이 프로토콜은 성인 마우스에서 대퇴골 골절을 수행하고 연구하는 신뢰할 수있는 기술을 설명합니다. 이 기술은 쉽고 빠르며 최소한의 도구가 필요합니다. 그것은 골절 치유의 다른 단계의 특성화를 허용합니다.
개인은 처음에는 골절 끝을 적절하게 정렬하고 생쥐 사이에 일관된 골절을 만드는 데 어려움을 겪을 수 있습니다. 골절 부위에 세심한주의를 기울이면 핀을 삽입하고 상처를 닫으면이 수술의 성공이 향상됩니다. 시작하려면 킬로그램 당 0.05 밀리그램의 부프레 노르핀을 피하로 주사하여 동물을 준비하십시오.
전기 트리머를 사용하여 대퇴골의 위치에 해당하는 양쪽 허벅지에 두 센티미터 정사각형을 면도합니다. 요오드를 사용하여 면도 된 부위를 살균하고 70 % 에탄올 용액으로 헹구십시오. 다섯 밀리미터 절개를하고 근본적인 근막을 노출시킵니다.
근막을 절단하여 대퇴골을 덮고있는 근육을 노출시킵니다. 조직을 손상시키지 않고 대퇴골에서 근육을 분리 한 다음 뼈에서 근육을 분리하고 대퇴골을 고정시켜 상처를 만듭니다. 대퇴골 샤프트의 중간에 횡단 절단을하십시오.
골수 공동의 원위 부분을 통해 가이드 바늘을 삽입하고 무릎 관절을 가로 질러 실을 밀어 넣으십시오. 그런 다음 가이드 바늘을 제거하고 근위 끝에서 유사한 절차를 수행하십시오. 바늘을 근위 끝에 두고 팁이 피부 위로 튀어 나오게하십시오.
가이드 바늘의 팁 내에 안정화 핀을 삽입하고 가이드 바늘이 당겨 나올 때 근위 구멍으로 들어가도록 밀어 넣은 다음 가이드 바늘을 버립니다. 원위 끝을 근위 끝과 정렬하여 실이 무릎 관절을 빠져 나올 때 원위 골수 구멍을 통과하도록하십시오. 수술 클램프를 사용하여 핀의 끝을 당겨 근위 및 원위 섹션이 함께 당겨지도록하십시오.
그런 다음 수술 핀의 끝을 골절 부위쪽으로 접어 골절 끝을 다시 정렬하십시오. 와이어 커터를 사용하여 바늘 바닥에서 플라스틱을 제거하십시오. 내부 조직 손상을 피하기 위해 핀의 끝을 비틀어주십시오.
마지막으로, 근육을 대퇴골에 교체하고 클립과 함께 피부를 꼬집어 상처 개구부를 닫습니다. 다른 다리의 대퇴골 골절없이 비슷한 절차를 수행하고 상처를 닫으십시오. 성공적인 수술 후, 형광 이미징은 대퇴골 골절 복구 과정에서 발견 된 Prx1 양성 periosteal 세포와 같은 다양한 Messent-Kinal 전구 인자를 밝혀 냈습니다.
골절 된 대퇴골의 알시안 블루 염색은 부드러운 굳은 살의 형성을 나타 냈습니다. 또한, 캘러스 또는 연골 형성의 백분율도 결정되었다. 골절 후 약 28 일에 Micro-CT를 사용함으로써 캘러스 갭 및 골절 갭과 함께 미네랄 화 과정이 감지되었습니다.
또한 골절 끝이 제대로 정렬되지 않았거나 핀으로 고정되지 않은 경우 골절 끝의 전체 또는 한쪽면에 냉담한 형성이 부족하다는 것이 관찰되었습니다. 이 절차를 시도 할 때 부러진 대퇴골의 두 끝을 조심스럽게 정렬하고 핀으로 안정화시켜 적절한 치유를 보장해야합니다. 수술 후 이미징 및 분자 분석을 위해 대퇴골을 수집 할 수 있습니다.
