Name: monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Vi takker medlemmene av Y.D.S. laboratoriet. Vi vil takke Wohl Institute for Translational Medicine ved Hadassah Medical Center, Jerusalem, for å ha levert det lille dyreavbildningsanlegget. Denne studien ble støttet av Research Career Development Award fra Israel Cancer Research Fund.

Alle museeksperimenter ble utført under det hebraiske universitetets institusjonelle dyrepleie- og brukskomitégodkjente protokoll MD-21-16429-5. I tillegg er det hebraiske universitetet sertifisert av Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC).
1. Vedlikehold av cellelinje
MERK: Cellelinjene for human brystkreft (MCF-7, MDA-MB-468 og MDA-MB-231) ble brukt i denne protokollen.
<ol><li>Kultur alle brystkreft celle linjer i Dulb...

<ol>
	<li>Waks, A. G., Winer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+treatment:+A+review.">Breast cancer treatment: A review.</a> JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).</li><li>Jin, X., Mu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+breast+cancer+metastasis.">Targeting breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer: Basic and Clinical Research. 9, 23-34 (2015).</li><li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model.">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (56), e3175 (2011).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212 (2006).</li><li>Kocat&#252;rk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (96), e51967 (2015).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+whole+picture.">The whole picture.</a> Nature. 463 (7283), 977-979 (2010).</li><li>Wang, Y., Tseng, J. -. C., Sun, Y., Beck, A. H., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+tumor+burden+and+molecular+pathways+in+mouse+models+of+cancer.">Noninvasive imaging of tumor burden and molecular pathways in mouse models of cancer.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (2), 135-144 (2015).</li><li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging.">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (1), 3-10 (2015).</li><li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+mouse+model+of+spontaneous+breast+cancer+metastasis.">An orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (114), (2016).</li><li>Morten, B. C., Scott, R. J., Avery-Kiejda, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Three+Different+Methods+for+Determining+Cell+Proliferation+in+Breast+Cancer+Cell+Lines.">Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54040 (2016).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (45), e2077 (2010).</li><li>Lv, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+transplantation+of+breast+tumors+as+preclinical+models+for+breast+cancer.">Orthotopic transplantation of breast tumors as preclinical models for breast cancer.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61173 (2020).</li><li>Cheng, R. Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+triple+negative+breast+cancer+using+orthotopic+breast+cancer+model.">Studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), e60316 (2020).</li><li>Bajikar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-suppressor+inactivation+of+GDF11+occurs+by+precursor+sequestration+in+triple-negative+breast+cancer.">Tumor-suppressor inactivation of GDF11 occurs by precursor sequestration in triple-negative breast cancer.</a> Developmental Cell. 43 (4), 418-435 (2017).</li><li>Khatib, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glutathione+peroxidase+8+(GPX8)/IL-6/STAT3+axis+is+essential+in+maintaining+an+aggressive+breast+cancer+phenotype.">The glutathione peroxidase 8 (GPX8)/IL-6/STAT3 axis is essential in maintaining an aggressive breast cancer phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (35), 21420-21431 (2020).</li></ol>

Dyrebaserte eksperimenter er obligatoriske for kreftforskning 7,8,9, og faktisk er det utviklet mange protokoller 3,6,10,11,12,13,14. Imidlertid bestemte de fleste av disse studiene den biologiske e...

Brystkreft er hyppige typer kreft over hele verden, med omtrent 250.000 nye tilfeller diagnostisert hvert år i USA1. Til tross for sin høye forekomst har et nytt sett med kreftmedisiner forbedret pasientresultatenefor brystkreft betydelig 2. Imidlertid er disse behandlingene fortsatt utilstrekkelige, da mange pasienter opplever tilbakefall av sykdom og metastatisk spredning til vitale organer2, som er hovedårsaken til pasientens sykelighet og dødelighet. Derfor er en av hovedutfordringene i brystkreftforskning å identifisere molekylære mekanismer som regulerer dannelsen av distale metastaser for å utvikle nye midler for å hemme utviklingen.
Kreftmetastase er en dynamisk prosess der celler løsner fra den primære svulsten og invaderer nærliggende vev gjennom blodsirkulasjonen. Dermed kan dyremodeller der cellene gjennomgår en lignende metastatisk kaskade lette identifiseringen av mekanismene som styrer denne prosessen 3,4. I tillegg er disse in vivo-modellene avgjørende for å utvikle brystkreftterapeutiske midler 5,6. Imidlertid kan disse ortotopiske modellene ikke indikere den faktiske tumorvekstkinetikken, da effekten bare bestemmes ved avslutning. Derfor etablerte vi et luciferasebasert verktøy for å oppdage tumorutvikling og metastatisk kolonisering i sanntid. I tillegg uttrykker disse cellene GFP for å oppdage metastatiske kolonier. Denne tilnærmingen er relativt enkel og involverer ingen invasive prosedyrer3. Dermed er kombinasjon av luciferase og fluorescensdeteksjon en nyttig strategi for å fremme de prekliniske studiene av brystkreftterapeutikk og sykdomshåndtering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.7 mL eppendorf tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LMCT1.7B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LTB15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>COSTAR</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Plates BLACK flat bottom</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN30496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counters</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A50298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria III sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 Needles 27 G (3/4&#39;&#39;)</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak Syringes 1 mL x 120</td>
			<td>BD</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 150 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counting chamber slides</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (DMEM), high glucose, no glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eppendorf Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EP5820740000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-127-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUW GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Yossi Buganim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Lior Nissim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP Terrell</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-01-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine Solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>bioluminescence measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF-7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-468</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>2430-475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hylabs</td>
			<td>BP655/500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-dR8.2-dvpr</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8455</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-VSV-G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8454</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm (90x15)</td>
			<td>MINI PLAST</td>
			<td>820-090-01-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 10ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 25ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 5ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010005S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX304 Luciferase-V5 blast plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#98580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoirs</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN20621STR200TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ18 Stereo microscopes</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Bio-Lab</td>
			<td>190359400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filters</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-FPV403030S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA Solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum driven Filters</td>
			<td>SOFRA LIFE SCIENCE</td>
			<td>SPE-22-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virusolve</td>
			<td></td>
			<td>disinfectant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoGlo Luciferin, In Vivo Grade</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#6366236001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence

Brystkreft er en hyppig heterogen malignitet og den nest ledende årsaken til dødelighet hos kvinner, hovedsakelig på grunn av fjern organmetastase. Flere dyremodeller har blitt generert, inkludert de mye brukte ortotopiske musemodellene, hvor kreftceller injiseres i pattedyrfettputen. Imidlertid kan disse modellene ikke bidra til å overvåke tumorvekstkinetikk og metastatisk kolonisering. Banebrytende verktøy for å overvåke kreftceller i sanntid hos mus vil øke forståelsen av tumorbiologi betydelig. 
Her ble brystkreftcellelinjer stabilt uttrykt luciferase og grønt fluorescerende protein (GFP) etablert. Spesielt inneholder denne teknikken to sekvensielle trinn initiert ved å måle luciferase aktivitet in vitro og etterfulgt av implantasjon av kreftceller i mammary fett pads av nonobese diabetisk-alvorlig kombinert immunsvikt (NOD-SCID) mus. Etter injeksjonen overvåkes både tumorveksten og metastatisk kolonisering i sanntid av det ikke-invasive bioluminescensavbildningssystemet. Deretter vil kvantifiseringen av GFP-uttrykkende metastaser i lungene bli undersøkt ved fluorescensmikroskopi for å validere de observerte bioluminescensresultatene. Dette sofistikerte systemet som kombinerer luciferase og fluorescensbaserte deteksjonsverktøy evaluerer kreftmetastase in vivo, som har stort potensial for bruk i brystkreftterapeutikk og sykdomshåndtering.

Vi genererte brystkreftcellelinjer (MDA-MB-231, MCF-7 og MDA-MB-468) som uttrykte GFP- og luciferasevektorer. Spesielt ble dette oppnådd ved en sekvensiell infeksjon. For det første ble brystkreftcellelinjene smittet med en lentivirusvektor som uttrykker fluorescerende GFP. GFP-positive celler (GFP+) ble sortert 2 dager etter infeksjon (figur 1A,B) og infisert med pLX304 Luciferase-V5 vektoren. Deretter ble blasticidin brukt til å velge for luciferase for å ge...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

Her beskriver vi en ikke-invasiv overvåkingsmetode som involverer luciferase og grønt fluorescerende proteinuttrykk i ulike brystkreftcellelinjer. Denne protokollen gir en teknikk for å overvåke tumordannelse og metastatisk kolonisering i sanntid hos mus.

Overvåking av brystkreftvekst og metastatisk kolonidannelse hos mus ved hjelp av bioluminescens

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...

Ved hjelp av dette sofistikerte, ikke-invasive verktøyet kan vi i sanntid overvåke tumorvekstkinetikk og metastatisk kolonisering hos mus, som har et stort potensial i brystkreftterapeutisk og sykdomshåndtering. Å kombinere luciferase og fluorescensdeteksjon er en nyttig strategi for å fremme de prekliniske studiene av brystkreftprogresjon og sykdomshåndtering. Dette kan brukes til anticancer narkotika studier.Denne protokollen er ikke begrenset til brystkreft og kan brukes på andre karsinomer, for eksempel lunge og bukspyttkjertel. Begynn med å dyrke cellene MCF-7, MDA-MB-468 og MDA-MB-231 GFP og luciferasepositive celler separat i en plate på 16 centimeter til 80 %. Etter høsting av cellene ved trypsinisering, frø et økende antall celler i hver brønn inn i en svart 96-brønns plate.Fyll deretter alle brønnene med 100 mikroliter DMEM, og inkuber i 16 til 24 timer i 37 grader Celsius, 5% CO2 inkubator. Forbered luciferinløsning i PBS ved en konsentrasjon på 1,5 milligram per milliliter, og lagre løsningen ved minus 20 grader Celsius. Etter inkubasjon, vask cellene en gang med PBS forsiktig før du tilsetter 100 mikroliter luciferinoppløsning i hver brønn.Vent i to minutter, og mål deretter luciferaseaktiviteten i alle brystkreftcellene ved hjelp av bioluminescens. Før du injiserer musen, må du overføre fem millioner MCF-7- og MDA-MB-468-celler til 200 mikroliter PBS og to millioner MDA-MB-231 GFP- og luciferasepositive celler i 100 mikroliter PBS. Forbered den bedøvede musen til injeksjon ved å plassere en kjegle over hodet i en liggende stilling.Tørk deretter bukområdet av musen over brystkjertelen med etanol ved hjelp av en bomullspinne, og løft den fjerde brystkjertelen med tang før du setter inn en 27-gauge nål under fettputen for sakte å injisere 100 mikroliter av den forberedte cellefjæringen. Etter injeksjonen, ta musen ut av hetten og overfør den til et nytt bur under observasjon til den kommer tilbake til bevisstheten. Før bioluminescensdeteksjonen, hold den bevisste musen ved å holde nakken med venstre hånd og vippe hånden til venstre, noe som resulterer i musens ansikt oppover med underkroppen i en liggende stilling.Injiser 100 mikroliter 30 milligram-per-milliliter luciferin intraperitoneally i nedre venstre abdominal kvadrant av musen ved hjelp av en en milliliter sprøyte. Hold musen i syv minutter uten anestesi, etterfulgt av tre minutter i anestesikammeret før du måler tumorkinetikken. Mens musen er under inkubasjon, åpner du programvaren og initialiserer bildesystemet ved å klikke initialiser-knappen.Hold oppsettet i automatisk eksponering med eksponeringstid i auto på 60 sekunder, binning medium ved en blenderåpning av f / stopp en, eksitasjonsfilter blokkert og utslippsfilter åpent. Når initialiseringen er over, velger du Imaging Wizard og Bioluminescence, og deretter klikker du Neste, Åpne filter for å velge musen i bildeemnet. I feltvisningen velger du trinn C ved 10 centimeter og motivhøyde på 1,50 centimeter.Klikk deretter Image Setup Stage til C.Forsikre deg om at musen er plassert på scenen i riktig liggende posisjon før du lukker døren og klikker på Hent-knappen. Vent til et bilde vises på skjermen. Gjenta prosedyren for den andre musen.For å oppdage lungemetastase, dekk det sterke signalet til den primære svulsten ved hjelp av et tykt papppapir og eksponer bare den ventrale siden av lungene mot kameraet. Ta bilde ved hjelp av de samme parameterne som beskrevet tidligere. Brystkreftcellelinjene ble infisert med en lentivirusvektor som uttrykte fluorescerende GFP og underlagt FAC-sortering.De GFP-positive cellene ble sortert to dager etter infeksjon, belagt og visualisert av fluorescensmikroskop. In vitro luciferase-aktiviteten ble bekreftet med en cellenummeravhengig økning i luciferaseaktivitetsnivåene. I tillegg ble det funnet en lineær korrelasjon mellom luciferaseaktiviteten og cellenummeret.Etter å ha injisert brystkreftcellelinjene, ble musene utsatt for bioluminescensavlesning annenhver uke for å bestemme tumorvekstkinetikken. Tumorvekstkinetikken var raskere i MDA-MB-231-cellelinjene enn i de mindre aggressive cellelinjene, MCF-7 og MDA-MB-468. Luminescensaktiviteten ble kvantifisert for tre cellelinjer.Seks uker etter injeksjon ble de høstede svulstene funnet for å opprettholde GFP-uttrykket. Også positive bioluminescensavlesninger ble oppnådd fra lungen til hele musen i sanntid. Lungen ble høstet for å verifisere positive metastatiske kolonier, og de metastatiske koloniene ble observert for GFP og bioluminescens.Det er viktigere å være forsiktig mens du utfører injeksjonsprosedyren. En feil injeksjon kan føre til avvik i tumorvekst eller fravær av svulst. Vi kan undersøke lungemetastase in vivo og ex vivo ved å oppdage GFP-uttrykk.I tillegg kan vi også studere histopatologien til lungene ved immunhiistokjemibasert farging. Denne teknikken kan være nyttig for å utforske de nye spørsmålene, for eksempel effekten av legemiddeleffektstudier.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utnytte Funksjonell genom Screening for å identifisere potensielt Novel narkotika mål i Cancer Cell spheroid kulturer

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Merking av brystkreftpasient-avledet xenografter med Spor Reporters for tumorvekst og metastase Studier

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

Ultralyd Evaluering av brystkreft relatert lymfødem

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Praktiske hensyn i å studere metastatisk lungekreft kolonisering i Osteosarcoma bruker lunge metastasering analysen

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Prekliniske vurdering av Bioactivity av Anticancer kumarin OT48 ved Spheroids, koloni formasjon analyser og sebrafisk Xenografts

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic injeksjon av brystkreft celler i mus Mammary fett puten

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

Utføre data mining og integrerende analyse av biomarkør i brystkreft bruke flere allment tilgjengelige databaser

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo hemming av MicroRNA å redusere tumor vekst i mus

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studere trippel negativ brystkreft ved hjelp ortotopisk brystkreft modell

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Kombinert bruk av hale vene metastasering analyser og Real-Time in vivo Imaging å kvantifisere brystkreft metastatisk kolonisering og byrde i lungene

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...