Name: live-3d-cell immunocytochemistry assays of pediatric diffuse midline glioma
Uploaded: 2021-11-11T13:00:00
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Wir danken Dr. Silvia Soddu und Dr. Giulia Federici (Unit of Cellular Networks and Molecular Therapeutic Targets, IRCCS-Regina Elena National Cancer Institute, Rom, Italien) für den Zugang zum IncuCyte S3 Live Cell Imaging System bei der vorläufigen Erstellung des Bildgebungsprotokolls. Ausserdem danken wir Bernadett Kolozsvari für die technische Beratung. Die Studie wurde durch das Stipendium von Children with Cancer UK (16-234) und das italienische Gesundheitsministerium Ricerca Corrente unterstützt. M Vinci ist Stipendiatin von Children with Cancer UK. R Ferretti ist Stipendiat der Fondazione Veronesi (2018 und 2019). Die Autoren danken der Fondazione Heal für ihre Unterstützung und der Children's Hospital Foundation für die Finanzierung der Queensland Children's Tumor Bank.

Dieses Protokoll folgt den Richtlinien der Ethikkommissionen der Institutionen für die Humanforschung.
HINWEIS: Diese Studie wurde mit dem Incucyte S3 und/oder SX5 Lebendzellanalysegerät (als Lebendzellanalysegerät bezeichnet) durchgeführt.
1. Generierung von reproduzierbar großen Tumorsphäroiden
HINWEIS: Das von Vinci et al. 2015 7,12 beschriebene Protokoll (...

<ol>
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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginine+starvation+and+docetaxel+induce+c-Myc-driven+hENT1+surface+expression+to+overcome+gemcitabine+resistance+in+ASS1-negative+tumors.">Arginine starvation and docetaxel induce c-Myc-driven hENT1 surface expression to overcome gemcitabine resistance in ASS1-negative tumors.</a> Clinical Cancer Research. 25 (16), 5122-5134 (2019).</li><li>Ferretti, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+invasion+into+Matrigel:+optimized+protocol+for+RNA+extraction.">Tumor cell invasion into Matrigel: optimized protocol for RNA extraction.</a> Biotechniques. 70 (6), 327-335 (2021).</li><li>Vinci, M., Box, C., Eccles, S. 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W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+antitumor+efficacy+of+anti-GD2+CAR+T+cells+in+H3-K27M.">Potent antitumor efficacy of anti-GD2 CAR T cells in H3-K27M.</a> Nature Medicine. 24 (5), 572-579 (2018).</li><li>Louis, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+2016+World+Health+Organization+classification+of+tumors+of+the+central+nervous+system:+A+summary.">The 2016 World Health Organization classification of tumors of the central nervous system: A summary.</a> Acta Neuropathologica. 131 (6), 803-820 (2016).</li><li>Czabanka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Junctional+adhesion+molecule-C+mediates+the+recruitment+of+embryonic-endothelial+progenitor+cells+to+the+perivascular+niche+during+tumor+angiogenesis.">Junctional adhesion molecule-C mediates the recruitment of embryonic-endothelial progenitor cells to the perivascular niche during tumor angiogenesis.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (4), 1209 (2020).</li><li>Pardoll, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Pankov&#225;, K., R&#246;sel, D., Novotn&#253;, M., Br&#225;bek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+mechanisms+of+transition+between+mesenchymal+and+amoeboid+invasiveness+in+tumor+cells.">The molecular mechanisms of transition between mesenchymal and amoeboid invasiveness in tumor cells.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 67 (1), 63-71 (2010).</li><li>Cheung, K. J., Gabrielson, E., Werb, Z., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collective+invasion+in+breast+cancer+requires+a+conserved+basal+epithelial+program.">Collective invasion in breast cancer requires a conserved basal epithelial program.</a> Cell. 155 (7), 1639-1651 (2013).</li></ol>

Die Lebend-3D-Zell-Immunzytochemie, die wir hier für die pädiatrische DMG-Invasion und -Migration übernommen haben, könnte auch für andere hochinvasive Tumorzelltypen, einschließlich Brust- und Darmkrebszelllinien, leicht angepasst werden. 
Anders als bei zuvor durchgeführten Live-2D-Zell-Immunzytochemie-Assays10 wird bei der Arbeit in 3D empfohlen, auf einige kritische Schritte zu achten. Insbesondere für den von uns beschriebenen Invasionsassay wird empfohlen,...

Die Fähigkeit von Tumorzellen, sich dem umgebenden Gewebe zu entziehen und es zu verbreiten, ist ein Kennzeichen von Krebs1. Insbesondere die Tumorzellmotilität ist ein charakteristisches Merkmal maligner Tumoren, unabhängig davon, ob es sich um einen metastasierten Tumortyp wie Brust2 oder Darmkrebs3 oder einen lokal invasiven Typ wie das diffuse Gliomhandelt 4,5.
Die Bildgebung spielt eine zentrale Rolle bei der Untersuchung vieler Aspekte von Tumorzellphänotypen; Bei der Untersuchung dynamischer zellulärer Prozesse wie Migration und Invasion ist jedoch die Bildgebung lebender Zellen definitiv zu bevorzugen, wenn Veränderungen in der Morphologie und der Zell-Zell-Interaktion auftreten 6,7 und im Laufe der Zeit leichter untersucht werden können. Für die Bildgebung lebender Zellen können verschiedene optische Mikroskopiesysteme verwendet werden, vom Phasenkontrastmikroskop bis zum konfokalen Fluoreszenzmikroskop, und die Bildaufnahme über einen kurzen oder langen Zeitraum auf einem inversen Mikroskop, das mit einer Kammer zur Temperatur- und CO2 -Kontrolle ausgestattet ist, oder in High-Content-Bildanalysesystemen mit eingebauten Kammern oder alternativ in Bildsystemen, die im Inkubator sitzen können, ohne dass die Zellen während der gesamten Dauer gestört werden müssen des Experiments. Die Wahl des verwendeten Systems wird häufig von einer Reihe von Faktoren bestimmt, wie z. B. der erforderlichen Auflösung, der Länge der Gesamterfassungszeit und der Zeitintervalle, dem verwendeten Gefäßtyp und dem Durchsatz des Assays (Einkammer- oder Multi-Well-Platte), der Empfindlichkeit der verwendeten Zellen (Edel- und/oder seltene Zellen) und der Phototoxizität der Zellen, wenn Fluorophore vorhanden sind.
Im Hinblick auf die Fluoreszenzbildgebung im Live-Modus kann dies erreicht werden, indem Zellen für die Expression fluoreszierender Proteine entweder für eine stabile Expression oder als induzierbares System8 transduzierbar gemacht werden, durch transiente Zelltransfektion oder durch die Verwendung von Zellfarbstoffen, die jetzt für die Markierung lebender Zellen7, für die Verfolgung lebender Zellen sowie für die Markierung subzellulärer Organellen9 zur Verfügung stehen.
Kürzlich wurde ein nützlicher Ansatz für die Immunzytochemie lebender Zellen entwickelt, bei dem ein Antikörper, der einen Oberflächenmarker der Wahl erkennt, an ein Markierungsreagenz gebunden werden kann, und nach Zugabe zu den Kulturmedien können Zellen, die den spezifischen Marker exprimieren, leicht in Echtzeit durch Lebendzell-Bildgebung abgebildet werden. Die Visualisierung und Quantifizierung der Markerexpression unter Verwendung eines solchen Systems kann leicht erreicht werden, wenn Zellen unter zweidimensionalen (2D) Kulturbedingungen gezüchtet werden10.
In dieser Studie haben wir Protokolle für die Invasion und Migration von pädiatrischen diffusen Mittelliniengliomen (DMG)-Patientenzellen optimiert11,12. DMG sind hochaggressive Hirntumoren, die Kinder betreffen und in der überwiegenden Mehrheit mit der Treibermutation K27M in Histon-H3-Varianten assoziiert sind. DMG entstehen im Hirnstamm und in den Mittellinienregionen des Zentralnervensystems (ZNS) und zeichnen sich durch eine stark infiltrative Natur aus. Es wurde gezeigt, dass diese invasive Fähigkeit zumindest teilweise durch die intratumorale Heterogenität und die krebsstammähnlichen Merkmale von DMG-Zellen vermittelt wird7.
Zur Veranschaulichung unserer Assays wurde ein Antikörpermarkierungsreagenz (ALR) in Kombination mit einem Antikörper gegen CD44 verwendet. CD44 ist ein Transmembran-Glykoprotein und Adhäsionsmolekül, das auf Stammzellen und anderen Zelltypen exprimiert wird und mit dem Phänotyp von Krebsstammzellen und der Migration und Invasion von Tumorzellen assoziiertist 13. Die Protokolle umfassen die Probenvorbereitung, die Bildaufnahme im Hellfeld- und Fluoreszenzmodus und die Analyse auf einem Lebendzellanalysegerät, das es ermöglichte, die gesamte CD44-Expression auf der DMG-Zellmembran während der 3D-Invasion und -Migration quantitativ in Echtzeit zu messen. Die Assays ermöglichten auch die Möglichkeit, das intermittierende Fluoreszenzsignal von CD44 auf einzelnen Zellen während der Migration und Invasion sichtbar zu machen. Interessanterweise wurde auch ein Effekt des Anti-CD44-Antikörpers beobachtet, der möglicherweise als blockierender Antikörper fungiert und auch die Zellmigration und -invasion zu reduzieren schien und einen Wechsel des Invasionsmusters von einem kollektiven mesenchymalartigen zu einem eher einzelligen amöbenartigen Phänotyp zu induzieren schien.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 Well TC-Treated Microplates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td>size 96 wells, polystyrene plate, flat bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB3056D</td>
			<td>solution for neurosphere dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Mv medical</td>
			<td>FFL16034</td>
			<td>cell counting chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD-44 (156-3C11)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>3570</td>
			<td>Mouse mAb IgG2a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356237</td>
			<td>Basement Membrane Matrix (BMM), Phenol Red-free, LDEV-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fabfluor-488 Antibody Labeling Dye</td>
			<td>Incucyte</td>
			<td>4743</td>
			<td>Antibody labelling reagent (ALR): Mouse IgG2a 488 antibody for Live-Cell Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incucyte S3 and/or SX5 Live-Cell Analysis Instrument</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>-</td>
			<td>The Incucyte S3 and/or SX5 Instrument is used for real-time cell monitoring and surveillance, cell health and viability, migration and invasion, plus a wide range of phenotypic cell-based assays.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>any inverted microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-Green Background Suppressor Reagent</td>
			<td>Incucyte</td>
			<td>6500-0045</td>
			<td>Backgroung suppressor reagent (BSR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tumor stem cell (TSM) medium</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>growth cell medium (see reference in the text for details)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-Low Attachment Multiple Well Plate</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>7007</td>
			<td>size 96 well, round bottom clear</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-3d-cell immunocytochemistry assays of pediatric diffuse midline glioma

Zellmigration und Zellinvasion sind spezifische Kennzeichen von H3K27M-mutierten Tumoren des diffusen Mittellinienglioms (DMG). Wir haben diese Merkmale bereits mit dreidimensionalen (3D) zellbasierten Invasions- und Migrationsassays modelliert. In dieser Studie haben wir diese 3D-Assays für die Immunzytochemie lebender Zellen optimiert. Ein Antikörper-Markierungsreagenz wurde verwendet, um die Expression des Adhäsionsmoleküls CD44 auf der Plasmamembran von migrierenden und eindringenden Zellen einer DMG H3K27M primären Patientenzelllinie in Echtzeit zu detektieren. CD44 ist mit dem Phänotyp von Krebsstammzellen und der Migration und Invasion von Tumorzellen assoziiert und an den direkten Interaktionen mit der extrazellulären Matrix des Zentralnervensystems (ZNS) beteiligt. Neurosphären (NS) aus der DMG H3K27M-Zelllinie wurden in die Basalmembranmatrix (BMM) eingebettet oder in Gegenwart eines Anti-CD44-Antikörpers in Verbindung mit dem Antikörpermarkierungsreagenz (ALR) auf eine dünne Beschichtungsschicht aus BMM aufgebracht. Die immunzytochemische Live-3D-Zellanalyse wurde auf einem Lebendzellanalysegerät durchgeführt, um die gesamte CD44-Expression, insbesondere auf den migrierenden und eindringenden Zellen, quantitativ zu messen. Die Methode ermöglicht es auch, die intermittierende Expression von CD44 auf der Plasmamembran von migrierenden und eindringenden Zellen in Echtzeit zu visualisieren. Darüber hinaus lieferte der Assay auch neue Einblicke in die mögliche Rolle von CD44 beim Übergang von mesenchymal zu amöboid in DMG H3K27M-Zellen.

Das Live-3D-Zell-Immunzytochemie-Protokoll für Invasion und Migration ist in einem einfachen und reproduzierbaren Arbeitsablauf in Abbildung 1 zusammengefasst. Durch die Aussaat der DMG-Zellen in ULA 96-Well-Rundbodenplatten werden reproduzierbare NS erhalten und in den gezeigten Schritten verwendet. Wenn die NS die ideale Größe von ~300 μm erreicht haben (ca. 4 Tage nach der Aussaat), werden die Assays für Invasion12 und Migration14 einge...

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Live-3D-Cell Immunocytochemistry Assays of Pediatric Diffuse Midline Glioma

In dieser Studie wird ein Protokoll der Lebend-3D-Zell-Immunzytochemie vorgestellt, das auf eine pädiatrische diffuse Mittellinien-Gliomzelllinie angewendet wird, um die Expression von Proteinen auf der Plasmamembran während dynamischer Prozesse wie 3D-Zellinvasion und -migration in Echtzeit zu untersuchen.

Lebend-3D-Zell-Immunzytochemie-Assays des pädiatrischen diffusen Mittellinienglioms

Cell migration and invasion are specific hallmarks of Diffuse Midline Glioma (DMG) H3K27M-mutant tumors. We have already modeled these features using ...

Das diffuse Mittelliniengliom ist ein hochinvasiver Hirntumor. Diese Methode hilft dabei, in Echtzeit zu untersuchen, wie DMG-Zellen in einem 3D-Kontext wandern und eindringen, mit spezifischen Erkenntnissen über die potenzielle Rolle eines Schlüsseladhäsionsmoleküls. Durch die Verwendung eines Markierungsreagenzes und eines spezifischen Antikörper-Anti-CD44 können wir die Expression von CD44 auf der Plasmamembran auf den DMG-Zellen auch in der 3D-Migration und -Invasion untersuchen.Die Anwendung dieser Technik unterstrich die potenzielle Rolle von CD44 bei der Motilität dieser Zellen, was darauf hindeutet, dass es ein wertvolles und invasives molekulares Ziel darstellen könnte. Rehydrieren Sie zunächst das ALR, indem Sie 100 Mikroliter steriles Wasser hinzufügen und die Lösung durch Pipettieren mischen. Mischen Sie den Antikörper mit dem ALR im TSM-Medium in einer Multi-Well-Platte mit rundem Boden oder in einem bernsteinfarbenen Röhrchen und schützen Sie es vor Licht.Bereiten Sie eine ausreichende Menge des Mediums vor, um 25 Mikroliter pro Vertiefung bei der dreifachen endgültigen Assay-Konzentration zu dosieren, und inkubieren Sie dann 15 Minuten lang bei Raumtemperatur. BSR wird im TSM-Medium mit einer Konzentration von 1,5 Millimolar verdünnt, um am Ende des Assays eine Endkonzentration von 0,5 Millimolar zu erhalten. Entfernen Sie dann vorsichtig und langsam 75 Mikroliter des Mediums aus jeder Vertiefung, vermeiden Sie es, den Boden der Vertiefung zu berühren, in der sich der NS befindet, und überprüfen Sie das Vorhandensein des NS visuell.Geben Sie vorsichtig 25 Mikroliter des BSR- und ALR-Antikörperkomplexes in jede Vertiefung und lassen Sie den ALR-Antikörperkomplex zwei bis drei Minuten lang mit dem Medium mischen. Stellen Sie mit einem inversen Mikroskop sicher, dass sich jeder NS mittig am Boden des Wells befindet. Vermeiden Sie die Bildung von Blasen, indem Sie sie mit einer Nadel entfernen.Lege den Teller für fünf Minuten auf Eis, damit der Boden des Tellers kalt wird. Geben Sie 75 Mikroliter BMM pro Vertiefung ab, indem Sie eine vorgekühlte P200-Spitze an der Innenwand der Vertiefung platzieren, um Blasenbildung zu vermeiden und den Boden der Vertiefung zu berühren. Lassen Sie den Teller fünf Minuten auf Eis, damit sich das BMM mit dem Medium vermischen kann.Überprüfen Sie mit einem inversen Mikroskop die Position von NS. Und wenn nicht zentral vorhanden, zentrifugieren Sie die Platte bei vier Grad Celsius bei 180 mal G fünf Minuten lang. Übertragen Sie dann die Platte in das Lebendzellanalysegerät, das in den Inkubator gestellt ist, der auf 37 Grad Celsius, 5 % Kohlendioxid und 95 % Luftfeuchtigkeit eingestellt ist. Sobald die Vertiefungen mit BMM beschichtet sind, schneiden Sie eine P200-Spitze ab.Entnehmen Sie 50 Mikroliter des Zellmediums und NS aus jeder ausgewählten Vertiefung und überführen Sie sie in eine beschichtete Vertiefung mit flachem Boden. Überprüfen Sie das Vorhandensein und die Position des NS in jeder Vertiefung visuell. Geben Sie vorsichtig 50 Mikroliter des verdünnten BSR- und ALR-Antikörpers in jede Vertiefung und warten Sie zwei bis drei Minuten, bis sich die Reagenzien vermischen.Stellen Sie mit einem inversen Mikroskop sicher, dass sich die meisten replizierten NS zentral im Bohrloch befinden. Nachdem Sie sich vergewissert haben, dass keine Blasen vorhanden sind, legen Sie die Platte vorsichtig in das Lebendzellanalysegerät, wie zuvor gezeigt. Wählen Sie in der Software des Live-Cell-Analysegeräts die Option "Zeitplan" aus, klicken Sie dann auf die Registerkarte "Plus" und wählen Sie "Nach Zeitplan scannen", um die Platten mit den im Textmanuskript angegebenen Intervallen zu scannen.Erstellen oder stellen Sie im Softwarefenster ein Schiff wieder her und klicken Sie dann auf die Option Neu. Wählen Sie den Sphäroid-Scan-Typ, die Phase plus Hellfeld, grüne Bildkanäle für den Invasionsassay und das 4X-Objektiv aus. Wählen Sie den Klonierungsscan mit Verdünnung, das 4X-Objektiv und die Phase und Grün für den Migrationsassay aus.Wählen Sie den Plattentyp aus und definieren Sie die zu scannenden Wells, indem Sie sie auf der Plattenkarte markieren, und stellen Sie dann die Scanfrequenz ein. Klicken Sie auf Zum Zeitplan hinzufügen und starten Sie den Scan. Wählen Sie den Reiter Neue Analysedefinition anlegen.Wählen Sie dann auf der Registerkarte Sphäroidinvasion oder Basisanalysatoranwendung für Invasion bzw. Migration aus. Wählen Sie die für die Invasion und Migration geeigneten Kanäle im Bildkanal aus. Wählen Sie einige repräsentative Bilder aus drei bis vier Vertiefungen aus, um eine Vorschau anzuzeigen und die Analyseeinstellung zu verfeinern.Passen Sie für den Invasionsassay auf der Registerkarte Analysedefinition die Anwendungseinstellungen im Hellfeld- und Grünkanal mit den im Textmanuskript genannten Einstellungen an, um eine präzise Segmentierung zwischen dem Sphäroid und den eindringenden Zellen zu erzeugen. Passen Sie für den Migrationsassay die Anwendungseinstellungen wie im Textmanuskript erwähnt in den Phasen- und Grünkanälen an, um eine präzise Segmentierung zwischen der Konfluenz und den grünen Zellen zu erzeugen. Überprüfen Sie, ob die Analyseeinstellungen für den NS korrekt sind, indem Sie zufällig auf mehrere Vertiefungen klicken.Wählen Sie die zu analysierenden Vertiefungen und Zeitpunkte aus. Speichern Sie die Analysedefinition und klicken Sie auf Fertig stellen. Die repräsentativen immunfluoreszierenden konfokalen Bilder der CD44-Expression in primären DMG-Patientenzellen zeigten die Rolle von CD44 bei der Zellmigration und -invasion.Die lebende 3D-Zellimmunchemie ermöglicht die Visualisierung der CD44-Expression. Die repräsentativen Bilder des Zeitraffers sowohl für die Migration als auch für die Invasion zeigen das Vorhandensein und Fehlen des grünen Fluoreszenzsignals auf derselben Zelle, das im Laufe der Zeit beobachtet wurde, was darauf hindeutet, dass die Expression von CD44 ein- und ausgeschaltet ist, während die Zellen wandern und eindringen. Die Migrations- und Invasionsprozesse werden über 96 Stunden verfolgt und zeigen QCTB-R059-Zellen mit einem hohen CD44-Gehalt.Die Quantifizierung der CD44-Expression und ihres Anstiegs über die Zeit wurde anhand des gesamten grünen Fluoreszenzsignals gemessen, das mit der ALR sowohl für die Migration als auch für die Invasion assoziiert ist. Wenn der Anti-CD44-Antikörper auf lebenden Zellen angewendet wird, beeinflusst er die Zellmorphologie und induziert einen Übergang von einer mesenchymalartigen zu einer amöbenartigen Invasion und eine Verringerung der invasiven und migrierenden Kapazität dieser Zellen. Die kritischsten Schritte der Methode sind das Mischen des Markierungsreagenzes mit einem Antikörper, die Zugabe der Mischung zum Matrigel und zum Medium sowie der Zugang zum Live-Cell-Imaging-Gerät.Diese Methode kann durch die Verwendung von zwei oder mehr unterschiedlichen Markierungsreagenzien und Antikörpern weiter implementiert werden, um die DMG-Zellinteraktion zu untersuchen, die durch direkte Zellen und Kontakt vermittelt wird. Unsere Methode bietet neue Werkzeuge, um die zellulären und molekularen Mechanismen der Migration und Invasion von DMG in 3D zu untersuchen und neue Richtungen zur Hemmung ihres infiltrativen Phänotyps zu eröffnen.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

Ein Protokoll für schnelle Post-mortem-Zellkultur von Diffuse Intrinsic Ponsgliom (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Forschung

Krebsforschung

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

Transplantation von Zebrafisch-pädiatrischen Hirntumoren in immune-kompetente Wirte für die Langzeitstudie von Tumorzellverhalten und Drug Response

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

Whole-body PET/MRI of Pediatric Patients: The Details That Matter

Ganzkörper-PET/MRT der pädiatrischen Patienten: die Details, die wichtig

Integrated PET/MRI is a hybrid imaging technique enabling clinicians to acquire diagnostic images for tumor assessment and treatment monitoring with both ...

Determination of Protein Expression Level in Cultured Cells by Immunocytochemistry on Paraffin-embedded Cell Blocks

Bestimmung der Proteinexpressionsgrad in kultivierten Zellen von Immunocytochemistry auf Paraffin-eingebetteten Zellenblöcken

Immunofluorescent staining is currently the method of choice for determination of protein expression levels in cell-culture systems when morphological ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

Bewertung von Biomarkern in Gliom von Immunohistochemistry auf Paraffin-eingebetteten 3D Gliom Neurosphäre Kulturen

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

Längsschnitt-Intravital-Bildgebung des Hirntumorzellverhaltens als Reaktion auf eine invasive chirurgische Biopsie

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures

Echtzeit-Überwachung der Migration menschlicher Gliom-Zell auf Dorsalwurzel Ganglion Axon-Oligodendrozyten-Ko-Kulturen

Glioblastoma is one of the most aggressive human cancers due to extensive cellular heterogeneity and the migration properties of hGCs. In order to better ...

Assays for Validating Histone Acetyltransferase Inhibitors

Assays zur Validierung von Histon-Acetyltransferase-Inhibitoren

Lysine acetyltransferases (KATs) catalyze acetylation of lysine residues on histones and other proteins to regulate chromatin dynamics and gene ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Ein schneller Screening-Workflow zur Identifizierung einer potenziellen Kombinationstherapie für GBM unter Verwendung von vom Patienten abgeleiteten Gliomstammzellen

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...