerlendirmek için mevcut tek biyokimyasal tekniktir. Mitokondrilerin uygulanabilirliği çeşitli hastalık durumlarına dahil edilir, bu nedenle protein ithalatının nasıl düzenlendiğini anlamak mitokondriyi hedefleyen yeni terapötik yaklaşımlara katkıda bulunmaya yardımcı olabilir. Mitokondrilerin canlılığını ve bütünlüğünü sağlamak için izolasyon sırasında ekstra bakım gereklidir.Dokunun iyice kıyılması ve sonraki tüm peletlerin hafifçe yeniden dürtmesi gereklidir. Prosedürü gösteren Ashley Oliveira olacak, laboratuvarımda doktora öğrencisi. Mitokondrilerin iskelet kasından izolasyona başlaması için, kaslardan yağ ve bağ dokusunu çıkarın ve homojen bir bulamaç olana kadar önceden soğutulmuş bir saat camı üzerindeki dokuları kıyın.Kıyılmış dokuyu önceden soğutulmuş 50 mililitrelik plastik santrifüj tüpüne yerleştirin ve tam ağırlığı kaydedin. Daha sonra, kıyılmış dokuyu ATP içeren tampon 1 ile on kat seyreltin. Kas örneğini 9,8 Hertz güç çıkışında 10 saniye boyunca homojenize etmek için sekiz milimetrelik çift bıçaklı homojenizatör kullanın ve görünür kas parçalarının kalmamasını sağlayın.Numuneyi 9.000x G'de dört santigrat derecede 10 dakika döndürdükten sonra, peletı resüspenzyon ortamının kabaca 95 mikrolitresinde dikkatlice yeniden ıslatın. Üstnatantı atmadan önce numuneyi santrifüjlayın ve peleti bir P-200 pipet kullanarak yaklaşık 180 mikrolitre resüspenzyon ortamı ile hafifçe yeniden biriktirin. İn vitro çeviri için, ithalat deneyinde ve bir çeviri şeridinde kullanılacak mitokondri örneği başına 20 mikrolitre sağlamak için yeterli çeviri reaksiyon karışımı hazırlayın.Kuluçka reaksiyonunu 30 dakika boyunca 30 santigrat dereceye yerleştirin. Çeviri reaksiyonunun başlamasından 15 dakika sonra, 90 mikrogram mitokondriyi steril 1,5 mililitre tüplere ayırın ve 10 dakika boyunca 30 santigrat derecede kuluçka öncesi yapın. Steril 1,5 mililitrelik yeni bir tüp setinde, 75 mikrogram mitokondriyi çeviri reaksiyonunun 18 mikrolitresi ile birleştirin ve tüpü istenen süre boyunca 30 santigrat derecede kuluçkaya yatırın.Çeviri reaksiyonunun kalan hacmini buzda tutun. İthalat reaksiyonunu uygun kuluçka süresinden sonra sonlandırmak için, tüpü buza yerleştirmek için 30 santigrat dereceden çıkarın ve ardından sakkaroz yastığı ile tüpün üzerine dikkatlice ithalat reaksiyonunu aktarın. Örnekleri sakkaroz minderi ile 17.000x G'de dört santigrat derecede 15 dakika santrifüjleyin.Bir P-1000 pipet kullanarak, peletin rahatsız etmeden üsttant dikkatlice çıkarın. Dış zara ithal etmek için, Reaksiyonu Tom40'a kullanarak gerçekleştirin ve peleti 50 mikrolitre taze hazırlanmış 0,1 molar sodyum karbonat içinde yeniden atın ve 30 dakika boyunca buz üzerinde kuluçkaya yatırın. Kuluçkadan sonra, numuneyi 14.000x G'de dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin.Daha sonra, örnekleri yazıda açıklandığı gibi SDS-PAGE elektroforezi için hazırlayın. Kalan çeviri reaksiyonunun üç mikrolitresini 37 mikrolitre lizis tamponu ve beş mikrolitre numune boyası ile karıştırarak kontrol çeviri şeridini hazırlayın. Numuneleri 95 santigrat derecede beş dakika kaynatın ve mitokondrileri saçmaktan kaçınmak için düşük hızda hafifçe aşağı doğru döndürün.SDS poliakrilamid jeline numuneler uyguladıktan sonra, jeli% 5 trikloroasetik asit veya TCA'da, sürekli karıştırarak beş dakika boyunca bir duman kaputunda kaynatın. Ardından, jeli çift damıtılmış suya, dakikada 50 dönüşte bir dakika boyunca dönen bir tabağa yerleştirin. Jeli 10 milimolar Tris'te dönen bir tabakta dakikada 50 dönüşte beş dakika yıkayın.Proteini çökeltmek için, jeli 30 dakika boyunca dönen bir plaka üzerinde kaplayacak kadar tek azı dişi salisitik asit hacminde yıkayın. Jeli susuzmak için, jel kurutucunun gözenekli yatağına büyük bir lekeleme kağıdı ve jelin uygulanacağı alana bir kağıt havlu yaprağı yerleştirin. Daha sonra, 11 santimetreye 9 santimetrelik şişkin kağıt parçası kesin ve kağıdı kağıt havluya yerleştirin.Jeli kaptan çıkarmak ve jeli ilk parçanın üzerine düz bir şekilde bırakmak için 11 santimetreye 9 santimetrelik ikinci bir kağıt kullanın. Jelin üzerine biraz daha büyük bir plastik parçası yerleştirin, sargının altında kırışıklık veya kabarcık olmamasını sağlayın. Daha sonra jel kurutucunun plastik kapağını sargının üzerine yerleştirin.Vakumun sesini aç. Plastik kapağın köşesini kaldırarak ve kapağın yeniden mühürlenebilmesini bekleyerek plastik kapağın bir conta oluşturduğundan emin olun. Jel kurutucuyu 90 dakika boyunca çalışacak şekilde kapatın, 30 santigrat dereceden başlayarak kademeli olarak 80 santigrat dereceye ulaşın ve koşunun sonunda 30 santigrat dereceye geri dönün.Jeli kurutma işleminde kullanılan plastik sargıya sarın. Susuz kaldıktan sonra jel katılaşmalı ve kağıt inceliğinde hissedecektir. Susuz jeli üzerine fosforlu bir film ile bir kasete yerleştirin.Fosforlu görüntüleme yapabilen uygun bir görüntüleyiçle otoradyografi kullanarak jeli görselleştirmeden önce filmi 24 saat boyunca maruz bırakın. Temsili analiz, subsarkolemal ve intermyofibriller mitokondrilerde malat dehidrogenaz veya MDH için normal ithalat oranlarını ve öncüL MDH'nin çeviri ürününü göstermektedir. Valinomisinin eklenmesi, SS ve IMF mitokondri matrisine MDH protein ithalatını engelledi.Benzer şekilde, deterjan Triton X, iç zarın çözünmesi nedeniyle her iki alt fraksiyona MDH ithalatını engelledi. Protein ithalatının tahmini artan süreler için gerçekleştirildi ve sonuç olarak ortaya çıkan veriler, ithalatın zamana bağlı bir süreç olduğunu ve SS ve IMF mitokondrilerinin ithalat için farklı oranlara veya kapasitelere sahip olduğunu gösterdi. Sıçanlar elektriksel uyarıma maruz kaldığında, Tom 40'ın dış zara ithalatı, kronik olarak uyarılmış hayvanlardan gelen kaslarda kontrollere kıyasla daha yüksekti.Ornitin transkarbamylaz veya OCT ithalatı, mitokondriyal matrise her kuluçka noktasında artırıldı ve kronik olarak uyarılan kastan mitokondrilerde 1.4 kat artışa neden oldu. Protein ithalatı mitokondriyal içerik indeksi ile pozitif olarak ilişkiliydi ve COX aktivitesi ile değerlendirildi. Mitokondriyal aracılı kesme dekontozu araştırırken, Bax ve Bak çift nakavt hayvanlar mitokondriyal matrise azaltılmış protein ithalatı sergilediler.Altı haftalık gönüllü tekerlek çalışması, çift nakavtlı hayvanlardaki ithalat kusurunu kurtardı. İthalat reaksiyonunun süresi ve hangi proteinin ithal edileceğinin gibi değişkenleri göz önünde bulundurmak önemlidir. Sitozolitik fraksiyonlar, sitozolizik faktörlerin ithalat oranını nasıl etkileyebileceğini anlamak için reaksiyona dahil edilebilir.Alternatif olarak, proteinlerin seçici olarak nasıl ithal edilebileceğini anlamak için inkübasyondan önce proteinler değiştirilebilir. Bu teknik, çeşitli hastalık durumlarında ortaya çıkabilecek mitokondriyal miyopatilerin karmaşık etiyolojilerini anlamaya yardımcı olabilir.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biochemistry

Unit 1

Intracellular Compartments and Protein Sorting

SCIENTISTS IN ACTION

A Filtration-based Method of Preparing High-quality Nuclei from Cross-linked Skeletal Muscle for Chromatin Immunoprecipitation

Kromatin İmmunopresipitasyon için Çapraz Bağlı İskelet Kasında Yüksek Kaliteli Nükleerlerin Hazırlanması İçin Filtrasyona Dayalı Bir Yöntem

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful method to determine protein binding to chromatin DNA. Fiber-rich skeletal muscle, however, has been a ...

Improved Protocol for Chromatin Immunoprecipitation from Mouse Skeletal Muscle

Kromatin Immunoprecipitation üzerinden fare kas iskelet için geliştirilmiş iletişim kuralı

We describe an efficient and reproducible protocol for the preparation of chromatin from adult mouse skeletal muscle, a physically resistant tissue with a ...

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Yalıtım ve solunum ölçümleri mitokondri Arabidopsis thaliana üzerinden

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

Mitokondrial kalsiyum akını izole mitokondri ve kültürlü hücreleri analizleri

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Studying Protein Import into Chloroplasts Using Protoplasts

Önceki kullanarak kloroplast eğitim Protein içe aktarma işlemi

The chloroplast is an essential organelle that is responsible for various cellular processes in plants, such as photosynthesis and the production of many ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Transkripsiyon faktörü-DNA bağlayıcı Affinities floresans mikroskobu kullanarak rekabet titrasyon tarafından yüksek hassasiyet ölçümü

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Protein katlanması, taşıma ve canlı hücreler radyoaktif darbe Chase tarafından bozulması Analizi

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Amiloid Fibrils ile Beyin Mitokondrisi ile Etkileşimler ve Membran Permeabilizasyonu

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Creating Highly Specific Chemically Induced Protein Dimerization Systems by Stepwise Phage Selection of a Combinatorial Single-Domain Antibody Library

Bir Kombinatoryal Tek Etki Alanı Antikor Kütüphanesi adım wise Faj Seçimi ile Son Derece Spesifik Kimyasal Kaynaklı Protein Dimerization Sistemleri Oluşturma

Protein dimerization events that occur only in the presence of a small-molecule ligand enable the development of small-molecule biosensors for the ...

Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

İskelet Kas Liflerinde Subsellüler Glikojen Dağılımının İletim Elektron Mikroskobu Kullanılarak Ölçülmesi

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...