Name: monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Благодарим сотрудников лаборатории Y.D.S. Мы хотели бы поблагодарить Институт трансляционной медицины Воля в Медицинском центре Хадасса, Иерусалим, за предоставление центра визуализации мелких животных. Это исследование было поддержано премией Research Career Development Award от Израильского фонда исследований рака.

Все эксперименты на мышах проводились в соответствии с протоколом MD-21-16429-5, одобренным Комитетом по уходу и использованию животных Еврейского университета. Кроме того, Еврейский университет сертифицирован Ассоциацией по оценке и аккредитации по уходу за лабораторными животными (AAALAC).<...

<ol>
	<li>Waks, A. G., Winer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+treatment:+A+review.">Breast cancer treatment: A review.</a> JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).</li><li>Jin, X., Mu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+breast+cancer+metastasis.">Targeting breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer: Basic and Clinical Research. 9, 23-34 (2015).</li><li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model.">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (56), e3175 (2011).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212 (2006).</li><li>Kocat&#252;rk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (96), e51967 (2015).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+whole+picture.">The whole picture.</a> Nature. 463 (7283), 977-979 (2010).</li><li>Wang, Y., Tseng, J. -. C., Sun, Y., Beck, A. H., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+tumor+burden+and+molecular+pathways+in+mouse+models+of+cancer.">Noninvasive imaging of tumor burden and molecular pathways in mouse models of cancer.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (2), 135-144 (2015).</li><li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging.">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (1), 3-10 (2015).</li><li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+mouse+model+of+spontaneous+breast+cancer+metastasis.">An orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (114), (2016).</li><li>Morten, B. C., Scott, R. J., Avery-Kiejda, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Three+Different+Methods+for+Determining+Cell+Proliferation+in+Breast+Cancer+Cell+Lines.">Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54040 (2016).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (45), e2077 (2010).</li><li>Lv, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+transplantation+of+breast+tumors+as+preclinical+models+for+breast+cancer.">Orthotopic transplantation of breast tumors as preclinical models for breast cancer.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61173 (2020).</li><li>Cheng, R. Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+triple+negative+breast+cancer+using+orthotopic+breast+cancer+model.">Studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), e60316 (2020).</li><li>Bajikar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-suppressor+inactivation+of+GDF11+occurs+by+precursor+sequestration+in+triple-negative+breast+cancer.">Tumor-suppressor inactivation of GDF11 occurs by precursor sequestration in triple-negative breast cancer.</a> Developmental Cell. 43 (4), 418-435 (2017).</li><li>Khatib, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glutathione+peroxidase+8+(GPX8)/IL-6/STAT3+axis+is+essential+in+maintaining+an+aggressive+breast+cancer+phenotype.">The glutathione peroxidase 8 (GPX8)/IL-6/STAT3 axis is essential in maintaining an aggressive breast cancer phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (35), 21420-21431 (2020).</li></ol>

Эксперименты на животных являются обязательными для исследования рака 7,8,9, и действительно было разработано много протоколов 3,6,10,11,12,13,14<...

Рак молочной железы является частым типом рака во всем мире, причем в Соединенных Штатах ежегодно диагностируется около 250 000 новых случаев1. Несмотря на высокую заболеваемость, новый набор противоопухолевых препаратов значительно улучшил исходы лечения рака молочной железы2. Тем не менее, эти методы лечения по-прежнему неадекватны, так как многие пациенты испытывают рецидив заболевания и метастатическое распространение на жизненно важные органы2, что является основной причиной заболеваемости и смертности пациентов. Поэтому одной из основных задач в исследованиях рака молочной железы является выявление молекулярных механизмов, регулирующих образование дистальных метастазов, для разработки новых средств для ингибирования их развития.
Метастазирование рака – это динамический процесс, при котором клетки отделяются от первичной опухоли и вторгаются в соседние ткани через кровообращение. Таким образом, животные модели, в которых клетки подвергаются подобному метастатическому каскаду, могут облегчить идентификацию механизмов, управляющих этим процессом 3,4. Кроме того, эти модели in vivo необходимы для разработки терапевтических агентов рака молочной железы 5,6. Однако эти ортотопические модели не могут указывать фактическую кинетику роста опухоли, поскольку эффект определяется только после прекращения. Поэтому мы создали инструмент на основе люциферазы для обнаружения развития опухоли и метастатической колонизации в режиме реального времени. Кроме того, эти клетки экспрессируют GFP для обнаружения метастатических колоний. Этот подход относительно прост и не предполагает каких-либо инвазивных процедур3. Таким образом, сочетание люциферазы и обнаружения флуоресценции является полезной стратегией для продвижения доклинических исследований терапии рака молочной железы и лечения заболеваний.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.7 mL eppendorf tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LMCT1.7B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LTB15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>COSTAR</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Plates BLACK flat bottom</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN30496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counters</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A50298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria III sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 Needles 27 G (3/4&#39;&#39;)</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak Syringes 1 mL x 120</td>
			<td>BD</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 150 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counting chamber slides</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (DMEM), high glucose, no glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eppendorf Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EP5820740000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-127-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUW GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Yossi Buganim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Lior Nissim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP Terrell</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-01-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine Solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>bioluminescence measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF-7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-468</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>2430-475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hylabs</td>
			<td>BP655/500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-dR8.2-dvpr</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8455</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-VSV-G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8454</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm (90x15)</td>
			<td>MINI PLAST</td>
			<td>820-090-01-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 10ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 25ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 5ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010005S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX304 Luciferase-V5 blast plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#98580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoirs</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN20621STR200TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ18 Stereo microscopes</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Bio-Lab</td>
			<td>190359400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filters</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-FPV403030S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA Solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum driven Filters</td>
			<td>SOFRA LIFE SCIENCE</td>
			<td>SPE-22-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virusolve</td>
			<td></td>
			<td>disinfectant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoGlo Luciferin, In Vivo Grade</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#6366236001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence

Рак молочной железы является частым гетерогенным злокачественным новообразованием и второй по значимости причиной смертности у женщин, в основном из-за отдаленных метастазов в органы. Было создано несколько моделей на животных, в том числе широко используемые ортотопические мышиные модели, где раковые клетки вводятся в жировую прокладку молочной железы. Однако эти модели не могут помочь контролировать кинетику роста опухоли и метастатическую колонизацию. Передовые инструменты для мониторинга раковых клеток в режиме реального времени у мышей значительно улучшат понимание биологии опухоли. 
Здесь были установлены клеточные линии рака молочной железы, стабильно экспрессирующие люциферазу и зеленый флуоресцентный белок (GFP). В частности, этот метод содержит два последовательных шага, инициированных измерением активности люциферазы in vitro и сопровождаемых имплантацией раковых клеток в подушечки молочного жира мышей с комбинированным иммунодефицитом (NOD-SCID). После инъекции как рост опухоли, так и метастатическая колонизация контролируются в режиме реального времени неинвазивной системой визуализации биолюминесценции. Затем количественная оценка GFP-экспрессирующих метастазов в легких будет исследована флуоресцентной микроскопией для подтверждения наблюдаемых результатов биолюминесценции. Эта сложная система, сочетающая в себе люциферазу и инструменты обнаружения на основе флуоресценции, оценивает метастазирование рака in vivo, что имеет большой потенциал для использования в терапии рака молочной железы и лечении заболеваний.

Мы сгенерировали клеточные линии рака молочной железы (MDA-MB-231, MCF-7 и MDA-MB-468), экспрессирующие векторы GFP и люциферазы. В частности, это было достигнуто путем последовательной инфекции. Во-первых, клеточные линии рака молочной железы были инфицированы лентивирусным вектором, экспрессирующ...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

Здесь мы описываем неинвазивный метод мониторинга, включающий экспрессию люциферазы и зеленого флуоресцентного белка в различных клеточных линиях рака молочной железы. Этот протокол обеспечивает технику мониторинга образования опухоли и метастатической колонизации в режиме реального времени у мышей.

Мониторинг роста рака молочной железы и метастатического колониеобразования у мышей с использованием биолюминесценции

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...

Используя этот сложный, неинвазивный инструмент, мы можем в режиме реального времени контролировать кинетику роста опухоли и метастатическую колонизацию у мышей, что имеет большой потенциал в терапии рака молочной железы и лечении заболеваний. Сочетание люциферазы и обнаружения флуоресценции является полезной стратегией для продвижения доклинических исследований прогрессирования рака молочной железы и лечения заболеваний. Это может быть применено для исследований противоопухолевых препаратов.Этот протокол не ограничивается раком молочной железы и может применяться к другим карциномам, таким как легкие и поджелудочная железа. Начните с выращивания MCF-7, MDA-MB-468 и MDA-MB-231 GFP и люцифераз-положительных клеток отдельно в 16-сантиметровой пластине до 80% конфлюентности. После сбора клеток путем трипсинизации посейте все большее количество клеток в каждой лунке в черную 96-луночную пластину.Затем заполните все колодцы 100 микролитрами DMEM и инкубируйте в течение 16-24 часов при температуре 37 градусов Цельсия, 5% CO2 инкубатора. Готовят раствор люциферина в PBS в концентрации 1,5 миллиграмма на миллилитр и хранят раствор при минус 20 градусах Цельсия. После инкубации тщательно промыть клетки PBS, прежде чем добавлять 100 микролитров раствора люциферина в каждую лунку.Подождите две минуты, а затем измерьте активность люциферазы во всех клетках рака молочной железы с помощью биолюминесценции. Перед инъекцией мыши переместите пять миллионов клеток MCF-7 и MDA-MB-468 в 200 микролитров PBS и два миллиона MDA-MB-231 GFP и люцифераз-положительных клеток в 100 микролитров PBS. Подготовьте обезболенную мышь к инъекции, поместив конус над головой в лежачее положение.Затем протрите брюшную область мыши над молочной железой этанолом, используя ватный тампон, и поднимите четвертую молочную железу щипцами, прежде чем вставить иглу 27-го калибра под жировую прокладку, чтобы медленно ввести 100 микролитров подготовленной клеточной суспензии. После инъекции выньте мышь из капюшона и перенесите ее в новую клетку под наблюдением, пока она не вернется в сознание. Перед обнаружением биолюминесценции удерживайте сознательную мышь, держа ее шею левой рукой и наклоняя руку влево, в результате чего лицо мыши поднимается вверх, а нижняя часть тела находится в положении лежа.Введите 100 микролитров 30 миллиграммов на миллилитр люциферина внутрибрюшинно в нижний левый брюшной квадрант мыши с помощью одномиллилитрового шприца. Держите мышь в течение семи минут без анестезии, а затем три минуты в анестезиологической камере, прежде чем измерять кинетику опухоли. Пока мышь находится в инкубации, откройте программное обеспечение и инициализируйте систему обработки изображений, нажав кнопку Инициализировать.Держите настройку в автоматическом экспонировании с временем экспозиции в авто в 60 секунд, биннингом среды на диафрагме f/stop one, фильтр возбуждения заблокирован и эмиссионный фильтр открыт. После завершения инициализации выберите Мастер создания образов и Биолюминесценция, а затем нажмите кнопку Далее, Открыть фильтр, чтобы выбрать мышь в объекте изображения. В поле зрения выберите стадию C на 10 сантиметров и высоту объекта на 1,50 сантиметра.Затем щелкните Стадия настройки образа, чтобы C.Убедитесь, что мышь помещена на рабочую область в правильном положении лежа, прежде чем закрыть дверь и нажать кнопку Получить. Дождитесь появления изображения на экране. Повторите процедуру для другой мыши.Чтобы обнаружить метастазы в легкие, накройте сильный сигнал первичной опухоли с помощью плотной картонной бумаги и обнажите только вентральную сторону легких по направлению к камере. Захватите изображение, используя те же параметры, что и описанные ранее. Клеточные линии рака молочной железы были инфицированы лентивирусным вектором, экспрессирующим флуоресцентный GFP и подлежащим сортировке FAC.GFP-положительные клетки были отсортированы через два дня после заражения, покрыты и визуализированы флуоресцентным микроскопом. Активность люциферазы in vitro была подтверждена клеточным числозависимым увеличением уровня активности люциферазы. Кроме того, была обнаружена линейная корреляция между активностью люциферазы и номером клетки.После инъекции клеточных линий рака молочной железы мышей подвергали показаниям биолюминесценции каждые две недели, чтобы определить кинетику роста опухоли. Кинетика роста опухоли была быстрее в клеточных линиях MDA-MB-231, чем в менее агрессивных клеточных линиях, MCF-7 и MDA-MB-468. Люминесцентная активность была количественно определена для трех клеточных линий.Через шесть недель после инъекции было обнаружено, что собранные опухоли поддерживают экспрессию GFP. Кроме того, положительные показания биолюминесценции были получены из легкого всей мыши в режиме реального времени. Легкое было собрано для проверки положительных метастатических колоний, а метастатические колонии наблюдались для GFP и биолюминесценции.Важнее быть осторожным при выполнении процедуры инъекции. Неправильная инъекция может привести к отклонению скорости роста опухоли или отсутствию опухоли. Мы можем исследовать метастазы в легкие in vivo и ex vivo, обнаруживая экспрессию GFP.Кроме того, мы также можем изучать гистопатологию легких путем окрашивания на основе иммуногистохимии. Этот метод может быть полезен для изучения новых вопросов, таких как влияние исследований эффективности лекарств.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Использование функциональной геномики скрининг для выявления потенциально новых целей наркотиком в сфероида культур раковых клеток

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Маркировку рака молочной железы на пациента получены ксенотрансплантатов с прослеживаемы Репортеров для опухолевого роста и метастазирования исследований

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

Ультрасонографическая Оценка рака молочной железы, связанных с лимфедема

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Практические соображения в изучении метастатического легких колонизации в остеосаркома, используя Assay легочных метастазов

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Доклинические оценки отпорности противораковые кумарина OT48 сфероидов, колонии формирования анализов и ксенотрасплантатов данио рерио

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Ортотопическая инъекции клеток рака молочной железы в мышей молочной железы жировой ткани

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

Выполнение интеллектуального анализа данных и интегративный анализ биомаркеров в раке молочной железы с использованием нескольких публично доступных баз данных

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

В Vivo ингибирование микроРНК для уменьшения роста опухоли у мышей

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Изучение Тройной отрицательный рак молочной железы Использование ортотопической модели рака молочной железы

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Комбинированное использование хвоста вен ы метастазы анализы и в режиме реального времени в Vivo Imaging для количественной диагностики рака молочной железы метастатическая колонизация и бремя в легких

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...