Name: a micropatterning assay for measuring cell chirality
Uploaded: 2022-03-11T13:00:00
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Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud (OD/NICHD DP2HD083961 y NHBLI R01HL148104). Leo Q. Wan es un Pew Scholar en Ciencias Biomédicas (PEW 00026185), apoyado por Pew Charitable Trusts. Haokang Zhang cuenta con el apoyo de la American Heart Association Predoctoral Fellowship (20PRE35210243).

1. Fabricación de sellos de polidimetilsiloxano (PDMS)16
<ol><li>Dibuje una matriz de anillos a microescala utilizando software CAD, con un diámetro interior de 250 μm y un diámetro exterior de 450 μm. El patrón utilizado en este protocolo es una matriz de 10 x 10 con una distancia de 850 μm entre anillos.</li>
	<li>Imprima una máscara de transparencia del patrón a la resolución deseada utilizando el servicio de impresión de máscaras de una empresa de microfabricación (consulte <str...

<ol>
	<li>Wan, L. Q., Chin, A. S., Worley, K. E., Ray, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+chirality:+emergence+of+asymmetry+from+cell+culture.">Cell chirality: emergence of asymmetry from cell culture.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 371, 20150413 (2016).</li><li>Rahman, T., Zhang, H., Fan, J., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+chirality+in+cardiovascular+development+and+disease.">Cell chirality in cardiovascular development and disease.</a> APL Bioengineering. 4 (3), (2020).</li><li>Inaki, M., Liu, J., Matsuno, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+chirality:+Its+origin+and+roles+in+left-right+asymmetric+development.">Cell chirality: Its origin and roles in left-right asymmetric development.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 371 (1710), 20150413 (2016).</li><li>Utsunomiya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+with+broken+left-right+symmetry:+Roles+of+intrinsic+cell+chirality+in+left-right+asymmetric+epithelial+morphogenesis.">Cells with broken left-right symmetry: Roles of intrinsic cell chirality in left-right asymmetric epithelial morphogenesis.</a> Symmetry. 11 (4), 505 (2019).</li><li>Tamada, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chiral+neuronal+motility:+The+missing+link+between+molecular+chirality+and+brain+asymmetry.">Chiral neuronal motility: The missing link between molecular chirality and brain asymmetry.</a> Symmetry. 11 (1), 102 (2019).</li><li>Tee, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+chirality+arising+from+the+self-organization+of+the+actin+cytoskeleton.">Cellular chirality arising from the self-organization of the actin cytoskeleton.</a> Nature Cell Biology. 17 (4), 445-457 (2015).</li><li>Wan, L. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterned+mammalian+cells+exhibit+phenotype-specific+left-right+asymmetry.">Micropatterned mammalian cells exhibit phenotype-specific left-right asymmetry.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (30), 12295-12300 (2011).</li><li>Fan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+chirality+regulates+intercellular+junctions+and+endothelial+permeability.">Cell chirality regulates intercellular junctions and endothelial permeability.</a> Science Advances. 4 (10), 2111 (2018).</li><li>Singh, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+nanotube-induced+loss+of+multicellular+chirality+on+micropatterned+substrate+is+mediated+by+oxidative+stress.">Carbon nanotube-induced loss of multicellular chirality on micropatterned substrate is mediated by oxidative stress.</a> ACS Nano. 8 (3), 2196-2205 (2014).</li><li>Zhang, H., Fan, J., Zhao, Z., Wang, C., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Alzheimer's+disease-related+proteins+on+the+chirality+of+brain+endothelial+cells.">Effects of Alzheimer's disease-related proteins on the chirality of brain endothelial cells.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 14, 231-240 (2021).</li><li>Chen, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Left-right+symmetry+breaking+in+tissue+morphogenesis+via+cytoskeletal+mechanics.">Left-right symmetry breaking in tissue morphogenesis via cytoskeletal mechanics.</a> Circulation Research. 110 (4), 551-559 (2012).</li><li>Ray, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+cellular+chirality+regulates+left-right+symmetry+breaking+during+cardiac+looping.">Intrinsic cellular chirality regulates left-right symmetry breaking during cardiac looping.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (50), 11568-11577 (2018).</li><li>Fan, J., Zhang, H., Rahman, T., Stanton, D. N., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+organelle-based+analysis+of+cell+chirality.">Cell organelle-based analysis of cell chirality.</a> Communicative and Integrative Biology. 12 (1), 78-81 (2019).</li><li>Chen, C. S., Mrksich, M., Huang, S., Whitesides, G. M., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+control+of+cell+life+and+death.">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276 (5317), 1425-1428 (1997).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanowire+magnetoscope+reveals+a+cellular+torque+with+left-right+bias.">Nanowire magnetoscope reveals a cellular torque with left-right bias.</a> ACS Nano. 10 (8), 7409-7417 (2016).</li><li>Wan, L. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+control+of+human+stem+cell+morphology+and+differentiation.">Geometric control of human stem cell morphology and differentiation.</a> Integrative Biology. 2 (7-8), 346-353 (2010).</li><li>Circular Statistics Toolbox. MathWorks Available from: <a target="_blank" href="https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/10676-circular-statistics-toolbox-directional-statistics">https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/10676-circular-statistics-toolbox-directional-statistics</a> (2021)</li><li>Chin, A. S., Worley, K. E., Ray, P., Kaur, G., Fan, J., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+chirality+revealed+by+three-dimensional+spontaneous+rotation.">Epithelial cell chirality revealed by three-dimensional spontaneous rotation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (48), 12188-12193 (2018).</li><li>Worley, K. E., Chin, A. S., Wan, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage-specific+chiral+biases+of+human+embryonic+stem+cells+during+differentiation.">Lineage-specific chiral biases of human embryonic stem cells during differentiation.</a> Stem Cells International. 2018, 1848605 (2018).</li></ol>

El ensayo de patrones en forma de anillo descrito aquí proporciona una herramienta fácil de usar para la caracterización cuantitativa de la quiralidad multicelular, capaz de producir resultados altamente confiables y repetibles. La rápida generación de microambientes definidos idénticos y el análisis imparcial permiten el procesamiento automatizado de alto rendimiento de muestras de gran tamaño. Este protocolo discute la fabricación de los micropatrones de anillo, el modelado celular y el análisis automático d...

La asimetría izquierda-derecha (LR) de la célula, también conocida como mano celular o quiralidad, describe la polaridad celular en el eje LR y se reconoce que es una propiedad biofísica fundamental y conservada 1,2,3,4,5. La quiralidad celular se ha observado tanto in vivo como in vitro a múltiples escalas. Hallazgos previos revelaron remolinos quirales de citoesqueleto de actina en células individuales sembradas en islas circulares6, migración sesgada y alineación de células dentro de límites confinados 7,8,9,10,11 y bucle asimétrico del tubo de calor de pollo 12.
A nivel multicelular, la quiralidad celular se puede determinar a partir de la migración o alineación direccional, la rotación celular, la dinámica citoesquelética y el posicionamiento de orgánuloscelulares 7,8,9,10,11,12,13. Hemos establecido un ensayo basado en micropatrones14 para caracterizar eficientemente el sesgo quiral de las células adherentes 7,8,9,10. Con los micropatrones en forma de anillo confinando geométricamente los grupos celulares, las células exhiben colectivamente migración direccional y alineación sesgada. Se desarrolló un programa MATLAB para detectar y medir automáticamente la alineación celular en imágenes de contraste de fase del anillo. La dirección de la alineación celular local se cuantifica con un ángulo sesgado, dependiendo de su desviación de la dirección circunferencial. Después del análisis estadístico, el patrón de anillo de las células se designa como sesgos en sentido contrario a las agujas del reloj (CCW) o sesgos en el sentido de las agujas del reloj (CW).
Este ensayo se ha utilizado para caracterizar la quiralidad de fenotipos celulares múltiples (Tabla 1), y se ha encontrado que la asimetría LR de las células es específica del fenotipo 7,11,15. Además, la interrupción de la dinámica y la morfología de la actina puede resultar en una reversión del sesgo quiral 7,8, y el estrés oxidativo también puede alterar la quiralidad celular9. Debido a la simplicidad del procedimiento y la robustez del enfoque 7,8,9,10, este ensayo de quiralidad 2D proporciona una herramienta eficiente y confiable para determinar y estudiar la quiralidad multicelular in vitro.
El propósito de este protocolo es demostrar el uso de este método para caracterizar la quiralidad celular. Este protocolo describe cómo fabricar matrices celulares con patrones a través de la técnica de impresión de microcontacto y realizar análisis de quiralidad de forma automatizada utilizando el programa MATLAB.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>Koptec</td>
			<td>DSP-MD-43</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BZX microscope system</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>BZX-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium (DMEM), high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electron beam evaporator</td>
			<td>Temscal</td>
			<td>BJD-1800</td>
			<td>Gold-titanum film coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89510-186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from bovine plasma</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1141-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10024-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass tweezers</td>
			<td>Exelta</td>
			<td>390BSAPI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold evaporation pellets</td>
			<td>International Advanced Materials</td>
			<td>AU18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HS-(CH2)11-EG3-OH (EG3)</td>
			<td>Prochimia</td>
			<td>TH 001-m11.n3-0.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>MATLAB_R2020b</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIH/3T3 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OAI contact aligner</td>
			<td>OAI</td>
			<td>200</td>
			<td>UV photolithography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octadecanethiol (C18)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>O1858-25ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89032-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Research product international</td>
			<td>P32080-100T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydimethylsiloxane Sylgard 184</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>DC4019862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon Wafer</td>
			<td>University Wafer</td>
			<td>ID#809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo fisher scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 3050 photoresist</td>
			<td>MicroChem</td>
			<td>Y311075 0500L1GL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium evaporation pellets</td>
			<td>International Advanced Materials</td>
			<td>TI14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparency mask (with feature)</td>
			<td>Outputicity.com</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Mask printing service</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td>Thermo fisher scientific</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a micropatterning assay for measuring cell chirality

La quiralidad es una propiedad celular intrínseca, que representa la asimetría en términos de polarización a lo largo del eje izquierda-derecha de la célula. Como esta propiedad única atrae cada vez más atención debido a sus importantes funciones tanto en el desarrollo como en la enfermedad, un método de cuantificación estandarizado para caracterizar la quiralidad celular avanzaría en la investigación y las aplicaciones potenciales. En este protocolo, describimos un ensayo de caracterización de quiralidad multicelular que utiliza matrices de células con micropatrones. Los micropatrones celulares se fabrican en portaobjetos de vidrio recubiertos de titanio / oro a través de la impresión de microcontacto. Después de la siembra en las islas geométricamente definidas (por ejemplo, en forma de anillo) recubiertas de proteínas, las células migran direccionalmente y forman una alineación sesgada hacia la dirección en el sentido de las agujas del reloj o en el sentido contrario a las agujas del reloj, que puede analizarse y cuantificarse automáticamente mediante un programa MATLAB escrito a medida. Aquí describimos en detalle la fabricación de sustratos micropatronados, la siembra celular, la recopilación de imágenes y el análisis de datos y mostramos resultados representativos obtenidos utilizando las células NIH/3T3. Este protocolo ha sido validado previamente en múltiples estudios publicados y es una herramienta eficiente y fiable para estudiar la quiralidad celular in vitro.

Quince minutos después de la siembra de células NIH/3T3, la adhesión celular en el patrón de anillo se confirmó visualmente mediante imágenes de contraste de fase. Después del cultivo posterior de 24 h, las células en los patrones se volvieron confluentes y alargadas con alineaciones claramente asimétricas, sesgadas hacia la dirección de las agujas del reloj (Figura 2). La migración direccional de las células unidas se registra mediante imágenes de lapso de tiempo, la motilidad ...

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A Micropatterning Assay for Measuring Cell Chirality

Presentamos un protocolo para determinar la quiralidad multicelular in vitro, utilizando la técnica de micropatronaje. Este ensayo permite la cuantificación automática de los sesgos izquierda-derecha de varios tipos de células y se puede utilizar con fines de detección.

Un ensayo de micropatrones para medir la quiralidad celular

Chirality is an intrinsic cellular property, which depicts the asymmetry in terms of polarization along the left-right axis of the cell. As this unique ...

El ensayo de quiralidad de células bast de micropatrones es una herramienta poderosa para estudiar la morfogénesis quiral multicelular en el desarrollo de la enfermedad. También es importante para la investigación celular. Este sistema de macropatrones es fácil de fabricar y usar, es capaz de producir resultados altamente confiables y repetibles, y también es compatible con el procesamiento automatizado de alto rendimiento para un gran tamaño de muestra.Comience cortando la corredera recubierta de titanio con oro en pequeñas piezas cuadradas de aproximadamente 12 por 12 milímetros. Con un cortador de vidrio, deslícese a través de la superficie para dejar una pista abollada, luego sostenga la diapositiva de vidrio a ambos lados y doble en la abolladura para romperse en cuartos pequeños. Para limpiar el portaobjetos, sumérjalo con el lado dorado hacia arriba en etanol 100% contenido en una placa de Petri en un agitador orbital durante al menos 10 minutos.Después de aspirar el etanol, seque el portaobjetos soplando con una corriente de nitrógeno. Limpie los sellos de polidimetilsiloxano o PDMS con agua jabonosa antes de secar el sello con gas nitrógeno. Disuelva 5,74 miligramos de octadecanetiol o C18 en 10 mililitros de etanol al 100% para hacer dos solución milimolar C18, luego limpie los sellos PDMS con etanol 100%.Remoje el sello PDMS con la superficie del patrón hacia abajo en solución C18 durante 10 segundos y luego séquelo suavemente con gas nitrógeno durante 60 segundos. Una vez seco, coloque el sello boca abajo en la diapositiva de oro durante 60 segundos antes de retirarlo. Para garantizar un estampado adecuado, toque suavemente las pinzas en el sello para transferir correctamente los patrones.A continuación, prepare las cámaras de humedad pipeteando un mililitro de etanol al 70% en una tapa de placa de Petri invertida. Y usando las pinzas, coloque un trozo de parafilm para cubrir la superficie asegurándose de que no queden burbujas. Retire el exceso de etanol si es necesario.Agregue 40 gotas de microlitros de solución EG3 por cada cuarto de portaobjetos de vidrio en la parapelícula en la cámara de humedad, dejando suficiente espacio entre las gotas para tener en cuenta el espaciado de las diapositivas de oro. Use pinzas para colocar la diapositiva de oro impresa C18 mirando hacia abajo sobre la gota, asegurándose de que no queden burbujas debajo de la diapositiva. Empuje suavemente las diapositivas juntas sin levantarlas para minimizar la evaporación.Después de sellar la placa de Petri herméticamente con parafilm, déjela a temperatura ambiente durante al menos tres horas. En un gabinete de bioseguridad, remoje y enjuague el portaobjetos de oro hacia arriba tres veces en etanol al 70% para eliminar EG3, luego deje en etanol durante 10 minutos para la esterilización. Después de aspirar el etanol, agregue PBS estéril.Prepare otra cámara de humedad con PBS en lugar de etanol como se ha demostrado. A continuación, agregue 50 gotas de microlitros de solución de fibronectina por cada cuarto de deslizamiento sobre la parapelícula, dejando algo de espacio entre las gotas. Luego coloque la diapositiva hacia abajo sobre la gota como se demostró anteriormente y deje la placa de Petri en el gabinete de bioseguridad durante 30 minutos.Después de enjuagar la diapositiva recubierta de oro tres veces, coloque la diapositiva hacia arriba en PBS. Antes de sembrar las células, caliente los medios y la tripsina en un baño de agua templado a 37 grados centígrados. Para una mejor unión celular, remoje el portaobjetos del patrón en una placa de 12 pocillos que contenga medios de cultivo y caliéntelo a 37 grados centígrados en la incubadora.Una vez que las células están tripsinizadas, neutralice las células con medios que contengan FBS, pegue las células a 100 veces G durante tres minutos y luego vuelva a suspender la bolita celular en medios frescos. Cuente las células y diluya la suspensión celular para lograr la concentración de 200, 000 células por mililitro. Agregue 0.5 mililitros de la suspensión celular a cada pozo que contenga una diapositiva de oro.Agite suavemente la placa varias veces para una siembra celular uniforme antes de incubar durante 15 minutos para la fijación de la célula. Después de 15 minutos, verifique la unión celular bajo un microscopio y, si es necesario, incube durante más tiempo. Una vez que las células estén unidas, aspire los medios que contienen células no unidas de cada pozo y agregue un mililitro de medios de cultivo frescos.Cultive las células en la incubadora durante 24 horas y verifique la confluencia para determinar si se ha formado quiralidad. Cuando se logre la confluencia requerida, fije las células eliminando los medios de cultivo. Después de enjuagar con PBS una vez, agregue una solución de paraformaldehído al 4% al portaobjetos e incube a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de enjuagar nuevamente con PBS tres veces.Para adquirir las imágenes, utilice un microscopio de contraste de fase con funcionalidad de cámara y capture cada anillo en la diapositiva a alta resolución. Para la caracterización de quiralidad, descargue los archivos de código de MATLAB, agregue la carpeta de código y las subcarpetas a la ruta de acceso de MATLAB y abra el ROI_selection. m archivo.En la línea cuatro, cambie el directorio a la carpeta de datos deseada. Cambie el tamaño de la imagen en la línea 14 con las dos primeras figuras que representan el tamaño del círculo interior del anillo, mientras que las otras dos representan el exterior. Para determinar la región de interés o el ROI en las imágenes de contraste de fase, ejecute el código de MATLAB ROI_selection.m haciendo clic en el botón Ejecutar. Arrastre manualmente el cuadrado de selección para que se ajuste al anillo, luego haga doble clic en la imagen para confirmar la selección. Después de seleccionar el ROI de todas las imágenes de la carpeta, se generará un archivo mat para almacenar la información del ROI de cada imagen.A continuación, abra el analysis_batch. m y cambie el directorio de la carpeta como se demostró anteriormente. Haga clic en el botón ejecutar para ejecutar el código analysis_batch.m para determinar la quiralidad de múltiples patrones de anillos celulares. Un datatoexcel. Se generará un archivo txt que contiene estadísticas circulares para cada anillo, así como los números de anillos no quirales y antihorarios en el sentido de las agujas del reloj.Los hallazgos actuales demuestran la utilidad del ensayo de quiralidad de patrón de anillo desarrollado experimentalmente, así como la sensibilidad de este ensayo a las alteraciones en el citoesqueleto. En el presente estudio, se encontró que al interrumpir la polimerización de actina con 50 tratamientos de latrunculina A nanomolar, las células de mioblasto C2C12 de ratón exhibieron una alteración del sesgo quiral en sentido contrario a las agujas del reloj o CCW en el sentido de las agujas del reloj o CW.In adición, las células endoteliales vasculares umbilicales humanas o hUCÉricas que fueron tratadas con 12-o-tetradecanoil-forbol-13-acetato o TPA para activar la proteína quinasa C mostraron un cambio dependiente de la dosis de quiralidad celular de CW a CCW. Después de la siembra celular a los patrones, los productos químicos o medicamentos se pueden complementar con el medio para estudiar la respuesta, y el sistema transwell se puede incorporar para estudiar el cocultivo celular.Este ensayo proporciona una herramienta eficiente para investigar la quiralidad multicelular en diferentes entornos experimentales y ofrece información importante sobre el papel de la quiralidad celular en diversos fenómenos y procesos biológicos.

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