Name: improving reproducibility to meet minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 guidelines in nanoparticle tracking analysis
Uploaded: 2021-11-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improving Reproducibility to Meet Minimal Information for Studies of Extracellular Vesicles 2018 Guidelines in Nanoparticle Tracking Analysis at JoVE.com

这项工作得到了堪萨斯州对中西部比较干细胞生物学研究所（MICSCB），约翰逊癌症研究中心对MLW和NIH R21AG066488对LKC的支持。OLS得到了MICSCB的GRA支持。作者感谢Santosh Aryal博士提供本项目中使用的脂质体，并感谢Weiss和Christenson实验室的成员进行有益的对话和反馈。感谢何鸿博士的技术支持。MLW感谢Betti Goren Weiss的支持和建议。

1. 一般协议指南
<ol><li>将显微镜保持在空气工作台上，或至少在无振动工作台上。确保将无关的振动（例如，脚踩在地板上，触摸桌子，门关闭，实验室交通）保持在最低限度。</li>
	<li>为所有视频录制设置并保持激光模块的温度恒定。 注意：选择的温度为25°C，因为纳米颗粒尺寸分析仪在该温度下进行了校准。因此，重要的是仪器的所有用户都知道并使用校准的温度。室温是不?...

<ol>
	<li>Lotvall, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+experimental+requirements+for+definition+of+extracellular+vesicles+and+their+functions:+a+position+statement+from+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles.">Minimal experimental requirements for definition of extracellular vesicles and their functions: a position statement from the International Society for Extracellular Vesicles.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 3 (1), (2014).</li><li>Thery, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+(MISEV2018):+a+position+statement+of+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles+and+update+of+the+MISEV2014+guidelines.">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 7 (1), 1535750 (2018).</li><li>Consortium, E. -. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EV-TRACK:+transparent+reporting+and+centralizing+knowledge+in+extracellular+vesicle+research.">EV-TRACK: transparent reporting and centralizing knowledge in extracellular vesicle research.</a> Nature Methods. 14 (3), 228-232 (2017).</li><li>Gardiner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+used+for+the+isolation+and+characterization+of+extracellular+vesicles:+results+of+a+worldwide+survey.">Techniques used for the isolation and characterization of extracellular vesicles: results of a worldwide survey.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 5, 32945 (2016).</li><li>Maas, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Possibilities+and+limitations+of+current+technologies+for+quantification+of+biological+extracellular+vesicles+and+synthetic+mimics.">Possibilities and limitations of current technologies for quantification of biological extracellular vesicles and synthetic mimics.</a> Journal of Controlled Release. 200, 87-96 (2015).</li><li>Danaei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+particle+size+and+polydispersity+index+on+the+clinical+applications+of+lipidic+nanocarrier+systems.">Impact of particle size and polydispersity index on the clinical applications of lipidic nanocarrier systems.</a> Pharmaceutics. 10 (2), 57 (2018).</li><li>Kestens, V., Bozatzidis, V., De Temmerman, P. J., Ramaye, Y., Roebben, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+particle+tracking+analysis+method+for+the+size+determination+of+nano-+and+microparticles.">Validation of a particle tracking analysis method for the size determination of nano- and microparticles.</a> Journal of Nanoparticle Research. 19 (8), 271 (2017).</li><li>Filipe, V., Hawe, A., Jiskoot, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+evaluation+of+nanoparticle+tracking+analysis+(NTA)+by+NanoSight+for+the+measurement+of+nanoparticles+and+protein+aggregates.">Critical evaluation of nanoparticle tracking analysis (NTA) by NanoSight for the measurement of nanoparticles and protein aggregates.</a> Pharmaceutical Research. 27 (5), 796-810 (2010).</li><li>Hole, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interlaboratory+comparison+of+size+measurements+on+nanoparticles+using+nanoparticle+tracking+analysis+(NTA).">Interlaboratory comparison of size measurements on nanoparticles using nanoparticle tracking analysis (NTA).</a> Journal of Nanoparticle Research. 15 (12), 2101 (2013).</li><li>Malvern analytical Ltd. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> NanoSight LM10 Operating Manual-P550H. , (2013).</li><li>Kim, A., Ng, W. B., Bernt, W., Cho, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+size+estimation+of+nanoparticle+tracking+analysis+on+polydisperse+macromolecule+assembly.">Validation of size estimation of nanoparticle tracking analysis on polydisperse macromolecule assembly.</a> Scientific Reports. 9 (1), 2639 (2019).</li><li>Gollwitzer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+techniques+for+size+measurement+of+nanoparticles+in+cell+culture+medium.">A comparison of techniques for size measurement of nanoparticles in cell culture medium.</a> Analytical Methods. 8 (26), 5272-5282 (2016).</li><li>vander Pol, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+size+distribution+of+exosomes+and+microvesicles+determined+by+transmission+electron+microscopy,+flow+cytometry,+nanoparticle+tracking+analysis,+and+resistive+pulse+sensing.">Particle size distribution of exosomes and microvesicles determined by transmission electron microscopy, flow cytometry, nanoparticle tracking analysis, and resistive pulse sensing.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 12 (7), 1182-1192 (2014).</li></ol>

有几种方法可用于估计纳米颗粒的大小和浓度11。这些包括从群体生成尺寸估计值的集合方法，包括动态光散射（DLS），离心沉降和单颗粒水平分析电子显微镜，NTA，原子力显微镜和可调谐电阻脉冲传感。其中，DLS和NTA是广泛使用的无损尺寸和浓度测量方法，基于布朗运动的理想介质。DLS依赖于光的散射，强度与粒子体积的平方成正比。因此，DLS比NTA对大颗粒，聚集体或多分散?...

对电动汽车和其他纳米级颗粒进行准确和可重复的分析给整个研究和行业带来了许多挑战。电动汽车研究的复制一直很困难，部分原因是报告与数据收集相关的必要参数缺乏统一性。为了解决这些缺陷，ISEV提出了行业指南，作为EV研究人员的最小生化，生物物理和功能标准集，并将其作为立场声明发布，通常称为MISEV20141。电动汽车研究步伐的加快需要更新指南，而“MISEV2018：ISEV的立场声明”扩展了MISEV2014指南2。MISEV2018论文包括表格，建议协议的概述以及记录特定EV相关表征的步骤。作为促进实验解释和复制的进一步措施，EV-TRACK被开发为众包知识库（http://evtrack.org），以实现EV生物学和用于已发表结果的方法的更透明报告3。尽管提出了这些关于方法标准化报告的建议，但该领域在复制和确认已公布的结果方面继续受到影响。
与美国国立卫生研究院和美国国家科学基金会在质量评估工具方面的努力相吻合，本文表明ISEV需要标准化的方法和细节报告，以便数据评估工具可以应用于实验室之间复制结果的目标。报告细胞源、细胞培养程序和 EV 分离方法是确定 EV 群体质量的重要因素。在NTA仪器中，检测设置，载体流体的折射率，导致多分散性的非均相颗粒群体，缺乏标准化的报告要求以及缺乏观察点内和观察者之间的测量结果等因素使得实验室之间的NTA比较变得困难或不可能。
自2006年开始使用以来，NTA是一种流行的纳米颗粒尺寸和浓度测定方法，目前约有80%的EV研究人员使用4。MISEV2018指南要求两种形式的单囊泡分析，其中NTA是流行的选择之一。NTA由于其广泛的可访问性，每个样品的低成本以及其直接的创始理论（斯托克斯 - 爱因斯坦方程）而继续被普遍用于EV表征。NTA的EV评估使用激光散射和布朗运动分析生成粒度分布和浓度估计，检测的下限由EV的折射率确定。当使用已知粘度和温度的流体样品时，将跟踪EV的轨迹以确定其在二维中的均方位移。这允许通过修正的斯托克斯 - 爱因斯坦方程5，6，7计算粒子扩散系数并将其转换为球面等效流体动力学直径。与其他表征方法相比，NTA的颗粒间分析在非均相EV群体中受到团聚物或更大颗粒的干扰较少7。虽然一些较大的颗粒对定量精度的影响很小，但即使微量的大的、高光散射颗粒的存在，由于软件EV检测和跟踪的减少，也会显著减少对较小颗粒的检测。作为一种测量技术，NTA通常被认为不偏向于较大的颗粒或颗粒聚集体，但可以通过单个颗粒分析9解决多个大小的群体。由于使用颗粒光散射，NTA分析的局限性之一是，与EV相比具有相似折射和尺寸属性的任何颗粒物（例如灰尘，塑料或粉末）都无法通过这种表征方法与实际EV区分开来。
NanoSight LM10（纳米颗粒尺寸分析仪）和LM14（激光模块）自2006年以来一直销售，尽管已经开发了该仪器的新型号，但这种特殊型号在许多核心设施中都可以找到，被认为是可靠的主力。需要进行培训以正确优化NTA设置，以实现高分辨率的尺寸和浓度测量。最佳视频录制所需的两个重要设置是（1）相机电平和（2）检测阈值。这些必须由操作员根据样品的特性进行设置。NTA分析的主要制约因素之一是建议样品浓度在107 和109 个颗粒/mL之间，要达到该样品稀释可能需要10个。用于稀释的溶液，如磷酸盐缓冲盐水、0.15 M盐水或超纯水，很少不含小于220μm的颗粒，这可能会影响NTA测量。用于稀释的溶液的NTA表征应在与正在分析的纳米颗粒样品相同的相机水平和检测阈值下进行。用于EV样品稀释的稀释剂中存在的纳米颗粒的大小和浓度很少包含在涉及EV的NTA分析的出版物中。
该协议使用合成EV样脂质体的NTA分析，这些脂质体使用选定的相机水平，检测阈值和样品的机械过滤来分析相机水平，检测阈值或样品过滤对NTA数据集的系统影响。脂质体的合成如 补充文件S1中所述。本实验使用合成脂质体，因为它们的尺寸均匀性，物理特性和在4°C下储存的稳定性。 虽然可以使用电动汽车的实际样品，但电动汽车在储存过程中的异质性和稳定性可能使这项研究及其解释复杂化。来自（A）脂质体和（B）EV的NTA报告中的相似性表明，本文中揭示的脂质体的系统效应可能也适用于EV表征（图1）。总之，这些发现支持了这样一种观点，即关键软件设置的完整报告和样品处理的描述，如稀释剂，稀释和过滤，会影响NTA数据的可重复性。
本文的目的是证明改变NTA设置（温度，相机水平和检测阈值）和样品制备会改变收集的结果：获得系统，显着的尺寸和浓度差异。由于NTA是满足MISEV2018表征规范的常用选项之一，这些结果证明了报告样品制备和NTA设置以确保可重复性的重要性。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63059/63059fig01.jpg"> 图1：代表性的NTA报告将脂质体与EV进行比较。 （A）脂质体：2020年3月12日在NTA上表征的未过滤样品。（B） EV：2021年8月26日在NTA上表征的未经过滤的样品。缩写：NTA =纳米颗粒跟踪分析;EV = 细胞外囊泡。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63059/63059fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的大图。</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Automatic Pipetter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tubes, Conical, Nunc 15 mL</td>
			<td>Thermo Sci.</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens Cleaner</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens Paper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoSight LM-10</td>
			<td>Malvern Panalytical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoSight LM-14 Laser Module</td>
			<td>Malvern Panalytical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanosight NTA Software Ver. 3.2</td>
			<td>Malvern Panalytical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper Towels</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tips, 1-200 &#181;L, Filtered, Sterile, Low Binding</td>
			<td>BioExpress</td>
			<td>P -3243-200X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tips, 50-1,000 &#181;L, Filtered, Sterile</td>
			<td>BioExpress</td>
			<td>P-3243-1250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline, Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered (No Ca or Mg)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standards, Latex Transfer- 100 nm (3 mL)</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>NTA4088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standards, Latex Transfer- 50 nm&#160; (3 mL)</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>NTA4087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Filter, 33 mm, .22 &#181;m, MCE, Sterile</td>
			<td>Fisher brand</td>
			<td>09-720-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, TB, 1 mL, slip tip</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waste fluid container</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improving reproducibility to meet minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 guidelines in nanoparticle tracking analysis

自2006年以来，纳米颗粒跟踪分析（NTA）一直是用于细胞外囊泡（EV）研究的几种表征方法之一。许多人认为，NTA仪器及其软件包可以在最少的培训后轻松使用，并且尺寸校准在内部是可行的。由于NTA采集和软件分析都构成了EV表征，因此在2018年细胞外囊泡研究的最小信息（MISEV2018）中进行了讨论。此外，它们还通过透明报告和集中细胞外囊泡研究（EV-TRACK）知识进行监测，以提高EV实验的稳健性（例如，最大限度地减少由于不受控制的因素引起的实验变异）。
尽管努力鼓励报告方法和控制，但许多已发表的研究论文未能报告重现原始NTA观察结果所需的关键环境。很少有论文报道阴性对照或稀释剂的NTA表征，显然假设市售产品，如磷酸盐缓冲盐水或超纯蒸馏水，是无颗粒的。同样，研究人员也很少报告阳性对照或尺寸标准来验证颗粒大小。斯托克斯-爱因斯坦方程结合了样品粘度和温度变量来确定颗粒位移。因此，在整个样品视频采集过程中报告稳定的激光室温度是准确复制的重要控制措施。样品或稀释剂的过滤也不是常规报告的，如果是这样，过滤器的细节（制造商，膜材料，孔径）和储存条件很少包括在内。国际细胞外囊泡学会（ISEV）可接受的实验细节的最低标准应包括用于EV表征的有据可查的NTA方案。以下实验提供了证据，证明NTA分析方案需要由个体研究人员建立，并包含在使用NTA表征作为满足MISEV2018单囊泡表征要求的选项之一的出版物方法中。

表1 包含脂质体样品（18个过滤和18个未过滤）和代表性DPBS稀释剂的NTA视频的结果。无论相机水平或检测阈值如何，两组之间的比较都已完成。过滤样品的平均粒径为108.5 nm，颗粒模式为86.2 nm，浓度为7.4×108 颗粒/mL。相比之下，未过滤样品的平均粒径为159.1 nm，颗粒模式为105.7 nm，浓度为7.6×108 个颗粒/mL。无论相机水平或检测阈值如何，滤波和未滤波样本的均值和模式?...

Watch this Scientific Journal Video about Improving Reproducibility to Meet Minimal Information for Studies of Extracellular Vesicles 2018 Guidelines in Nanoparticle Tracking Analysis at JoVE.com

Improving Reproducibility to Meet Minimal Information for Studies of Extracellular Vesicles 2018 Guidelines in Nanoparticle Tracking Analysis

纳米颗粒跟踪分析（NTA）是一种广泛使用的表征细胞外囊泡的方法。本文重点介绍了NTA实验参数和对照，以及样品和稀释剂的统一分析和表征方法，这是补充MISEV2018和EV-TRACK提出的实验室之间可重复性指南所必需的。

提高可重复性以满足细胞外囊泡研究的最少信息 2018纳米颗粒跟踪分析指南

Nanoparticle tracking analysis (NTA) has been one of several characterization methods used for extracellular vesicle (EV) research since 2006. Many ...

该协议是为NanoSight LM10的新手操作员开发的。通过遵循分步说明，可以获得准确且可重复的结果。无论用户的技能水平如何，此技术都有助于确保多次试运行的结果一致。纳米颗粒表征，特别是定量，仍然是细胞外囊泡研究领域的一个挑战。该协议允许对悬浮液中的纳米颗粒进行一致的尺寸和浓度分析。首先用高质量的镜头清洁剂和镜头纸清洁激光模块的玻璃表面。在组装模块之前，请确保O形圈密封件正确安装在流通池盖的凹槽中。然后将流通池盖放在激光模块上，确保电触点处于正确的方向。接下来，将四个弹簧加载的翼形螺钉穿过流通池板，并接合激光模块的螺纹，而无需单独拧紧。在对流通池盖施加均匀压力的同时，以交替对角线方式均匀拧紧指旋螺钉，直到紧贴。用一毫升DPBS冲洗两个带滑锁适配器的一毫升结核菌素注射器三次。从第一个结核菌素注射器中取出并丢弃柱塞，然后将注射器插入剩余的端口以用作空洞的稀释剂或样品储液器。然后用一毫升DPBS填充第二个注射器，并将其连接到流通池盖的入口端口。保持激光模块倾斜，出口注射器端口升高，以便在DPBS缓慢注入激光模块时从腔室中清除空气。通过将一毫升空气注入进气口，从激光模块中冲洗剩余的DPBS。重复冲洗两次。最后一次冲洗后，尽可能完全清空激光模块，并加载模块以进行聚焦和定位。打开软件。在左上角框的“捕获”选项卡下，单击“启动相机”。如果相机在五分钟后自动关闭，请单击“启动相机”以重新启动它。在同一选项卡中，将相机级别调整为14至16，以增亮激光线并简化粒子识别和聚焦。通过将头件左侧的顶部滑块移入或移出，将图像从相机转移到目镜。在视野中，找到密度增加的区域（称为指纹和中心），然后垂直聚焦指纹。在视野中，将激光线居中，然后移动顶部滑块以将光线转移到计算机屏幕上观察到的相机。计算机屏幕上的图像是从显微镜目镜中的视图镜像。调整焦点以使用对焦旋钮锐化屏幕上单个移动粒子的图像。要加载样品，将一毫升样品吸入冲洗过的一毫升结核菌素注射器中，并将注射器连接到流通池盖的入口端口。继续推进柱塞，直到连接到出口的开放式注射器中的液体明显。模块应倾斜，以便从激光模块中清除空气。在相机视图中，将焦点移动到激光线右侧的均匀数量粒子的区域。调整垂直方向以将水平光带居中并重新对焦，直到视图中粒子数量最多。确保所有后续措施的焦点位置保持一致。将相机级别调整到相机视图右上角的深色信息符号间歇性地打开和关闭的点。对于纳米颗粒跟踪分析或NTA，将持续时间设置为30或60秒，将视频数量设置为5。要更改现有基本文件名，请单击具有新文件名的生成数据的新存储站点的选项卡。然后检查目标温度框以输入所需的温度，然后单击创建脚本以重复使用标准测量值。加载示例并准备好运行实验后，单击“创建并运行脚本”。在设置报告详细信息弹出屏幕中，填写有关操作员，样品和稀释剂的必要信息的字段。填写完所有所需字段后，单击“设置确定”以启动脚本。在每次视频捕获之前，请查找手动推进柱塞的提示。将约0.05毫升样品注入激光室。当粒子静止时，单击“确定”。完成第五次视频捕获后，设置确认框将与流程框一起出现。由于帧是从视频屏幕底部手动推进的，因此请注意屏幕上产生颗粒的蓝色十字的数量，并设置用于处理样品的检测阈值。等待在结果直方图中自动处理视频，然后显示完成对话框通知，然后单击“确定”。出现导出设置框后，单击“导出”保存结果。突出显示当前实验中列出的所有五个捕获视频。接下来，单击进程所选文件并等待设置确认框出现在进程框中以闪烁以更改检测阈值，然后将检测阈值调整到所需级别并转到设置并单击确定。视频将在结果直方图中自动处理，并显示一个对话框通知。单击 OK.In 代表性分析，则显示脂质体样品的纳米跟踪分析或NTA结果以及代表性的DPBS稀释剂。过滤样品的平均粒径为108纳米，浓度为每毫升10至8个颗粒的7.4倍。相比之下，未过滤样品的平均粒径为159纳米，浓度为每毫升10至8个颗粒的7.6倍。在组合相机水平下，随着检测阈值从2个增加到5个，平均和模式粒径显示过滤样品的粒径显着减小。随着检测阈值的增加，组合相机水平下的粒子浓度降低。未检测到过滤和未过滤样品之间的颗粒浓度有显着差异。在组合检测阈值下，随着相机水平从12增加到14，注意到过滤样品的平均和模式颗粒尺寸减小。随着相机水平从12增加到14，综合检测阈值处的颗粒浓度增加。未过滤和未过滤样品之间未观察到显着差异。步骤 4.1 到 5.2 对于找到正确的查看区域非常重要。在多次试运行中实现一致的结果取决于这种可重复的技能。动态光散射通常用作纳米粒子跟踪分析的伴随物，主要用于获得zeta电位，即粒子的表面电荷。对于纳米颗粒分析，NTA仍然是一种非常有价值的定量颗粒的方法，可用于细胞外囊泡研究。

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

循环压力为生物反应器的设计体外主动脉心脏瓣膜的研究

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

科研

生物工程

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

高分子基因传递纳米粒子的纳米粒子跟踪分析和高通量流式细胞仪评价

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

A Novel Three-dimensional Flow Chamber Device to Study Chemokine-directed Extravasation of Cells Circulating under Physiological Flow Conditions

一种新型三维流室装置研究生理流量条件下的趋化因子的细胞循环外渗

Extravasation of circulating cells from the bloodstream plays a central role in many physiological and pathophysiological processes, including stem cell ...

Longitudinal Measurement of Extracellular Matrix Rigidity in 3D Tumor Models Using Particle-tracking Microrheology

细胞外基质刚性三维肿瘤模型的纵向测量用粒子跟踪Microrheology

The mechanical microenvironment has been shown to act as a crucial regulator of tumor growth behavior and signaling, which is itself remodeled and ...

Quantification and Size-profiling of Extracellular Vesicles Using Tunable Resistive Pulse Sensing

定量和大小分析外囊泡的使用可调电阻脉冲检测

Extracellular vesicles (EVs), including &#8216;microvesicles&#8217; and &#8216;exosomes&#8217;, are highly abundant in bodily fluids. Recent years have ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3d轨道跟踪的改进双光子显微镜之应用：细胞内的囊泡的跟踪

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Paper-based Devices for Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles

基于纸张的设备进行隔离外囊泡与表征

Extracellular vesicles (EVs), membranous particles released from various types of cells, hold a great potential for clinical applications. They contain ...

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Retroductal 纳米微粒注射液对小鼠颌下腺的治疗

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Evaluation of the Storage Stability of Extracellular Vesicles

细胞外囊储存稳定性的评价

Extracellular vesicles (EVs) are promising targets in current research, to be used as drugs, drug-carriers, and biomarkers. For their clinical ...

In Vivo Two-Color 2-Photon Imaging of Genetically-Tagged Reporter Cells in the Skin

在 Vivo 双色 2 光子成像中,基因标记报告器细胞在皮肤中

Fibroblasts are mesenchymal cells that change their morphology upon activation, ultimately influencing the microenvironment of the tissue they are located ...