Name: monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Vi tackar medlemmarna i Y.D.S.-laboratoriet. Vi vill tacka The Wohl Institute for Translational Medicine vid Hadassah Medical Center, Jerusalem, för att ha tillhandahållit den lilla djuravbildningsanläggningen. Denna studie stöddes av Research Career Development Award från Israel Cancer Research Fund.

Alla musexperiment utfördes under hebreiska universitetets institutionella djurvård och användningskommittégodkända protokoll MD-21-16429-5. Dessutom är det hebreiska universitetet certifierat av Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC).
1. Underhåll av cellinjer
OBS: De mänskliga bröstcancercellinjerna (MCF-7, MDA-MB-468 och MDA-MB-231) användes i detta protokoll.
<ol><li>Odla alla bröstcancercellinjer i Dulbeccos...

<ol>
	<li>Waks, A. G., Winer, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+treatment:+A+review.">Breast cancer treatment: A review.</a> JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).</li><li>Jin, X., Mu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+breast+cancer+metastasis.">Targeting breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer: Basic and Clinical Research. 9, 23-34 (2015).</li><li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model.">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (56), e3175 (2011).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212 (2006).</li><li>Kocat&#252;rk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (96), e51967 (2015).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+whole+picture.">The whole picture.</a> Nature. 463 (7283), 977-979 (2010).</li><li>Wang, Y., Tseng, J. -. C., Sun, Y., Beck, A. H., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+tumor+burden+and+molecular+pathways+in+mouse+models+of+cancer.">Noninvasive imaging of tumor burden and molecular pathways in mouse models of cancer.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (2), 135-144 (2015).</li><li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging.">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (1), 3-10 (2015).</li><li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+mouse+model+of+spontaneous+breast+cancer+metastasis.">An orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (114), (2016).</li><li>Morten, B. C., Scott, R. J., Avery-Kiejda, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Three+Different+Methods+for+Determining+Cell+Proliferation+in+Breast+Cancer+Cell+Lines.">Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54040 (2016).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (45), e2077 (2010).</li><li>Lv, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+transplantation+of+breast+tumors+as+preclinical+models+for+breast+cancer.">Orthotopic transplantation of breast tumors as preclinical models for breast cancer.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e61173 (2020).</li><li>Cheng, R. Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+triple+negative+breast+cancer+using+orthotopic+breast+cancer+model.">Studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), e60316 (2020).</li><li>Bajikar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-suppressor+inactivation+of+GDF11+occurs+by+precursor+sequestration+in+triple-negative+breast+cancer.">Tumor-suppressor inactivation of GDF11 occurs by precursor sequestration in triple-negative breast cancer.</a> Developmental Cell. 43 (4), 418-435 (2017).</li><li>Khatib, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glutathione+peroxidase+8+(GPX8)/IL-6/STAT3+axis+is+essential+in+maintaining+an+aggressive+breast+cancer+phenotype.">The glutathione peroxidase 8 (GPX8)/IL-6/STAT3 axis is essential in maintaining an aggressive breast cancer phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (35), 21420-21431 (2020).</li></ol>

Djurbaserade experiment är obligatoriska för cancerforskning 7,8,9, och faktiskt har många protokoll utvecklats 3,6,10,11,12,13,14. De flesta av dessa studier bestämde emellertid den biologiska ...

Bröstcancer är vanliga typer av cancer över hela världen, med cirka 250 000 nya fall som diagnostiseras varje år i USA1. Trots sin höga förekomst har en ny uppsättning läkemedel mot cancer avsevärt förbättrat bröstcancerpatientens resultat2. Dessa behandlingar är dock fortfarande otillräckliga, eftersom många patienter upplever sjukdomsåterfall och metastatisk spridning till vitala organ2, vilket är den främsta orsaken till patientens sjuklighet och dödlighet. Därför är en av de största utmaningarna inom bröstcancerforskning att identifiera de molekylära mekanismer som reglerar bildandet av distala metastaser för att utveckla nya medel för att hämma deras utveckling.
Cancermetastaser är en dynamisk process där celler lossnar från den primära tumören och invaderar angränsande vävnader genom blodcirkulationen. Således kan djurmodeller där cellerna genomgår en liknande metastatisk kaskad underlätta identifieringen av de mekanismer som styr denna process 3,4. Dessutom är dessa in vivo-modeller viktiga för att utveckla terapeutiska medel för bröstcancer 5,6. Dessa ortotopiska modeller kan dock inte indikera den faktiska tumörtillväxtkinetiken eftersom effekten endast bestäms vid avslutning. Därför etablerade vi ett luciferasbaserat verktyg för att upptäcka tumörutveckling och metastatisk kolonisering i realtid. Dessutom uttrycker dessa celler GFP för att detektera de metastatiska kolonierna. Detta tillvägagångssätt är relativt enkelt och involverar inga invasiva förfaranden3. Att kombinera luciferas- och fluorescensdetektering är således en användbar strategi för att främja de prekliniska studierna av bröstcancerterapi och sjukdomshantering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.7 mL eppendorf tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LMCT1.7B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LTB15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L tips</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LRT200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>COSTAR</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well Plates BLACK flat bottom</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN30496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counters</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A50298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria III sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microlance 3 Needles 27 G (3/4&#39;&#39;)</td>
			<td>BD</td>
			<td>302200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak Syringes 1 mL x 120</td>
			<td>BD</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 150 mm x 20 mm Style Dish</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counting chamber slides</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (DMEM), high glucose, no glutamine</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 80i microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eppendorf Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>EP5820740000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-127-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FUW GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Yossi Buganim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Gifted from Dr. Lior Nissim&#39;s lab (Hebrew University of Jerusalem)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP Terrell</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>NDC 66794-01-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine Solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>bioluminescence measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF-7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-468</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC HTB-132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>NORMAX</td>
			<td>2430-475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Hylabs</td>
			<td>BP655/500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-dR8.2-dvpr</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8455</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-VSV-G</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#8454</td>
			<td>Provided by David M. Sabatini&#8217;s lab (Whitehead institute, Boston, USA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm (90x15)</td>
			<td>MINI PLAST</td>
			<td>820-090-01-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 10ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010010S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 25ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 5ml</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-GSP010005S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX304 Luciferase-V5 blast plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#98580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 9</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoirs</td>
			<td>Bar Naor</td>
			<td>BN20621STR200TC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ18 Stereo microscopes</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Bio-Lab</td>
			<td>190359400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filters</td>
			<td>Lifegene</td>
			<td>LG-FPV403030S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue 0.5% solution</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-102-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA Solution B (0.25%), EDTA (0.05%)</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>03-052-1a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum driven Filters</td>
			<td>SOFRA LIFE SCIENCE</td>
			<td>SPE-22-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virusolve</td>
			<td></td>
			<td>disinfectant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoGlo Luciferin, In Vivo Grade</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#6366236001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring breast cancer growth and metastatic colony formation in mice using bioluminescence

Bröstcancer är en frekvent heterogen malignitet och den näst vanligaste orsaken till dödlighet hos kvinnor, främst på grund av avlägsna organmetastaser. Flera djurmodeller har genererats, inklusive de allmänt använda ortotopiska musmodellerna, där cancerceller injiceras i bröstfettkudden. Dessa modeller kan dock inte hjälpa till att övervaka tumörtillväxtkinetik och metastatisk kolonisering. Banbrytande verktyg för att övervaka cancerceller i realtid hos möss kommer avsevärt att främja förståelsen av tumörbiologi. 
Här etablerades bröstcancercellinjer som stabilt uttrycker luciferas och grönt fluorescerande protein (GFP). Specifikt innehåller denna teknik två sekventiella steg som initieras genom att mäta luciferasaktiviteten in vitro och följt av implantation av cancercellerna i bröstfettkuddar av icke-obese diabetiker-svåra kombinerade immunbrist (NOD-SCID) möss. Efter injektionen övervakas både tumörtillväxten och metastatisk kolonisering i realtid av det icke-invasiva bioluminescensavbildningssystemet. Därefter kommer kvantifieringen av GFP-uttryckande metastaser i lungorna att undersökas med fluorescensmikroskopi för att validera de observerade bioluminescensresultaten. Detta sofistikerade system som kombinerar luciferas- och fluorescensbaserade detektionsverktyg utvärderar cancermetastaser in vivo, vilket har stor potential för användning i bröstcancerterapi och sjukdomshantering.

Vi genererade bröstcancercellinjer (MDA-MB-231, MCF-7 och MDA-MB-468) som uttrycker GFP- och luciferasvektorer. Specifikt uppnåddes detta genom en sekventiell infektion. Först infekterades bröstcancercellinjerna med en lentivirusvektor som uttrycker fluorescerande GFP. De GFP-positiva cellerna (GFP+) sorterades 2 dagar efter infektion (figur 1A,B) och infekterades med pLX304 Luciferase-V5-vektorn. Sedan användes blasticidin för att välja för luciferas för...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence at JoVE.com

Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

Här beskriver vi en icke-invasiv övervakningsmetod som involverar luciferas och grönt fluorescerande proteinuttryck i olika bröstcancercellinjer. Detta protokoll ger en teknik för att övervaka tumörbildning och metastatisk kolonisering i realtid hos möss.

Övervakning av bröstcancertillväxt och metastatisk kolonibildning hos möss med bioluminescens

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...

Med hjälp av detta sofistikerade, icke-invasiva verktyg kan vi i realtid övervaka tumörtillväxtkinetik och metastatisk kolonisering hos möss, vilket har en stor potential inom bröstcancerterapi och sjukdomshantering. Att kombinera luciferas och fluorescensdetektering är en användbar strategi för att främja de prekliniska studierna av bröstcancerprogression och sjukdomshantering. Detta kan tillämpas för läkemedelsstudier mot cancer.Detta protokoll är inte begränsat till bröstcancer och kan tillämpas på andra karcinom, såsom lunga och bukspottkörtel. Börja med att odla MCF-7, MDA-MB-468 och MDA-MB-231 GFP och luciferaspositiva celler separat i en 16-centimeter platta till 80% sammanflöde. Efter att ha skördat cellerna genom trypsinisering, frö ett ökande antal celler i varje brunn till en svart 96-brunnsplatta.Fyll sedan alla brunnar med 100 mikroliter DMEM och inkubera i 16 till 24 timmar i 37 grader Celsius, 5% CO2-inkubator. Förbered luciferinlösning i PBS vid en koncentration på 1,5 milligram per milliliter och förvara lösningen vid minus 20 grader Celsius. Tvätta cellerna en gång med PBS försiktigt efter inkubation innan du tillsätter 100 mikroliter luciferinlösning i varje brunn.Vänta i två minuter och mät sedan luciferasaktiviteten i alla bröstcancerceller med hjälp av bioluminescens. Innan du injicerar musen, överför fem miljoner MCF-7- och MDA-MB-468-celler till 200 mikroliter PBS och två miljoner MDA-MB-231 GFP och luciferaspositiva celler till 100 mikroliter PBS. Förbered den bedövade musen för injektion genom att placera en kon över huvudet i ryggläge.Torka sedan av musens bukområde ovanför bröstkörteln med etanol med en bomullspinne och lyft den fjärde bröstkörteln med pincett innan du sätter in en 27-gauge nål under fettkudden för att långsamt injicera 100 mikroliter av den beredda cellsuspensionen. Efter injektionen, ta musen ur huven och överför den till en ny bur under observation tills den återgår till medvetandet. Innan bioluminescensdetekteringen, håll fast den medvetna musen genom att hålla nacken med vänster hand och luta handen åt vänster, vilket resulterar i musens ansikte uppåt med underkroppen i ryggläge.Injicera 100 mikroliter av 30 milligram per milliliter luciferin intraperitonealt i musens nedre vänstra bukkvadrant med en spruta på en milliliter. Håll musen i sju minuter utan anestesi, följt av tre minuter i anestesikammaren innan du mäter tumörkinetiken. Medan musen är under inkubation, öppna programvaran och initiera bildsystemet genom att klicka på Initialize-knappen.Håll inställningen i automatisk exponering med exponeringstid i auto på 60 sekunder, binning medium vid en bländare på f / stop one, excitationsfilter blockerat och emissionsfilter öppet. När initieringen är slut väljer du Bildguiden och Bioluminescens och klickar sedan på Nästa, Öppna filter för att välja mus i bildmotivet. I fältvyn väljer du steg C vid 10 centimeter och motivhöjd vid 1,50 centimeter.Klicka sedan på Image Setup Stage för att C.Se till att musen är placerad på scenen i rätt ryggläge innan du stänger dörren och klickar på knappen Hämta. Vänta tills en bild visas på skärmen. Upprepa proceduren för den andra musen.För att upptäcka lungmetastaser, täck den starka signalen från den primära tumören med ett tjockt kartongpapper och exponera endast den ventrala sidan av lungorna mot kameran. Ta bilden med samma parametrar som beskrivits tidigare. Bröstcancercellinjerna infekterades med en lentivirusvektor som uttrycker fluorescerande GFP och utsattes för FAC-sortering.De GFP-positiva cellerna sorterades två dagar efter infektion, pläterades och visualiserades med fluorescensmikroskop. Luciferasaktiviteten in vitro bekräftades med en cellnummerberoende ökning av luciferasaktivitetsnivåerna. Dessutom hittades en linjär korrelation mellan luciferasaktiviteten och cellnumret.Efter att ha injicerat bröstcancercellinjerna utsattes mössen för bioluminescensavläsning varannan vecka för att bestämma tumörtillväxtkinetiken. Tumörtillväxtkinetiken var snabbare i MDA-MB-231-cellinjerna än i de mindre aggressiva cellinjerna, MCF-7 och MDA-MB-468. Luminiscensaktiviteten kvantifierades för tre cellinjer.Sex veckor efter injektionen visade sig de skördade tumörerna bibehålla GFP-uttrycket. Dessutom erhölls positiva bioluminescensavläsningar från hela musens lunga i realtid. Lungan skördades för att verifiera positiva metastatiska kolonier, och de metastatiska kolonierna observerades för GFP och bioluminescens.Det är viktigare att vara försiktig när du utför injektionsproceduren. En felaktig injektion kan leda till avvikelse i tumörtillväxthastigheten eller frånvaro av tumör. Vi kan undersöka lungmetastasen in vivo och ex vivo genom att detektera GFP-uttryck.Dessutom kan vi också studera lungans histopatologi genom immunohistokemibaserad färgning. Denna teknik kan vara användbar för att utforska de nya frågorna, såsom effekten av läkemedelseffektstudier.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Med hjälp av funktionsgenomik screening för att identifiera potentiellt ny läkemedelsmål för cancercellernas Spheroid Kulturer

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Märkning av bröstcancerpatient som härrör xenografter med spår Reportrar för tumörtillväxt och metastas studier

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

Ultraljud av bröstcancer relaterade lymfödem

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Praktiska överväganden studera metastaserande lungcancer kolonisationen i osteosarkom med pulmonell metastas-analys

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Preklinisk utvärdering av bioaktiviteten av den mot cancer kumarin OT48 av Spheroids, koloni bildandet analyser och zebrafiskar xenograft

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Ortotop injektion av bröstcancerceller i möss mjölkkörtlar fettet Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

Utföra data mining och integrativ analys av Biomarker i bröst Cancer med hjälp av flera allmänt tillgängliga databaser

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo-hämning av mikroRNA för att minska tumörtillväxten hos möss

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studera Triple negativ bröstcancer med ortopotopic bröstcancer modell

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Kombinerad användning av Stjärtvenmetastaser-analyser och real tids in vivo-avbildning för att kvantifiera bröst cancer metastaserande kolonisering och börda i lungorna

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...