Name: uracil-dna glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis
Uploaded: 2022-04-22T14:00:00
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Agradecemos ao Centro Integrado de Genômica Funcional da NCFPB (Taipei, Taiwan) e ao NRPB Pharmacogenomics Lab (Taipei, Taiwan) pelo apoio técnico. Este trabalho foi apoiado pelo Ministério da Ciência e Tecnologia, Taiwan, R.O.C. [número de subvenção MOST109-2314-B-002 -186 para K.-Y.S., MOST 107-2320-B-002-016-MY3 para S.-Y.C., MOST 110-2320-B-002-043 para W.-h.F.]. H.-L.C. é um beneficiário de uma bolsa de doutorado da Universidade Nacional de Taiwan. Financiamento para cobrança de acesso aberto: Ministério da Ciência e Tecnologia, R.O.C.

1. Preparação de substrato/modelo
<ol><li>Design uracil substrato/modelo duplex com um conteúdo G+C equilibrado de ~50 ± 10% e temperatura mínima de fusão de 50 °C para a região duplex. NOTA: Uma diferença de nucleotídeos entre 18 substratos e 19 modelos nt (Tabela 1 e Figura 1) ajuda a melhor interpretação do sinal de MS e a ressaração adequada. A cadeia de modelo serve como DNA complementar para gerar incompatibilidades A-U ou G-U (<stro...

Este artigo fornece um procedimento detalhado para o uso de um método de ensaio UDG MALDI-TOF MS para detectar diretamente produtos de DNA contendo AP. As principais vantagens deste método são que os substratos contendo uracil são livres de rótulos, escaláveis, fáceis de trabalhar e oferecem maior flexibilidade no design de substratos.
A extração de fenol/clorofórmio recomendada pelo fornecedor UDG permite a inativação da enzima para evitar a degradação do DNA do produto. No enta...

Embora o uracil seja uma base normal no RNA, é uma lesão comum e altamente mutagênica no DNA genômico. Uracil pode surgir de deaminação hidrolítica espontânea/enzimática de uma desoxicytidina. Em cada célula viva, essa desaminação ocorre 100-500 vezes por dia sob condições fisiológicas1,2. Se essas alterações não forem reparadas, pode haver uma mudança na composição da sequência de DNA, causando mutação. Como uracil no DNA prefere emparelhar com dATP durante a replicação, se a citosina desaminar para uracil, em dois eventos de replicação, haverá uma nova mutação de transição G:C para A:T em metade do DNA progêneo3.
Entre as estratégias celulares para manter a estabilidade genética, o reparo da excisão de base (BER) é um mecanismo essencial que repara bases danificadas, como uracil, no DNA4. BER é um processo altamente conservado evolutivamente. Existem duas vias ber gerais: a via de remendo curto que leva a um trecho de reparo de um único nucleotídeo e a via de remendo longo que produz um setor de reparo de pelo menos dois nucleotídeos5. BER é um mecanismo coordenado que ocorre em várias etapas. O primeiro passo no BER é a hidrólise enzimática da base nucleotídea danificada por uma glicosilase de DNA específica para gerar um local intermediário apurinic/apyrimidinic (AP) 6. Isso é seguido pelo decote da espinha dorsal do fosfato de açúcar no local ap por uma endonuclease, a limpeza do DNA termina por uma lise, preenchimento de lacunas por uma polimerase de DNA, e selando o corte final por um ligase5.
Uracil-DNA glicosylase (UDG) hidrolisa o uracil de DNA contendo uracil para BER em Escherichia coli. Ensaios convencionais de UDG utilizando DNA radiolabeled envolvendo diferentes técnicas de separação6,7,8,9,10,11,12,13 são geralmente demorados, intensivos em mão-de-obra, com reagentes de rotulagem dispendiosos, procedimentos complicados e que exigem treinamento intensivo e prática para reduzir riscos de exposição a materiais radioativos. Ensaios de oligonucleotídeos fluorométricos foram desenvolvidos como um substituto para a rotulagem de radioisótopos14, além de faróis moleculares e tecnologia de transferência de energia de ressonância Förster15,16,17,18,19,20. No entanto, é necessária rotulagem específica para todos os métodos acima mencionados. Recentemente foram desenvolvidos ensaios biosensores sem rótulo21,22,23 e métodos colorimétricos baseados na formação de um G-quadruplex24,25,26. No entanto, vários pares A:U ou sequências especialmente projetadas nas sondas complicam a definição da unidade enzimápica.
MALDI-TOF MS é uma tecnologia que pode ser de grande utilidade na análise de DNA. As aplicações desenvolvidas incluem genotipismo de nucleotídeo único genotipagem27,28, análise de nucleotídeos modificados29 e identificação intermediária de reparo de DNA30,31,32,33,34. Maldi-TOF MS deve ser prontamente adotado para análise de glicosylase de DNA para detectar produtos de DNA contendo local de AP. No entanto, os ap-sites no DNA são propensos a quebra de fios em muitas condições experimentais33. Um ensaio UDG é apresentado aqui usando MALDI-TOF MS para medir diretamente a produção do local AP sem ruído significativo de quebra de fios. Este método livre de rótulos é fácil de trabalhar e tem um alto potencial para a aplicação farmacêutica do rastreamento inibidor de glicosylase de DNA.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Amino-2-hydroxymethyl-propane-1,3-diol (Tris base)</td>
			<td>J.T baker</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclaved deionized water</td>
			<td>MILLIPORE</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>J.T Baker</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>AQUAGLOVE</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2,3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid (HCl)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bucket</td>
			<td>Taiwan.Inc</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low retention pipette tips(0.5-10 &#181;L)</td>
			<td>extra gene</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low retention pipette tips(1,250 &#181;L)</td>
			<td>national scientific supply co, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low retention pipette tips(200 &#181;L)</td>
			<td>national scientific supply co, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MassARRAY</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 4, 5 
			Mass spectrometry control programs include Typer Chip Linker, SpectroACQUIRE, and Start RT Process.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MassARRAY Nanodispenser</td>
			<td>AAT Bioquest, Inc.</td>
			<td>RS1000</td>
			<td>Protocol 3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Kubota</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Clubio</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube (1.5 mL)</td>
			<td>National scientific supply co, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube rack</td>
			<td>Taiwan.Inc</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette&#160; (P1000)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette&#160; (P2)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette (P10)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette (P100)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette (P200)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette (SL2)</td>
			<td>Rainin</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligonucleotides</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (Singapore)</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quest Graph IC50 Calculator (v.1)</td>
			<td>AAT Bioquest, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Fig. 4 
			https://www.aatbio.com/tools/ic50-calculator-v1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>WAKO</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectroCHIP array</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td>#01509</td>
			<td>Protocol 3, 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Taiwan.Inc</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Typer 4.0 software</td>
			<td>&#160;Agena Bioscience, CA</td>
			<td>#10145</td>
			<td>Protocol 6 
			Typer 4.0 consists four programs including Assay Designer, Assay Editor, Plate Editor, and Typer Analyzer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UDG Reaction Buffer (10x)</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>B0280S</td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil Glycosylase Inhibitor</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>M0281S</td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil-DNA Glycosylase</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>M0280L</td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-VISBLE spectrophotometer UV-1601</td>
			<td>SHIMADZU</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>ZETA ZC-4000 (Taiwan.Inc)</td>
			<td></td>
			<td>Protocol 2</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

uracil-dna glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis

Uracil-DNA glicosylase (UDG) é um componente-chave na via de reparo de excisão base para a correção de uracil formado a partir de deaminação hidrolítica da citosina. Assim, é crucial para a manutenção da integridade do genoma. Um método altamente específico, não rotulado, não-radio-isotópico foi desenvolvido para medir a atividade udg. Um duplex de DNA sintético contendo um uracil específico do local foi cortado pelo UDG e, em seguida, submetido à análise de espectrometria de massa assistida pela Matrix(MALDI-TOF MS). Um protocolo foi estabelecido para preservar o produto apurinic/apyrimidinic (AP) no DNA sem quebra de fios. A alteração do valor m/z do substrato para o produto foi utilizada para avaliar a hidrólise uracil por UDG. Um substrato G:U foi utilizado para análise cinética UDG que produz o Km = 50 nM, Vmax = 0,98 nM/s e Kcat = 9,31 s-1. A aplicação deste método a um ensaio inibidor de gllicosylase uracil (UGI) rendeu um valor IC50 de 7,6 pM. A especificidade do UDG usando uracil em várias posições dentro de substratos de DNA de fio único e duplamente encalhados demonstrou diferentes eficiências de decote. Assim, este método simples, rápido e versátil MALDI-TOF MS pode ser um excelente método de referência para várias glicosilases de DNA monofuncionais. Também tem o potencial como ferramenta para a triagem inibidora de glicosilase de DNA.

Modelos e substratos Tomando oligonucleotídeos sintéticos com U no centro (U+9) emparelhados com um modelo G como exemplo (Figura 1A), um controle em branco de quantidades equimolares de modelo e substrato contendo uracil pode ser usado para controle de qualidade da pureza oligonucleotídeo sintético (Figura 1B; os sinais correspondem ao m/z designado e ao baixo ruído de fundo). Para a análise dos dados de MS, as alturas máximas foram m...

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Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

Um método não-rótulo, não-isotópico não-radio-isotópico para avaliar a atividade uracil-DNA glicosylase foi desenvolvido usando espectrometria de massa MALDI-TOF para análise direta do produto que contém local apurinic/apyrimidinic. O ensaio provou ser bastante simples, específico, rápido e fácil de usar para a medição de glicosilase de DNA.

Ensaio de Glicosylase Uracil-DNA por Desorção a Laser Assistida por Matriz/Análise de Espectrometria de Massa

Uracil-DNA glycosylase (UDG) is a key component in the base excision repair pathway for the correction of uracil formed from hydrolytic deamination of ...

Mecanismos de reparação de DNA são muito importantes para manter a integridade do genoma em todos os organismos vivos. Uracil-DNA glicosylase é uma proteína crucial de reparação de DNA na via básica de reparação de tecidos. Usando espectrometria de massa MALDI-TOF, podemos detectar diretamente o produto AP para ensaio de atividade enzimático.O ensaio convencional de glicosylase requer trabalho de substrato. Este método é livre de rótulos e detecta diretamente a mudança de massa de um substrato uracil para o produto AP. Outras vantagens incluem alta especificidade, versatilidade, escalabilidade, rapidez e facilidade de execução.Usamos e.coli uracil-DNA glycosylase como exemplo. Este método pode ser facilmente modificado para outros ensaios de glicosylase de DNA. Pessoal de laboratório bem treinado com habilidades precisas de tubulação e diluição são essenciais.Reagentes recém-preparados e tampões de sal baixos devem ser usados para melhores sinais e menor ruído de fundo. Demonstrando o procedimento estará Hui-Lan Chang, um estudante de doutorado do meu laboratório. Para um ensaio de glicosylase de DNA usando substrato de base guanina-uracil de T1 U+9 duplex, adicionar 70 microliters de água, 10 microliters de 10X uracil-DNA glicosylase ou tampão de reação UDG, cinco microliters de estoque T1, e cinco microliters de estoque U+9 em um tubo de microcentrifuse esterilizado de 1,5 mililitros.Feche o tubo antes de incuba-lo em um banho de água por 30 minutos a 65 graus Celsius, seguido de 30 minutos a 37 graus Celsius, e finalmente no gelo por três minutos para garantir o bom enlaamento do duplex do modelo de substrato. Em seguida, em um novo tubo de 1,5 mililitro, adicione 49 microliters de tampão de reação UDG frio e um microliter de UDG diluído, em seguida, prepare diluições seriais com o buffer UDG para as concentrações de enzimas desejadas e coloque o UDG diluído no gelo. Em seguida, em outro tubo de 1,5 mililitro, adicione nove microliters da mistura de substrato preparado e pré-ataque a 37 graus Celsius, em seguida, adicione um microliter do UDG diluído e flick o tubo para misturar o conteúdo.Centrifufique brevemente a mistura de reação e coloque o tubo imediatamente para incubação a 37 graus Celsius. Use o temporizador para cronometrar a reação. Para a terminação de reação, prepare 0,25 ácido clorídrico molar e solução de base 0,23 molar tris.Use o medidor de pH para confirmar o pH ao preparar o reagente e testar por tira de pH antes de operar a etapa de terminação de reação, depois acidificar 10 microliters de tris-EDTA com um microliter de 0,25 ácido clorídrico molar e garantir que o pH esteja em torno de dois mais ou menos 0,5. Neutralizar a solução com um microliter de base tris e garantir que o pH final esteja em torno de 6,5 mais ou menos 0,5. Em seguida, adicione um microliter de 0,25 ácido clorídrico molar à mistura de reação para inativar a enzima e colocar o tubo no gelo por seis minutos, em seguida, adicione um microliter de base tris para neutralizar os produtos de DNA e evitar a quebra do local AP por exposição prolongada ao ácido.Depois de adicionar 13 microliters de tris-EDTA para aumentar o volume da mistura do produto para transferência de chips de matriz, coloque o tubo no gelo. Finalmente, transfira todos os 25 produtos de reação UDG de microcentrículos para uma placa de microtiter de 384 poços. Abra a porta do distribuidor de nanoliter e carregue a placa de microtítmetro de 384 poços no suporte da placa do convés e, em seguida, insira a matriz do chip na posição correspondente da placa de batedor.Coloque a placa de batedor carregada no convés de processamento do distribuidor de nanoliter e feche a porta. Toque no botão de execução na tela de transferência e aguarde que o instrumento comece a distribuir amostras da placa de microtítiter para o chip matrix. Em seguida, usando a opção de guia de visão, mostre a imagem do chip e os volumes de distribuição para cada ponto durante a dispensação.Certifique-se de que o volume manchado no chip esteja na faixa de cinco a 10 nanoliters. Usando o programa de aplicação apropriado, prepare um arquivo xlsx contendo o valor de sinal M por Z previsto para importação. Em seguida, use o programa de aplicativos para criar e definir um novo ensaio UDG clicando com o botão direito do mouse no grupo de ensaio de importação na opção de formato de designer e selecionando o arquivo Excel da lista suspensa.Em seguida, clique com o botão direito da placa de projeto do cliente e clique na parte superior da árvore de opção suspensa para estabelecer uma nova placa de ensaio. Em seguida, na caixa de diálogo, digite um nome de arquivo. E no tipo de placa suspensa, selecione o tipo de placa de 384 poços.Pressione OK e espere que uma placa em branco apareça à direita da tela. Em seguida, clique na opção ensaio e selecione o ensaio na lista suspensa. Para atribuir o ensaio selecionado a cada posição de ponto de amostra na placa, mova o cursor para cada posição da placa em branco, clique para destacar o poço e clique com o botão direito do mouse para selecionar adicionar placas.Usando um computador desktop ou laptop, prepare uma lista de trabalho em formato xlsx sem cabeçalho para todas as amostras no chip e clique no novo botão de projeto de amostra e selecione o arquivo da lista suspensa para importar a lista de trabalho. Procure todos os códigos de amostra de teste na lista de trabalho à esquerda da tela e clique em um código de amostra na lista de trabalho e clique com o botão direito do mouse na posição correspondente da placa para vincular os testes a cada posição. Pressione o botão de dentro/para fora do espectrômetro de massa para estender o convés e retirar o suporte do chip.Insira o chip de amostra no suporte do chip, coloque o suporte do chip carregado no convés estendido e pressione novamente o botão de entrada/saída para que o chip de amostra entre no instrumento. No programa de controle de espectrômetro de massa, clique duas vezes no ícone de aquisição. Na janela de aquisição, clique na guia de execução automática para iniciar o instrumento e adquira espectros de massa das amostras no chip.Para análise de dados, execute o programa de análise de dados e, em seguida, navegue na árvore do banco de dados e selecione o ID do chip.Clique para destacar um alvo bem no chip e clique no ícone de espectro para mostrar o espectro de massa. Clique com o botão direito do mouse para escolher a caixa de diálogo de personalização e cortar uma faixa de espectro específica em uma nova janela, em seguida, clique no eixo x para digitar nos limites superior e inferior de M a Z e pressione OK para mostrar o espectro de alcance especificado, incluindo os sinais de interesse. Para medir a altura máxima dos valores M por Z correspondentes ao substrato uracil, produto AP e modelo, clique no pico e veja a altura máxima no canto superior esquerdo da tela.Finalmente, para salvar o espectro para registro, a exportação com o botão direito do mouse é exportação e selecione o tipo de arquivo como JPEG na lista suspensa. Clique no destino e navegue em disco para selecionar o dispositivo de armazenamento na lista suspensa e digite o nome do arquivo e clique em exportar. O sistema modelo para um teste de glicosylase de DNA é mostrado aqui.O DNA do modelo nucleotídeo de 19 nucleotídeos permaneceu inalterado após a hidrólise da glicosila. Portanto, o sinal poderia servir de referência para a quantitação do produto AP. A diferença de um nucleotídeo entre o substrato e o modelo correspondente produziu um perfil de sinal bem separado para ambos.O sinal do produto AP também foi bem separado do do substrato contendo uracil. Para a análise dos dados de MS, as alturas máximas foram medidas. A análise do curso de tempo para a atividade de UDG em 0,01, 0,02, 0,05 e 0,1 demonstrou tanto a dose quanto a dependência do tempo.Um exemplo de gráfico de taxa de reação com intensidades relativas de sinal de MS do produto e substrato em concentrações nanomolar é mostrado aqui. A taxa de reação do UDG é apresentada como nanomoles do site AP produzido por segundo. O KM e o VMAX foram calculados a partir do enredo lineweaver Burk.A unidade medida de espectrometria de massa MALDI-TOF foi proporcional à unidade definida de 0,001 unidades a 0,02 unidades com coeficiente de determinação apreciável. A inibição da atividade UDG por um inibidor de glicossilase uracil é mostrada aqui. Na presença de 100 picomoles do inibidor, a atividade de 0,05 unidades de UDG foi inibida a um nível indetectável e o IC50 foi encontrado como 7,6 picomoles.Uma vez que o tamanho de AP é labile e pode ser hidrolisado por uma reação beta de eliminação em pH extremo e temperatura elevada, a sacieçação do ensaio deve ser realizada no gelo para o período definido. Além disso, use um medidor de pH para garantir que o HCL acidifique o tampão de reação à base de pH e tris desejada neutralizada adequadamente a mistura do produto. Este método também pode ser modificado para analisar glicosilase de DNA bifunctional.Por exemplo, U+2 T3 é um substrato adequado para ensaio de DNA glicosylase formamidopyrimidina. Os produtos de decote da atividade de ligase FPG AP podem ser facilmente detectados pela massa MALDI-TOF. Este método tem o potencial de se tornar o método de referência para a medição monofuncional da glicosilase e também pode ser usado como uma ferramenta para triagem inibidora de glicosylase para o desenvolvimento farmacêutico.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

resolvida no tempo com ionização por electrospray Hidrogénio-deutério troca Espectrometria de Massa para estudar a estrutura e dinâmica das proteínas

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Bioquímica

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Resolver purificada por afinidade complexos de proteínas por Azul Native PAGE e Proteína Correlação Profiling

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Lipid Droplet Isolation for Quantitative Mass Spectrometry Analysis

Isolamento de gotículas de gordura para análise quantitativa Espectrometria de Massa

Lipid droplets are vital to the replication of a variety of different pathogens, most prominently the Hepatitis C Virus (HCV), as the putative site of ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glicoproteômica da matriz extracelular: um método de análise GLICOPï¿½TIDOS Intact Usando Espectrometria de Massa

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Optimal Preparation of Formalin Fixed Samples for Peptide Based Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging Workflows

Preparação ideal de formol fixada amostras para peptídeo baseado Matrix assistida por espectrometria de massa de ionização/dessorção Laser Imaging fluxos de trabalho

The use of matrix-assisted laser desorption/ionization, mass spectrometry imaging (MALDI MSI) has rapidly expanded, since this technique analyzes a host ...

Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Revisão e ensaio de reparo de DNA usando extensão de nucleotídeo único e análise de espectrometria de massa MALDI-TOF

The maintenance of the genome and its faithful replication is paramount for conserving genetic information. To assess high fidelity replication, we have ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

Detecção de locais de ubiquitinação de proteínas por enriquecimento de peptídeos e espectrometria de massa

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Perfil e identificação de nitropeptídeos ilustrados pela angiotensina II

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Preparação de amostras para espectrometria de ionização de eletrospray de sonda

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Quantitative Analysis of the Cellular Lipidome of Saccharomyces Cerevisiae Using Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry

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Análise Quantitativa do Lipidome Celular de Saccharomyces Cerevisiae Usando Cromatografia Líquida Juntamente com Espectrometria de Massa de Tandem

Lipids are structurally diverse amphipathic molecules that are insoluble in water. Lipids are essential contributors to the organization and function of ...