Name: monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
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Nous remercions les membres du laboratoire Y.D.S. Nous tenons à remercier l’Institut Wohl pour la médecine translationnelle du Centre médical Hadassah, à Jérusalem, pour avoir fourni l’installation d’imagerie pour petits animaux. Cette étude a été soutenue par le prix de développement de carrière en recherche du Fonds israélien de recherche sur le cancer.

Toutes les expériences sur la souris ont été réalisées dans le cadre du protocole MD-21-16429-5 approuvé par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université hébraïque. En outre, l’Université hébraïque est certifiée par l’Association pour l’évaluation et l’accréditation des soins aux animaux de laboratoire (AAALAC).
1. Maintenance des lignées cellulaires
REMARQUE: Les lignées cellulaires du cancer du sein hum...

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	<li>Waks, A. G., Winer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+treatment:+A+review.">Breast cancer treatment: A review.</a> JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).</li><li>Jin, X., Mu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+breast+cancer+metastasis.">Targeting breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer: Basic and Clinical Research. 9, 23-34 (2015).</li><li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model.">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (56), e3175 (2011).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212 (2006).</li><li>Kocat&#252;rk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (96), e51967 (2015).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+whole+picture.">The whole picture.</a> Nature. 463 (7283), 977-979 (2010).</li><li>Wang, Y., Tseng, J. -. C., Sun, Y., Beck, A. H., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+tumor+burden+and+molecular+pathways+in+mouse+models+of+cancer.">Noninvasive imaging of tumor burden and molecular pathways in mouse models of cancer.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (2), 135-144 (2015).</li><li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging.">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (1), 3-10 (2015).</li><li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+mouse+model+of+spontaneous+breast+cancer+metastasis.">An orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (114), (2016).</li><li>Morten, B. C., Scott, R. J., Avery-Kiejda, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Three+Different+Methods+for+Determining+Cell+Proliferation+in+Breast+Cancer+Cell+Lines.">Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54040 (2016).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (45), e2077 (2010).</li><li>Lv, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+transplantation+of+breast+tumors+as+preclinical+models+for+breast+cancer.">Orthotopic transplantation of breast tumors as preclinical models for breast cancer.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61173 (2020).</li><li>Cheng, R. Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+triple+negative+breast+cancer+using+orthotopic+breast+cancer+model.">Studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), e60316 (2020).</li><li>Bajikar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-suppressor+inactivation+of+GDF11+occurs+by+precursor+sequestration+in+triple-negative+breast+cancer.">Tumor-suppressor inactivation of GDF11 occurs by precursor sequestration in triple-negative breast cancer.</a> Developmental Cell. 43 (4), 418-435 (2017).</li><li>Khatib, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glutathione+peroxidase+8+(GPX8)/IL-6/STAT3+axis+is+essential+in+maintaining+an+aggressive+breast+cancer+phenotype.">The glutathione peroxidase 8 (GPX8)/IL-6/STAT3 axis is essential in maintaining an aggressive breast cancer phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (35), 21420-21431 (2020).</li></ol>

Les expériences sur les animaux sont obligatoires pour la recherche sur le cancer 7,8,9, et en effet de nombreux protocoles ont été développés 3,6,10,11,12,13,14. Cependant, la plupart de ces ...

Les cancers du sein sont des types de cancer fréquents dans le monde entier, avec environ 250 000 nouveaux cas diagnostiqués chaque année aux États-Unis1. Malgré son incidence élevée, un nouvel ensemble de médicaments anticancéreux a considérablement amélioré les résultats des patientes atteintes d’un cancer du sein2. Cependant, ces traitements sont encore inadéquats, car de nombreux patients connaissent une rechute de la maladie et une propagation métastatique aux organes vitaux2, qui est la principale cause de morbidité et de mortalité des patients. Par conséquent, l’un des principaux défis de la recherche sur le cancer du sein est d’identifier les mécanismes moléculaires régulant la formation des métastases distales afin de développer de nouveaux moyens d’inhiber leur développement.
La métastase cancéreuse est un processus dynamique dans lequel les cellules se détachent de la tumeur primaire et envahissent les tissus voisins par la circulation sanguine. Ainsi, les modèles animaux dans lesquels les cellules subissent une cascade métastatique similaire peuvent faciliter l’identification des mécanismes qui régissent ce processus 3,4. De plus, ces modèles in vivo sont essentiels au développement d’agents thérapeutiques contre le cancer du sein 5,6. Cependant, ces modèles orthotopiques ne peuvent pas indiquer la cinétique réelle de croissance tumorale car l’effet n’est déterminé qu’à la fin. Par conséquent, nous avons mis en place un outil basé sur la luciférase pour détecter le développement de tumeurs et la colonisation métastatique en temps réel. De plus, ces cellules expriment la GFP pour détecter les colonies métastatiques. Cette approche est relativement simple et n’implique aucune procédure invasive3. Ainsi, la combinaison de la luciférase et de la détection par fluorescence est une stratégie utile pour faire progresser les études précliniques sur les thérapies contre le cancer du sein et la gestion de la maladie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.7 mL eppendorf tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LMCT1.7B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LTB15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>COSTAR</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Plates BLACK flat bottom</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN30496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counters</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A50298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria III sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 Needles 27 G (3/4&#39;&#39;)</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak Syringes 1 mL x 120</td>
			<td>BD</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 150 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counting chamber slides</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (DMEM), high glucose, no glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eppendorf Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EP5820740000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-127-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUW GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Yossi Buganim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Lior Nissim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP Terrell</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-01-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine Solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>bioluminescence measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF-7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-468</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>2430-475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hylabs</td>
			<td>BP655/500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-dR8.2-dvpr</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8455</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-VSV-G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8454</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm (90x15)</td>
			<td>MINI PLAST</td>
			<td>820-090-01-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 10ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 25ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 5ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010005S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX304 Luciferase-V5 blast plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#98580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoirs</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN20621STR200TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ18 Stereo microscopes</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Bio-Lab</td>
			<td>190359400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filters</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-FPV403030S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA Solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum driven Filters</td>
			<td>SOFRA LIFE SCIENCE</td>
			<td>SPE-22-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virusolve</td>
			<td></td>
			<td>disinfectant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoGlo Luciferin, In Vivo Grade</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#6366236001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence

Le cancer du sein est une tumeur maligne hétérogène fréquente et la deuxième cause de mortalité chez les femmes, principalement due à des métastases d’organes distants. Plusieurs modèles animaux ont été générés, y compris les modèles murins orthotopiques largement utilisés, où des cellules cancéreuses sont injectées dans le coussinet adipeux mammaire. Cependant, ces modèles ne peuvent pas aider à surveiller la cinétique de croissance tumorale et la colonisation métastatique. Des outils de pointe pour surveiller les cellules cancéreuses en temps réel chez la souris feront progresser considérablement la compréhension de la biologie tumorale. 
Ici, des lignées cellulaires de cancer du sein exprimant de manière stable la luciférase et la protéine fluorescente verte (GFP) ont été établies. Plus précisément, cette technique contient deux étapes séquentielles initiées par la mesure de l’activité de la luciférase in vitro et suivies de l’implantation des cellules cancéreuses dans les coussinets adipeux mammaires de souris atteintes d’immunodéficience combinée diabétique-sévère (NOD-SCID) non obèses. Après l’injection, la croissance tumorale et la colonisation métastatique sont surveillées en temps réel par le système d’imagerie par bioluminescence non invasif. Ensuite, la quantification des métastases exprimant la GFP dans les poumons sera examinée par microscopie à fluorescence pour valider les résultats de bioluminescence observés. Ce système sophistiqué combinant la luciférase et les outils de détection basés sur la fluorescence évalue les métastases cancéreuses in vivo, qui ont un grand potentiel d’utilisation dans les thérapies contre le cancer du sein et la gestion des maladies.

Nous avons généré des lignées cellulaires de cancer du sein (MDA-MB-231, MCF-7 et MDA-MB-468) exprimant des vecteurs GFP et luciférase. Plus précisément, cela a été réalisé par une infection séquentielle. Tout d’abord, les lignées cellulaires du cancer du sein ont été infectées par un vecteur de lentivirus exprimant la GFP fluorescente. Les cellules GFP positives (GFP+) ont été triées 2 jours après l’infection (Figure 1A,B) et infectées pa...

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Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

Ici, nous décrivons une méthode de surveillance non invasive impliquant l’expression de la luciférase et de la protéine fluorescente verte dans diverses lignées cellulaires de cancer du sein. Ce protocole fournit une technique pour surveiller la formation de tumeurs et la colonisation métastatique en temps réel chez la souris.

Surveillance de la croissance du cancer du sein et de la formation de colonies métastatiques chez la souris à l’aide de la bioluminescence

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...

En utilisant cet outil sophistiqué et non invasif, nous pouvons surveiller en temps réel la cinétique de croissance tumorale et la colonisation métastatique chez la souris, ce qui a un grand potentiel dans la thérapie du cancer du sein et la gestion de la maladie. La combinaison de la luciférase et de la détection par fluorescence est une stratégie utile pour faire progresser les études précliniques sur la progression du cancer du sein et la gestion de la maladie. Cela peut être appliqué pour les études de médicaments anticancéreux.Ce protocole ne se limite pas au cancer du sein et pourrait être appliqué à d’autres carcinomes, tels que le poumon et le pancréas. Commencez par cultiver les cellules MCF-7, MDA-MB-468 et MDA-MB-231 GFP et luciférase positive séparément dans une plaque de 16 centimètres à 80% de confluence. Après avoir récolté les cellules par trypsinisation, ensemencez un nombre croissant de cellules dans chaque puits dans une plaque noire de 96 puits.Ensuite, remplissez tous les puits avec 100 microlitres de DMEM et incubez pendant 16 à 24 heures dans un incubateur à 37 degrés Celsius, 5% CO2. Préparer la solution de luciférine dans le PBS à une concentration de 1,5 milligramme par millilitre et conserver la solution à moins 20 degrés Celsius. Après l’incubation, lavez doucement les cellules une fois avec du PBS avant d’ajouter 100 microlitres de solution de luciférine dans chaque puits.Attendez deux minutes, puis mesurez l’activité de la luciférase dans toutes les cellules cancéreuses du sein à l’aide de la bioluminescence. Avant d’injecter la souris, transférez cinq millions de cellules MCF-7 et MDA-MB-468 dans 200 microlitres de PBS et deux millions de cellules MDA-MB-231 GFP et luciférase positives dans 100 microlitres PBS. Préparez la souris anesthésiée pour l’injection en plaçant un cône sur la tête en position couchée.Ensuite, essuyez la région abdominale de la souris au-dessus de la glande mammaire avec de l’éthanol à l’aide d’un coton-tige et soulevez la quatrième glande mammaire avec une pince avant d’insérer une aiguille de calibre 27 sous le coussinet adipeux pour injecter lentement 100 microlitres de la suspension cellulaire préparée. Après l’injection, sortez la souris du capot et transférez-la dans une nouvelle cage sous observation jusqu’à ce qu’elle revienne à la conscience. Avant la détection de la bioluminescence, retenez la souris consciente en tenant son cou avec la main gauche et en inclinant la main vers la gauche, ce qui entraîne le visage de la souris vers le haut avec le bas du corps en position couchée.Injecter 100 microlitres de 30 milligrammes par millilitre de luciférine par voie intrapéritonéale dans le quadrant abdominal inférieur gauche de la souris à l’aide d’une seringue d’un millilitre. Gardez la souris pendant sept minutes sans anesthésie, suivies de trois minutes dans la chambre d’anesthésie avant de mesurer la cinétique tumorale. Pendant que la souris est en incubation, ouvrez le logiciel et initialisez le système d’imagerie en cliquant sur le bouton Initialiser.Maintenez la configuration en exposition automatique avec un temps d’exposition dans l’auto à 60 secondes, un milieu de binning à une ouverture de f/stop un, un filtre d’excitation bloqué et un filtre d’émission ouvert. Une fois l’initialisation terminée, sélectionnez Assistant Imagerie et bioluminescence, puis cliquez sur Suivant, Ouvrir le filtre pour sélectionner la souris dans l’objet de l’image. Dans la vue de champ, sélectionnez l’étape C à 10 centimètres et la hauteur du sujet à 1,50 centimètre.Ensuite, cliquez sur Image Setup Stage pour C.Assurez-vous que la souris est placée sur la scène en position couchée appropriée avant de fermer la porte et de cliquer sur le bouton Acquérir. Attendez qu’une image apparaisse à l’écran. Répétez la procédure pour l’autre souris.Pour détecter les métastases pulmonaires, couvrez le signal fort de la tumeur primaire à l’aide d’un papier carton épais et exposez uniquement le côté ventral des poumons vers la caméra. Capturez l’image en utilisant les mêmes paramètres que ceux décrits précédemment. Les lignées cellulaires du cancer du sein ont été infectées par un vecteur lentivirus exprimant la GFP fluorescente et soumises au tri FAC.Les cellules GFP positives ont été triées deux jours après l’infection, plaquées et visualisées au microscope à fluorescence. L’activité in vitro de la luciférase a été confirmée par une augmentation des niveaux d’activité de la luciférase en fonction du nombre de cellules. De plus, une corrélation linéaire a été trouvée entre l’activité de la luciférase et le nombre de cellules.Après avoir injecté les lignées cellulaires du cancer du sein, les souris ont été soumises à une lecture de bioluminescence toutes les deux semaines pour déterminer la cinétique de croissance tumorale. La cinétique de croissance tumorale était plus rapide dans les lignées cellulaires MDA-MB-231 que dans les lignées cellulaires moins agressives, MCF-7 et MDA-MB-468. L’activité de luminescence a été quantifiée pour trois lignées cellulaires.Six semaines après l’injection, les tumeurs récoltées ont été trouvées pour maintenir l’expression de GFP. En outre, des lectures de bioluminescence positives ont été obtenues à partir du poumon de la souris entière en temps réel. Le poumon a été prélevé pour vérifier les colonies métastatiques positives, et les colonies métastatiques ont été observées pour la GFP et la bioluminescence.Il est plus important d’être prudent lors de la procédure d’injection. Une injection incorrecte peut entraîner une déviation du taux de croissance tumorale ou l’absence de tumeur. Nous pouvons examiner les métastases pulmonaires in vivo et ex vivo en détectant l’expression de GFP.En outre, nous pouvons également étudier l’histopathologie des poumons par coloration à base d’immunohistochimie. Cette technique peut être utile pour explorer les nouvelles questions, telles que l’effet des études d’efficacité des médicaments.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Recherche

Recherche en cancérologie

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Étiquetage des xénogreffes de patients dérivés cancer du sein avec traçables Reporters pour la croissance tumorale et la métastase études

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Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Utilisation combinée des essais de métastases de veine de queue et de l'imagerie in vivo en temps réel pour quantifier la colonisation métastatique et le fardeau du cancer du sein dans les poumons

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...