Name: interphase fluorescence in situ hybridization of bone marrow smears of multiple myeloma
Uploaded: 2022-04-15T14:00:00
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Dieses Projekt wurde vom Innovationsfonds des WNLO 2018WNLOKF023 unterstützt.

Diese Studie wurde nach den Grundsätzen der Helsinki-Erklärung durchgeführt und von der Ethikkommission des Zhongnan-Krankenhauses der Universität Wuhan (Nr. 2019065) genehmigt. Die Proben wurden von einem MM-Patienten in der Abteilung für Hämatologie des Zhongnan-Krankenhauses der Universität Wuhan (China) entnommen.
1. Vorbereitung der BM-Abstriche
<ol><li>Legen Sie die ersten 0,2 ml BM-Lösung auf einen sauberen Einweg-Glasobjektträger.</li>
	<li>Verteilen Sie die...

<ol>
	<li>Sonneveld, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+multiple+myeloma+with+high-risk+cytogenetics:+a+consensus+of+the+International+Myeloma+Working+Group.">Treatment of multiple myeloma with high-risk cytogenetics: a consensus of the International Myeloma Working Group.</a> Blood. 127, 2955-2962 (2016).</li><li>Radbruch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competence+and+competition:+the+challenge+of+becoming+a+long-lived+plasma+cell.">Competence and competition: the challenge of becoming a long-lived plasma cell.</a> Nature Reviews Immunology. 6, 741-750 (2006).</li><li>Lai, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cytogenetics+in+multiple+myeloma:+a+study+of+151+patients+including+117+patients+at+diagnosis.">Improved cytogenetics in multiple myeloma: a study of 151 patients including 117 patients at diagnosis.</a> Blood. 85 (9), 2490-2497 (1995).</li><li>Hallek, M., Bergsagel, P. L., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+myeloma:+increasing+evidence+for+a+multistep+transformation+process.">Multiple myeloma: increasing evidence for a multistep transformation process.</a> Blood. 91, 3-21 (1998).</li><li>Munsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consensus+recommendations+for+risk+stratification+in+multiple+myeloma:+report+of+the+International+Myeloma+Workshop+Consensus+Panel+2.">Consensus recommendations for risk stratification in multiple myeloma: report of the International Myeloma Workshop Consensus Panel 2.</a> Blood. 117, 4696-4700 (2011).</li><li>Gole, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cIg-FISH+On+Patients+with+Multiple+Myeloma+-+A+Modified+and+Simple+Technique+Easily+Incorporated+Into+Routine+Clinical+Service.">cIg-FISH On Patients with Multiple Myeloma - A Modified and Simple Technique Easily Incorporated Into Routine Clinical Service.</a> Blood. 120, 4792-4792 (2012).</li><li>Lee, S. H., Erber, W., Porwit, A., Tomonaga, M., Peterson, L. I. C. S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematology,+ICSH+guidelines+for+the+standardization+of+bone+marrow+specimens+and+reports.">Hematology, ICSH guidelines for the standardization of bone marrow specimens and reports.</a> International Journal of Laboratory Hematology. 30, 349-364 (2008).</li><li>&#352;tifter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+evaluation+of+bone+marrow+aspirate+and+biopsy+is+superior+in+the+prognosis+of+multiple+myeloma.">Combined evaluation of bone marrow aspirate and biopsy is superior in the prognosis of multiple myeloma.</a> Diagnostic Pathology. 5, 30 (2010).</li><li>Huegel, A., Coyle, L., McNeil, R., Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+interphase+fluorescence+in+situ+hybridization+on+direct+hematological+bone+marrow+smears.">Evaluation of interphase fluorescence in situ hybridization on direct hematological bone marrow smears.</a> Pathology. 27, 86-90 (1995).</li><li>Jacobsson, B., Bernell, P., Arvidsson, I., Hast, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+morphology,+esterase+cytochemistry,+and+interphase+cytogenetics+of+peripheral+blood+and+bone+marrow+smears.">Classical morphology, esterase cytochemistry, and interphase cytogenetics of peripheral blood and bone marrow smears.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 44, 1303-1309 (1996).</li><li>Dunning, K., Safo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ultimate+Wright-Giemsa+stain:+60+years+in+the+making.">The ultimate Wright-Giemsa stain: 60 years in the making.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry. 86, 69-75 (2011).</li><li>Woronzoff-Dashkoff, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+wright-giemsa+stain.+Secrets+revealed.">The wright-giemsa stain. Secrets revealed.</a> Clinics in Laboratory Medicine. 22, 15-23 (2002).</li><li>McPherson, R. A., Pincus, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Henry's+Clinical+diagnosis+and+Management+by+Laboratory+Methods+E-book.">Henry's Clinical diagnosis and Management by Laboratory Methods E-book.</a> Elsevier Health Sciences. , (2017).</li><li>Ross, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+from+the+European+Myeloma+Network+on+interphase+FISH+in+multiple+myeloma+and+related+disorders.">Report from the European Myeloma Network on interphase FISH in multiple myeloma and related disorders.</a> Haematologica. 97, 1272-1277 (2012).</li></ol>

Die Anwendung von FISH auf die genetische Risikostratifizierung in MM ist von wesentlicher Bedeutung. Der kritische Teil der FISH-Berichte sind nicht alle kernhaltigen Zellen, sondern klonale PCs, die spezifisch gereinigt oder identifiziert wurden, indem sie mit Anti-CD138-Magnetkügelchen sortiert oder markiert wurden. Interphase FISH nach PC-Sortierung oder cIg-FISH erwies sich aufgrund des relativ geringen Anteils an PCs im BM als signifikant bei der Diagnose von MM. Diese Methoden weisen jedoch einige Mängel auf, da...

Das Multiple Myelom (MM) ist eine maligne Plasmazellerkrankung (PC) mit starker biologischer Heterogenität und großen individuellen Unterschieden in der klinischen Wirksamkeit, mit Überlebenszeiten von Monaten bis Jahrzehnten. Zytogenetische Merkmale sind wichtige prognostische Indikatoren für MM. Das Risikostratifizierungssystem und individualisierte Behandlungen, die auf genetischen Merkmalen basieren, sind zu Themen von intensivem Interesse in der klinischen Forschung zu MM1 geworden. Zu den Aberrationen von PCs, die in einem Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierungspanel (FISH) aus Knochenmark (BM) getestet wurden, gehören del 13q14 (RB1), del 17p13 (TP53), t(4;14) (IGH/FGFR3), t(11;14) (IGH/MYEOV), t(14;16) (IGH/MAF), t(14:20) (IGH/MAFB), 1q21 (CKS1B) Verstärkung/Verstärkung und 1p (CDKN2C) Deletion.
Die Standard-Metaphasenzytogenetik sollte in die Erstbeurteilung von MM-Patienten einbezogen werden. Obwohl die konventionelle G-Band-Karyotypisierung den Vorteil einer Ganzchromosomenanalyse bietet, führt die geringe Ausbeute dieser Methode zu vielen falsch negativen Ergebnissen2. Traditionell wurden PCs als weitgehend unfähig zur Spaltung angesehen, da sie die Endprodukte der B-Lymphozyten-Differenzierung sind. Dies macht es schwierig, geteilte Bilder zu erhalten. Eine verbesserte zytogenetische Analyse in MM mit Langzeitkulturen (6 Tage) und die Stimulation von Kulturen durch Zytokine können eine vielversprechende Methode zur Identifizierung zytogenetischer Anomalien bei neu diagnostizierten MM-Patienten sein3. Selbst wenn die Kulturzeit auf 6 Tage verlängert wurde, wurden zytogenetische Anomalien bei 30%-50% der MM-Patienten genau berichtet4. Darüber hinaus zeichnet sich MM durch komplexe zytogenetische Aberrationen aus, die seine prognostische Heterogenität widerspiegeln. Die Auflösung der traditionellen Chromosomenbanding-Technologie ist jedoch gering, was leicht zu einer verpassten Erkennung von Chromosomenanomalien in MM führen kann.
Interphase FISH, vorzugsweise nach CD138-positiver magnetischer Perlen-basierter PC-Sortierung oder Markierung mit zytoplasmatischer Immunglobulin-Leichtkette κ/λ, ist bei der Analyse von MM5,6 unverzichtbar. Für die optimierte Ausbeute an Tumorzellen wird dringend eine CD138-positive ausgewählte Probe empfohlen. Die genaue Quantifizierung zytogenetischer Aberrationen erfordert jedoch mindestens 4 ml antikoaguliertes BM für die PC-Sortierung. Darüber hinaus erhöhen die Kombinationen von entweder CD138-Immunmagnetperlensortierung mit FISH oder zytoplasmatischem κ/λ-Leichtketten-Immunglobulin mit FISH-Test (cIg-FISH) zahlreiche experimentelle Kosten und sind zeitaufwendig.
In der Regel wird das PC-Verhältnis zunächst aus der morphologischen Untersuchung von gefärbten BM-Abstrichen oder BM-Biopsieabschnitten beurteilt7,8. BM-Proben von höchster Qualität (erste Markaspiratproben) werden für morphologische Tests verwendet, während diejenigen, die zum FISH- oder anderen Nachweis geschickt werden, oft die sekundären Aspiratproben mit hohen Verdünnungsverhältnissen mit peripherem Blut sind.
Bereits in den 1990er Jahren zeigten mehrere Studien, dass BM-Abstriche direkt für interstitielle FISH-Untersuchungen verwendet werden können, was sich als zuverlässige und wiederholbare Methode erwiesen hat9. Eine elegante Studie, die auf Zellmorphologie und Esterasezytochemie in Kombination mit FISH aus peripherem Blut und BM-Abstrichen basierte, bestätigte ihre große klinische Bedeutung für die Aufklärung von Chromosomenanomalien bei Patienten mit granulozytärer und lymphatischer Leukämie10.
Hierin stellen wir eine neuartige Methode zur Verfügung, um den Erfolg des Interphasen-FISH-Detektions bei MM-Patienten zu verbessern.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>automatic FISH machine</td>
			<td>Leica&#160; Corporation</td>
			<td>S500-24</td>
			<td>FINAL Assy Thermobrite 240V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abbott Molecular Inc.</td>
			<td>06J49-001</td>
			<td>DAPI Counterstain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FISH Analysis Software</td>
			<td>IMSTAR&#160; Corporation</td>
			<td>IMSTAR</td>
			<td>FISH Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FISH Probe</td>
			<td>Abbott Molecular Inc.</td>
			<td>05N56-020</td>
			<td>Vysis Locus Specifc Identifer TP53 / CEP 17 FISH Probe Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixed volume pipette</td>
			<td>Eppendorf China Ltd.</td>
			<td>M33768H</td>
			<td>10&#160; microliter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>Olympus Corporation</td>
			<td>BX53</td>
			<td>Forward Fluorescence Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Karyotype Analysis Software</td>
			<td>IMSTAR&#160; Corporation</td>
			<td>IMSTAR</td>
			<td>Karyotype Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td>Olympus&#160; Corporation</td>
			<td>BX41</td>
			<td>Forward Light Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NP-40</td>
			<td>Abbott Molecular Inc.</td>
			<td>07J05-001</td>
			<td>NP-40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic staining dyeing rack</td>
			<td>Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd.</td>
			<td>RSJ-501</td>
			<td>&#160;24 slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic staining dyeing tank</td>
			<td>Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd.</td>
			<td>RSJ-516</td>
			<td>&#160;24 slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Cement</td>
			<td>Marabu&#160;GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>FixoGum&#160;</td>
			<td>Rubber Cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SSC</td>
			<td>Abbott Molecular Inc.</td>
			<td>02J10-032</td>
			<td>20&#215;SSC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Shanghai Boxun Medical Bio-Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>DK-8D</td>
			<td>Multiple Temperature Water bath</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

interphase fluorescence in situ hybridization of bone marrow smears of multiple myeloma

Der Nachweis der Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) ist eine unverzichtbare Methode bei der genetischen Risikostratifizierung beim multiplen Myelom (MM), einem der häufigsten hämatologischen Malignome. Das identifizierende Merkmal von MM sind angesammelte bösartige Plasmazellen im Knochenmark. FISH-Berichte für MM konzentrieren sich hauptsächlich auf gereinigte oder identifizierte klonale Plasmazellen und nicht auf alle kernhaltigen Zellen, indem sie mit Anti-CD138-Magnetkügelchen sortiert oder mit zytoplasmatischer Immunglobulin-Leichtkette κ oder λ markiert werden. Knochenmark-Interphasenkerne werden in der Regel aus frischen Knochenmarkzellen gewonnen. Eine zufriedenstellende Anreicherung von Plasmazellproben erfordert jedoch große Mengen an frischem Heparin-antikoaguliertem Knochenmark, das bei schwieriger Knochenmarkextraktion oder einem trockenen Knochenmarkhahn nicht erhalten werden kann. Hierin etablieren wir eine neuartige Methode, um den Erfolg des FISH-Nachweises auf gefärbten oder ungefärbten Knochenmarkabstrichen zu verbessern. Knochenmarkabstriche sind leichter zu erhalten als antikoagulierte Knochenmarkproben.

In der ersten morphologischen Beurteilung eines neu diagnostizierten MM-Patienten wurde festgestellt, dass 15% der PCs in einem BM-Abstrich größere und dunklere Kerne zusammen mit größeren Mengen an Zytoplasma als normale PCs aufwiesen (Abbildung 2A). Die erste Röhre von Heparin antikoaguliertem BM, die mit der Immunphänotyp-Technik nachgewiesen wurde, zeigte nur 2,3% der monoklonalen aberranten PCs. Die CD138-Immunperlensortierung in Kombination mit FISH oder der cIg-FISH-Technik ist ...

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Interphase Fluorescence in situ Hybridization of Bone Marrow Smears of Multiple Myeloma

Hier stellen wir ein Protokoll zur Verbesserung des Erfolgs des Interphasenfluoreszenz-in-situ-Hybridisierungsnachweises bei Knochenmarkabstrichen von Patienten mit multiplem Myelom vor.

Interphasenfluoreszenz-in-situ-Hybridisierung von Knochenmarkabstrichen des Multiplen Myeloms

Fluorescence in situ hybridization (FISH) detection is an indispensable method in genetic risk stratification in multiple myeloma (MM), which is one of ...

Die Anwendung der Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung namens FISH auf die genetische Risikostratifizierung beim multiplen Myelom ist unerlässlich. Der kritische Teil der FISH-Berichte sind nicht alle kernhaltigen Zellen, sondern klonale Plasmazellen, die spezifisch gereinigt oder identifiziert wurden, indem sie mit Anti-CD138-Magnetperlen sortiert oder markiert wurden, mit zytoplasmatischem Kappa- oder Lambda-Leichtketten-Immunglobulin mit FISH-Tests namens cIg FISH. Interphase FISH nach Plasmazellsortierung oder cIg FISH erweist sich aufgrund des relativ geringen Anteils an Plasmazellen im Knochenmark als signifikant bei der Diagnose des multiplen Myeloms.Diese Methoden weisen jedoch einige Mängel auf, darunter komplexe Prozesse, hohe Probenanforderungen und hohe experimentelle Kosten. Plasmazellen können in einem Knochenmarkabstrich schnell lokalisiert werden. Darauf aufbauend verwenden wir Knochenmarkabstrich FISH zum Nachweis von multiplen Myelomzellen.Diese Studie wurde nach den Grundsätzen der Helsinki-Erklärung durchgeführt und von der Ethikkommission des Zhongnan-Krankenhauses der Universität Wuhan genehmigt. Die Proben wurden von einem Patienten mit multiplem Myelom in der Abteilung für Hämatologie des Zhongnan-Krankenhauses der Universität von China Wuhan gesammelt. Legen Sie die ersten 0,2 Milliliter Knochenmarklösung auf einen sauberen Einweg-Glasobjektträger, verteilen Sie die Knochenmarkabstriche auf gleichmäßige Dicke und scharfe Schwänze, indem Sie das Knochenmark schnell entfernen und trocknen Sie es dann auf natürliche Weise.Decken Sie die Knochenmarkfilme mit einem Milliliter Wright-Giemsa-Lösung für ca. 10 Sekunden bei Raumtemperatur ab. Geben Sie einen Milliliter Phosphatpuffer zu den Objektträgern, es war Vorsicht geboten, um zu verhindern, dass die Farbstofflösung austrocknet oder von den Objektträgern fließt. Mischen Sie die Farbstofflösung vorsichtig und halten Sie sie 15 Minuten bei Raumtemperatur.Spülen Sie die Rutschen mit sauberem Wasser ab und trocknen Sie sie bei Raumtemperatur an der Luft. Verwenden Sie die Vorwärtslichtmikroskopie, um bösartige Plasmazellen nachzuweisen, die Plasmazellen sollten gut verteilt sein. Was wir jetzt im Feld sehen, sind die Plasmazellen, die ziemlich verstreut sind.Dies ist eine typische binukleare Kernplasmazelle. Decken Sie den hybridisierten Bereich 10 Minuten lang mit Fixierlösung ab, um Plasmazellen zu verfärben und zu fixieren. Spülen Sie den Objektträger mit entionisiertem Wasser ab und trocknen Sie ihn an der Luft bei Raumtemperatur.Ein Glas mit zweifachem SSC-Puffer in einem Wasserbad auf 56 Grad Celsius vorheizen. Waschen Sie den vorbereiteten Knochenmarkabstrich im vorgewärmten zweifachen SSC-Puffer für 10 Minuten, gefolgt von einem Eintauchen in deionisiertes Wasser bei Raumtemperatur. Dehydrieren Sie den Abstrich in einem Ethanolgradienten von jeweils 70% 85% und 100% Ethanol für jeweils eine Minute.Trocknen Sie den Abstrich 10 Minuten lang an der Luft. Zuerst TP53 auf Zentromer der Chromosom-17-Sondenmischung in den Hybridisierungsbereich geben und mit einem Deckschlitten abdecken, drücken Sie vorsichtig die feine spitze Pinzette, um Luftblasen von unten zu entfernen. Versiegeln Sie alle Seiten des Deckschliffs mit Gummizement, um eine gute Dichtheit zu gewährleisten.Nach der Erstarrung des Gummizements wurde der Schlitten auf eine automatische FISH-Maschine gelegt Denaturierung wurde bei 78 Grad Celsius für fünf Minuten durchgeführt, gefolgt von einer Hybridisierung bei 37 Grad Celsius über Nacht. Nehmen Sie die Folie von der FISH-Maschine auf. Verwenden Sie eine feine spitze Pinzette, um den Gummizement vorsichtig zu entfernen.Tauchen Sie den Schieber etwa ein bis zwei Minuten lang bei Raumtemperatur in zwei Mal SSC ein, um den Abdeckschlupf abzuwaschen. Waschen Sie die Rutsche in 68 Grad Celsius Vorwärmpuffer in einem Wasserbad für zwei Minuten. Waschen Sie die Rutschen mit zweimal SSC in einem 37 Grad Celsius warmen Wasserbad für eine Minute.Direkt im Dunkeln aufstellen, um gründlich für 10 Minuten bei 10 Mikroliter DAPI auf den hybridisierten Bereich zu trocknen, mit einem Deckglas abdecken. Betrachten Sie hybridisierten Objektträger mit einem geeigneten Filterset auf einem Fluoreszenzmikroskop, verwenden Sie einen monochromatischen blauen Fluorophor-optischen Filter, um die Fluoreszenzintensität des Zellkerns zu beobachten. Nehmen Sie Zellkernbilder unter einem DAPI-Filtersatz auf.CEP17 wurde mit grüner Fluoreszenz markiert. Verwenden Sie den optischen Spektrum-Grünfluorophorfilter, um den Standort von CEP17 zu beobachten. Nehmen Sie das CEP17-Signalbild unter grünem Filterset.Das TP53-Gen wurde mit oranger Fluoreszenz markiert. Verwenden Sie den optischen Fluorophorfilter des Spektrums, um TP53 zu beobachten, nehmen Sie das TP53-Signalbild unter dem Satz, verschmelzen Sie diese drei Bilder zu einer Gesamtheit und untersuchen Sie sie auf numerische Anomalien. In einer normalen Interphasenzelle werden zwei orange und zwei grüne Signale in einem Kern mit blauer Fluoreszenz beobachtet, die auf ein Paar normaler Chromosomen 17 hinweist.Die Ergebnisse zeigten die Morphologie und Genetik des Knochenmarks bei einem Patienten mit multiplem Myelom. Abbildung A zeigte, dass 15% der Plasmazellen in einem Knochenmarkabstrich größer und dunkler und kerniger zusammen mit großen Mengen an Zytoplasma als normal waren. Abbildung B zeigte ein Graustufenbild von repräsentativ durch eine kernhaltige Plasmazelle in einem Knochenmarkabstrich.Abbildung C zeigte vier orange und vier grüne Signale in einem Interphasenkern der Plasmazelle, was darauf hindeutet, dass vier Kopien von Chromosom 17 in einem Kern lokalisiert waren. Abbildung D zeigte, dass das abnormale Chromosomenkaryogram dieses Patienten zwei Chromosomenpaare 17 in einem Kern bestätigte. Knochenmarkabstriche sind viel einfacher zu erhalten als gerinnungshemmende Knochenmarkproben, da die Gewinnung von antikoaguliertem Knochenmark komplexe Verfahren erfordert, um den Kern zu erhalten.Dementsprechend haben wir eine überzeugende Methode für Knochenmarkabstrich FISH zum Nachweis von multiplen Myelomzellen etabliert.

Research

JoVE Journal

Medicine

Interphase Fluorescence in situ Hybridization of Bone Marrow Smears of Multiple Myeloma

Oral Biofilm Analysis of Palatal Expanders by Fluorescence In-Situ Hybridization and Confocal Laser Scanning Microscopy

Oral Biofilm Analyse Palatal Expander durch Fluoreszenz in situ Hybridisierung und konfokale Laser Scanning Mikroskopie

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) of natural heterogeneous biofilm is today facilitated by a comprehensive range of staining techniques, one of ...

Forschung

Medizin

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Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Mittels quantitativer real-time PCR zum Donor Cell Engraftment in einem Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Modell fest

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

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Präklinische Evaluierung von Tyrosinkinase-Inhibitoren für die Behandlung von akuter Leukämie

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are ...

Femoral Bone Marrow Aspiration in Live Mice

Oberschenkelknochenmark-Aspiration im Live-Mäuse

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed ...

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Busulfan als myelosuppressiven Agenten zur Erwirtschaftung stabiler Hochrangige Knochenmark Chimärismus bei Mäusen

Bone marrow transplantation (BMT) is often used to replace the bone marrow (BM) compartment of recipient mice with BM cells expressing a distinct ...

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Einrichtung eines Menschen Multiple Myeloma Xenograftmodell im Huhn, das Tumorwachstum, Invasion und Angiogenese Studieren

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...

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