Name: live-3d-cell immunocytochemistry assays of pediatric diffuse midline glioma
Uploaded: 2021-11-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-3D-Cell Immunocytochemistry Assays of Pediatric Diffuse Midline Glioma at JoVE.com

हम इमेजिंग प्रोटोकॉल के प्रारंभिक सेट अप में इनक्यूसाइट एस 3 लाइव सेल इमेजिंग सिस्टम तक पहुंच के लिए डॉ सिल्विया सोड्डू और डॉ गिलिया फेडेरिकी (सेलुलर नेटवर्क और आणविक चिकित्सीय लक्ष्यों की इकाई, आईआरसीसीएस-रेजिना एलेना नेशनल कैंसर इंस्टीट्यूट, रोम, इटली) को धन्यवाद देना चाहते हैं। इसके अलावा, हम तकनीकी सलाह के लिए बर्नाडेट कोलोज़स्वरी को धन्यवाद देते हैं। अध्ययन को चिल्ड्रन विद कैंसर यूके ग्रांट (16-234) और इतालवी स्वास्थ्य मंत्रालय रिसर्का कोरेंट द्वारा समर्थित किया गया था। एम विंची एक चिल्ड्रन विद कैंसर यूके फेलो हैं। आर फेरेटी फोंडाज़ियोन वेरोनेसी फैलोशिप (2018 और 2019) के प्राप्तकर्ता हैं। लेखक ों ने अपने समर्थन के लिए फोंडाज़िओन हील और क्वींसलैंड चिल्ड्रन ट्यूमर बैंक के वित्तपोषण के लिए चिल्ड्रन हॉस्पिटल फाउंडेशन को स्वीकार किया।

यह प्रोटोकॉल संस्थानों की मानव अनुसंधान नैतिकता समितियों के दिशानिर्देशों का पालन करता है।
नोट: यह अध्ययन इनक्यूसाइट एस 3 और / या एसएक्स 5 लाइव-सेल विश्लेषण उपकरण (लाइव सेल विश्लेषण उपकरण के र...

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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Pankov&#225;, K., R&#246;sel, D., Novotn&#253;, M., Br&#225;bek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+mechanisms+of+transition+between+mesenchymal+and+amoeboid+invasiveness+in+tumor+cells.">The molecular mechanisms of transition between mesenchymal and amoeboid invasiveness in tumor cells.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 67 (1), 63-71 (2010).</li><li>Cheung, K. J., Gabrielson, E., Werb, Z., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collective+invasion+in+breast+cancer+requires+a+conserved+basal+epithelial+program.">Collective invasion in breast cancer requires a conserved basal epithelial program.</a> Cell. 155 (7), 1639-1651 (2013).</li></ol>

लाइव-3 डी-सेल इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री जिसे हमने बाल चिकित्सा डीएमजी आक्रमण और प्रवास के लिए यहां अपनाया है, उसे आसानी से स्तन और कोलन कैंसर सेल लाइनों सहित अन्य अत्यधिक आक्रामक ट्यूमर सेल प्रकारों के ल...

ट्यूमर कोशिकाओं की आसपास के ऊतकों से बचने और प्रसार करने कीक्षमता कैंसर 1 की एक पहचान है। विशेष रूप से, ट्यूमर सेल गतिशीलता घातक ट्यूमर की एक विशिष्ट विशेषता है, चाहे वह एक मेटास्टैटिक ट्यूमर प्रकार जैसे स्तन2 या कोलोरेक्टल कैंसर3 या स्थानीय रूप से आक्रामक प्रकार जैसे कि डिफ्यूज ग्लियोमा 4,5 हो।
ट्यूमर सेल फेनोटाइप के कई पहलुओं की जांच में इमेजिंग की केंद्रीय भूमिका है; हालांकि, माइग्रेशन और आक्रमण जैसी गतिशील सेलुलर प्रक्रियाओं का अध्ययन करते समय लाइव-सेल इमेजिंग को निश्चित रूप से प्राथमिकता दी जानी चाहिए, जब आकृति विज्ञान और सेल-सेल इंटरैक्शन 6,7 में परिवर्तन होते हैं और समय के साथ अधिक आसानी से जांच की जा सकती है। लाइव-सेल इमेजिंग के लिए, विभिन्न ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी सिस्टम का उपयोग किया जा सकता है, चरण कंट्रास्ट से कॉन्फोकल फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप तक, और तापमान और सीओ2 नियंत्रण के लिए एक कक्ष से लैस उल्टे माइक्रोस्कोप पर छोटी या लंबी अवधि में किए गए छवि अधिग्रहण, या उच्च-सामग्री छवि विश्लेषण प्रणालियों में जिनमें अंतर्निहित कक्ष होते हैं, या वैकल्पिक रूप से छवि प्रणालियों में जो पूरी अवधि के दौरान कोशिकाओं को परेशान करने की आवश्यकता के बिना इनक्यूबेटर में बैठ सकते हैं। प्रयोग की। उपयोग की जाने वाली प्रणाली की पसंद अक्सर कई कारकों द्वारा निर्धारित की जाती है जैसे कि रिज़ॉल्यूशन की आवश्यकता, समग्र अधिग्रहण समय और समय अंतराल की लंबाई, उपयोग किए गए पोत प्रकार और परख के थ्रूपुट (एकल कक्ष या मल्टी-वेल प्लेट), उपयोग की जाने वाली कोशिकाओं की संवेदनशीलता (कीमती और / या दुर्लभ कोशिकाएं) और फ्लोरोफोरे मौजूद होने पर कोशिकाओं की फोटोटॉक्सिसिटी।
लाइव मोड में फ्लोरोसेंट इमेजिंग के संबंध में, यह फ्लोरोसेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए कोशिकाओं को ट्रांसड्यूसिंग करके या तो स्थिर अभिव्यक्ति के लिए या इंड्यूसेबल सिस्टम8 के रूप में, क्षणिक सेल अभिकर्मक द्वारा, या सेल रंगों का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है जो अब लाइव-सेल लेबलिंग7 के लिए उपलब्ध हैं, लाइव-सेल ट्रैकिंग के साथ-साथ उपकोशिकीय ऑर्गेनेल9 को लेबल करने के लिए।
लाइव-सेल इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री के लिए हाल ही में एक उपयोगी दृष्टिकोण विकसित किया गया है, जहां पसंद के सतह मार्कर को पहचानने वाले एंटीबॉडी को लेबलिंग अभिकर्मक से बांधा जा सकता है, और कल्चर मीडिया के अलावा, विशिष्ट मार्कर को व्यक्त करने वाली कोशिकाओं को लाइव-सेल इमेजिंग द्वारा वास्तविक समय में आसानी से चित्रित किया जा सकता है। इस तरह की प्रणाली का उपयोग करके मार्कर अभिव्यक्ति का विज़ुअलाइज़ेशन और परिमाणीकरण आसानी से प्राप्त किया जा सकता है जब कोशिकाओं को दो-आयामी (2 डी)संस्कृति स्थितियों में उगाया जाता है।
इस अध्ययन में, हमने लाइव-3 डी-सेल इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री आक्रमण और बाल चिकित्सा डिफ्यूज मिडलाइन ग्लियोमा (डीएमजी) रोगी-व्युत्पन्नकोशिकाओं के प्रवास के लिए प्रोटोकॉल को अनुकूलित किया। डीएमजी बच्चों को प्रभावित करने वाले अत्यधिक आक्रामक मस्तिष्क ट्यूमर हैं, हिस्टोन एच 3 वेरिएंट में ड्राइवर म्यूटेशन के 27 एम से जुड़े विशाल बहुमत के लिए। डीएमजी मस्तिष्क स्टेम और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) के मध्य रेखा क्षेत्रों में उत्पन्न होता है और अत्यधिक घुसपैठ प्रकृति की विशेषता है। इस आक्रामक क्षमता को कम से कम इंट्राट्यूमर विषमता और डीएमजी कोशिकाओं की कैंसर-स्टेम जैसी विशेषताओं द्वारा मध्यस्थ दिखाया गयाहै।
हमारे परख का उदाहरण देने के लिए, सीडी 44 के लिए एंटीबॉडी के साथ संयोजन में एक एंटीबॉडी लेबलिंग अभिकर्मक (एएलआर) का उपयोग किया गया था। सीडी 44 एक ट्रांसमेम्ब्रेन ग्लाइकोप्रोटीन और आसंजन अणु है जो स्टेम सेल और अन्य सेल प्रकारों पर व्यक्त किया जाता है, जो कैंसर स्टेम सेल फेनोटाइप और ट्यूमर सेल माइग्रेशन और आक्रमण13 से जुड़ा होता है। प्रोटोकॉल में नमूना तैयारी, ब्राइटफील्ड और फ्लोरोसेंट मोड में छवि अधिग्रहण, और एक लाइव-सेल विश्लेषण उपकरण पर विश्लेषण शामिल है जो 3 डी आक्रमण और माइग्रेशन के दौरान डीएमजी सेल झिल्ली पर समग्र सीडी 44 अभिव्यक्ति को वास्तविक समय में मात्रात्मक रूप से मापने की अनुमति देता है। परख ने प्रवास और आक्रमण करते समय व्यक्तिगत कोशिकाओं पर सीडी 44 के आंतरायिक फ्लोरोसेंट सिग्नल की कल्पना करने की संभावना की भी अनुमति दी। दिलचस्प बात यह है कि एंटी-सीडी 44 एंटीबॉडी का एक प्रभाव भी देखा गया था, जो संभावित रूप से एक अवरुद्ध एंटीबॉडी के रूप में कार्य करता है, सेल माइग्रेशन और आक्रमण को कम करने के साथ-साथ आक्रमण पैटर्न को सामूहिक मेसेनकाइमल जैसे से अधिक एकल-सेल अमीबॉइड-जैसे फेनोटाइप में बदलने के लिए प्रेरित करता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 Well TC-Treated Microplates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td>size 96 wells, polystyrene plate, flat bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB3056D</td>
			<td>solution for neurosphere dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Mv medical</td>
			<td>FFL16034</td>
			<td>cell counting chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD-44 (156-3C11)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>3570</td>
			<td>Mouse mAb IgG2a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356237</td>
			<td>Basement Membrane Matrix (BMM), Phenol Red-free, LDEV-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fabfluor-488 Antibody Labeling Dye</td>
			<td>Incucyte</td>
			<td>4743</td>
			<td>Antibody labelling reagent (ALR): Mouse IgG2a 488 antibody for Live-Cell Immunocytochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incucyte S3 and/or SX5 Live-Cell Analysis Instrument</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>-</td>
			<td>The Incucyte S3 and/or SX5 Instrument is used for real-time cell monitoring and surveillance, cell health and viability, migration and invasion, plus a wide range of phenotypic cell-based assays.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>any inverted microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-Green Background Suppressor Reagent</td>
			<td>Incucyte</td>
			<td>6500-0045</td>
			<td>Backgroung suppressor reagent (BSR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tumor stem cell (TSM) medium</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>growth cell medium (see reference in the text for details)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-Low Attachment Multiple Well Plate</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>7007</td>
			<td>size 96 well, round bottom clear</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-3d-cell immunocytochemistry assays of pediatric diffuse midline glioma

सेल माइग्रेशन और आक्रमण डिफ्यूज मिडलाइन ग्लियोमा (डीएमजी) एच 3 के 27 एम-उत्परिवर्ती ट्यूमर के विशिष्ट लक्षण हैं। हमने पहले से ही त्रि-आयामी (3 डी) सेल-आधारित आक्रमण और माइग्रेशन परख का उपयोग करके इन सुविधाओं का मॉडल तैयार किया है। इस अध्ययन में, हमने लाइव-सेल इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री के लिए इन 3 डी परखों को अनुकूलित किया है। एक एंटीबॉडी लेबलिंग अभिकर्मक का उपयोग डीएमजी एच 3 के 27 एम प्राथमिक रोगी-व्युत्पन्न सेल लाइन के पलायन और हमलावर कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली पर आसंजन अणु सीडी 44 की अभिव्यक्ति का वास्तविक समय में पता लगाने के लिए किया गया था। सीडी 44 कैंसर स्टेम सेल फेनोटाइप और ट्यूमर सेल माइग्रेशन और आक्रमण से जुड़ा हुआ है और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) बाह्य मैट्रिक्स के साथ प्रत्यक्ष बातचीत में शामिल है। डीएमजी एच 3 के 27 एम सेल लाइन से न्यूरोस्फीयर (एनएस) को बेसल मेम्ब्रेन मैट्रिक्स (बीएमएम) में एम्बेडेड किया गया था या एंटीबॉडी लेबलिंग अभिकर्मक (एएलआर) के साथ संयोजन में एंटी-सीडी 44 एंटीबॉडी की उपस्थिति में बीएमएम की एक पतली कोटिंग परत पर रखा गया था। लाइव-3 डी-सेल इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री छवि विश्लेषण एक लाइव-सेल विश्लेषण उपकरण पर किया गया था ताकि समग्र सीडी 44 अभिव्यक्ति को मात्रात्मक रूप से मापा जा सके, विशेष रूप से माइग्रेटिंग और हमलावर कोशिकाओं पर। विधि माइग्रेटिंग और हमलावर कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली पर सीडी 44 की आंतरायिक अभिव्यक्ति को वास्तविक समय में देखने की अनुमति देती है। इसके अलावा, परख ने डीएमजी एच 3 के 27 एम कोशिकाओं में मेसेनकाइमल से अमीबॉइड संक्रमण में सीडी 44 की संभावित भूमिका में नई अंतर्दृष्टि भी प्रदान की।

आक्रमण और माइग्रेशन के लिए लाइव-3 डी-सेल इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री प्रोटोकॉल को चित्रा 1 में एक सरल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य वर्कफ़्लो में संक्षेपित किया गया है। यूएलए 96-अच्छी तरह से ग...

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Live-3D-Cell Immunocytochemistry Assays of Pediatric Diffuse Midline Glioma

यह अध्ययन लाइव-3 डी-सेल इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री का एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है जो एक बाल चिकित्सा डिफ्यूज मिडलाइन ग्लियोमा सेल लाइन पर लागू होता है, जो 3 डी सेल आक्रमण और प्रवासन जैसी गतिशील प्रक्रियाओं के दौरान प्लाज्मा झिल्ली पर प्रोटीन की अभिव्यक्ति का वास्तविक समय में अध्ययन करने के लिए उपयोगी है।

लाइव-3 डी-सेल इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री बाल चिकित्सा डिफ्यूज मिडलाइन ग्लियोमा के परीक्षण

Cell migration and invasion are specific hallmarks of Diffuse Midline Glioma (DMG) H3K27M-mutant tumors. We have already modeled these features using ...

डिफ्यूज मिडलाइन ग्लियोमा एक अत्यधिक आक्रामक मस्तिष्क ट्यूमर है। यह विधि वास्तविक समय में अध्ययन करने में मदद करती है कि डीएमजी कोशिकाएं एक प्रमुख आसंजन अणु की संभावित भूमिका पर विशिष्ट अंतर्दृष्टि के साथ 3 डी संदर्भ में कैसे माइग्रेट और आक्रमण करती हैं। एक लेबलिंग अभिकर्मक और एक विशिष्ट एंटीबॉडी एंटी-सीडी 44 का उपयोग करके, हम लाइव सेल इमेजिंग द्वारा डीएमजी कोशिकाओं पर प्लाज्मा झिल्ली पर सीडी 44 की अभिव्यक्ति का अध्ययन कर सकते हैं।इस तकनीक के आवेदन ने इन कोशिकाओं की गतिशीलता में सीडी 44 की संभावित भूमिका पर प्रकाश डाला, यह सुझाव देते हुए कि यह एक मूल्यवान और आक्रामक आणविक लक्ष्य का प्रतिनिधित्व कर सकता है। शुरू करने के लिए, 100 माइक्रोलीटर बाँझ पानी जोड़कर एएलआर को फिर से हाइड्रेट करें और पाइपिंग द्वारा घोल को मिलाएं। एक गोल तल मल्टी-वेल प्लेट में या एम्बर ट्यूब में टीएसएम माध्यम में एएलआर के साथ एंटीबॉडी मिलाएं और इसे प्रकाश से बचाएं।तीन गुना अंतिम परख एकाग्रता पर प्रति कुएं 25 माइक्रोलीटर वितरित करने के लिए माध्यम की पर्याप्त मात्रा तैयार करें और फिर 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें। परख के अंत में 0.5 मिलीमोलर की अंतिम एकाग्रता प्राप्त करने के लिए टीएसएम माध्यम में बीएसआर को 1.5 मिलीमोलर एकाग्रता पर पतला करें। फिर धीरे-धीरे और धीरे-धीरे प्रत्येक कुएं से माध्यम के 75 माइक्रोलीटर को हटा दें, कुएं के तल को छूने से बचें जहां एनएस बैठता है और एनएस की उपस्थिति की जांच करता है।धीरे-धीरे बीएसआर और एएलआर एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के 25 माइक्रोलीटर को प्रत्येक कुएं में जोड़ें और एएलआर एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स को दो से तीन मिनट के लिए माध्यम के साथ मिश्रण करने दें। एक उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग करके, सुनिश्चित करें कि प्रत्येक एनएस कुएं के तल पर केंद्रीय रूप से स्थित है। सुई का उपयोग करके उन्हें हटाकर बुलबुले के गठन से बचें।प्लेट के निचले हिस्से को ठंडा होने देने के लिए प्लेट को पांच मिनट के लिए बर्फ पर रखें। कुएं की आंतरिक दीवार पर प्री-कूल्ड पी 200 टिप रखकर, बुलबुले के गठन से बचने और कुएं के तल को छूने से बचकर प्रति कुएं 75 माइक्रोलीटर बीएमएम वितरित करें। बीएमएम को माध्यम के साथ मिश्रण करने देने के लिए प्लेट को पांच मिनट के लिए बर्फ पर छोड़ दें।एक उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग करके, एनएस के स्थान की जांच करें। और यदि केंद्रीय रूप से मौजूद नहीं है, तो प्लेट को पांच मिनट के लिए 180 गुना जी पर चार डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूज करें। फिर प्लेट को 37 डिग्री सेल्सियस, 5% कार्बन डाइऑक्साइड और 95% आर्द्रता पर इनक्यूबेटर सेट के भीतर रखे लाइव सेल विश्लेषण उपकरण में स्थानांतरित करें। एक बार जब कुओं को बीएमएम के साथ लेपित किया जाता है, तो पी 200 टिप काट लें।प्रत्येक चयनित कुएं से सेल माध्यम और एनएस के 50 माइक्रोलीटर लें और इसे एक लेपित फ्लैट तल कुएं में स्थानांतरित करें। प्रत्येक कुएं में एनएस की उपस्थिति और स्थिति की जांच करें। धीरे-धीरे प्रत्येक कुएं में पतला बीएसआर और एएलआर एंटीबॉडी के 50 माइक्रोलीटर जोड़ें, अभिकर्मकों को मिश्रण करने के लिए दो से तीन मिनट तक प्रतीक्षा करें।और एक उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग करके, सुनिश्चित करें कि अधिकांश प्रतिकृति एनएस कुएं में केंद्रीय रूप से स्थित हैं। किसी भी बुलबुले की अनुपस्थिति सुनिश्चित करने के बाद, प्लेट को धीरे से लाइव सेल विश्लेषण उपकरण में स्थानांतरित करें जैसा कि पहले दिखाया गया है। लाइव सेल विश्लेषण उपकरण सॉफ्टवेयर पर, प्राप्त करने के लिए विकल्प अनुसूची का चयन करें, फिर प्लस टैब पर क्लिक करें और पाठ पांडुलिपि में उल्लिखित अंतराल के साथ प्लेटों को स्कैन करने के लिए शेड्यूल पर स्कैन का चयन करें।सॉफ़्टवेयर विंडो पर, पोत बनाएँ या पुनर्स्थापित करें और फिर नया विकल्प पर क्लिक करें। आक्रमण परख के लिए स्फेरॉइड स्कैन प्रकार, चरण प्लस ब्राइटफील्ड, हरे रंग की छवि चैनल और 4 एक्स उद्देश्य का चयन करें। माइग्रेशन परख के लिए कमजोर पड़ने वाले क्लोनिंग स्कैन, टाइप 4एक्स उद्देश्य, और चरण और हरे रंग का चयन करें।प्लेट प्रकार का चयन करें और प्लेट मानचित्र पर उन्हें हाइलाइट करके स्कैन किए जाने वाले कुओं को परिभाषित करें, फिर स्कैनिंग आवृत्ति सेट करें। शेड्यूल में जोड़ें पर क्लिक करें और स्कैन शुरू करें। नई विश्लेषण परिभाषा बनाएँ टैब का चयन करें.फिर टैब पर क्रमशः आक्रमण और माइग्रेशन के लिए स्फेरॉइड आक्रमण या बुनियादी विश्लेषक अनुप्रयोग का चयन करें। छवि चैनल में आक्रमण और माइग्रेशन उपयुक्त चैनलों का चयन करें। विश्लेषण सेटिंग का पूर्वावलोकन और परिष्कृत करने के लिए तीन से चार कुओं से कुछ प्रतिनिधि छवियों का चयन करें।आक्रमण परख के लिए, विश्लेषण परिभाषा टैब में, स्फेरॉइड और हमलावर कोशिकाओं के बीच एक सटीक विभाजन उत्पन्न करने के लिए पाठ पांडुलिपि में उल्लिखित सेटिंग्स के साथ ब्राइटफील्ड और हरे चैनलों में एप्लिकेशन सेटिंग्स को समायोजित करें। माइग्रेशन परख के लिए, संगम और हरी कोशिकाओं के बीच एक सटीक विभाजन उत्पन्न करने के लिए चरण और हरे चैनलों में पाठ पांडुलिपि में उल्लिखित एप्लिकेशन सेटिंग्स को समायोजित करें। कई कुओं पर यादृच्छिक रूप से क्लिक करके जांचें कि विश्लेषण सेटिंग्स एनएस के लिए सही हैं।विश्लेषण करने के लिए कुओं और समय बिंदुओं का चयन करें। विश्लेषण परिभाषा सहेजें और समाप्त करें पर क्लिक करें। प्राथमिक डीएमजी रोगी-व्युत्पन्न कोशिकाओं में सीडी 44 अभिव्यक्ति के प्रतिनिधि इम्यूनोफ्लोरोसेंट कॉन्फोकल छवियों ने सेल माइग्रेशन और आक्रमण में सीडी 44 की भूमिका का प्रदर्शन किया।लाइव 3 डी सेल इम्यूनोकेमिस्ट्री सीडी 44 अभिव्यक्ति की कल्पना करने की अनुमति देता है। माइग्रेशन और आक्रमण दोनों के लिए समय अंतराल के प्रतिनिधि फ्रेम समय के साथ देखे गए एक ही सेल पर हरे फ्लोरोसेंट सिग्नल की उपस्थिति और अनुपस्थिति दिखाते हैं, जिससे पता चलता है कि सीडी 44 की अभिव्यक्ति चालू और बंद है जबकि कोशिकाएं पलायन और आक्रमण कर रही हैं। माइग्रेशन और आक्रमण प्रक्रियाओं का 96 घंटों से अधिक पालन किया जाता है, जिसमें क्यूसीटीबी-आर 059 कोशिकाओं को सीडी 44 के उच्च स्तर के साथ दिखाया जाता है।सीडी 44 अभिव्यक्ति की मात्रा और समय के साथ इसकी वृद्धि को माइग्रेशन और आक्रमण दोनों के लिए एएलआर से जुड़े समग्र हरे प्रतिदीप्ति संकेत द्वारा मापा गया था। जब एंटी-सीडी 44 एंटीबॉडी का उपयोग जीवित कोशिकाओं पर किया जाता है, तो यह कोशिका आकृति विज्ञान को प्रभावित करता है, जिससे मेसेनकाइमल जैसे से अमीबॉइड जैसे आक्रमण में संक्रमण होता है और इन कोशिकाओं की आक्रामक और प्रवासी क्षमता में कमी आती है। विधि का सबसे महत्वपूर्ण कदम एक एंटीबॉडी के साथ लेबलिंग अभिकर्मक का मिश्रण, मैट्रिगेल और माध्यम के मिश्रण को जोड़ना और लाइव सेल इमेजिंग उपकरण तक पहुंच है।प्रत्यक्ष कोशिकाओं और संपर्क द्वारा मध्यस्थता डीएमजी सेल इंटरैक्शन की जांच के लिए दो या दो से अधिक विशिष्ट लेबलिंग अभिकर्मकों और एंटीबॉडी के उपयोग से इस विधि को आगे लागू किया जा सकता है। हमारी विधि 3 डी में डीएमजी माइग्रेशन और आक्रमण के सेलुलर और आणविक तंत्र की जांच करने के लिए नए उपकरण प्रदान करती है, जो उनके घुसपैठ फेनोटाइप को रोकने के लिए नई दिशाएं प्रदान करती है।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

फैलाना आंतरिक Pontine Glioma की रैपिड पोस्टमार्टम सेल संस्कृति के लिए एक प्रोटोकॉल (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

ट्यूमर सेल व्यवहार और ड्रग रिस्पांस के दीर्घकालिक अध्ययन के लिए प्रतिरक्षा-सक्षम होस्ट में ज़ेफराफीश बाल रोग के ट्यूमर का प्रत्यारोपण

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

Whole-body PET/MRI of Pediatric Patients: The Details That Matter

पूरे शरीर पीईटी/बाल रोगियों के एमआरआई: विवरण है कि बात

Integrated PET/MRI is a hybrid imaging technique enabling clinicians to acquire diagnostic images for tumor assessment and treatment monitoring with both ...

Determination of Protein Expression Level in Cultured Cells by Immunocytochemistry on Paraffin-embedded Cell Blocks

आयल-एम्बेडेड सेल ब्लॉक्स पर Immunocytochemistry द्वारा कल्चरल सेल में प्रोटीन एक्सप्रेशन लेवल का निर्धारण

Immunofluorescent staining is currently the method of choice for determination of protein expression levels in cell-culture systems when morphological ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

तंत्रिकाबंधार्बुद में Immunohistochemistry द्वारा आयल-एंबेडेड 3d तंत्रिकाबंधार्बुद Neurosphere संस्कृतियों का मूल्यांकन

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

एक इनवेसिव सर्जिकल बायोप्सी के जवाब में मस्तिष्क ट्यूमर सेल व्यवहार के दीर्घकालिक Intravital इमेजिंग

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures

डोर्सल रूट गैंगलियन एक्सन-ओलिगोडेनरोसाइट सह-संस्कृतियों पर मानव ग्लियोमा सेल माइग्रेशन की वास्तविक समय निगरानी

Glioblastoma is one of the most aggressive human cancers due to extensive cellular heterogeneity and the migration properties of hGCs. In order to better ...

Assays for Validating Histone Acetyltransferase Inhibitors

हिस्टोन एसिटिलट्रांसफेरेज अवरोधकों को मान्य करने के लिए परखें

Lysine acetyltransferases (KATs) catalyze acetylation of lysine residues on histones and other proteins to regulate chromatin dynamics and gene ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

रोगी-व्युत्पन्न ग्लियोमा स्टेम सेल का उपयोग करके जीबीएम के लिए संभावित संयोजन थेरेपी की पहचान करने के लिए एक रैपिड स्क्रीनिंग वर्कफ़्लो

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...