Name: generating self-assembling human heart organoids derived from pluripotent stem cells
Uploaded: 2021-09-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generating Self-Assembling Human Heart Organoids Derived from Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل المعهد الوطني للقلب والرئة والدم للمعاهد الوطنية للصحة تحت أرقام الجوائز K01HL135464 و R01HL151505 وجمعية القلب الأمريكية تحت رقم الجائزة 19IPLOI34660342. نود أن نشكر MSU المتقدمة المجهر الأساسية والدكتور وليام جاكسون في قسم MSU لعلم الصيدلة وعلم السموم للوصول إلى المجاهر confocal، وIQ المجهر الأساسية، وMSU الجينوم الأساسية لخدمات التسلسل. ونود أيضا أن نشكر جميع أعضاء مختبر أغيري على تعليقاتهم ونصائحهم القيمة.

1. ثقافة hPSC والصيانة
ملاحظة: يجب استزراع مركبات PSCs المستحثة بشريا (hiPSCs) أو الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) لمدة مقطعين متتاليين على الأقل بعد ذوبانها قبل استخدامها لتوليد EBs للتمايز أو لمزيد من حفظ التبريد. يتم استزراع hPSCs في المتوسط PSC (انظر جدول المواد) على مصفو...

<ol>
	<li>Hoffman, J. I. E., Kaplan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+congenital+heart+disease.">The incidence of congenital heart disease.</a> Journal of the American College of Cardiology. 39 (12), 1890-1900 (2002).</li><li>Wu, W., He, J., Shao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+mortality+trend+of+congenital+heart+disease+at+the+global,+regional,+and+national+level,+1990-2017.">Incidence and mortality trend of congenital heart disease at the global, regional, and national level, 1990-2017.</a> Medicine. 99 (23), 20593 (2020).</li><li>Fahed, A. C., Gelb, B. D., Seidman, J. G., Seidman, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+congenital+heart+disease:+the+glass+half+empty.">Genetics of congenital heart disease: the glass half empty.</a> Circulation Research. 112 (4), 707-720 (2013).</li><li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly.">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li><li>Mansour, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+model+of+functional+and+vascularized+human+brain+organoids.">An in vivo model of functional and vascularized human brain organoids.</a> Nature Biotechnology. 36, 432-441 (2018).</li><li>Homan, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow-enhanced+vascularization+and+maturation+of+kidney+organoids+in+vitro.">Flow-enhanced vascularization and maturation of kidney organoids in vitro.</a> Nature Methods. 16 (3), 255-262 (2019).</li><li>Uchimura, K., Wu, H., Yoshimura, Y., Humphreys, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pluripotent+stem+cell-derived+kidney+organoids+with+improved+collecting+duct+maturation+and+injury+modeling.">Human pluripotent stem cell-derived kidney organoids with improved collecting duct maturation and injury modeling.</a> Cell Reports. 33 (11), 108514 (2020).</li><li>Serra, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-organization+and+symmetry+breaking+in+intestinal+organoid+development.">Self-organization and symmetry breaking in intestinal organoid development.</a> Nature. 569, 66-72 (2019).</li><li>Mithal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+mesenchyme+free+intestinal+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of mesenchyme free intestinal organoids from human induced pluripotent stem cells.</a> Nature Communications. 11, 215 (2020).</li><li>Porotto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Authentic+modeling+of+human+respiratory+virus+infection+in+human+pluripotent+stem+cell-derived+lung+organoids.">Authentic modeling of human respiratory virus infection in human pluripotent stem cell-derived lung organoids.</a> mBio. 10 (3), 00723 (2019).</li><li>Dye, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+generation+of+human+pluripotent+stem+cell+derived+lung+organoids.">In vitro generation of human pluripotent stem cell derived lung organoids.</a> Elife. 4, 05098 (2015).</li><li>Mun, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+expandable+human+pluripotent+stem+cell-derived+hepatocyte-like+liver+organoids.">Generation of expandable human pluripotent stem cell-derived hepatocyte-like liver organoids.</a> Journal of Hepatology. 71 (5), 970-985 (2019).</li><li>Vyas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+liver+organoids+recapitulate+hepatobiliary+organogenesis+in+vitro.">Self-assembled liver organoids recapitulate hepatobiliary organogenesis in vitro.</a> Hepatology. 67 (2), 750-761 (2018).</li><li>Dossena, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+GMP-compliant+scalable+production+of+human+pancreas+organoids.">Standardized GMP-compliant scalable production of human pancreas organoids.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11, 94 (2020).</li><li>Georgakopoulos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion,+genomic+stability+and+in+vivo+safety+of+adult+human+pancreas+organoids.">Long-term expansion, genomic stability and in vivo safety of adult human pancreas organoids.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 4 (2020).</li><li>Andersen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precardiac+organoids+form+two+heart+fields+via+Bmp/Wnt+signaling.">Precardiac organoids form two heart fields via Bmp/Wnt signaling.</a> Nature Communications. 9, 3140 (2018).</li><li>Rossi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capturing+cardiogenesis+in+gastruloids.">Capturing cardiogenesis in gastruloids.</a> Cell Stem Cell. 28 (2), 230-240 (2021).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+generation+of+functional+murine+heart+organoids+via+FGF4+and+extracellular+matrix.">In vitro generation of functional murine heart organoids via FGF4 and extracellular matrix.</a> Nature Communications. 11 (1), 4283 (2020).</li><li>Drakhlis, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+heart-forming+organoids+recapitulate+early+heart+and+foregut+development.">Human heart-forming organoids recapitulate early heart and foregut development.</a> Nature Biotechnology. 39 (6), 737-746 (2021).</li><li>Hofbauer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioids+reveal+self-organizing+principles+of+human+cardiogenesis.">Cardioids reveal self-organizing principles of human cardiogenesis.</a> Cell. 184 (12), 3299-3317 (2021).</li><li>Bao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+and+long-term+maintenance+of+epicardial+cells+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+under+fully+defined+conditions.">Directed differentiation and long-term maintenance of epicardial cells derived from human pluripotent stem cells under fully defined conditions.</a> Nature Protocols. 12 (9), 1890-1900 (2017).</li><li>Bao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+self-renewing+human+epicardial+cells+generated+from+pluripotent+stem+cells+under+defined+xeno-free+conditions.">Long-term self-renewing human epicardial cells generated from pluripotent stem cells under defined xeno-free conditions.</a> Nature Biomedical Engineering. 1, 0003 (2016).</li><li>Lewis-Israeli, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembling+human+heart+organoids+for+the+modeling+of+cardiac+development+and+congenital+heart+disease.">Self-assembling human heart organoids for the modeling of cardiac development and congenital heart disease.</a> Nature Communications. 12, 5142 (2021).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+cardiomyocyte+differentiation+from+human+pluripotent+stem+cells+via+temporal+modulation+of+canonical+Wnt+signaling.">Robust cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells via temporal modulation of canonical Wnt signaling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (27), 1848-1857 (2012).</li><li>Burridge, P. W., Keller, G., Gold, J. D., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+de+novo+cardiomyocytes:+Human+pluripotent+stem+cell+differentiation+and+direct+reprogramming.">Production of de novo cardiomyocytes: Human pluripotent stem cell differentiation and direct reprogramming.</a> Cell Stem Cell. 10 (1), 16-28 (2012).</li><li>Hashem, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+mitophagy+facilitates+mitochondrial+damage+in+Danon+disease.">Impaired mitophagy facilitates mitochondrial damage in Danon disease.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 108, 86-94 (2017).</li><li>Sun, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells+as+a+model+for+familial+dilated+cardiomyopathy.">Patient-specific induced pluripotent stem cells as a model for familial dilated cardiomyopathy.</a> Science Translational Medicine. 4 (130), (2012).</li><li>Stroud, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luma+is+not+essential+for+murine+cardiac+development+and+function.">Luma is not essential for murine cardiac development and function.</a> Cardiovascular Research. 114 (3), 378-388 (2018).</li><li>Liang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+screening+using+a+library+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+reveals+disease-specific+patterns+of+cardiotoxicity.">Drug screening using a library of human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes reveals disease-specific patterns of cardiotoxicity.</a> Circulation. 127 (16), 1677-1691 (2013).</li><li>Mills, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+screening+in+human+cardiac+organoids+reveals+a+metabolic+mechanism+for+cardiomyocyte+cell+cycle+arrest.">Functional screening in human cardiac organoids reveals a metabolic mechanism for cardiomyocyte cell cycle arrest.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (40), 8372-8381 (2017).</li><li>Braam, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+drug-induced+cardiotoxicity+using+human+embryonic+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Prediction of drug-induced cardiotoxicity using human embryonic stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Stem Cell Research. 4 (2), 107-116 (2010).</li><li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+recapitulate+the+predilection+of+breast+cancer+patients+to+doxorubicin-induced+cardiotoxicity.">Human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes recapitulate the predilection of breast cancer patients to doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Nature Medicine. 22 (5), 547-556 (2016).</li><li>Pinto, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+cardiac+cellular+composition.">Revisiting cardiac cellular composition.</a> Circulation Research. 118 (3), 400-409 (2017).</li><li>Bertero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+genome+reorganization+during+human+cardiogenesis+reveal+an+RBM20-dependent+splicing+factory.">Dynamics of genome reorganization during human cardiogenesis reveal an RBM20-dependent splicing factory.</a> Nature Communications. 10 (1), 1538 (2019).</li><li>Gilbert, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+plate+mesoderm:+Heart+and+Circulatory+System.">Lateral plate mesoderm: Heart and Circulatory System.</a> Developmental Biology. 6th edition. , 591-610 (2000).</li><li>Richards, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cardiac+organoids+for+the+modelling+of+myocardial+infarction+and+drug+cardiotoxicity.">Human cardiac organoids for the modelling of myocardial infarction and drug cardiotoxicity.</a> Nature Biomedical Engineering. 4 (4), 446-462 (2020).</li><li>Lewis-Israeli, Y. R., Wasserman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Organoids+and+Engineered+Heart+Tissues:+Novel+Tools+for+Modeling+Human+Cardiac+Biology+and+Disease.">Heart Organoids and Engineered Heart Tissues: Novel Tools for Modeling Human Cardiac Biology and Disease.</a> Biomolecules. 1277, (2021).</li></ol>

وقد استخدمت التطورات الأخيرة في خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية وغيرها من الخلايا ذات الأصل القلبي لنمذجة نمو القلب البشري22,24,25 والمرض26,27,28 وكأدوات لفحص العلاج...

عيوب القلب الخلقية (CHDs) هي النوع الأكثر شيوعا من العيوب الخلقية في البشر وتؤثر على ما يقرب من 1٪ من جميع المواليد الأحياء1،2،3. وفي معظم الظروف، لا تزال أسباب ال CHDs غير معروفة. تشكل القدرة على إنشاء نماذج قلب الإنسان في المختبر التي تشبه إلى حد كبير القلب البشري النامي خطوة هامة إلى الأمام لدراسة الأسباب الكامنة وراء ال CHDs مباشرة في البشر بدلا من النماذج الحيوانية البديلة.
مثال نماذج الأنسجة المزروعة في المختبر هي organoids ، 3D يبني الخلية التي تشبه الجهاز من مصلحة في تكوين الخلايا والوظيفة الفسيولوجية. غالبا ما تستمد الأجهزة العضوية من الخلايا الجذعية أو خلايا السلف وقد استخدمت بنجاح لنمذجة العديد من الأعضاء مثل الدماغ4,5, الكلى6,7, الأمعاء8,9, lung10,11, liver12,13, والبنكرياس14,15 ، على سبيل المثال لا الحصر. وقد ظهرت دراسات حديثة تثبت جدوى إنشاء أجهزة القلب ذاتية التجميع لدراسة نمو القلب في المختبر. وتشمل هذه النماذج استخدام الخلايا الجذعية الجنينية الماوس (mESCs) لنموذج التنمية في وقت مبكر القلب16,17 تصل إلى مواصفات الأذين البطين18 والخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSCs) لتوليد طبقة متعددة الجراثيم القلبية endoderm organoids19 وcededs20 غرف مع تكوين الخلوية معقدة للغاية.
تقدم هذه الورقة بروتوكول تعديل WNT ثلاثي الخطوات الجديد لتوليد hHOs معقدة للغاية بطريقة فعالة وفعالة من حيث التكلفة. يتم إنشاء الأجهزة العضوية في لوحات 96 بئرا ، مما يؤدي إلى نظام قابل للتطوير وعالي الإنتاجية يمكن أن يكون آليا بسهولة. تعتمد هذه الطريقة على إنشاء مجاميع hPSC وتفعيل الخطوات التنموية لتولد القلب ، بما في ذلك تكوين ميسودرم والفطرية القلبية ، ومواصفات مجال القلب الأولى والثانية ، وتشكيل الجهاز البروباديري ، ومواصفات الأذين البطين. بعد 15 يوما من التمايز، تحتوي hHOs على جميع أنساب الخلايا الرئيسية الموجودة في القلب، والغرف الداخلية المحددة جيدا، والغرف الأذينية والبطينية، وشبكة الأوعية الدموية في جميع أنحاء الجهاز. هذا النظام العضوي القلب متطورة للغاية وقابلة للاستنساخ قابلة للتحقيق في التحليلات الهيكلية والوظيفية والجزيئية، والنسخ في دراسة تطور القلب، والأمراض، والفحص الدوائي.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Donkey anti- mouse</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Donkey anti- rabbit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Donkey anti- mouse</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21203</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Donkey anti- rabbit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21207</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Donkey anti- goat</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A32849</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HAND1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab196622</td>
			<td>Rabbit; 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HAND2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab200040</td>
			<td>Rabbit; 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NFAT2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab25916</td>
			<td>Rabbit; 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PECAM1</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>P2B1</td>
			<td>Rabbit; 1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNNT2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab8295</td>
			<td>Mouse; 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>THY1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab133350</td>
			<td>Rabbit; 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TJP1</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>PA5-19090</td>
			<td>Goat; 1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VIM</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11256</td>
			<td>Goat; 1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WT1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab89901</td>
			<td>Rabbit; 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media and Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>NC9464543</td>
			<td>cell dissociation reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activin A</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>338AC010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (Minus Insulin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1895601</td>
			<td>insulin-free cell culture supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-044</td>
			<td>cell culture supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP-4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>PHC9534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Bioworld</td>
			<td>50253966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR-99021</td>
			<td>Selleck</td>
			<td>442310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(-)-Fructose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>F0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10566016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Essential 8 Flex Medium Kit</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2858501</td>
			<td>pluripotent stem cell (PSC) medium containing 1% penicillin-streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo4-AM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>410225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel GFR</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CB40230</td>
			<td>Basement membrane extracellular matrix (BM-ECM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>S30-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>IC15014601</td>
			<td>Powder dissolved in PBS Buffer &#8211; use at 4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Solution (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybead Microspheres</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>73155</td>
			<td>90 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ReLeSR</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>NC0729236</td>
			<td>dissociation reagent for hPSCs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiazovivin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>SML1045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1525006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H170010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT-C59</td>
			<td>Selleck</td>
			<td>NC0710557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL Microcentrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02682002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Falcon Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1495970C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Cryogenic Vials</td>
			<td>Corning</td>
			<td>13-700-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Reagent Reservoirs</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13681502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Well Flat Bottom Cell Culture Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>0720083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 Well chambered cover Glass with #1.5 high performance cover glass</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>C8-1.5H-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Clear Ultra Low Attachment Microplates</td>
			<td>Costar</td>
			<td>07201680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Image processing software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional</td>
			<td>06-666</td>
			<td>laboratory wipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Cover Glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-241</td>
			<td>24 x 50 mm No. 1.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moxi Cell Counter</td>
			<td>Orflo Technologies</td>
			<td>&#160;MXZ001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moxi Z Cell Count Cassette &#8211; Type M</td>
			<td>Orflo&#160;Technologies</td>
			<td>MXC001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel Pipettes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FBE1200300</td>
			<td>30-300 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus cellVivo</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>For Caclium Imaging, analysis with Imagej</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend X1 Centrifuge</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75004261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermoshaker</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>13-687-711PM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Top Coat Nail Varish</td>
			<td>Seche Vite</td>
			<td></td>
			<td>Can purchase from any supermarket</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generating self-assembling human heart organoids derived from pluripotent stem cells

القدرة على دراسة تطور القلب البشري في الصحة والمرض محدودة للغاية من خلال القدرة على نمذجة تعقيد القلب البشري في المختبر. إن تطوير منصات أكثر كفاءة تشبه الأعضاء يمكنها نمذجة المجمع في الأنماط الظاهرية في الجسم الحي ، مثل الأعضاء العضوية والأعضاء على الشريحة ، سيعزز القدرة على دراسة نمو القلب البشري والمرض. تصف هذه الورقة بروتوكولا لتوليد أعضاء القلب البشرية المعقدة للغاية (hHOs) من خلال التنظيم الذاتي باستخدام الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات وتنشيط المسار التنموي التدريجي باستخدام مثبطات الجزيء الصغيرة. يتم إنشاء الأجسام الجنينية (EBs) في لوحة من 96 بئرا مع آبار مرفق مستديرة القاع ومنخفضة للغاية ، مما يسهل ثقافة التعليق للهياكل الفردية.
تخضع EBs للتمايز إلى hHOs من خلال استراتيجية تعديل إشارات Wnt من ثلاث خطوات ، والتي تنطوي على تنشيط مسار Wnt الأولي للحث على مصير mesoderm القلبي ، وخطوة ثانية من تثبيط Wnt لإنشاء أنساب قلبية نهائية ، وخطوة تنشيط Wnt ثالثة للحث على أنسجة الأعضاء البروبيكاردية. هذه الخطوات، التي نفذت في شكل 96 بئرا، هي ذات كفاءة عالية، استنساخها، وتنتج كميات كبيرة من organoids لكل شوط. يكشف التحليل عن طريق التصوير المناعي من اليوم الثالث إلى اليوم الحادي عشر من التمايز عن مواصفات حقل القلب الأول والثاني والأنسجة المعقدة للغاية داخل hHOs في اليوم 15 ، بما في ذلك أنسجة عضلة القلب مع مناطق خلايا القلب الأذينية والبطينية ، وكذلك الغرف الداخلية المبطنة بالأنسجة القلبية. كما تظهر الأجهزة العضوية شبكة الأوعية الدموية المعقدة في جميع أنحاء الهيكل وبطانة خارجية من الأنسجة epicardial. من وجهة نظر وظيفية، فاز hHOs بقوة والحاضر نشاط الكالسيوم العادي كما يحددها التصوير الحي فلو-4. بشكل عام، يشكل هذا البروتوكول منصة صلبة للدراسات المختبرية في الأنسجة القلبية الشبيهة بالأعضاء البشرية.

لتحقيق التنظيم الذاتي hHO في المختبر، قمنا بتعديل والجمع بين بروتوكولات التمايز الموصوفة سابقا لتمايز أحادي الطبقة ثنائية الأبعاد لخلايا القلب وخلايا epicardial22 باستخدام مضواسير مسار WNT وأجهزة التمايز ثلاثية الأبعاد precardiac16 باستخدام عوامل النمو BMP4 وActivin A. باستخ...

Watch this Scientific Journal Video about Generating Self-Assembling Human Heart Organoids Derived from Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Generating Self-Assembling Human Heart Organoids Derived from Pluripotent Stem Cells

هنا، نقوم بوصف بروتوكول لإنشاء أجهزة القلب البشرية ذات الصلة بالتنمية (hHOs) بكفاءة باستخدام الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات عن طريق التنظيم الذاتي. يعتمد البروتوكول على التنشيط التسلسلي للإشارات التنموية وينتج أنسجة قلب بشرية معقدة للغاية ووثيقة الصلة وظيفيا.

توليد ذاتية التجميع الأعضاء القلب البشري المستمدة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات

The ability to study human cardiac development in health and disease is highly limited by the capacity to model the complexity of the human heart in ...

يسمح لنا هذا البروتوكول بإنشاء بنية ثلاثية الأبعاد معقدة تشبه إلى حد كبير قلب الإنسان النامي بطريقة بسيطة وفعالة من حيث التكلفة ، وهي قابلة للاستنساخ عبر خطوط الخلايا. وهو يتألف من بروتوكول واحد مع ثلاث خطوات من التمايز، مما يؤدي إلى جميع أنواع الخلايا من القلب، بما في ذلك الغرف وشبكة الأوعية الدموية. تسمح لنا هذه التقنية بنمذجة مجموعة واسعة من أمراض القلب والأوعية الدموية البشرية وفحص العلاجات الدوائية الفعالة.بفضل طبيعة الإنتاجية العالية لتصميمها. هذه الطريقة مفيدة في التحقيق في تطور القلب البشري وكذلك الأمراض المرتبطة به عادة. واحد منهم عيوب خلقية في القلب.يتطلب هذا البروتوكول مهارات أساسية في زراعة الخلايا. نوصي بانتباه وحساسية pipetting فضلا عن التعامل لطيف من organoids. ابدأ بإنشاء أجسام جنينية أو EBs قبل يومين من التمايز.اغسل مركبات HPSCs المتجانسة الفرعية مع DBPS لمدة 10 ثوان على الأقل. ثم يستنشق DPBS. إضافة ملليلتر واحد من ACUTA درجة حرارة الغرفة والاستفادة بلطف لوحة ما يقرب من خمس مرات كل دقيقة لمدة ثلاث إلى خمس دقائق للحث على مفرزة، في حين تحقق تحت المجهر.ثم إضافة ملليلتر واحد من المتوسط PSC وثياس أفين أو ثياس لوقف رد الفعل. ماصة وسائل الإعلام صعودا وهبوطا في البئر، مرتين إلى ثلاث مرات لتوليد تعليق خلية واحدة وجمع الخلايا. ثم نقل تعليق خلية واحدة إلى أنبوب الطرد المركزي وتدور لمدة خمس دقائق في 300 مرة G.Aspirate العملاقة وإعادة قضاء الخلايا في ملليلتر واحد من المتوسط PSC وثياس.تمييع الخلايا في DPBS. عد الخلايا باستخدام عداد الخلية أو مقياس الكيسات الهيمو وتمييع الخلايا في المتوسط PSC مع ثياس إلى تركيز 100،000 خلية لكل ملليلتر. إضافة 100 ميكرولتر من تعليق الخلايا المخففة إلى كل بئر من أسفل مستدير مرفق منخفض جدا 96 لوحة بئر.طاردة مركزية لوحة في 100 مرة G لمدة ثلاث دقائق واحتضان لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد 24 ساعة بعناية إزالة 50 ميكرولتر من المتوسط من كل بئر وإضافة 200 القمامة الأساسية من المتوسط PSC الطازجة، دافئة إلى 37 درجة مئوية لحجم 250 ميكرولتر لكل بئر. احتضان الخلايا لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.إزالة 166 ميكرولتر أو ثلثي المتوسطة من جانب واحد من كل بئر، وإضافة 166 ميكرولتر من RPMI 1640 تحتوي على الأنسولين خالية B27 الملحق, ستة ميكرومولار يهتف 990211, 0.875 نانوغرام لكل ملليلتر من البروتين مورفوجينيتي العظام أربعة و 1.5 نانوغرام لكل ملليلتر من أكتيفين A.Incubate لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد 24 ساعة إزالة 166 ميكرولتر من المتوسطة من جانب واحد من كل بئر وإضافة 166 ميكرولتر من RPMI الطازجة 1640 مع الأنسولين مجانا B27 الملحق. احتضان لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.للحث على مواصفات mesoderm القلب في اليوم الثاني، وإزالة 166 ميكرولتر من المتوسط من كل بئر وإضافة 166 ميكرولتر من RPMI 1640، تحتوي على الأنسولين خالية من فيتامين B27 الملحق وثلاثة ميكرومولار Wnt-C59 ومواصلة الحضانة لمدة 48 ساعة. في اليوم الرابع، قم بإزالة 166 ميكرولتر من المتوسط من كل بئر وأضف 166 ميكرولتر من RPMI 1640 الطازج مع ملحق B27 الخالي من الأنسولين، ثم احتضن 48 ساعة أخرى. في اليوم السادس، قم بإزالة 166 ميكرولتر من المتوسط من كل بئر وأضف 166 ميكرولتر من RPMI 1640 مع ملحق B27.لهذا وجميع التغييرات وسائل الإعلام اللاحقة, استخدام الملحق B27 مع الأنسولين, احتضان لمدة 24 ساعة أخرى. في اليوم السابع، ثقافة الخلية جاهزة للتمايز الملحمي المؤيد. إزالة 166 ميكرولتر من المتوسطة من كل بئر وإضافة 166 ميكرولتر من RPMI الطازجة 1640 التي تحتوي على ملحق B27 وثلاثة يهتف micromolar 99021.ثم في حضانة لمدة ساعة واحدة، بعد ساعة واحدة إزالة لوحة من الحاضنة، وإزالة 166 ميكرولتر من المتوسطة من جانب واحد من كل بئر وإضافة 166 ميكرولتر من RPMI الطازجة 1640 التي تحتوي على ملحق B27 مواصلة الحضانة لمدة 48 ساعة أخرى. كرر هذه العملية لنا كل 48 ساعة حتى جمع. الأجهزة العضوية جاهزة للتحليلات والتجريب في اليوم 15 لنقل الأعضاء كلها ، وقطع غيض من ماصة P200 ، من خمسة إلى 10 ملليمترات من الفتحة بقطر يتراوح بين 2 و 3 ملليمترات تقريبا.اضغط على المكبس ماصة وإدراج طرف عموديا في أسفل الجولة جيدا مع organoid. تناول ما يقرب من 100 إلى 200 ميكرولتر من المتوسطة بما يكفي لجمع organoids ونقلها إلى الوجهة المستهدفة. قبل التمايز EBS تظهر كما الجماهير كروية السود عملية التمايز يبدأ في اليوم صفر مع تنشيط مسار WNT وإضافة عامل النمو لمدة 24 ساعة بالضبط.مزيد من تحرير Wnt C59 في اليوم الثاني النتائج في توسيع organoid من ما يقرب من 200 ميكرومتر إلى حد أقصى من ملليمتر واحد. بدأت الأعضاء القلب البشري ينبض في وقت مبكر من اليوم السادس و 100٪ من organoids أظهرت الضرب مرئية بحلول اليوم 10. كشفت صور التكبير العالية لليوم السابع organoid أن معظم اليد واحدة التعبير عن الخلايا كانت cardiomyocyte في الأصل واليد الثانية كانت الخلايا غير myosite من هارتفيلد الثانية، خلايا السلف.تم التعبير عن نصوص الحمض النووي الريبي لكل من اليد الأولى واليد الثانية من اليوم الثالث فصاعدا في بيانات تسلسل الحمض النووي الريبي. تم التعبير عن علامات FHF بشكل كبير خلال اليومين الثالث وال11 في حين تم التعبير عن علامة SF بشكل أكبر بعد اليوم 13. كشفت بقعة immunofluorescence وجود مختلف الأنساب نوع خلية القلب البشرية التي تشكل قلب الإنسان.مثل الأنسجة عضلة القلب و epicardial، خلايا الشغاف، الخلايا البطانية، والخلايا الليفية القلبية. كما لوحظت العلامات التي تعبر عن أنساب الخلايا المذكورة أعلاه في ملامح التعبير الجيني RNA SAC. تم استخدام تصوير الكالسيوم الحي للخلايا الفردية في الأعضاء الكاملة لقياس الوظيفة الكهربية للأعضاء.تباينت كثافة الفلورية فلو-4 مع مرور الوقت بسبب خروج دخول الكالسيوم من الخلية مما يكشف عن إمكانات العمل المنتظمة. تظهر الخرائط الحرارية التي تظهر كثافة الكالسيوم فوق منطقة تكبير عالية من الجهاز ، زيادة الكثافة بسبب عابري الكالسيوم والخلايا الفردية. عند محاولة هذا البروتوكول، ضع في اعتبارك أن EBs والأعضاء اللاحقة غير متصلة بأسفل اللوحة، وسنتحرك مع الإزالة بالإضافة إلى الوسائط التي تتطلب تغييرات إعلامية منتبهة.يمكن أن تكون الأجهزة العضوية ثقافة لفترات أطول من الزمن أدخلت على تقنيات النضج، أو حتى تتعرض للمحفزات الخارجية، مثل تكييف الميكانيكية أو الكهربائية، وحتى الضغوطات مثل السموم. تسمح هذه التقنية بالوصول إلى مراحل نمو قلب الجنين البشري التي لا يمكن الوصول إليها في الأبحاث ، مما يمهد الطريق لرؤى جديدة في تطور القلب ومسببات الأمراض.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Optimized Protocol for the Extraction of Proteins from the Human Mitral Valve

بروتوكول محسن لاستخراج البروتينات من صمام ميترال الإنسان

Analysis of the cellular proteome can help to elucidate the molecular mechanisms underlying diseases due to the development of technologies that permit ...

Enrichment of Detergent-insoluble Protein Aggregates from Human Postmortem Brain

إثراء مجاميع البروتين تستعصي على الحل المنظفات من الدماغ البشري تشريح الجثة

In this study, we describe an abbreviated single-step fractionation protocol for the enrichment of detergent-insoluble protein aggregates from human ...

A Western Blotting Protocol for Small Numbers of Hematopoietic Stem Cells

الغربية النشاف بروتوكول لإعداد صغيرة من الخلايا الجذعية المكونة للدم

Hematopoietic stem cells (HSCs) are rare cells, with the mouse bone marrow containing only ~25,000 phenotypic long term repopulating HSCs. A Western ...

Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae

Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae

الجمع بين علم البلورات بالأشعة السينية بزاوية صغيرة تبعثر الأشعة السينية نموذج المناطق غير منظم من Nsa1 من سيريفيسيا س.

Determination of the full-length structure of ribosome assembly factor Nsa1 from Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) is challenging because of the ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome التنميط في الليشمانياوالخلايا البشرية والخصية الماوس

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

عزل ميتوريبوسومي من الخلايا HEK السريع

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

دينامية البروتين وميرنا "تحليل بوليسوميس" من "قلب الفأرة متفرقة بعد نضح لانجيندورف"

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Enhancing the Engraftment of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Cardiomyocytes via a Transient Inhibition of Rho Kinase Activity

تعزيز تطعيم خلايا القلب المستمدة من الخلايا الجذعية المتعددة القوى التي يسببها الإنسان عن طريق تثبيط عابر لنشاط رو كيناز

A crucial factor in improving cellular therapy effectiveness for myocardial regeneration is to safely and efficiently increase the cell engraftment rate. ...

Extracellular Glucose Depletion as an Indirect Measure of Glucose Uptake in Cells and Tissues Ex Vivo

Extracellular Glucose Depletion as an Indirect Measure of Glucose Uptake in Cells and Tissues Ex Vivo

استنفاد الجلوكوز خارج الخلية كمقياس غير مباشر لامتصاص الجلوكوز في الخلايا والأنسجة خارج الجسم الحي

The ongoing worldwide epidemic of diabetes increases the demand for the identification of environmental, nutritional, endocrine, genetic, and epigenetic ...

Human Mesenchymal Stem Cell Processing for Clinical Applications Using a Closed Semi-Automated Workflow

معالجة الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية للتطبيقات السريرية باستخدام سير عمل مغلق شبه آلي

Human mesenchymal stem cells (hMSCs) are currently being explored as a promising cell-based therapeutic modality for various diseases, with more market ...