Name: monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
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हम वाईडीएस प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद देते हैं। हम छोटे पशु इमेजिंग सुविधा प्रदान करने के लिए हदासाह मेडिकल सेंटर, यरूशलेम में ट्रांसलेशनल मेडिसिन के लिए वोहल इंस्टीट्यूट को धन्यवाद देना चाहते हैं। इस अध्ययन को इज़राइल कैंसर रिसर्च फंड से अनुसंधान कैरियर विकास पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया था।

सभी माउस प्रयोगों को हिब्रू विश्वविद्यालय संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति-अनुमोदित प्रोटोकॉल एमडी -21-16429-5 के तहत किया गया था। इसके अलावा, हिब्रू विश्वविद्यालय प्रयोगशाला पशु देखभाल (AAALAC) के मूल्यांक?...

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	<li>Waks, A. G., Winer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+treatment:+A+review.">Breast cancer treatment: A review.</a> JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).</li><li>Jin, X., Mu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+breast+cancer+metastasis.">Targeting breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer: Basic and Clinical Research. 9, 23-34 (2015).</li><li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model.">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (56), e3175 (2011).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212 (2006).</li><li>Kocat&#252;rk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (96), e51967 (2015).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+whole+picture.">The whole picture.</a> Nature. 463 (7283), 977-979 (2010).</li><li>Wang, Y., Tseng, J. -. C., Sun, Y., Beck, A. H., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+tumor+burden+and+molecular+pathways+in+mouse+models+of+cancer.">Noninvasive imaging of tumor burden and molecular pathways in mouse models of cancer.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (2), 135-144 (2015).</li><li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging.">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (1), 3-10 (2015).</li><li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+mouse+model+of+spontaneous+breast+cancer+metastasis.">An orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (114), (2016).</li><li>Morten, B. C., Scott, R. J., Avery-Kiejda, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Three+Different+Methods+for+Determining+Cell+Proliferation+in+Breast+Cancer+Cell+Lines.">Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54040 (2016).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (45), e2077 (2010).</li><li>Lv, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+transplantation+of+breast+tumors+as+preclinical+models+for+breast+cancer.">Orthotopic transplantation of breast tumors as preclinical models for breast cancer.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61173 (2020).</li><li>Cheng, R. Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+triple+negative+breast+cancer+using+orthotopic+breast+cancer+model.">Studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), e60316 (2020).</li><li>Bajikar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-suppressor+inactivation+of+GDF11+occurs+by+precursor+sequestration+in+triple-negative+breast+cancer.">Tumor-suppressor inactivation of GDF11 occurs by precursor sequestration in triple-negative breast cancer.</a> Developmental Cell. 43 (4), 418-435 (2017).</li><li>Khatib, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glutathione+peroxidase+8+(GPX8)/IL-6/STAT3+axis+is+essential+in+maintaining+an+aggressive+breast+cancer+phenotype.">The glutathione peroxidase 8 (GPX8)/IL-6/STAT3 axis is essential in maintaining an aggressive breast cancer phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (35), 21420-21431 (2020).</li></ol>

पशु-आधारित प्रयोग कैंसर अनुसंधान 7,8,9 के लिए अनिवार्य हैं, और वास्तव में कई प्रोटोकॉल विकसित किए गए हैं 3,6,10,11,12,13,14<...

स्तन कैंसर दुनिया भर में कैंसर के अक्सर प्रकार हैं, संयुक्त राज्य अमेरिका में हर साल लगभग 250,000 नए मामलों का निदान किया जाताहै। इसकी उच्च घटनाओं के बावजूद, एंटीकैंसर दवाओं के एक नए सेट ने स्तन कैंसर के रोगी परिणामों में काफी सुधार कियाहै। हालांकि, ये उपचार अभी भी अपर्याप्त हैं, क्योंकि कई रोगियों को रोग के पुनरुत्थान और मेटास्टैटिक प्रसार का अनुभव होता हैमहत्वपूर्ण अंग2, जो रोगी रुग्णता और मृत्यु दर का प्राथमिक कारण है। इसलिए, स्तन कैंसर अनुसंधान में मुख्य चुनौतियों में से एक उनके विकास को रोकने के लिए नए साधन विकसित करने के लिए डिस्टल मेटास्टेसिस के गठन को विनियमित करने वाले आणविक तंत्र की पहचान कर रहा है।
कैंसर मेटास्टेसिस एक गतिशील प्रक्रिया है जिसमें कोशिकाएं प्राथमिक ट्यूमर से अलग हो जाती हैं और रक्त परिसंचरण के माध्यम से पड़ोसी ऊतकों पर आक्रमण करती हैं। इस प्रकार, पशु मॉडल जिसमें कोशिकाएं एक समान मेटास्टैटिक कैस्केड से गुजरती हैं, इस प्रक्रियाको 3,4 नियंत्रित करने वाले तंत्र की पहचान की सुविधा प्रदान कर सकती हैं। इसके अतिरिक्त, विवो मॉडल में ये स्तन कैंसर चिकित्सीयएजेंटों 5,6 के विकास के लिए आवश्यक हैं। हालांकि, ये ऑर्थोटोपिक मॉडल वास्तविक ट्यूमर विकास कैनेटीक्स को इंगित नहीं कर सकते हैं क्योंकि प्रभाव केवल समाप्ति पर निर्धारित किया जाता है। इसलिए, हमने वास्तविक समय में ट्यूमर के विकास और मेटास्टैटिक उपनिवेशीकरण का पता लगाने के लिए एक लूसिफेरस-आधारित उपकरण स्थापित किया। इसके अतिरिक्त, ये कोशिकाएं मेटास्टैटिक कॉलोनियों का पता लगाने के लिए जीएफपी व्यक्त करती हैं। यह दृष्टिकोण अपेक्षाकृत सरल है और इसमें कोई आक्रामक प्रक्रियाएं शामिल नहींहैं। इस प्रकार, लुसिफेरस और प्रतिदीप्ति का पता लगाने का संयोजन स्तन कैंसर चिकित्सीय और रोग प्रबंधन के प्रीक्लिनिकल अध्ययन को आगे बढ़ाने के लिए एक सहायक रणनीति है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.7 mL eppendorf tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LMCT1.7B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LTB15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>COSTAR</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Plates BLACK flat bottom</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN30496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counters</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A50298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria III sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 Needles 27 G (3/4&#39;&#39;)</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak Syringes 1 mL x 120</td>
			<td>BD</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 150 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counting chamber slides</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (DMEM), high glucose, no glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eppendorf Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EP5820740000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-127-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUW GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Yossi Buganim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Lior Nissim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP Terrell</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-01-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine Solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>bioluminescence measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF-7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-468</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>2430-475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hylabs</td>
			<td>BP655/500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-dR8.2-dvpr</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8455</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-VSV-G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8454</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm (90x15)</td>
			<td>MINI PLAST</td>
			<td>820-090-01-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 10ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 25ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 5ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010005S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX304 Luciferase-V5 blast plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#98580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoirs</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN20621STR200TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ18 Stereo microscopes</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Bio-Lab</td>
			<td>190359400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filters</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-FPV403030S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA Solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum driven Filters</td>
			<td>SOFRA LIFE SCIENCE</td>
			<td>SPE-22-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virusolve</td>
			<td></td>
			<td>disinfectant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoGlo Luciferin, In Vivo Grade</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#6366236001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence

स्तन कैंसर एक लगातार विषम दुर्दमता है और महिलाओं में मृत्यु दर का दूसरा प्रमुख कारण है, मुख्य रूप से दूर के अंग मेटास्टेसिस के कारण। कई पशु मॉडल उत्पन्न किए गए हैं, जिनमें व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल शामिल हैं, जहां कैंसर कोशिकाओं को स्तन वसा पैड में इंजेक्ट किया जाता है। हालांकि, ये मॉडल ट्यूमर विकास कैनेटीक्स और मेटास्टैटिक उपनिवेशीकरण की निगरानी करने में मदद नहीं कर सकते हैं। चूहों में वास्तविक समय में कैंसर कोशिकाओं की निगरानी करने के लिए अत्याधुनिक उपकरण ट्यूमर जीव विज्ञान की समझ को काफी आगे बढ़ाएंगे। 
यहां, स्तन कैंसर सेल लाइनों को दृढ़ता से लुसिफेरस और हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन (जीएफपी) को व्यक्त करते हुए स्थापित किया गया था। विशेष रूप से, इस तकनीक में विट्रो में लूसिफेरस गतिविधि को मापने के द्वारा शुरू किए गए दो अनुक्रमिक चरण शामिल हैं और इसके बाद कैंसर कोशिकाओं को गैर-मोटापे से ग्रस्त मधुमेह-गंभीर संयुक्त इम्यूनोडेफिशिएंसी (एनओडी-एससीआईडी) चूहों के स्तन वसा पैड में प्रत्यारोपित किया जाता है। इंजेक्शन के बाद, ट्यूमर की वृद्धि और मेटास्टैटिक उपनिवेशीकरण दोनों को वास्तविक समय में noninvasive bioluminescence इमेजिंग सिस्टम द्वारा मॉनिटर किया जाता है। फिर, फेफड़ों में जीएफपी-व्यक्त मेटास्टेसिस के परिमाणीकरण की जांच प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा की जाएगी ताकि मनाया बायोल्यूमिनेसेंस परिणामों को मान्य किया जा सके। लूसिफेरस और प्रतिदीप्ति-आधारित पहचान उपकरणों के संयोजन वाली यह परिष्कृत प्रणाली विवो में कैंसर मेटास्टेसिस का मूल्यांकन करती है, जिसमें स्तन कैंसर चिकित्सीय और रोग प्रबंधन में उपयोग की बड़ी क्षमता है।

हमने स्तन कैंसर सेल लाइनों (एमडीए-एमबी -231, एमसीएफ -7, और एमडीए-एमबी -468) को जीएफपी और लूसिफेरस वैक्टर व्यक्त किया। विशेष रूप से, यह एक अनुक्रमिक संक्रमण द्वारा प्राप्त किया गया था। सबसे पहले, स्तन कैंसर सेल ल?...

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Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

यहां, हम विभिन्न स्तन कैंसर सेल लाइनों में लूसिफेरस और हरे रंग की फ्लोरोसेंट प्रोटीन अभिव्यक्ति को शामिल करने वाली एक noninvasive निगरानी विधि का वर्णन करते हैं। यह प्रोटोकॉल चूहों में वास्तविक समय में ट्यूमर गठन और मेटास्टैटिक उपनिवेशीकरण की निगरानी करने के लिए एक तकनीक प्रदान करता है।

Bioluminescence का उपयोग कर चूहों में स्तन कैंसर के विकास और मेटास्टेटिक कॉलोनी गठन की निगरानी

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...

इस परिष्कृत, गैर-इनवेसिव टूल का उपयोग करके, हम चूहों में ट्यूमर विकास कैनेटीक्स और मेटास्टैटिक उपनिवेशीकरण की वास्तविक समय की निगरानी कर सकते हैं, जिसमें स्तन कैंसर चिकित्सीय और रोग प्रबंधन में एक बड़ी क्षमता है। लुसिफेरस और प्रतिदीप्ति का पता लगाने का संयोजन स्तन कैंसर की प्रगति और रोग प्रबंधन के प्रीक्लिनिकल अध्ययन को आगे बढ़ाने के लिए एक सहायक रणनीति है। यह एंटीकैंसर दवा अध्ययन के लिए लागू किया जा सकता है।यह प्रोटोकॉल स्तन कैंसर तक सीमित नहीं है और इसे अन्य कार्सिनोमा पर लागू किया जा सकता है, जैसे कि फेफड़े और अग्नाशय। MCF-7, MDA-MB-468, और MDA-MB-231 GFP और लूसिफेरस-पॉजिटिव कोशिकाओं को 16-सेंटीमीटर प्लेट में 80% confluency में अलग-अलग बढ़ाकर शुरू करें। ट्रिप्सिनाइजेशन द्वारा कोशिकाओं की कटाई के बाद, प्रत्येक कुएं में कोशिकाओं की बढ़ती संख्या को एक काले 96-अच्छी तरह से प्लेट में बीज दें।फिर, डीएमईएम के 100 माइक्रोलीटर के साथ सभी कुओं को भरें, और 37 डिग्री सेल्सियस, 5% सीओ 2 इनक्यूबेटर में 16 से 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें। पीबीएस में 1.5-मिलीग्राम-प्रति-मिलीलीटर एकाग्रता पर लूसिफेरिन समाधान तैयार करें, और समाधान को माइनस 20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। इनक्यूबेशन बाद, प्रत्येक कुएं में लूसिफेरिन समाधान के 100 माइक्रोलीटर जोड़ने से पहले पीबीएस के साथ कोशिकाओं को धीरे-धीरे धोएं।दो मिनट तक प्रतीक्षा करें, और फिर बायोल्यूमिनेसेंस का उपयोग करके सभी स्तन कैंसर कोशिकाओं में लूसिफेरस गतिविधि को मापें। माउस को इंजेक्ट करने से पहले, पीबीएस के 200 माइक्रोलीटर में पांच मिलियन एमसीएफ -7 और एमडीए-एमबी -468 कोशिकाओं को स्थानांतरित करें और दो मिलियन एमडीए-एमबी -231 जीएफपी और लूसिफेरस-पॉजिटिव कोशिकाओं को 100 माइक्रोलीटर पीबीएस में स्थानांतरित करें। एक सुपाइन स्थिति में सिर पर एक शंकु रखकर इंजेक्शन के लिए anesthetized माउस तैयार करें।इसके बाद, एक कपास झाड़ू का उपयोग करके इथेनॉल के साथ स्तन ग्रंथि के ऊपर माउस के पेट के क्षेत्र को पोंछें, और तैयार सेल निलंबन के 100 माइक्रोलीटर को धीरे-धीरे इंजेक्ट करने के लिए वसा पैड के नीचे 27-गेज सुई डालने से पहले संदंश के साथ चौथे स्तन ग्रंथि को उठाएं। इंजेक्शन के बाद, माउस को हुड से बाहर निकालें और इसे निगरानी में एक नए पिंजरे में स्थानांतरित करें जब तक कि यह चेतना में वापस नहीं आ जाता। बायोल्यूमिनेसेंस डिटेक्शन से पहले, बाएं हाथ से अपनी गर्दन को पकड़कर और हाथ को बाईं ओर झुकाकर सचेत माउस को रोकें, जिसके परिणामस्वरूप माउस का चेहरा निचले शरीर के साथ ऊपर की ओर एक सुपाइन स्थिति में होता है।एक-मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करके माउस के निचले बाएं पेट के चतुर्भुज में 30-मिलीग्राम-प्रति-मिलीलीटर लूसिफेरिन इंट्रापेरिटोनियल रूप से 100 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें। संज्ञाहरण के बिना सात मिनट के लिए माउस रखें, इसके बाद ट्यूमर कैनेटीक्स को मापने से पहले संज्ञाहरण कक्ष के भीतर तीन मिनट। जबकि माउस इनक्यूबेशन के तहत है, सॉफ़्टवेयर खोलें और प्रारंभ करें बटन पर क्लिक करके इमेजिंग सिस्टम को प्रारंभ करें।60 सेकंड पर ऑटो में एक्सपोजर समय के साथ ऑटो एक्सपोजर में सेटअप रखें, एफ / स्टॉप वन के एपर्चर पर माध्यम को बिनिंग करें, उत्तेजना फ़िल्टर अवरुद्ध हो गया, और उत्सर्जन फ़िल्टर खुला हो। जब प्रारंभ समाप्त हो जाता है, तो इमेजिंग विज़ार्ड और बायोल्यूमिनेसेंस का चयन करें और फिर छवि विषय में माउस का चयन करने के लिए अगला, फ़िल्टर खोलें क्लिक करें. फ़ील्ड दृश्य में, 10 सेंटीमीटर पर चरण C और 1.50 सेंटीमीटर पर विषय ऊंचाई का चयन करें।उसके बाद, क्लिक करें छवि सेटअप चरण C.सुनिश्चित करें कि माउस उचित सुपाइन स्थिति में मंच पर रखा गया है करने से पहले दरवाजा बंद करने और प्राप्त करें बटन क्लिक करने से पहले। स्क्रीन पर किसी छवि के प्रकट होने की प्रतीक्षा करें. अन्य माउस के लिए प्रक्रिया को दोहराएँ।फेफड़ों के मेटास्टेसिस का पता लगाने के लिए, एक मोटे कार्डबोर्ड पेपर का उपयोग करके प्राथमिक ट्यूमर के मजबूत संकेत को कवर करें और कैमरे की ओर फेफड़ों के केवल वेंट्रल पक्ष को उजागर करें। पहले वर्णित के रूप में एक ही पैरामीटर का उपयोग कर छवि कैप्चर करें। स्तन कैंसर सेल लाइनों को फ्लोरोसेंट जीएफपी को व्यक्त करने वाले एक लेंटीवायरस वेक्टर से संक्रमित किया गया था और एफएसी सॉर्टिंग के अधीन था।जीएफपी-पॉजिटिव कोशिकाओं को दो दिन बाद संक्रमण के बाद क्रमबद्ध किया गया था, मढ़वाया गया था और प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप द्वारा कल्पना की गई थी। इन विट्रो लूसिफेरस गतिविधि की पुष्टि लूसिफेरस गतिविधि के स्तर में सेल नंबर-निर्भर वृद्धि के साथ की गई थी। इसके अलावा, लूसिफेरस गतिविधि और सेल नंबर के बीच एक रैखिक सहसंबंध पाया गया था।स्तन कैंसर सेल लाइनों को इंजेक्ट करने के बाद, चूहों को ट्यूमर के विकास कैनेटीक्स को निर्धारित करने के लिए हर दो सप्ताह में बायोल्यूमिनेसेंस पढ़ने के अधीन किया गया था। ट्यूमर वृद्धि कैनेटीक्स कम आक्रामक सेल लाइनों, MCF-7 और MDA-MB-468 की तुलना में MDA-MB-231 सेल लाइनों में तेजी से था। ल्यूमिनेसेंस गतिविधि को तीन सेल लाइनों के लिए परिमाणित किया गया था।इंजेक्शन के छह सप्ताह बाद, जीएफपी अभिव्यक्ति को बनाए रखने के लिए काटे गए ट्यूमर पाए गए थे। इसके अलावा, सकारात्मक bioluminescence रीडिंग वास्तविक समय में पूरे माउस के फेफड़ों से प्राप्त किए गए थे। फेफड़ों को सकारात्मक मेटास्टैटिक उपनिवेशों को सत्यापित करने के लिए काटा गया था, और जीएफपी और बायोल्यूमिनेसेंस के लिए मेटास्टैटिक कॉलोनियों को देखा गया था।इंजेक्शन प्रक्रिया करते समय सावधान रहना अधिक महत्वपूर्ण है। एक अनुचित इंजेक्शन ट्यूमर की वृद्धि दर या ट्यूमर की अनुपस्थिति में विचलन का कारण बन सकता है। हम जीएफपी अभिव्यक्ति का पता लगाकर विवो और पूर्व विवो में फेफड़ों के मेटास्टेसिस की जांच कर सकते हैं।इसके अलावा, हम इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री-आधारित धुंधला द्वारा फेफड़ों के हिस्टोपैथोलॉजी का भी अध्ययन कर सकते हैं। यह तकनीक नए प्रश्नों का पता लगाने के लिए उपयोगी हो सकती है, जैसे कि दवा प्रभावकारिता अध्ययन का प्रभाव।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

उपयोग कार्यात्मक जीनोमिक्स स्क्रीनिंग कैंसर सेल उपगोल संस्कृतियों में संभावित उपन्यास ड्रग लक्ष्यों की पहचान करने के लिए

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस अध्ययन के लिए Traceable पत्रकारों के साथ स्तन कैंसर के रोगी व्युत्पन्न Xenografts की लेबलिंग

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

स्तन कैंसर से संबंधित lymphedema के Ultrasonographic मूल्यांकन

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

ऑस्टियो में फेफड़े के मेटास्टेसिस परख का उपयोग मेटास्टेटिक फेफड़ों औपनिवेशीकरण अध्ययन में व्यावहारिक विचार

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Spheroids, कॉलोनी के गठन की परख, और Zebrafish Xenografts द्वारा विरोधी अनंतमूलि OT48 की सी गतिविधि के नैदानिक मूल्यांकन

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

स्तन कैंसर कोशिकाओं के चूहों स्तन वसा पैड में Orthotopic इंजेक्शन

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

कई सार्वजनिक रूप से सुलभ डेटाबेस का उपयोग कर स्तन कैंसर में Biomarker के डेटा खनन और एकीकृत विश्लेषण प्रदर्शन

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

चूहे में ट्यूमर की वृद्धि को कम करने के लिए MicroRNA के Vivo निषेध में

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

ऑर्थोटोपिक स्तन कैंसर मॉडल का उपयोग कर ट्रिपल नकारात्मक स्तन कैंसर का अध्ययन

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

स्तन कैंसर मेटास्टैटिक उपनिवेशीकरण और फेफड़ों में बोझ की मात्रा निर्धारित करने के लिए वीवो इमेजिंग में पूंछ नस मेटास्टेसिस Assays और वास्तविक समय का संयुक्त उपयोग

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...