Name: interphase fluorescence in situ hybridization of bone marrow smears of multiple myeloma
Uploaded: 2022-04-15T14:00:00
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इस परियोजना को WNLO 2018WNLOKF023 के इनोवेशन फंड द्वारा समर्थित किया गया था।

यह अध्ययन हेलसिंकी घोषणा के सिद्धांतों के अनुसार आयोजित किया गया था और वुहान विश्वविद्यालय के झोंगनान अस्पताल की नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था (नंबर 2019065)। नमूनों को वुहान विश्वविद्यालय (च?...

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	<li>Sonneveld, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+multiple+myeloma+with+high-risk+cytogenetics:+a+consensus+of+the+International+Myeloma+Working+Group.">Treatment of multiple myeloma with high-risk cytogenetics: a consensus of the International Myeloma Working Group.</a> Blood. 127, 2955-2962 (2016).</li><li>Radbruch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competence+and+competition:+the+challenge+of+becoming+a+long-lived+plasma+cell.">Competence and competition: the challenge of becoming a long-lived plasma cell.</a> Nature Reviews Immunology. 6, 741-750 (2006).</li><li>Lai, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+cytogenetics+in+multiple+myeloma:+a+study+of+151+patients+including+117+patients+at+diagnosis.">Improved cytogenetics in multiple myeloma: a study of 151 patients including 117 patients at diagnosis.</a> Blood. 85 (9), 2490-2497 (1995).</li><li>Hallek, M., Bergsagel, P. L., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+myeloma:+increasing+evidence+for+a+multistep+transformation+process.">Multiple myeloma: increasing evidence for a multistep transformation process.</a> Blood. 91, 3-21 (1998).</li><li>Munsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consensus+recommendations+for+risk+stratification+in+multiple+myeloma:+report+of+the+International+Myeloma+Workshop+Consensus+Panel+2.">Consensus recommendations for risk stratification in multiple myeloma: report of the International Myeloma Workshop Consensus Panel 2.</a> Blood. 117, 4696-4700 (2011).</li><li>Gole, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cIg-FISH+On+Patients+with+Multiple+Myeloma+-+A+Modified+and+Simple+Technique+Easily+Incorporated+Into+Routine+Clinical+Service.">cIg-FISH On Patients with Multiple Myeloma - A Modified and Simple Technique Easily Incorporated Into Routine Clinical Service.</a> Blood. 120, 4792-4792 (2012).</li><li>Lee, S. H., Erber, W., Porwit, A., Tomonaga, M., Peterson, L. I. C. S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematology,+ICSH+guidelines+for+the+standardization+of+bone+marrow+specimens+and+reports.">Hematology, ICSH guidelines for the standardization of bone marrow specimens and reports.</a> International Journal of Laboratory Hematology. 30, 349-364 (2008).</li><li>&#352;tifter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+evaluation+of+bone+marrow+aspirate+and+biopsy+is+superior+in+the+prognosis+of+multiple+myeloma.">Combined evaluation of bone marrow aspirate and biopsy is superior in the prognosis of multiple myeloma.</a> Diagnostic Pathology. 5, 30 (2010).</li><li>Huegel, A., Coyle, L., McNeil, R., Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+interphase+fluorescence+in+situ+hybridization+on+direct+hematological+bone+marrow+smears.">Evaluation of interphase fluorescence in situ hybridization on direct hematological bone marrow smears.</a> Pathology. 27, 86-90 (1995).</li><li>Jacobsson, B., Bernell, P., Arvidsson, I., Hast, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+morphology,+esterase+cytochemistry,+and+interphase+cytogenetics+of+peripheral+blood+and+bone+marrow+smears.">Classical morphology, esterase cytochemistry, and interphase cytogenetics of peripheral blood and bone marrow smears.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 44, 1303-1309 (1996).</li><li>Dunning, K., Safo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ultimate+Wright-Giemsa+stain:+60+years+in+the+making.">The ultimate Wright-Giemsa stain: 60 years in the making.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry. 86, 69-75 (2011).</li><li>Woronzoff-Dashkoff, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+wright-giemsa+stain.+Secrets+revealed.">The wright-giemsa stain. Secrets revealed.</a> Clinics in Laboratory Medicine. 22, 15-23 (2002).</li><li>McPherson, R. A., Pincus, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Henry's+Clinical+diagnosis+and+Management+by+Laboratory+Methods+E-book.">Henry's Clinical diagnosis and Management by Laboratory Methods E-book.</a> Elsevier Health Sciences. , (2017).</li><li>Ross, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+from+the+European+Myeloma+Network+on+interphase+FISH+in+multiple+myeloma+and+related+disorders.">Report from the European Myeloma Network on interphase FISH in multiple myeloma and related disorders.</a> Haematologica. 97, 1272-1277 (2012).</li></ol>

एमएम में आनुवांशिक जोखिम स्तरीकरण के लिए मछली का आवेदन आवश्यक है। FISH रिपोर्ट का महत्वपूर्ण हिस्सा सभी न्यूक्लिएटेड कोशिकाएं नहीं हैं, लेकिन क्लोनल पीसी विशेष रूप से एंटी-CD138 चुंबकीय मोतियों के साथ छंट?...

मल्टीपल मायलोमा (एमएम) एक घातक प्लाज्मा सेल (पीसी) रोग है जिसमें मजबूत जैविक विषमता और नैदानिक प्रभावकारिता में बड़े व्यक्तिगत अंतर हैं, जिसमें महीनों से लेकर दशकों तक जीवित रहने की अवधि होती है। साइटोजेनेटिक विशेषताएं एमएम के महत्वपूर्ण पूर्वानुमान संकेतक हैं। आनुवांशिक विशेषताओं के आधार पर जोखिम स्तरीकरण प्रणाली और व्यक्तिगत उपचार एमएम 1 पर नैदानिक अनुसंधान में गहन रुचि के विषय बन गए हैं। अस्थि मज्जा (BM) के सीटू संकरण (FISH) पैनल में प्रतिदीप्ति में परीक्षण किए गए पीसी के विपथनों में del 13q14 (RB1), del 17p13 (TP53), t(4;14) (IGH/FGFR3), t(11;14) (IGH/MYEOV), t(14;16) (IGH/MAF), t(14:20) (IGH/MAFB) (IGH/MAFB) शामिल हैं।
मानक मेटाफेज साइटोजेनेटिक्स को एमएम रोगियों के प्रारंभिक मूल्यांकन में शामिल किया जाना चाहिए। यद्यपि पारंपरिक जी-बैंडेड कैरियोटाइपिंग एक पूरे गुणसूत्र विश्लेषण का लाभ प्रदान करता है, इस विधि की कम उपज कई झूठे नकारात्मक परिणामों की ओर ले जाती है2। परंपरागत रूप से, पीसी को विभाजित करने में काफी हद तक असमर्थ के रूप में देखा गया है क्योंकि वे बी लिम्फोसाइट भेदभाव के अंतिम चरण के उत्पाद हैं। यह विभाजित छवियों को प्राप्त करना मुश्किल बनाता है। दीर्घकालिक संस्कृतियों (6 दिन) और साइटोकिन्स द्वारा संस्कृतियों की उत्तेजना के साथ एमएम में बेहतर साइटोजेनेटिक विश्लेषण नए निदान किए गए एमएम रोगियों में साइटोजेनेटिक असामान्यताओं की पहचान करने के लिए एक आशाजनक तरीका हो सकता है3। यहां तक कि जब संस्कृति का समय 6 दिनों तक बढ़ाया गया था, हालांकि, साइटोजेनेटिक असामान्यताओं को एमएम रोगियों के 30% -50% में सटीक रूप से सूचित किया गया था। इसके अलावा, एमएम को जटिल साइटोजेनेटिक विपथन की विशेषता है जो इसकी भविष्यवाणी विषमता को दर्शाता है। हालांकि, पारंपरिक गुणसूत्र बैंडिंग तकनीक का रिज़ॉल्यूशन कम है, जिससे आसानी से एमएम में क्रोमोसोमल असामान्यताओं का पता लगाने से चूक हो सकती है।
Interphase FISH, अधिमानतः CD138-सकारात्मक चुंबकीय मनका-आधारित पीसी सॉर्टिंग या साइटोप्लाज्मिक इम्युनोग्लोबुलिन प्रकाश श्रृंखला के साथ अंकन के बाद, MM5,6 के विश्लेषण में अपरिहार्य है। एक CD138-सकारात्मक चयनित नमूना दृढ़ता से ट्यूमर कोशिकाओं की अनुकूलित उपज के लिए अनुशंसित है। हालांकि, साइटोजेनेटिक विपथन की सटीक मात्रा के लिए पीसी सॉर्टिंग के लिए कम से कम 4 मिलीलीटर एंटीकोएगुलेटेड बीएम की आवश्यकता होती है। इसके अतिरिक्त, या तो CD138 इम्युनोमैग्नेटिक मनका के संयोजन मछली या साइटोप्लाज्मिक के साथ छंटाई /
आमतौर पर, पीसी अनुपात का आकलन पहले दाग वाले बीएम स्मीयर या बीएम बायोप्सी अनुभागों 7,8 की रूपात्मक परीक्षा से किया जाता है। उच्चतम गुणवत्ता (पहले मज्जा एस्पिरेट नमूनों) के बीएम नमूनों का उपयोग रूपात्मक परीक्षण के लिए किया जाता है, जबकि मछली या अन्य पहचान के लिए भेजे गए लोग अक्सर परिधीय रक्त के साथ कमजोर पड़ने के उच्च अनुपात के साथ माध्यमिक एस्पिरेट नमूने होते हैं।
1990 के दशक की शुरुआत में, कई अध्ययनों से पता चला है कि बीएम स्मीयर का उपयोग सीधे अंतरालीय मछली परीक्षाओं के लिए किया जा सकता है, जो एक विश्वसनीय और दोहराने योग्य विधि साबित हुई है। परिधीय रक्त और बीएम स्मीयर के मछली के साथ संयुक्त सेल आकृति विज्ञान और एस्टेरेस साइटोकेमिस्ट्री पर आधारित एक सुरुचिपूर्ण अध्ययन ने ग्रैनुलोसाइटिक और लिम्फोसाइटिक ल्यूकेमिया 10 वाले रोगियों में गुणसूत्र असामान्यताओं को स्पष्ट करने के लिए इसके महान नैदानिक महत्व की पुष्टि की।
यहां, हम एमएम रोगियों में इंटरफ़ेज़ मछली का पता लगाने की सफलता में सुधार के लिए एक उपन्यास विधि प्रदान करते हैं।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>automatic FISH machine</td>
			<td>Leica&#160; Corporation</td>
			<td>S500-24</td>
			<td>FINAL Assy Thermobrite 240V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abbott Molecular Inc.</td>
			<td>06J49-001</td>
			<td>DAPI Counterstain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FISH Analysis Software</td>
			<td>IMSTAR&#160; Corporation</td>
			<td>IMSTAR</td>
			<td>FISH Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FISH Probe</td>
			<td>Abbott Molecular Inc.</td>
			<td>05N56-020</td>
			<td>Vysis Locus Specifc Identifer TP53 / CEP 17 FISH Probe Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixed volume pipette</td>
			<td>Eppendorf China Ltd.</td>
			<td>M33768H</td>
			<td>10&#160; microliter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>Olympus Corporation</td>
			<td>BX53</td>
			<td>Forward Fluorescence Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Karyotype Analysis Software</td>
			<td>IMSTAR&#160; Corporation</td>
			<td>IMSTAR</td>
			<td>Karyotype Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td>Olympus&#160; Corporation</td>
			<td>BX41</td>
			<td>Forward Light Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NP-40</td>
			<td>Abbott Molecular Inc.</td>
			<td>07J05-001</td>
			<td>NP-40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic staining dyeing rack</td>
			<td>Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd.</td>
			<td>RSJ-501</td>
			<td>&#160;24 slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic staining dyeing tank</td>
			<td>Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd.</td>
			<td>RSJ-516</td>
			<td>&#160;24 slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Cement</td>
			<td>Marabu&#160;GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>FixoGum&#160;</td>
			<td>Rubber Cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SSC</td>
			<td>Abbott Molecular Inc.</td>
			<td>02J10-032</td>
			<td>20&#215;SSC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Shanghai Boxun Medical Bio-Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>DK-8D</td>
			<td>Multiple Temperature Water bath</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

interphase fluorescence in situ hybridization of bone marrow smears of multiple myeloma

प्रतिदीप्ति इन सीटू संकरण (FISH) का पता लगाना एकाधिक मायलोमा (MM) में आनुवंशिक जोखिम स्तरीकरण में एक अपरिहार्य विधि है, जो सबसे आम हेमेटोलॉजिकल दुर्दमताओं में से एक है। एमएम की पहचान विशेषता अस्थि मज्जा में घातक प्लाज्मा कोशिकाओं को संचित करती है। एमएम के लिए फिश रिपोर्ट मुख्य रूप से सभी न्यूक्लिएटेड कोशिकाओं के बजाय शुद्ध या पहचाने गए क्लोनल प्लाज्मा कोशिकाओं पर ध्यान केंद्रित करती है, एंटी-सीडी 138 चुंबकीय मोतियों के साथ छंटाई करके या साइटोप्लाज्मिक इम्युनोग्लोबुलिन लाइट चेन के साथ चिह्नित करके या π। अस्थि मज्जा इंटरफ़ेज़ नाभिक आमतौर पर ताजा अस्थि मज्जा कोशिकाओं से प्राप्त होते हैं। हालांकि, प्लाज्मा सेल नमूनों के संतोषजनक संवर्धन के लिए बड़ी मात्रा में ताजा हेपरिन एंटी-कोगुलेटेड अस्थि मज्जा की आवश्यकता होती है, जिसे मुश्किल अस्थि मज्जा निष्कर्षण या अस्थि मज्जा सूखे नल के मामले में प्राप्त नहीं किया जा सकता है। यहां, हम दाग या unstained अस्थि मज्जा smears पर FISH का पता लगाने की सफलता में सुधार करने के लिए एक उपन्यास विधि स्थापित करते हैं। अस्थि मज्जा स्मीयर एंटीकोगुलेटेड अस्थि मज्जा नमूनों की तुलना में प्राप्त करना आसान है।

एक नए निदान एमएम रोगी के प्रारंभिक रूपात्मक मूल्यांकन में, बीएम स्मीयर में पीसी के 15% को सामान्य पीसी (चित्रा 2 ए) की तुलना में साइटोप्लाज्म की बड़ी मात्रा के साथ बड़े और गहरे नाभिक पाए गए थे। immu...

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Interphase Fluorescence in situ Hybridization of Bone Marrow Smears of Multiple Myeloma

यहां, हम कई मायलोमा रोगियों से अस्थि मज्जा स्मीयर पर सीटू संकरण का पता लगाने में इंटरफेज प्रतिदीप्ति की सफलता में सुधार के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।

मल्टीपल मायलोमा के अस्थि मज्जा स्मीयर के सीटू संकरण में इंटरफेज प्रतिदीप्ति

Fluorescence in situ hybridization (FISH) detection is an indispensable method in genetic risk stratification in multiple myeloma (MM), which is one of ...

सीटू संकरण में प्रतिदीप्ति का अनुप्रयोग जिसे कई मायलोमा में आनुवंशिक जोखिम स्तरीकरण के लिए FISH कहा जाता है, आवश्यक है। FISH रिपोर्ट का महत्वपूर्ण हिस्सा सभी न्यूक्लिएटेड कोशिकाएं नहीं हैं, लेकिन क्लोनल प्लाज्मा कोशिकाओं को विशेष रूप से शुद्ध या एंटी-CD138 चुंबकीय मोतियों के साथ छंटाई करके या साइटोप्लाज्मिक कप्पा या लैम्ब्डा लाइट चेन इम्युनोग्लोबुलिन के साथ चिह्नित करके पहचाना जाता है, जिसे सीआईजी फिश कहा जाता है। प्लाज्मा सेल छँटाई या cIg मछली के बाद Interphase मछली कई मायलोमा के निदान में महत्वपूर्ण हो जाता है, अस्थि मज्जा में प्लाज्मा कोशिकाओं के अपेक्षाकृत कम अनुपात के कारण.हालांकि, इन तरीकों में जटिल प्रक्रियाओं, उच्च नमूना मांगों और उच्च प्रयोगात्मक लागतों सहित कुछ कमियां हैं। प्लाज्मा कोशिकाओं को जल्दी से अस्थि मज्जा स्मीयर में स्थित किया जा सकता है। इसके आधार पर, हम कई मायलोमा कोशिकाओं का पता लगाने के लिए अस्थि मज्जा स्मीयर मछली का उपयोग करते हैं।यह अध्ययन हेलसिंकी घोषणा के सिद्धांतों के अनुसार आयोजित किया गया था और वुहान विश्वविद्यालय के झोंगनान अस्पताल की आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। नमूने चीन के वुहान विश्वविद्यालय के झोंगनान अस्पताल के हेमेटोलॉजी विभाग में एक मल्टीपल मायलोमा रोगी से एकत्र किए गए थे। एक साफ डिस्पोजेबल ग्लास स्लाइड पर अस्थि मज्जा समाधान के पहले 0.2 मिलीलीटर रखें, अस्थि मज्जा को जल्दी से हटाकर समान मोटाई और तेज पूंछ में अस्थि मज्जा स्मीयर को फैलाएं और फिर इसे स्वाभाविक रूप से सूखा दें।कमरे के तापमान पर लगभग 10 सेकंड के लिए राइट-गिमसा समाधान के एक मिलीलीटर के साथ अस्थि मज्जा फिल्मों को कवर करें। स्लाइड में फॉस्फेट बफर का एक मिलीलीटर जोड़ें, डाई समाधान को सूखने या स्लाइड से बहने से रोकने के लिए देखभाल की आवश्यकता थी। डाई समाधान को धीरे से मिलाएं और इसे कमरे के तापमान पर 15 मिनट तक बनाए रखें।स्लाइड्स को साफ पानी से कुल्ला करें और इसे कमरे के तापमान पर हवा में सुखा लें। घातक प्लाज्मा कोशिकाओं का पता लगाने के लिए आगे प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग करें, प्लाज्मा कोशिकाओं को अच्छी तरह से तितर-बितर किया जाना चाहिए। अब हम क्षेत्र में जो देखते हैं वह प्लाज्मा कोशिकाएं हैं जो काफी बिखरी हुई हैं।यह एक विशिष्ट द्विनाभिकीय परमाणु प्लाज्मा सेल है। प्लाज्मा कोशिकाओं को बदरंग और ठीक करने के लिए 10 मिनट के लिए फिक्सेटिव समाधान के साथ संकरित क्षेत्र को कवर करें। विआयनीकृत पानी के साथ स्लाइड कुल्ला और कमरे के तापमान पर हवा में इसे सूखा।पानी के स्नान में 56 डिग्री सेल्सियस तक दो बार एसएससी बफर वाले एक जार को प्रीहीट करें। 10 मिनट के लिए पहले से गर्म दो बार एसएससी बफर में तैयार अस्थि मज्जा स्मीयर को धोएं, इसके बाद कमरे के तापमान पर विआयनीकृत पानी में डुबकी लगाएं। एक इथेनॉल ग्रेडिएंट 70% 85% और 100% इथेनॉल प्रत्येक में स्मीयर को एक मिनट के लिए निर्जलित करें।स्मीयर को 10 मिनट के लिए हवा में सुखाएं। सबसे पहले संकरण क्षेत्र में गुणसूत्र 17 जांच मिश्रण के सेंट्रोमियर पर TP53 जोड़ें और नीचे से हवा के बुलबुले को हटाने के लिए धीरे से ठीक नुकीले चिमटी को धीरे से कवर स्लिप प्रेस के साथ कवर करें। अच्छी जकड़न सुनिश्चित करने के लिए रबर सीमेंट के साथ कवर स्लिप के सभी किनारों को सील करें।रबर सीमेंट के ठोसीकरण के बाद स्लाइड को एक स्वचालित फिश मशीन पर रखा गया था, जिसके बाद पांच मिनट के लिए 78 डिग्री सेल्सियस पर किया गया था, जिसके बाद रात भर 37 डिग्री सेल्सियस पर संकरण किया गया था। मछली मशीन से स्लाइड उठाओ. रबर सीमेंट को धीरे से हटाने के लिए एक ठीक नुकीले चिमटी का उपयोग करें।कवर स्लिप को धोने के लिए लगभग एक या दो मिनट के लिए कमरे के तापमान पर दो बार एसएससी में स्लाइड को विसर्जित करें। दो मिनट के लिए पानी के स्नान में 68 डिग्री सेल्सियस प्रीहीटिंग बफर में स्लाइड को धोएं। एक मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में दो बार एसएससी के साथ स्लाइड धोएं।संकरित क्षेत्र में DAPI के 10 माइक्रोलीटर पर 10 मिनट के लिए अच्छी तरह से सूखने के लिए अंधेरे में सही सेट करें, एक कवर स्लिप के साथ कवर करें। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप पर एक उपयुक्त फ़िल्टर सेट का उपयोग करके संकरित स्लाइड देखें, सेल नाभिक की प्रतिदीप्ति तीव्रता का निरीक्षण करने के लिए मोनोक्रोमैटिक ब्लू फ्लोरोफोर ऑप्टिकल फ़िल्टर का उपयोग करें। DAPI फ़िल्टर सेट के अंतर्गत सेल नाभिक छवियाँ लें.CEP17 को हरे रंग की प्रतिदीप्ति के साथ लेबल किया गया था। CEP17 के स्थान का निरीक्षण करने के लिए स्पेक्ट्रम ग्रीन फ्लोरोफोर ऑप्टिकल फ़िल्टर का उपयोग करें। हरे रंग के फ़िल्टर सेट के तहत CEP17 संकेत छवि ले लो.TP53 जीन नारंगी प्रतिदीप्ति के साथ लेबल किया गया था। TP53 का निरीक्षण करने के लिए स्पेक्ट्रम नारंगी फ्लोरोफोर ऑप्टिकल फ़िल्टर का उपयोग करें, सेट के नीचे TP53 सिग्नल छवि लें, इन तीन छवियों को संपूर्णता में मर्ज करें और संख्यात्मक असामान्यताओं के लिए जांच करें। एक सामान्य इंटरफेज सेल में दो नारंगी और दो हरे रंग के संकेत एक नाभिक के अंदर देखे जाते हैं, जिसमें नीले प्रतिदीप्ति होते हैं जो सामान्य गुणसूत्रों की एक जोड़ी को दर्शाते हैं।परिणामों ने एकाधिक मायलोमा रोगी में अस्थि मज्जा के आकृति विज्ञान और आनुवंशिकी को दिखाया। चित्रा ए से पता चला है कि अस्थि मज्जा स्मीयर में प्लाज्मा कोशिकाओं के 15% को सामान्य से बड़ी मात्रा में साइटोप्लाज्म के साथ बड़े और गहरे और परमाणु पाए गए हैं। चित्रा बी ने अस्थि मज्जा स्मीयर में एक न्यूक्लिएटेड प्लाज्मा सेल द्वारा प्रतिनिधि की एक ग्रे स्केल छवि दिखाई।चित्रा सी ने प्लाज्मा सेल के एक इंटरफेज नाभिक में चार नारंगी और चार हरे रंग के संकेतों को दिखाया, यह सुझाव देते हुए कि गुणसूत्र 17 की चार प्रतियां एक नाभिक में स्थानीयकृत थीं। चित्रा डी से पता चला है कि इस रोगी के असामान्य गुणसूत्र कैरियोग्राम ने एक नाभिक में 17 गुणसूत्रों के दो जोड़े की पुष्टि की। अस्थि मज्जा स्मीयर एंटीकोआगुलेंट अस्थि मज्जा के नमूनों की तुलना में प्राप्त करना बहुत आसान है क्योंकि एंटीकोएगुलेटेड अस्थि मज्जा प्राप्त करने के लिए नाभिक प्राप्त करने के लिए जटिल प्रक्रियाओं की आवश्यकता होती है।तदनुसार, हमने कई मायलोमा कोशिकाओं का पता लगाने के लिए अस्थि मज्जा स्मीयर मछली के लिए एक ठोस विधि स्थापित की।

Research

JoVE Journal

Medicine

Interphase Fluorescence in situ Hybridization of Bone Marrow Smears of Multiple Myeloma

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प्रतिदीप्ति में स्वस्थानी संकरण और Confocal माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग लेजर द्वारा तालु विस्तारक के मौखिक Biofilm विश्लेषण

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