Name: monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

نشكر أعضاء مختبر Y.D.S. نود أن نشكر معهد وول للطب الانتقالي في مركز هداسا الطبي في القدس على توفير مرفق تصوير الحيوانات الصغيرة. تم دعم هذه الدراسة من قبل جائزة التطوير الوظيفي البحثي من صندوق أبحاث السرطان الإسرائيلي.

تم إجراء جميع تجارب الفئران بموجب البروتوكول المعتمد من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية في الجامعة العبرية MD-21-16429-5. بالإضافة إلى ذلك، فإن الجامعة العبرية معتمدة من قبل جمعية تقييم واعتماد رعاية المختبرات (AAALAC).
1. صيانة خط الخلية
ملاحظة: تم استخدام ?...

<ol>
	<li>Waks, A. G., Winer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+treatment:+A+review.">Breast cancer treatment: A review.</a> JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).</li><li>Jin, X., Mu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+breast+cancer+metastasis.">Targeting breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer: Basic and Clinical Research. 9, 23-34 (2015).</li><li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model.">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (56), e3175 (2011).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212 (2006).</li><li>Kocat&#252;rk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (96), e51967 (2015).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+whole+picture.">The whole picture.</a> Nature. 463 (7283), 977-979 (2010).</li><li>Wang, Y., Tseng, J. -. C., Sun, Y., Beck, A. H., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+tumor+burden+and+molecular+pathways+in+mouse+models+of+cancer.">Noninvasive imaging of tumor burden and molecular pathways in mouse models of cancer.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (2), 135-144 (2015).</li><li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging.">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (1), 3-10 (2015).</li><li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+mouse+model+of+spontaneous+breast+cancer+metastasis.">An orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (114), (2016).</li><li>Morten, B. C., Scott, R. J., Avery-Kiejda, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Three+Different+Methods+for+Determining+Cell+Proliferation+in+Breast+Cancer+Cell+Lines.">Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54040 (2016).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (45), e2077 (2010).</li><li>Lv, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+transplantation+of+breast+tumors+as+preclinical+models+for+breast+cancer.">Orthotopic transplantation of breast tumors as preclinical models for breast cancer.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61173 (2020).</li><li>Cheng, R. Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+triple+negative+breast+cancer+using+orthotopic+breast+cancer+model.">Studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), e60316 (2020).</li><li>Bajikar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-suppressor+inactivation+of+GDF11+occurs+by+precursor+sequestration+in+triple-negative+breast+cancer.">Tumor-suppressor inactivation of GDF11 occurs by precursor sequestration in triple-negative breast cancer.</a> Developmental Cell. 43 (4), 418-435 (2017).</li><li>Khatib, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glutathione+peroxidase+8+(GPX8)/IL-6/STAT3+axis+is+essential+in+maintaining+an+aggressive+breast+cancer+phenotype.">The glutathione peroxidase 8 (GPX8)/IL-6/STAT3 axis is essential in maintaining an aggressive breast cancer phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (35), 21420-21431 (2020).</li></ol>

التجارب القائمة على الحيوانات إلزامية لأبحاث السرطان7،8،9 ، وبالفعل تم تطوير العديد من البروتوكولات3،6،10،11،12،13،14.<s...

سرطان الثدي هي أنواع متكررة من السرطان في جميع أنحاء العالم ، مع ما يقرب من 250،000 حالة جديدة يتم تشخيصها كل عام في الولايات المتحدة1. على الرغم من ارتفاع معدل الإصابة به ، إلا أن مجموعة جديدة من الأدوية المضادة للسرطان قد حسنت بشكل كبير نتائج مرضى سرطان الثدي2. ومع ذلك ، لا تزال هذه العلاجات غير كافية ، حيث يعاني العديد من المرضى من انتكاس المرض وانتشاره النقيلي إلى الأعضاء الحيوية2 ، وهو السبب الرئيسي لاعتلال المرضى ووفياتهم. لذلك ، فإن أحد التحديات الرئيسية في أبحاث سرطان الثدي هو تحديد الآليات الجزيئية التي تنظم تكوين النقائل البعيدة لتطوير وسائل جديدة لمنع تطورها.
ورم خبيث سرطاني هو عملية ديناميكية تنفصل فيها الخلايا عن الورم الأساسي وتغزو الأنسجة المجاورة من خلال الدورة الدموية. وبالتالي ، فإن النماذج الحيوانية التي تخضع فيها الخلايا لسلسلة نقيلي مماثلة يمكن أن تسهل تحديد الآليات التي تحكم هذه العملية 3,4. بالإضافة إلى ذلك ، هذه النماذج في الجسم الحي ضرورية لتطوير عوامل علاج سرطان الثدي 5,6. ومع ذلك ، لا يمكن أن تشير هذه النماذج التقويمية إلى حركية نمو الورم الفعلية حيث يتم تحديد التأثير فقط عند الإنهاء. لذلك ، أنشأنا أداة قائمة على luciferase للكشف عن تطور الورم والاستعمار النقيلي في الوقت الفعلي. بالإضافة إلى ذلك، تعبر هذه الخلايا عن GFP للكشف عن المستعمرات النقيلية. هذا النهج بسيط نسبيا ولا ينطوي على أي إجراءات غازية3. وبالتالي ، فإن الجمع بين اكتشاف لوسيفيراز والتألق هو استراتيجية مفيدة للمضي قدما في الدراسات قبل السريرية لعلاجات سرطان الثدي وإدارة الأمراض.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.7 mL eppendorf tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LMCT1.7B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LTB15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>COSTAR</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Plates BLACK flat bottom</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN30496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counters</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A50298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria III sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 Needles 27 G (3/4&#39;&#39;)</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak Syringes 1 mL x 120</td>
			<td>BD</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 150 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counting chamber slides</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (DMEM), high glucose, no glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eppendorf Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EP5820740000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-127-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUW GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Yossi Buganim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Lior Nissim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP Terrell</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-01-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine Solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>bioluminescence measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF-7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-468</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>2430-475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hylabs</td>
			<td>BP655/500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-dR8.2-dvpr</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8455</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-VSV-G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8454</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm (90x15)</td>
			<td>MINI PLAST</td>
			<td>820-090-01-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 10ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 25ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 5ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010005S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX304 Luciferase-V5 blast plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#98580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoirs</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN20621STR200TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ18 Stereo microscopes</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Bio-Lab</td>
			<td>190359400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filters</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-FPV403030S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA Solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum driven Filters</td>
			<td>SOFRA LIFE SCIENCE</td>
			<td>SPE-22-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virusolve</td>
			<td></td>
			<td>disinfectant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoGlo Luciferin, In Vivo Grade</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#6366236001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence

سرطان الثدي هو ورم خبيث غير متجانس متكرر والسبب الرئيسي الثاني للوفيات لدى النساء ، ويرجع ذلك أساسا إلى ورم خبيث في الأعضاء البعيدة. تم إنشاء العديد من النماذج الحيوانية ، بما في ذلك نماذج الفئران العظمية المستخدمة على نطاق واسع ، حيث يتم حقن الخلايا السرطانية في وسادة الدهون الثديية. ومع ذلك ، لا يمكن لهذه النماذج المساعدة في مراقبة حركية نمو الورم والاستعمار النقيلي. الأدوات المتطورة لمراقبة الخلايا السرطانية في الوقت الحقيقي في الفئران ستعزز بشكل كبير فهم بيولوجيا الورم. 
هنا ، تم إنشاء خطوط خلايا سرطان الثدي التي تعبر بثبات عن luciferase وبروتين الفلورسنت الأخضر (GFP). على وجه التحديد ، تحتوي هذه التقنية على خطوتين متتابعتين بدأتا بقياس نشاط luciferase في المختبر وتليها زرع الخلايا السرطانية في منصات الدهون الثديية للفئران غير البدينة. بعد الحقن ، تتم مراقبة كل من نمو الورم والاستعمار النقيلي في الوقت الفعلي بواسطة نظام التصوير غير الباضع. بعد ذلك ، سيتم فحص القياس الكمي للنقائل المعبرة عن GFP في الرئتين بواسطة المجهر الفلوري للتحقق من صحة نتائج التلألؤ الحيوي المرصودة. يقوم هذا النظام المتطور الذي يجمع بين أدوات الكشف القائمة على اللوسيفيراز والتألق بتقييم ورم خبيث للسرطان في الجسم الحي ، والذي يتمتع بإمكانات كبيرة للاستخدام في علاجات سرطان الثدي وإدارة الأمراض.

لقد أنشأنا خطوط خلايا سرطان الثدي (MDA-MB-231 و MCF-7 و MDA-MB-468) التي تعبر عن ناقلات GFP و luciferase. على وجه التحديد ، تم تحقيق ذلك عن طريق عدوى متتابعة. أولا ، أصيبت خطوط خلايا سرطان الثدي بناقل فيروس lentivirus يعبر عن GFP الفلورسنت. تم فرز الخلايا الإيجابية GFP (GFP +) بعد يومين من الإصابة (الشكل 1A<...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

هنا ، نصف طريقة مراقبة غير جراحية تتضمن تعبير لوسيفيراز وبروتين الفلورسنت الأخضر في خطوط خلايا سرطان الثدي المختلفة. يوفر هذا البروتوكول تقنية لمراقبة تكوين الورم والاستعمار النقيلي في الوقت الفعلي في الفئران.

مراقبة نمو سرطان الثدي وتكوين مستعمرة النقيلي في الفئران باستخدام التلألؤ الحيوي

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...

باستخدام هذه الأداة المتطورة وغير الغازية ، يمكننا مراقبة حركية نمو الورم في الوقت الفعلي والاستعمار النقيلي في الفئران ، والتي لديها إمكانات كبيرة في علاج سرطان الثدي وإدارة الأمراض. يعد الجمع بين لوسيفيراز والكشف عن التألق استراتيجية مفيدة لتعزيز الدراسات قبل السريرية لتطور سرطان الثدي وإدارة المرض. يمكن تطبيق ذلك على دراسات الأدوية المضادة للسرطان.لا يقتصر هذا البروتوكول على سرطان الثدي ويمكن تطبيقه على سرطانات أخرى ، مثل الرئة والبنكرياس. ابدأ بزراعة الخلايا MCF-7 و MDA-MB-468 و MDA-MB-231 GFP و luciferase الإيجابية بشكل منفصل في صفيحة طولها 16 سم إلى 80٪ من التقاء. بعد حصاد الخلايا عن طريق التربسينات ، قم بزرع عدد متزايد من الخلايا في كل بئر في صفيحة سوداء من 96 بئرا.ثم ، املأ جميع الآبار ب 100 ميكرولتر من DMEM ، واحتضنها لمدة 16 إلى 24 ساعة في 37 درجة مئوية ، حاضنة 5٪ CO2. تحضير محلول لوسيفيرين في PBS بتركيز 1.5 ملليغرام لكل ملليلتر ، وتخزين المحلول عند 20 درجة مئوية تحت الصفر. بعد الحضانة ، اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام PBS بلطف قبل إضافة 100 ميكرولتر من محلول luciferin في كل بئر.انتظري لمدة دقيقتين، ثم قم بقياس نشاط لوسيفيراز في جميع خلايا سرطان الثدي باستخدام التلألؤ الحيوي. قبل حقن الفأر ، قم بنقل خمسة ملايين خلية MCF-7 و MDA-MB-468 إلى 200 ميكرولتر من PBS ومليوني خلية MDA-MB-231 GFP و luciferase إيجابية إلى 100 ميكرولتر PBS. تحضير الماوس المخدر للحقن عن طريق وضع مخروط فوق الرأس في وضع ضعيف.بعد ذلك ، امسح منطقة البطن من الماوس فوق الغدة الثديية بالإيثانول باستخدام قطعة قطن ، وارفع الغدة الثديية الرابعة بالملقط قبل إدخال إبرة قياس 27 تحت وسادة الدهون لحقن 100 ميكرولتر ببطء من تعليق الخلية المعدة. بعد الحقن ، أخرج الفأر من الغطاء وانقله إلى قفص جديد تحت الملاحظة حتى يعود إلى الوعي. قبل الكشف عن التلألؤ الحيوي ، قم بتقييد الماوس الواعي عن طريق تثبيت رقبته باليد اليسرى وإمالة اليد إلى اليسار ، مما يؤدي إلى وجه الماوس لأعلى مع الجزء السفلي من الجسم في وضع ضعيف.حقن 100 ميكرولتر من لوسيفيرين 30 ملليغرام لكل ملليلتر داخل الصفاق في الربع البطني الأيسر السفلي من الماوس باستخدام حقنة ملليلتر واحد. احتفظ بالفأر لمدة سبع دقائق دون تخدير، تليها ثلاث دقائق داخل غرفة التخدير قبل قياس حركية الورم. أثناء وجود الماوس قيد الحضانة، افتح البرنامج وقم بتهيئة نظام التصوير بالنقر فوق الزر تهيئة.حافظ على الإعداد في التعريض الضوئي التلقائي مع وقت التعريض الضوئي في الوضع التلقائي عند 60 ثانية، ووسط الربط عند فتحة f/stop one، ومرشح الإثارة المحظور، وفلتر الانبعاثات مفتوحا. عند انتهاء التهيئة، حدد معالج التصوير والتلألؤ الحيوي ثم انقر فوق التالي، فتح عامل التصفية لتحديد الماوس في موضوع الصورة. في طريقة عرض الحقل، حدد المرحلة C عند 10 سنتيمترات وارتفاع الهدف عند 1.50 سم.ثم انقر فوق مرحلة إعداد الصورة إلى C.تأكد من وضع الماوس على المسرح في وضع الاستلقاء المناسب قبل إغلاق الباب والنقر فوق الزر "اكتساب". انتظر حتى تظهر صورة على الشاشة. كرر الإجراء الخاص بالماوس الآخر.للكشف عن ورم خبيث في الرئة، قم بتغطية الإشارة القوية للورم الأساسي باستخدام ورق مقوى سميك وقم بفضح الجانب البطني من الرئتين فقط نحو الكاميرا. التقط الصورة باستخدام نفس المعلمات الموضحة سابقا. أصيبت خطوط خلايا سرطان الثدي بناقل فيروس lentivirus يعبر عن GFP الفلورسنت ويخضع لفرز FAC.تم فرز الخلايا الإيجابية GFP بعد يومين من العدوى ، مطلية وتصور بواسطة المجهر الفلوري. تم تأكيد نشاط لوسيفيراز في المختبر مع زيادة تعتمد على عدد الخلايا في مستويات نشاط لوسيفيراز. بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على علاقة خطية بين نشاط luciferase ورقم الخلية.بعد حقن خطوط خلايا سرطان الثدي ، خضعت الفئران لقراءة التلألؤ الحيوي كل أسبوعين لتحديد حركية نمو الورم. كانت حركية نمو الورم أسرع في خطوط خلايا MDA-MB-231 مقارنة بخطوط الخلايا الأقل عدوانية ، MCF-7 و MDA-MB-468. تم تحديد نشاط التلألؤ كميا لثلاثة خطوط خلوية.بعد ستة أسابيع من الحقن ، تم العثور على الأورام التي تم حصادها للحفاظ على تعبير GFP. أيضا ، تم الحصول على قراءات التلألؤ الحيوي الإيجابية من رئة الفأر بأكمله في الوقت الفعلي. تم حصاد الرئة للتحقق من المستعمرات النقيلية الإيجابية ، ولوحظت المستعمرات النقيلية ل GFP والتلألؤ الحيوي.من المهم أن تكون حذرا أثناء إجراء عملية الحقن. قد يؤدي الحقن غير السليم إلى انحراف في معدل نمو الورم أو عدم وجود ورم. يمكننا فحص ورم خبيث في الرئة في الجسم الحي وخارج الجسم الحي عن طريق الكشف عن تعبير GFP.بالإضافة إلى ذلك ، يمكننا أيضا دراسة علم الأمراض النسيجية للرئتين عن طريق التلطيخ القائم على الكيمياء النسيجية المناعية. يمكن أن تكون هذه التقنية مفيدة لاستكشاف الأسئلة الجديدة ، مثل تأثير دراسات فعالية الدواء.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

الاستفادة من علم الجينوم وظيفية الفرز لتحديد أهداف المخدرات رواية يحتمل في الثقافات كروي الخلية السرطانية

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

وضع العلامات لسرطان الثدي Xenografts المستمدة من المريض مع يمكن عزوها مراسلون لنمو الأورام والدراسات الانبثاث

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

بالأشعة فوق الصوتية تقييم الثدي وذمة لمفية المتعلقة السرطان

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

الاعتبارات العملية في دراسة الاستعمار الرئة المنتشر في أوستيوساركوما باستخدام مقايسة خبيث الرئوية

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

التقييم السريري بيواكتيفيتي OT48 الكومارين السرطان الماغنيسيوم وفحوصات تشكيل مستعمرة، وتكثيفها الزرد

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

حقن أورثوتوبيك من خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية في الفئران

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

أداء استخراج البيانات والتحليل التكاملي لمؤشر الحيوية في سرطان الثدي باستخدام قواعد بيانات متعددة يمكن الوصول اليها علنا

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

في تثبيط فيفو من MicroRNA لتقليل نمو الورم في الفئران

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

دراسة ثلاثية سلبية سرطان الثدي باستخدام نموذج سرطان الثدي Orthotopic

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

الجمع بين استخدام الذيل الوريد الانبثاث الاختبارات والوقت الحقيقي في التصوير فيفو لقياس سرطان الثدي الاستعمار المنتشر والعبء في الرئتين

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...