Name: uracil-dna glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis
Uploaded: 2022-04-22T14:00:00
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我々は、NCFPB機能ゲノミクス統合コアファシリティ(台湾・台北)及びNRPBファーマコゲノミクス・ラボ(台湾・台北)の技術支援に感謝する。この研究は、台湾科学技術部(R.O..C.の支援を受けた[助成金番号MOST109-2314-B-002-186からK.-Y.S.、ほとんどが107-2320-B-002-016-MY3からS.Y..C、MOST 110-2320-B-002-043からW.-h.F.へ]。H.-L.C.は国立台湾大学から博士研究員を授与されています。オープンアクセス料金のための資金:科学技術省、R.O..C。

1. 基板/テンプレートの準備
<ol><li>ウラシル基板/テンプレート二重膜は、約50 ± 10%のバランスのとれたG + C含有量と、二重鎖領域の最低溶融温度50°Cで設計します。 注:18 nt基板と19 ntテンプレート(表1および図1)の間の1つのヌクレオチド差は、MSシグナルの解釈と適切なアニーリングの改善に役立ちます。鋳型鎖は、A-UまたはG-Uミスマッチを生...

このホワイトペーパーでは、UDG MALDI−TOF MSアッセイ法を使用してAP含有DNA産物を直接検出するための詳細な手順を提供する。この方法の主な利点は、ウラシル含有基質がラベルフリーで、スケーラブルで、取り扱いが容易で、基質設計においてより大きな柔軟性を有することである。
UDGサプライヤーが推奨するフェノール/クロロホルム抽出は、酵素の不活性化を可能に?...

ウラシルはRNAの正常な塩基であるが、ゲノムDNAにおいて一般的で変異原性の高い病変である。ウラシルは、デオキシシチジンの自発的/酵素的加水分解脱アミノ化から生じ得る。各生細胞において、この脱アミノ化は生理学的条件下で1日100〜500回起こる1,2。これらの変化が修復されない場合、DNA配列組成に変化があり、突然変異を引き起こす可能性がある。DNA中のウラシルは複製中にdATPと対合することを好むので、シトシンがウラシルに脱アミノ化する場合、2つの複製事象において、子孫DNAの半分に新しいG:CからA:Tへの移行変異が存在する3。
遺伝的安定性を維持するための細胞戦略の中で、塩基切除修復(BER)は、DNA4のウラシルなどの損傷した塩基を修復する重要なメカニズムである。BERは高度に進化的に保存されたプロセスです。2つの一般的なBER経路がある:単一ヌクレオチドの修復路に至る短いパッチ経路と、少なくとも2ヌクレオチドの修復経路を生成するロングパッチ経路5。BERは、いくつかのステップで発生する調整されたメカニズムです。BERの最初のステップは、損傷特異的DNAグリコシラーゼによる損傷ヌクレオチド塩基の酵素加水分解であり、アプリニン/アピリミジン(AP)中間部位を生成する6。これに続いて、エンドヌクレアーゼによるAP部位の糖リン酸骨格の切断、リアーゼによるDNA末端のクリーンアップ、DNAポリメラーゼによるギャップ充填、およびリガーゼによる最終ニックの封止が続きます5。
ウラシルDNAグリコシラーゼ(UDG)は、大腸菌中のBERのウラシル含有DNAからウラシルを加水分解する。異なる分離技術を含む放射性標識DNAを用いた従来のUDGアッセイ6、7、8、9、10、11、12、13は、通常、時間がかかり、労働集約的であり、高価な標識試薬、複雑な手順、および放射性物質への曝露のリスクを低減するために集中的な訓練と実践を必要とする。蛍光測定オリゴヌクレオチドアッセイは、分子ビーコンおよびフェルスター共鳴エネルギー移動技術に加えて、放射性同位元素標識14の代替として開発されている15,16,17,18,19,20。しかしながら、前述の方法の全てに特定の標識が必要である。近年、ラベルフリーバイオセンサアッセイ21、22、23およびG−quadruplex24、25、26の形成に基づく比色法が開発されている。しかし、プローブ内の複数のA:Uペアまたは特別に設計された配列は、酵素単位の定義を複雑にします。
MALDI-TOF MS は、DNA 解析に非常に役立つ可能性のある技術です。開発されたアプリケーションには、一塩基多型ジェノタイピング27,28、改変ヌクレオチド解析29、DNA修復中間体同定30,31,32,33,34が含まれる。MALDI-TOF MS は、AP 部位含有 DNA 産物を検出するための DNA グリコシラーゼ分析に容易に採用する必要があります。しかし、DNA中のAP部位は、多くの実験条件下で鎖が切断されやすい33。ここでは、MALDI-TOF MS を使用して UDG アッセイを行い、大きなストランドブレークノイズなしで AP サイト生産を直接測定します。このラベルフリー法は、取り扱いが容易であり、DNAグリコシラーゼ阻害剤スクリーニングの医薬応用に高い可能性を秘めています。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Amino-2-hydroxymethyl-propane-1,3-diol (Tris base)</td>
			<td>J.T baker</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclaved deionized water</td>
			<td>MILLIPORE</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>J.T Baker</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>AQUAGLOVE</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2,3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid (HCl)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bucket</td>
			<td>Taiwan.Inc</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low retention pipette tips(0.5-10 &#181;L)</td>
			<td>extra gene</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low retention pipette tips(1,250 &#181;L)</td>
			<td>national scientific supply co, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low retention pipette tips(200 &#181;L)</td>
			<td>national scientific supply co, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MassARRAY</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 4, 5 
			Mass spectrometry control programs include Typer Chip Linker, SpectroACQUIRE, and Start RT Process.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MassARRAY Nanodispenser</td>
			<td>AAT Bioquest, Inc.</td>
			<td>RS1000</td>
			<td>Protocol 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Kubota</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Clubio</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube (1.5 mL)</td>
			<td>National scientific supply co, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube rack</td>
			<td>Taiwan.Inc</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette&#160; (P1000)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette&#160; (P2)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette (P10)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette (P100)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette (P200)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette (SL2)</td>
			<td>Rainin</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligonucleotides</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (Singapore)</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quest Graph IC50 Calculator (v.1)</td>
			<td>AAT Bioquest, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Fig. 4 
			https://www.aatbio.com/tools/ic50-calculator-v1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>WAKO</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectroCHIP array</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td>#01509</td>
			<td>Protocol 3, 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Taiwan.Inc</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Typer 4.0 software</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td>#10145</td>
			<td>Protocol 6 
			Typer 4.0 consists four programs including Assay Designer, Assay Editor, Plate Editor, and Typer Analyzer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UDG Reaction Buffer (10x)</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>B0280S</td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil Glycosylase Inhibitor</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>M0281S</td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil-DNA Glycosylase</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>M0280L</td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VISBLE spectrophotometer UV-1601</td>
			<td>SHIMADZU</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>ZETA ZC-4000 (Taiwan.Inc)</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

uracil-dna glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis

ウラシルDNAグリコシラーゼ(UDG)は、シトシンの加水分解脱アミノ化から形成されるウラシルの補正のための塩基切除修復経路における重要な成分である。したがって、ゲノムの完全性の維持には極めて重要です。UDG活性を測定するために、高度に特異的で非標識の非放射性同位体法が開発された。部位特異的ウラシルを含む合成DNA二重鎖をUDGにより切断し、次いでマトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間質量分析(MALDI-TOF MS)分析を行った。鎖切断なしにDNA中の非熟菌/アピリミジン部位(AP)産物を保存するためのプロトコルが確立されました。基質から生成物までのm/z値の変化を用いて、UDGによるウラシル加水分解を評価した。UDG速度論的解析にG:U基板を用い、Km = 50 nM、Vmax = 0.98 nM/s、Kcat = 9.31 s-1を得た。ウラシルグリコシラーゼ阻害剤(UGI)アッセイへのこの方法の適用は、7.6pMのIC50値をもたらした。一本鎖および二本鎖DNA基質内の様々な位置でウラシルを用いたUDG特異性は、異なる切断効率を実証した。したがって、この単純で迅速で汎用性の高いMALDI−TOF MS法は、様々な単官能DNAグリコシラーゼの優れた参照法となり得る。また、DNAグリコシラーゼ阻害剤スクリーニングのツールとしての可能性も秘めています。

テンプレートと基板 中央にU(U+9)をGテンプレートと対にした合成オリゴヌクレオチドを例にとると(図1A)、等モル量のテンプレートとウラシル含有基質のブランク制御を合成オリゴヌクレオチド純度の品質管理に使用できます(図1B;シグナルは指定されたm/zと一致し、低バックグラウンドノイズ)。MSデータ解析のために、ピーク高さを?...

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Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

ウラシル-DNAグリコシラーゼ活性をアッセイするための非標識、非放射性同位体法が、直接アプリン/アピリミジン部位含有生成物分析のためのMALDI-TOF質量分析法を用いて開発された。このアッセイは、DNAグリコシラーゼ測定に非常にシンプルで、特異的で、迅速で、使いやすいことが証明されました。

マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型質量分析分析によるウラシル-DNAグリコシラーゼアッセイ

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

DNA修復機構は、すべての生物においてゲノムの完全性を維持するために非常に重要です。ウラシルDNAグリコシラーゼは、基本的な組織修復経路において重要なDNA修復タンパク質である。MALDI-TOF質量分析法を用いて、酵素活性アッセイのためにAP生成物を直接検出することができる。従来のグリコシラーゼアッセイは、基質の労力を必要とする。この方法はラベルフリーで、ウラシル基質からAP生成物への質量変化を直接検出します。その他の利点には、高い特異性、汎用性、スケーラビリティ、迅速性、および実行が容易であることが含まれます。我々は、例として大腸菌ウラシルDNAグリコシラーゼを用いた。この方法は、他のDNAグリコシラーゼアッセイのために容易に改変することができる。正確なピペッティングと希釈のスキルを備えたよく訓練されたラボ担当者が不可欠です。新しく調製した試薬と低塩緩衝液は、より良い信号とより少ないバックグラウンドノイズのために使用する必要があります。手順を実演するのは、私の研究室の博士課程の学生であるHui-Lan Changです。T1 U+9 二重鎖のグアニン - ウラシル塩基含有基質を使用する DNA グリコシラーゼアッセイの場合、1.5 ミリリットルの滅菌微量遠心管に、70 マイクロリットルの水、10 マイクロリットルの 10 倍ウラシル DNA グリコシラーゼまたは UDG 反応バッファー、5 マイクロリットルの T1 ストック、および 5 マイクロリットルの U+9 ストックを加えます。チューブを閉じてから、水浴中で摂氏65度で30分間、続いて摂氏37度で30分間、最後に氷上で3分間インキュベートして、基板テンプレート二重鎖の適切なアニーリングを確実にします。次に、新しい1.5ミリリットルのチューブに、49マイクロリットルの氷冷UDG反応緩衝液および1マイクロリットルの希釈UDGを加え、次いで、所望の酵素濃度のためにUDG緩衝液で段階希釈物を調製し、希釈UDGを氷上に置く。次に、別の1.5ミリリットルのチューブに、調製した基質混合物の9マイクロリットルを加え、摂氏37度で予温し、次いで希釈されたUDGの1マイクロリットルを加え、チューブをフリックして内容物を混合する。反応混合物を短時間遠心分離し、直ちにチューブを置き、摂氏37度でインキュベートする。タイマーを使用して反応のタイミングを計ります。反応停止のために、0.25モル塩酸および0.23モルトリス塩基溶液を調製する。反応終了ステップを操作する前に、試薬を調製し、pHストリップで試験するときにpHメーターを使用してpHを確認し、10マイクロリットルのトリスEDTAを1マイクロリットルの0.25モル塩酸で酸性にし、pHが約2プラスマイナス0.5であることを確認します。1マイクロリットルのトリス塩基で溶液を中和し、最終pHが約6.5プラスマイナス0.5であることを確認します。次に、反応混合物に1マイクロリットルの0.25モル塩酸を加えて酵素を失活させ、チューブを氷上に6分間置いた後、1マイクロリットルのトリス塩基を加えてDNA産物を中和し、酸への長時間の曝露によるAP部位の切断を回避する。マトリックスチップ移送用の製品混合物の体積を増加させるために13マイクロリットルのtris-EDTAを加えた後、チューブを氷の上に置きます。最後に、25マイクロリットルのUDG反応産物をすべてマイクロ遠心分離管から384ウェルマイクロタイタープレートに移す。ナノリットルディスペンサーのドアを開き、384ウェルマイクロタイタープレートをデッキのプレートホルダーにロードし、マトリックスチップアレイを対応するスカウトプレート位置に挿入します。装填されたスカウトプレートをナノリットルディスペンサーの処理デッキに置き、ドアを閉じます。転写画面のランボタンをタッチし、機器がマイクロタイタープレートからマトリックスチップへのサンプルの分配を開始するのを待ちます。次に、ビジョンタブオプションを使用して、チップの画像とディスペンス中の各スポットのディスペンス量を表示します。チップ上の斑点のある体積が5~10ナノリットルの範囲であることを確認します。適切なアプリケーション・プログラムを使用して、インポート用の予測信号 M by Z 値を含む xlsx ファイルを準備します。次に、アプリケーションプログラムを使用して、デザイナー形式でアッセイグループをインポートオプションを右クリックし、ドロップダウンリストからExcelファイルを選択することで、新しいUDGアッセイを作成および定義します。次に、顧客プロジェクトプレートボタンを右クリックし、ドロップダウンオプションツリーの上部をクリックして、新しいアッセイプレートを確立します。次に、ダイアログボックスでファイル名を入力します。プレートタイプドロップダウンで、384ウェルプレートタイプを選択します。OKを押して、画面の右側に空白のプレートが表示されるのを待ちます。次に、アッセイオプションをクリックし、ドロップダウンリストからアッセイを選択します。選択したアッセイをプレート上の各サンプルスポット位置に割り当てるには、ブランクプレートの各位置にカーソルを移動し、ウェルをクリックして強調表示し、右クリックしてプラークの追加を選択します。デスクトップまたはラップトップコンピュータを使用して、チップ上のすべてのサンプルのヘッダーのないxlsx形式の作業リストを準備し、新しいサンプルプロジェクトの追加ボタンをクリックしてドロップダウンリストからファイルを選択して作業リストをインポートします。画面左側の作業リストですべてのテストサンプルコードを探し、作業リストでサンプルコードをクリックし、プレートの対応する位置を右クリックしてテストを各位置にリンクします。質量分析計のイン/アウトボタンを押してデッキを伸ばし、チップホルダーを取り出します。サンプルチップをチップホルダーに挿入し、ロードされたチップホルダーを拡張デッキに置き、サンプルチップが機器に入るように入出力ボタンをもう一度押します。質量分析計制御プログラムで、取得アイコンをダブルクリックします。集録ウィンドウで、自動実行タブをクリックして装置を起動し、チップ上のサンプルから質量スペクトルを取得します。データ解析を行うには、データ解析プログラムを実行し、データベースツリーを参照してチップ ID を選択します。クリックしてチップ上のターゲットウェルをハイライト表示し、スペクトルアイコンをクリックしてマススペクトルを表示します。右クリックしてカスタマイズダイアログを選択し、新しいウィンドウで特定のスペクトル範囲をトリミングし、x軸をクリックしてM×Zの上限と下限を入力し、OKを押して目的の信号を含む指定された範囲スペクトルを表示します。ウラシル基板、APプロダクト、およびテンプレートに対応するZ値によって信号Mのピーク高さを測定するには、ピークをクリックして、画面の左上隅にピーク高さを表示します。最後に、記録保持のためにスペクトルを保存するには、[エクスポート] を右クリックし、ドロップダウン リストで [ファイルの種類] を JPEG として選択します。コピー先をクリックし、ディスクを参照してドロップダウン・リストでストレージ・デバイスを選択し、ファイル名を入力して[エクスポート]をクリックします。DNAグリコシラーゼアッセイのモデル系をここに示す。19ヌクレオチド鋳型DNAはグリコシラーゼ加水分解後も変化しなかった。したがって、信号はAP生成物の定量のための基準として役立つ可能性がある。基質と対応する鋳型との間の1つのヌクレオチドの相違は、両方のために十分に分離されたシグナルプロファイルを生じた。AP生成物のシグナルも、ウラシル含有基質のシグナルから十分に分離されていた。MSデータ解析のために、ピーク高さを測定した。0.01、0.02、0.05、および0.1におけるUDG活性の経時変化分析は、線量依存性と時間依存性の両方を示した。ナノモル濃度における生成物および基質の相対MSシグナル強度を有する反応速度プロットの例がここに示されている。UDG反応速度は、毎秒生成されるAP部位のナノモルとして提示される。KMとVMAXはラインウィーバーバーのプロットから計算された。MALDI-TOF質量分析測定単位は、0.001単位から0.02単位まで定義された単位に比例し、かなりの決定係数を有していた。ウラシルグリコシラーゼ阻害剤によるUDG活性の阻害をここに示す。100ピコモールの阻害剤の存在下で、0.05単位のUDGの活性が検出不可能なレベルまで阻害され、IC50は7.6ピコモールであることが見出された。APサイズは不安定であり、極端なpHおよび高温でのベータ除去反応によって加水分解される可能性があるため、アッセイクエンチは、定義された期間、氷上で実施されるべきである。また、pHメーターを使用して、HCLが反応緩衝液を所望のpHに酸性化し、トリス塩基が生成物混合物を適切に中和したことを確認する。この方法は、二官能性DNAグリコシラーゼを分析するために改変することもできる。例えば、U+2 T3は、ホルムアミドピリミジンDNAグリコシラーゼアッセイに好適な基質である。FPG APリガーゼ活性の切断産物は、MALDI−TOF塊によって容易に検出することができる。この方法は、単官能グリコシラーゼ測定の参考法となる可能性を秘めており、医薬品開発のためのグリコシラーゼ阻害剤スクリーニングのツールとしても使用可能です。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

時間分解エレクトロスプレーイオン化水素 - 重水素交換質量分析タンパク質の構造とダイナミクスを学ぶために

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

ブルーネイティブPAGEおよびタンパク質相関プロファイリングによってアフィニティー精製タンパク質複合体の解決

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Lipid Droplet Isolation for Quantitative Mass Spectrometry Analysis

定量的質量分析のための脂肪滴の分離

Lipid droplets are vital to the replication of a variety of different pathogens, most prominently the Hepatitis C Virus (HCV), as the putative site of ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

細胞外マトリックスのグライコ：質量分析法を用いて無傷の糖ペプチドの分析のための方法

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Optimal Preparation of Formalin Fixed Samples for Peptide Based Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging Workflows

ペプチド ベースのマトリックスのためにサンプルを固定ホルマリンの最適な準備支援レーザー脱離イオン化質量分析イメージング ワークフロー

The use of matrix-assisted laser desorption/ionization, mass spectrometry imaging (MALDI MSI) has rapidly expanded, since this technique analyzes a host ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

校正と単一のヌクレオチドの拡張子と MALDI-TOF 質量分析を用いた DNA 修復アッセイ

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

ペプチド濃縮と質量分析によるタンパク質ユビキチン化部位の検出

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

アンジオテンシンIIによるニトロペプチドプロファイリングと同定

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

Sample Preparation for Probe Electrospray Ionization Mass Spectrometry

プローブエレクトロスプレーイオン化質量分析のためのサンプル調製

Mass spectrometry (MS) is a powerful tool in analytical chemistry because it provides very accurate information about molecules, such as mass-to-charge ...

Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

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液体クロマトグラフィーとタンデム質量分析法を用いたサッカロミセス・セレビシエ細胞リピドームの定量的解析

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of ...