Name: 3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis
Uploaded: 2022-02-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis at JoVE.com

Vi takker Hyesuk Park for den tekniske hjælp. Denne forskning blev støttet af midler fra National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK), NIH (R01 2DK083283, til NJT), National Institute on Aging (NIA), NIH (1R01AG060726, til NJT). Vi anerkender taknemmeligt Jon Mulholland og Kitty Lee fra Cell Sciences Imaging Facility i Beckman Center for teknisk assistance med to-fotonmikroskopi-billeddannelsen.

Dyreforsøg udføres i henhold til de eksperimentelle procedurer, der er godkendt af de institutionelle dyrepleje- og brugskomiteer (IACUC'er) ved Stanford University og Veterans Affairs Hospital i Palo Alto. 6-8 uger gamle C57BL/6J-hanmus blev fodret med enten chow eller fastfoodkost suppleret med 4,2% majssirup med høj fruktose (se materialetabel) i drikkevand i 14 uger5. Musene blev holdt i standardbure i en 12 timers mørk/lys cyklus.
1. Kiru...

<ol>
	<li>Friedman, S. L., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+fibrosis:+2022+unmet+needs+and+a+blueprint+for+the+future.">Hepatic fibrosis: 2022 unmet needs and a blueprint for the future.</a> Hepatology. 75 (2), 473-488 (2021).</li><li>Ye, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence,+incidence,+and+outcomes+of+non-obese+or+lean+non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence, incidence, and outcomes of non-obese or lean non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Gastroenterology and Hepatology. 5 (8), 739-752 (2020).</li><li>Schwabe, R. F., Tabas, I., Pajvani, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+fibrosis+development+in+non-alcoholic+steatohepatitis.">Mechanisms of fibrosis development in non-alcoholic steatohepatitis.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1913-1928 (2020).</li><li>Arteel, G. E., Naba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+liver+matrisome+-+looking+beyond+collagens.">The liver matrisome - looking beyond collagens.</a> JHEP Reports. 2 (4), 100115 (2020).</li><li>Jiang, J. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonphagocytic+activation+of+NOX2+is+implicated+in+progressive+non-alcoholic+steatohepatitis+during+aging.">Nonphagocytic activation of NOX2 is implicated in progressive non-alcoholic steatohepatitis during aging.</a> Hepatology. 72 (4), 1204-1218 (2020).</li><li>Dehnad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGER1+downregulation+associates+with+fibrosis+in+non-alcoholic+steatohepatitis+and+type+2+diabetes.">AGER1 downregulation associates with fibrosis in non-alcoholic steatohepatitis and type 2 diabetes.</a> Journal of Clinical Investigation. 130 (8), 4320-4330 (2020).</li><li>Mayorca-Guiliani, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+and+antibody+staining+of+mouse+tissues+to+map+native+extracellular+matrix+structures+in+3D.">Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D.</a> Nature Protocols. 14 (12), 3395-3425 (2019).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cirrhotic+human+liver+extracellular+matrix+3D+scaffolds+promote+smad-dependent+tgf-beta1+epithelial+mesenchymal+transition.">Cirrhotic human liver extracellular matrix 3D scaffolds promote smad-dependent tgf-beta1 epithelial mesenchymal transition.</a> Cells. 9 (1), 83 (2019).</li><li>Klaas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alterations+in+the+extracellular+matrix+composition+guide+the+repair+of+damaged+liver+tissue.">The alterations in the extracellular matrix composition guide the repair of damaged liver tissue.</a> Scientific Reports. 6, 27398 (2016).</li><li>Mattei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanostructure+and+composition+of+highly+reproducible+decellularized+liver+matrices.">Mechanostructure and composition of highly reproducible decellularized liver matrices.</a> Acta Biomaterialia. 10 (2), 875-882 (2014).</li><li>Ren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+two+decellularization+methods+in+the+development+of+a+whole-organ+decellularized+rat+liver+scaffold.">Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold.</a> Liver International. 33 (3), 448-458 (2013).</li><li>Piersma, B., Hayward, M. K., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrosis+and+cancer:+A+strained+relationship.">Fibrosis and cancer: A strained relationship.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1873 (2), 188356 (2020).</li><li>Cox, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+matrix+in+cancer.">The matrix in cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 21 (4), 217-238 (2021).</li><li>Mirdamadi, E. S., Kalhori, D., Zakeri, N., Azarpira, N., Solati-Hashjin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+tissue+engineering+as+an+emerging+alternative+for+liver+disease+treatment.">Liver tissue engineering as an emerging alternative for liver disease treatment.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (2), 145-163 (2020).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+human+liver+as+a+natural+3D-scaffold+for+liver+bioengineering+and+transplantation.">Decellularized human liver as a natural 3D-scaffold for liver bioengineering and transplantation.</a> Scientific Reports. 5, 13079 (2015).</li><li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+culture+system+for+liver+tissue+mimicking+hepatic+plates+for+improvement+of+human+hepatocyte+(C3A)+function+and+polarity.">3D culture system for liver tissue mimicking hepatic plates for improvement of human hepatocyte (C3A) function and polarity.</a> BioMed Research International. 2020, 6354183 (2020).</li><li>Shimoda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+liver+scaffolds+promote+liver+regeneration+after+partial+hepatectomy.">Decellularized liver scaffolds promote liver regeneration after partial hepatectomy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 12543 (2019).</li></ol>

Den nuværende protokol viser, at decellularisering gennem en lav strømningshastighed DOC in situ perfusion bevarer de frangible triple-helical og native fibrillære kollagenstrukturer, hvilket giver en pålidelig og omkostningseffektiv platform til at fange dynamisk ECM-remodellering i NASH leverfibrose. Selvom decellularisering blev udført i normale og fibrotiske lever, før ECM-komponenter blev identificeret eller genereret biologiske stilladser til cellekultur, er dynamikken i ECM-remodellering i leverfibr...

Ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD) er den mest almindelige leversygdom, der rammer 20% -25% af den voksne befolkning. 25% af NAFLD-patienterne udvikler sig til ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH), hvor risikoen for skrumpelever, leversvigt og hepatocellulært karcinom øges1. I de næste 20 år anslås det, at NASH vil tegne sig for 2 millioner leverrelaterede dødsfald i US2. Da der ikke er nogen godkendte behandlinger, er der et presserende behov for at dechifrere de mekanismer, der forårsager leverfibrose hos NASH-patienter og udvikle målrettet behandling3.
Den ekstracellulære matrix (ECM) er et dynamisk, komplekst mikromiljø, der udøver tovejskommunikation med celler for at regulere vævshomeostase4. Lever-ECM består af strukturelle elementer såsom proteoglycaner, kollagener, fibronectin, elastin og andre ikke-strukturelle proteiner (fx olfactomedin og thrombospondin) for at yde fysisk og strukturel støtte4.
Leverfibrose er et kronisk sårhelende respons på leverskader af forskellige ætiologier, herunder NASH3. Det skyldes en ubalance i den dynamiske ECM-matrixremodelleringsproces og er kendetegnet ved overdreven strukturelle proteiner i den skadede lever4. Fibrogenese afhænger af den dynamiske celle-celle kommunikation mellem forskellige hepatiske celletyper. Hepatiske stellatceller (HSC'er), når de aktiveres, differentieres til Smooth Muscle Alpha 2 Actin-udtrykkende, migrerende og prolifererende myofibroblastlignende celler og syntetiserer ECM-proteiner som en sårlukkende handling. Aktiverede HSC'er er de centrale kollagenproducerende celler i leveren1.
Den molekylære mekanisme for ECM-remodellering, fibrosemønstre og deres forhold til cellulære begivenheder er ikke klare. En bedre forståelse af den tredimensionelle (3D) ECM-struktur er stadig nødvendig, selvom massespektrometriteknikker har hjulpet med at analysere ECM-proteinsammensætning4. Traditionelt er Massons trikrome plet, Picro Sirius Red pletter og anden harmonisk generation (SHG) billeddannelse blevet udført på todimensionelle (2D) tynde leversektioner. Det typiske fibrosemønster af NASH kaldes "kyllingetråd", som strækker sig til zone 3 og er perisinusformet / pericellulær fibrose 5,6. Der har imidlertid været mangel på undersøgelser med fokus på 3D-strukturen i den indfødte lever, især dem, der ikke involverer vævssektionering. Robuste billeddannelsesmetoder til at identificere mønstre og karakteristika ved fibrose gennem dynamisk ECM-remodellering i leverfibrose ville betydeligt styrke forståelsen af NASH-mekanismer og identificere nye terapeutiske mål.
For at løse disse udfordringer blev en hurtig og effektiv protokol optimeret til at afbilde den indfødte lever-ECM via decellularisering7. Helleverdecellularisering er en tilgang til at fjerne levercellulært indhold, samtidig med at det oprindelige 3D ECM-netværk opretholdes gennem vaskemiddelperfusion. Mus blev fodret med enten chow eller fastfood diæt (FFD) i 14 uger. Decellularisering blev udført efter in situ portalveneperfusion med mildt rengøringsmiddel og lave strømningshastigheder for at bevare triple-spiralformede og native fibrillære kollagenstrukturer. To-fotonmikroskopi blev anvendt til at analysere ændringer i kollagenstrukturer i ECM. 3D-billederne af den oprindelige ECM-struktur i normale og NASH-lever blev rekonstitueret og analyseret. Udførelse af in situ perfusionsdecellularisering og analyse af stilladset ved to-fotonmikroskopi giver en praktisk og overkommelig platform til at visualisere den dynamiske ECM-ombygning i leveren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 MONOCRYL UNDYED 1 x 18&#34; P-3</td>
			<td>MONOCRYL</td>
			<td>Y494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 suture</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>10-000-649</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/monomid-nylon-non-absorbable-sutures-7/10000649?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AnaSed Injection (xylazine)</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td>this drug to use by or on the order of a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD INSYTE AUTOGUARD I.V. CATHETER WITH BC TECHNOLOGY</td>
			<td>BD</td>
			<td>382612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chow diet</td>
			<td>Envigo</td>
			<td># 2918</td>
			<td>Control diet. A fixed formula, non-autoclavable diet manufactured with high quality ingredients and designed to support gestation, lactation, and growth of rodents.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast-food diet (AIN76A Western Diet)</td>
			<td>Test Diet</td>
			<td>1810060</td>
			<td>https://www.testdiet.com/cs/groups/lolweb/@testdiet/documents/web_content/mdrf/mdux/~edisp/ducm04_051601.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-3502</td>
			<td>https://vectorlabs.com/hematoxylin-and-eosin-stain-kit.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kent Scientific Rat Surgical Kit</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>13-005-205</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/rat-surgical-kit/13005205#?keyword=mouse%20surgery%20kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>NDC 50989-996-06 - 10 mL - vial.</td>
			<td>KetaVed has been clinically studied in subhuman primates in addition to those species listed under Administration and Dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP5 upright Confocal, multi-photon</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer connector (Three-way stopcock with SPIN-LOCK&#174;)</td>
			<td>bbraun</td>
			<td>D300</td>
			<td>https://www.bbraunusa.com/en/products/b0/three-way-stopcockwithspin-lock.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrosirius Red Stain Kit</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>24901</td>
			<td>https://www.polysciences.com/default/picrosirius-red-stain-kit-40771</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rayon tipped applicator</td>
			<td>puritan</td>
			<td>25-806 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>sigmaaldrich</td>
			<td>D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrup</td>
			<td>www.target.com</td>
			<td>24 fl oz</td>
			<td>https://www.target.com/p/pancake-syrup-24-fl-oz-market-pantry-8482/-/A-13007801</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable Speed Peristaltic Pump</td>
			<td>INTLLAB</td>
			<td>BT100</td>
			<td>https://www.amazon.com/gp/product/B082K97W5W/ref=ox_sc_saved_title_2?smid=A12NUUP87ZRRAR&#38;psc=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>https://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium.html</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis

Ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH) er den mest almindelige kroniske leversygdom i USA, der rammer mere end 70 millioner amerikanere. NASH kan udvikle sig til fibrose og til sidst til skrumpelever, en betydelig risikofaktor for hepatocellulært karcinom. Den ekstracellulære matrix (ECM) giver strukturel støtte og opretholder leverhomeostase via matricellulære signaler. Leverfibrose skyldes en ubalance i den dynamiske ECM-remodelleringsproces og er kendetegnet ved overdreven ophobning af strukturelle elementer og tilhørende ændringer i glycosaminoglycaner. Det typiske fibrosemønster af NASH kaldes "kyllingetråd", som normalt består af zone 3 perisinusformet / pericellulær fibrose, baseret på træk observeret af Massons trikrome plet og Picrosirius røde pletter. Imidlertid kan disse traditionelle tynde todimensionelle (2D) vævsdiasbaserede billeddannelsesteknikker ikke demonstrere de detaljerede tredimensionelle (3D) ECM-strukturelle ændringer, hvilket begrænser forståelsen af den dynamiske ECM-remodellering i leverfibrose.
Det nuværende arbejde optimerede en hurtig og effektiv protokol til at afbilde den oprindelige ECM-struktur i leveren via decellularisering for at løse ovenstående udfordringer. Mus blev fodret enten med chow eller fastfood kost i 14 uger. Decellularisering blev udført efter in situ portalveneperfusion, og to-fotonmikroskopiteknikkerne blev anvendt til at afbilde og analysere ændringer i den oprindelige ECM. 3D-billederne af normal- og NASH-leveren blev rekonstitueret og analyseret. Udførelse af in situ perfusionsdecellularisering og analyse af stilladset ved to-fotonmikroskopi gav en praktisk og pålidelig platform til at visualisere den dynamiske ECM-remodellering i leveren.

Kollagenfibrene blev påvist med anden harmonisk generation og to-fotonmikroskopi. Signalet kommer fra de frangible triple-helical og native fibrillære kollagenstrukturer. Specifikke antistoffer blev ikke brugt til at analysere kollagenundertyper; Dette kan dog føjes til billeddannelsesteknikken.
Når levervævet studeres uden decellularisering, er det udfordrende at få billeder i høj opløsning af kollagennetværket (figur 5A). I decellularis...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis at JoVE.com

3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis

Denne protokol optimerer leveren in situ perfusion / decellularisering og to-foton mikroskopi metoder til at etablere en pålidelig platform til at visualisere dynamikken i ekstracellulær matrix (ECM) remodellering under ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH).

3D-billeddannelse af leverens ekstracellulære matrix i en musemodel af ikke-alkoholisk steatohepatitis

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most common chronic liver disease in the United States, affecting more than 70 million Americans. NASH can ...

NASH er en af de vigtigste kroniske leversygdomme i verden. Det kan udvikle sig til fibrose, skrumpelever, og til sidst leverkræft. Undersøg den dynamiske ændring af ECM i NASH kan hjælpe med at forstå fibrose bedre.Traditionel billeddannelse kan ikke demonstrere 3D ECM-strukturændringer, hvilket begrænser forståelsen af dynamisk ECM-remodelleringsproces i leverfibrosen. Til at begynde med skal du veje musen før proceduren. Efter bedøvelse af musen barberes det ventrale område ved hjælp af en hårklipper og desinficeres huden med 70% ethanol.Placer musen på ryggen og immobiliser benene på operationspladen med tape. Brug Mayo saks og Adson tang til at lave et tre centimeter snit sideværts i underlivet. Og så et fem centimeter snit lodret fra den lave mave til xiphoidprocessen uden at åbne brysthulen.Efter åbning af bughinden skal du forsigtigt placere tarmene til dyrets venstre og hæve leverens højre lap med en rayon-tippet applikator for at udsætte portalvenen. For at kateterisere portalvenen induceres et 24 gauge IV-kateter i den distale ende af portalvenen. Placer kateterspidsen, før portalvenen forgrener sig ud i leverlapperne.Træk nålen ud med det samme, når kateteret kommer ind i venen. Kontroller, at kateteret er korrekt placeret inde i venen ved at perfusere leveren med PBS ved hjælp af en milliliter sprøjte via kateteret. Brug Dumont mikrotang, en Castroviejo-mikronål og 4-0 sutur til at placere en søm under forgreningen af portalvenen og en anden søm en centimeter under for at fastgøre kateteret.Tilslut kateteret til en silikoneslange på en meter længde, tre millimeter indvendig diameter og 4,1 millimeter ydre diameter med et lokkestik. Tilslut silikoneslangen til en peristaltisk pumpe og et reservoir, der indeholder deioniseret vand. Fjern forsigtigt luftboblerne inde i røret og undgå at generere nye bobler under perfusionen.Indstil den peristaltiske pumpe til en floweffekt på 0,2 ml pr. Minut. Se først med deioniseret vand i to timer, og leverens farve ændres fra rød til gul under perfusion. Skift perfusionsopløsningen til 0,5% natriumdeoxycholat og fortsæt natten over, og leveren bliver hvid i slutningen af perfusionen.Skift perfusionsopløsningen til deioniseret vand og perfus i to timer. Brug Dumont micro tang og micros springende saks til at samle den decellulariserede lever og vask den omhyggeligt i en petriskål med PBS. Overfør et lille stykke decellulariseret lever til et mikroskopglas og placer vævet i midten.Tilsæt 10 mikroliter antifade monteringsmedium til vævet med en pipette for at undgå vævstørring. Dæk vævet med et dækglas og påfør en lille kraft for at flade prøven. Forsegl kanterne på dækglasset med farveløs og gennemsigtig neglelak.Placer en dråbe nedsænkningsolie på toppen af dækglasset, og placer diaset på mikroskopets diasholder. Sænk 20X olieobjektivet, indtil det kommer i kontakt med nedsænkningsolien. Skift til den violette kanal med bølgelængde 405 nanometer.Tænd lukkeren, og fokuser prøven. Naviger og placer interesseområdet til billedbehandling. Sluk lukkeren, før du går over til billedoptagelse ved hjælp af laserlys.For at starte de to fotonlasere skal du skifte til computerstyringen og tænde for tofotonlaseren først. Tænd derefter for de to fotonlasercontrollere og lukkeren, og sørg for, at udgangseffekten er højere end 2,5 watt. Reducer lasereffekten for at forhindre fluorescensdæmpning.Vælg og juster detektorer både fotomultiplikatorer og hybrid for at imødekomme de valgte fluoroforer. Vælg samtidige eller sekventielle billedoptagelser. Juster pinhole til den højeste værdi.Juster laserbølgelængder, forstærkning, effekt, forskydning af pixelopholdstiden, pixelstørrelsesgennemsnit og zoom. Rul computerens Z-controller, og indstil Z-dimensionerne. Definer start- og slutpunkterne, og vælg antallet af billeder, der er angivet inden for en lydstyrke.Hent billeder. Efter at have udført de to fotonmikroskopi afslørede kollagenfibre uden decellularisering et billede med lav opløsning af kollagennetværket. I den decellulariserede ekstracellulære matrix blev der observeret tilsyneladende forskelle i morfologien og den rumlige fordeling mellem chow og fastfood diætlever.Kollagenfibre og mus på en chow-diæt udviste et sammenvævet og velorganiseret netværk, mens musene på fastfood-diæt viste kollagenbundter med mindre forbindelse. Den tredimensionelle struktur af leverens ekstracellulære matrix viser, at kollagenfibrene hos mus på chow-diæten viste et velorganiseret netværk, men ikke i fastfood-diætmus. For at bekræfte kvaliteten af det fibrillære kollagen i den decellulariserede ekstracellulære matrix blev diasene farvet med hæmatoxylin Eosin og Picrosirius rød.Hæmatoxylin og Eosin viser, at alle cellerne er blevet fjernet. I Picrosirius røde farvningsbilleder afslørede den ekstracellulære matrix fra de chow-fodrede mus et velorganiseret netværk. Og i modsætning hertil viste mus på fastfood kost tættere kollagenfibre.Fjern forsigtigt boblen inde i et rør før perfusionen. Boblen blokerer karret i leveren og påvirker perfusionen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

Evaluering af Planar-Cell-polaritet fænotyper i Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

Strategisk endotelcelle Tube Formation Assay: Sammenligning ekstracellulære matrix og vækstfaktor nedsat ekstracellulær matrix

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet måling af musen mesenterica arterie ved hjælp af Wire blodkar

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

Inkorporering af en overleves leverbiopsi Procedure i mus at vurdere ikke-alkoholiske Steatohepatitis (NASH) opløsning

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Murine Precision-Cut Lever skiver som en Ex Vivo Model af leverbiologi

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Drug Treatment by Central Venous Catheter in a Mouse Model of Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm and Monitoring by 3D Ultrasound

Lægemiddelbehandling ved central venekateter i en musemodel af angiotensin II induceret abdominal aortaaneurisme og overvågning ved 3D-ultralyd

Since pharmaceutical treatment options are lacking in the clinical management of abdominal aortic aneurysm (AAA), animal models, in particular mouse ...

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Undersøgelse af de beskyttende virkninger af Platycodin D på ikke-alkoholisk fedtleversygdom i en palmitinsyre-induceret in vitro-model

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...

Delivery of Cardioactive Therapeutics in a Porcine Myocardial Infarction Model

Levering af kardioaktive lægemidler i en porcin myokardieinfarktmodel

Myocardial infarction is one of the leading causes of death and disability worldwide, and there is an urgent need for novel cardioprotective or ...

Liver Transplantation in Mouse and Analyzing Allograft Patency

Successful Orthotopic Liver Transplantation in Mice Utilizing Microcomputed Tomography Angiography

Enhancing Transplantation Research Through MicroCT Angiography in Murine Models (Video) | JoVE

Vellykket ortopisk levertransplantation hos mus ved hjælp af mikrocomputertomografiangiografi

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality ...