Name: monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Vi takker medlemmerne af Y.D.S. laboratoriet. Vi vil gerne takke Wohl Institute for Translational Medicine på Hadassah Medical Center, Jerusalem, for at stille billeddannelsesanlægget til rådighed for små dyr. Denne undersøgelse blev støttet af Research Career Development Award fra Israel Cancer Research Fund.

Alle museforsøg blev udført under Hebrew University Institutional Animal Care and Use Committee-godkendt protokol MD-21-16429-5. Derudover er det hebraiske universitet certificeret af Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC).
1. Vedligeholdelse af cellelinje
BEMÆRK: De humane brystkræftcellelinjer (MCF-7, MDA-MB-468 og MDA-MB-231) blev anvendt i denne protokol.
<ol><li>Dyrkning af alle brystkræftcellelinjerne i Dulbeccos...

<ol>
	<li>Waks, A. G., Winer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+treatment:+A+review.">Breast cancer treatment: A review.</a> JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).</li><li>Jin, X., Mu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+breast+cancer+metastasis.">Targeting breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer: Basic and Clinical Research. 9, 23-34 (2015).</li><li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model.">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (56), e3175 (2011).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212 (2006).</li><li>Kocat&#252;rk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (96), e51967 (2015).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+whole+picture.">The whole picture.</a> Nature. 463 (7283), 977-979 (2010).</li><li>Wang, Y., Tseng, J. -. C., Sun, Y., Beck, A. H., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+tumor+burden+and+molecular+pathways+in+mouse+models+of+cancer.">Noninvasive imaging of tumor burden and molecular pathways in mouse models of cancer.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (2), 135-144 (2015).</li><li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging.">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (1), 3-10 (2015).</li><li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+mouse+model+of+spontaneous+breast+cancer+metastasis.">An orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (114), (2016).</li><li>Morten, B. C., Scott, R. J., Avery-Kiejda, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Three+Different+Methods+for+Determining+Cell+Proliferation+in+Breast+Cancer+Cell+Lines.">Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54040 (2016).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (45), e2077 (2010).</li><li>Lv, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+transplantation+of+breast+tumors+as+preclinical+models+for+breast+cancer.">Orthotopic transplantation of breast tumors as preclinical models for breast cancer.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61173 (2020).</li><li>Cheng, R. Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+triple+negative+breast+cancer+using+orthotopic+breast+cancer+model.">Studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), e60316 (2020).</li><li>Bajikar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-suppressor+inactivation+of+GDF11+occurs+by+precursor+sequestration+in+triple-negative+breast+cancer.">Tumor-suppressor inactivation of GDF11 occurs by precursor sequestration in triple-negative breast cancer.</a> Developmental Cell. 43 (4), 418-435 (2017).</li><li>Khatib, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glutathione+peroxidase+8+(GPX8)/IL-6/STAT3+axis+is+essential+in+maintaining+an+aggressive+breast+cancer+phenotype.">The glutathione peroxidase 8 (GPX8)/IL-6/STAT3 axis is essential in maintaining an aggressive breast cancer phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (35), 21420-21431 (2020).</li></ol>

Dyrebaserede forsøg er obligatoriske for kræftforskning 7,8,9, og der er faktisk udviklet mange protokoller 3,6,10,11,12,13,14. Imidlertid bestemte de fleste af disse undersøgelser kun den biolog...

Brystkræft er hyppige kræftformer på verdensplan, med ca. 250.000 nye tilfælde diagnosticeret hvert år i USA1. På trods af den høje forekomst har et nyt sæt kræftlægemidler signifikant forbedret brystkræftpatienternes resultater2. Disse behandlinger er dog stadig utilstrækkelige, da mange patienter oplever sygdomstilbagefald og metastatisk spredning til vitale organer2, hvilket er den primære årsag til patientens sygelighed og dødelighed. Derfor er en af de største udfordringer inden for brystkræftforskning at identificere de molekylære mekanismer, der regulerer dannelsen af distale metastaser for at udvikle nye midler til at hæmme deres udvikling.
Kræftmetastase er en dynamisk proces, hvor celler løsner sig fra den primære tumor og invaderer nabovæv gennem blodcirkulationen. Således kan dyremodeller, hvor cellerne gennemgår en lignende metastatisk kaskade, lette identifikationen af de mekanismer, der styrer denne proces 3,4. Derudover er disse in vivo-modeller afgørende for at udvikle terapeutiske midler til brystkræft 5,6. Disse ortotopiske modeller kan imidlertid ikke indikere den faktiske tumorvækstkinetik, da effekten kun bestemmes ved afslutning. Derfor etablerede vi et luciferasebaseret værktøj til at detektere tumorudvikling og metastatisk kolonisering i realtid. Derudover udtrykker disse celler GFP for at detektere de metastatiske kolonier. Denne fremgangsmåde er relativt enkel og involverer ingen invasive procedurer3. Således er kombination af luciferase og fluorescensdetektion en nyttig strategi til at fremme de prækliniske undersøgelser af brystkræftterapi og sygdomshåndtering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.7 mL eppendorf tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LMCT1.7B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LTB15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>COSTAR</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Plates BLACK flat bottom</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN30496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counters</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A50298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria III sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 Needles 27 G (3/4&#39;&#39;)</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak Syringes 1 mL x 120</td>
			<td>BD</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 150 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counting chamber slides</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (DMEM), high glucose, no glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eppendorf Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EP5820740000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-127-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUW GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Yossi Buganim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Lior Nissim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP Terrell</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-01-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine Solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>bioluminescence measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF-7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-468</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>2430-475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hylabs</td>
			<td>BP655/500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-dR8.2-dvpr</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8455</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-VSV-G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8454</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm (90x15)</td>
			<td>MINI PLAST</td>
			<td>820-090-01-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 10ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 25ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 5ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010005S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX304 Luciferase-V5 blast plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#98580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoirs</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN20621STR200TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ18 Stereo microscopes</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Bio-Lab</td>
			<td>190359400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filters</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-FPV403030S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA Solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum driven Filters</td>
			<td>SOFRA LIFE SCIENCE</td>
			<td>SPE-22-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virusolve</td>
			<td></td>
			<td>disinfectant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoGlo Luciferin, In Vivo Grade</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#6366236001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence

Brystkræft er en hyppig heterogen malignitet og den næststørste årsag til dødelighed hos kvinder, hovedsageligt på grund af fjern organmetastase. Flere dyremodeller er blevet genereret, herunder de meget anvendte ortotopiske musemodeller, hvor kræftceller injiceres i brystfedtpuden. Disse modeller kan imidlertid ikke hjælpe med at overvåge tumorvækstkinetik og metastatisk kolonisering. Banebrydende værktøjer til overvågning af kræftceller i realtid i mus vil betydeligt fremme forståelsen af tumorbiologi. 
Her blev brystkræftcellelinjer stabilt udtrykt luciferase og grønt fluorescerende protein (GFP) etableret. Specifikt indeholder denne teknik to sekventielle trin initieret ved at måle luciferaseaktiviteten in vitro og efterfulgt af implantation af kræftcellerne i brystfedtpuder af ikke-overvægtige diabetiker-svær kombineret immundefekt (NOD-SCID) mus. Efter injektionen overvåges både tumorvækst og metastatisk kolonisering i realtid af det ikke-invasive bioluminescensbilleddannelsessystem. Derefter vil kvantificeringen af GFP-ekspresserende metastaser i lungerne blive undersøgt ved fluorescensmikroskopi for at validere de observerede bioluminescensresultater. Dette sofistikerede system, der kombinerer luciferase og fluorescensbaserede detektionsværktøjer, evaluerer kræftmetastase in vivo, som har stort potentiale til brug i brystkræftterapi og sygdomshåndtering.

Vi genererede brystkræftcellelinjer (MDA-MB-231, MCF-7 og MDA-MB-468), der udtrykker GFP- og luciferasevektorer. Specifikt blev dette opnået ved en sekventiel infektion. For det første blev brystkræftcellelinjerne inficeret med en lentivirusvektor, der udtrykte fluorescerende GFP. De GFP-positive celler (GFP+) blev sorteret 2 dage efter infektion (figur 1A,B) og inficeret med pLX304 Luciferase-V5-vektoren. Derefter blev blasticidin brugt til at vælge lucifera...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

Her beskriver vi en ikke-invasiv overvågningsmetode, der involverer luciferase og grøn fluorescerende proteinekspression i forskellige brystkræftcellelinjer. Denne protokol giver en teknik til at overvåge tumordannelse og metastatisk kolonisering i realtid hos mus.

Overvågning af brystkræftvækst og metastatisk kolonidannelse hos mus ved hjælp af bioluminescens

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...

Ved hjælp af dette sofistikerede, ikke-invasive værktøj kan vi i realtid overvåge tumorvækstkinetik og metastatisk kolonisering hos mus, hvilket har et stort potentiale inden for brystkræftbehandling og sygdomshåndtering. Kombination af luciferase og fluorescensdetektion er en nyttig strategi til at fremme de prækliniske undersøgelser af brystkræftprogression og sygdomshåndtering. Dette kan anvendes til undersøgelser af kræftmedicin.Denne protokol er ikke begrænset til brystkræft og kan anvendes på andre carcinomer, såsom lunge og bugspytkirtel. Start med at dyrke MCF-7, MDA-MB-468 og MDA-MB-231 GFP og luciferase-positive celler separat i en 16 centimeter plade til 80% sammenløb. Efter høst af cellerne ved trypsinisering frø et stigende antal celler i hver brønd til en sort 96-brønds plade.Fyld derefter alle brøndene med 100 mikroliter DMEM, og inkuber i 16 til 24 timer i 37 grader Celsius, 5% CO2 inkubator. Forbered luciferinopløsning i PBS ved en koncentration på 1,5 milligram pr. Milliliter, og opbevar opløsningen ved minus 20 grader Celsius. Efter inkubation vaskes cellerne en gang med PBS forsigtigt, inden der tilsættes 100 mikroliter luciferinopløsning i hver brønd.Vent i to minutter, og mål derefter luciferaseaktiviteten i alle brystkræftcellerne ved hjælp af bioluminescens. Før musen injiceres, overføres fem millioner MCF-7- og MDA-MB-468-celler til 200 mikroliter PBS og to millioner MDA-MB-231 GFP- og luciferase-positive celler til 100 mikroliter PBS. Forbered den abethetiserede mus til injektion ved at placere en kegle over hovedet i liggende stilling.Tør derefter musens abdominale område over brystkirtlen med ethanol ved hjælp af en vatpind, og løft den fjerde brystkirtel med tang, før du indsætter en 27-gauge nål under fedtpuden for langsomt at injicere 100 mikroliter af den forberedte cellesuspension. Efter injektionen skal du tage musen ud af emhætten og overføre den til et nyt bur under observation, indtil den vender tilbage til bevidstheden. Før bioluminescensdetektionen skal du begrænse den bevidste mus ved at holde nakken med venstre hånd og vippe hånden til venstre, hvilket resulterer i musens ansigt opad med underkroppen i liggende stilling.Injicer 100 mikroliter 30 milligram luciferin intraperitonealt i musens nedre venstre abdominale kvadrant ved hjælp af en 1 milliliter sprøjte. Hold musen i syv minutter uden bedøvelse, efterfulgt af tre minutter i anæstesikammeret, før du måler tumorkinetikken. Mens musen er under inkubation, skal du åbne softwaren og initialisere billedbehandlingssystemet ved at klikke på knappen Initialiser.Hold opsætningen i automatisk eksponering med eksponeringstid i auto på 60 sekunder, binning medium ved en blænde på f / stop en, excitationsfilter blokeret og emissionsfilter åbent. Når initialiseringen slutter, skal du vælge Billedguiden og Bioluminescens og derefter klikke på Næste, Åbn filter for at vælge musen i billedmotivet. I feltvisningen skal du vælge trin C ved 10 centimeter og motivhøjde ved 1,50 centimeter.Klik derefter på Image Setup Stage til C.Sørg for, at musen er placeret på scenen i den rigtige liggende position, før du lukker døren og klikker på knappen Erhverv. Vent på, at et billede vises på skærmen. Gentag proceduren for den anden mus.For at detektere lungemetastase skal du dække det stærke signal fra den primære tumor ved hjælp af et tykt pappapir og kun udsætte den ventrale side af lungerne mod kameraet. Tag billedet ved hjælp af de samme parametre som beskrevet tidligere. Brystkræftcellelinjerne blev inficeret med en lentivirusvektor, der udtrykte fluorescerende GFP og underlagt FAC-sortering.De GFP-positive celler blev sorteret to dage efter infektion, belagt og visualiseret af fluorescensmikroskop. In vitro luciferase-aktiviteten blev bekræftet med en celletalafhængig stigning i luciferaseaktivitetsniveauerne. Derudover blev der fundet en lineær korrelation mellem luciferaseaktiviteten og cellenummeret.Efter injektion af brystkræftcellelinjerne blev musene udsat for bioluminescensaflæsning hver anden uge for at bestemme tumorvækstkinetikken. Tumorvækstkinetikken var hurtigere i MDA-MB-231-cellelinjerne end i de mindre aggressive cellelinjer, MCF-7 og MDA-MB-468. Luminescensaktiviteten blev kvantificeret for tre cellelinjer.Seks uger efter injektionen viste de høstede tumorer sig at opretholde GFP-ekspressionen. Der blev også opnået positive bioluminescensaflæsninger fra lungen af hele musen i realtid. Lungen blev høstet for at verificere positive metastatiske kolonier, og de metastatiske kolonier blev observeret for GFP og bioluminescens.Det er vigtigere at være forsigtig, mens du udfører injektionsproceduren. En forkert injektion kan føre til afvigelse i tumorvæksthastigheden eller fravær af tumor. Vi kan undersøge lungemetastasen in vivo og ex vivo ved at detektere GFP-ekspression.Derudover kan vi også studere lungernes histopatologi ved immunohistokemibaseret farvning. Denne teknik kan være nyttig til at udforske de nye spørgsmål, såsom effekten af lægemiddeleffektivitetsundersøgelser.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Ved hjælp af Functional Genomics Screening at identificere potentielt nyt lægemiddel mod cancer Cell sfæroide Cultures

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Mærkning af Breast Cancer Patient-afledte Xenografter med Sporbare Journalister for tumorvækst og Metastase Studies

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

Ultrasonografi af brystkræft-relaterede Lymphedema

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Praktiske overvejelser i studere metastatisk lunge kolonisering i Osteosarcoma ved hjælp af pulmonale metastaser Assay

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Prækliniske vurdering af Bioactivity af Anticancer cumarin OT48 af Spheroids, koloni dannelse Assays og zebrafisk Xenografts

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic injektion af brystkræftceller ind i musene brystkirtler fedt Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

Udførelse af datamining og Integrativ analyse af biomarker i brystkræft ved hjælp af flere offentligt tilgængelige databaser

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo hæmning af MicroRNA at mindske tumor vækst i mus

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studere Triple Negative Breast Cancer Brug Orthotopic Breast Cancer Model

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Kombineret brug af hale vene metastase assays og Real-Time in vivo billeddannelse at kvantificere brystkræft metastatisk kolonisering og byrde i lungerne

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...