Name: 3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis
Uploaded: 2022-02-25T13:30:00
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Nous remercions Hyesuk Park pour l’aide technique. Cette recherche a été financée par le National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK), le NIH (R01 2DK083283, au NJT), le National Institute on Aging (NIA), NIH (1R01AG060726, au NJT). Nous remercions Jon Mulholland et Kitty Lee du Cell Sciences Imaging Facility du Centre Beckman pour leur assistance technique dans l’imagerie par microscopie à deux photons.

Les expériences sur les animaux sont effectuées selon les procédures expérimentales approuvées par les comités institutionnels de soin et d’utilisation des animaux (IACUC) de l’Université de Stanford et de l’hôpital des anciens combattants de Palo Alto. Des souris C57BL/6J mâles âgées de 6 à 8 semaines ont été nourries avec du chow ou un régime de restauration rapide complété par du sirop de maïs à haute teneur en fructose à 4,2 % (voir le tableau des matières) dans de l’eau ...

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	<li>Friedman, S. L., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+fibrosis:+2022+unmet+needs+and+a+blueprint+for+the+future.">Hepatic fibrosis: 2022 unmet needs and a blueprint for the future.</a> Hepatology. 75 (2), 473-488 (2021).</li><li>Ye, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence,+incidence,+and+outcomes+of+non-obese+or+lean+non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence, incidence, and outcomes of non-obese or lean non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Gastroenterology and Hepatology. 5 (8), 739-752 (2020).</li><li>Schwabe, R. F., Tabas, I., Pajvani, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+fibrosis+development+in+non-alcoholic+steatohepatitis.">Mechanisms of fibrosis development in non-alcoholic steatohepatitis.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1913-1928 (2020).</li><li>Arteel, G. E., Naba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+liver+matrisome+-+looking+beyond+collagens.">The liver matrisome - looking beyond collagens.</a> JHEP Reports. 2 (4), 100115 (2020).</li><li>Jiang, J. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonphagocytic+activation+of+NOX2+is+implicated+in+progressive+non-alcoholic+steatohepatitis+during+aging.">Nonphagocytic activation of NOX2 is implicated in progressive non-alcoholic steatohepatitis during aging.</a> Hepatology. 72 (4), 1204-1218 (2020).</li><li>Dehnad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGER1+downregulation+associates+with+fibrosis+in+non-alcoholic+steatohepatitis+and+type+2+diabetes.">AGER1 downregulation associates with fibrosis in non-alcoholic steatohepatitis and type 2 diabetes.</a> Journal of Clinical Investigation. 130 (8), 4320-4330 (2020).</li><li>Mayorca-Guiliani, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+and+antibody+staining+of+mouse+tissues+to+map+native+extracellular+matrix+structures+in+3D.">Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D.</a> Nature Protocols. 14 (12), 3395-3425 (2019).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cirrhotic+human+liver+extracellular+matrix+3D+scaffolds+promote+smad-dependent+tgf-beta1+epithelial+mesenchymal+transition.">Cirrhotic human liver extracellular matrix 3D scaffolds promote smad-dependent tgf-beta1 epithelial mesenchymal transition.</a> Cells. 9 (1), 83 (2019).</li><li>Klaas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alterations+in+the+extracellular+matrix+composition+guide+the+repair+of+damaged+liver+tissue.">The alterations in the extracellular matrix composition guide the repair of damaged liver tissue.</a> Scientific Reports. 6, 27398 (2016).</li><li>Mattei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanostructure+and+composition+of+highly+reproducible+decellularized+liver+matrices.">Mechanostructure and composition of highly reproducible decellularized liver matrices.</a> Acta Biomaterialia. 10 (2), 875-882 (2014).</li><li>Ren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+two+decellularization+methods+in+the+development+of+a+whole-organ+decellularized+rat+liver+scaffold.">Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold.</a> Liver International. 33 (3), 448-458 (2013).</li><li>Piersma, B., Hayward, M. K., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrosis+and+cancer:+A+strained+relationship.">Fibrosis and cancer: A strained relationship.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1873 (2), 188356 (2020).</li><li>Cox, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+matrix+in+cancer.">The matrix in cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 21 (4), 217-238 (2021).</li><li>Mirdamadi, E. S., Kalhori, D., Zakeri, N., Azarpira, N., Solati-Hashjin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+tissue+engineering+as+an+emerging+alternative+for+liver+disease+treatment.">Liver tissue engineering as an emerging alternative for liver disease treatment.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (2), 145-163 (2020).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+human+liver+as+a+natural+3D-scaffold+for+liver+bioengineering+and+transplantation.">Decellularized human liver as a natural 3D-scaffold for liver bioengineering and transplantation.</a> Scientific Reports. 5, 13079 (2015).</li><li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+culture+system+for+liver+tissue+mimicking+hepatic+plates+for+improvement+of+human+hepatocyte+(C3A)+function+and+polarity.">3D culture system for liver tissue mimicking hepatic plates for improvement of human hepatocyte (C3A) function and polarity.</a> BioMed Research International. 2020, 6354183 (2020).</li><li>Shimoda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+liver+scaffolds+promote+liver+regeneration+after+partial+hepatectomy.">Decellularized liver scaffolds promote liver regeneration after partial hepatectomy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 12543 (2019).</li></ol>

Le protocole actuel montre que la décellularisation par perfusion in situ DOC à faible débit préserve les structures de collagène fibrillaire tricoïdale et hélicoïdale frangible, fournissant une plate-forme fiable et rentable pour capturer le remodelage dynamique de l’ECM dans la fibrose hépatique NASH. Bien que la décellularisation ait été réalisée dans des foies normaux et fibrotiques avant d’identifier les composants de l’ECM ou de générer des échafaudages biologiques pour la culture ce...

La stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD) est la maladie hépatique la plus courante, affectant 20% à 25% de la population adulte. 25% des patients atteints de NAFLD évoluent vers une stéatohépatite non alcoolique (NASH), où le risque de cirrhose, d’insuffisance hépatique et de carcinome hépatocellulaire augmente1. Au cours des 20 prochaines années, on estime que la NASH représentera 2 millions de décès liés au foie aux États-Unis2. En l’absence de traitements homologués, il est urgent de décrypter les mécanismes responsables de la fibrose hépatique chez les patients NASH et de développer un traitement ciblé3.
La matrice extracellulaire (MCE) est un microenvironnement dynamique et complexe qui exerce une communication bidirectionnelle avec les cellules pour réguler l’homéostasie tissulaire4. La MEC hépatique est composée d’éléments structuraux tels que les protéoglycanes, le collagène, la fibronectine, l’élastine et d’autres protéines non structurelles (par exemple, l’olfactomedine et la thrombospondine) pour fournir un soutien physique et structurel4.
La fibrose hépatique est une réponse chronique à la cicatrisation des plaies aux lésions hépatiques de diverses étiologies, y compris la NASH3. Elle résulte d’un déséquilibre dans le processus dynamique de remodelage de la matrice ECM et se caractérise par un excès de protéines structurelles dans le foie blessé4. La fibrogenèse dépend de la communication dynamique cellule-cellule entre différents types de cellules hépatiques. Les cellules stellaires hépatiques (CSH), lorsqu’elles sont activées, se différencient en cellules de type myofibroblastes exprimant l’alpha 2 Smooth Muscle 2 et synthétisent les protéines ECM en tant qu’action de fermeture de la plaie. Les CSH activées sont les cellules centrales productrices de collagène dans le foie1.
Le mécanisme moléculaire du remodelage de l’ECM, les modèles de fibrose et leur relation avec les événements cellulaires ne sont pas clairs. Une meilleure compréhension de la structure tridimensionnelle (3D) de l’ECM est encore nécessaire, même si les techniques de spectrométrie de masse ont permis d’analyser la composition protéique de l’ECM4. Traditionnellement, la coloration trichrome de Masson, les taches rouge Picro Sirius et l’imagerie de deuxième génération harmonique (SHG) ont été réalisées sur des coupes de foie minces bidimensionnelles (2D). Le schéma de fibrose typique de la NASH est appelé « fil de poulet », qui s’étend à la zone 3 et est une fibrose périsinusoïdale / péricellulaire 5,6. Cependant, il y a eu un manque d’études axées sur la structure 3D du foie natif, en particulier celles qui n’impliquent pas de section tissulaire. Des approches d’imagerie robustes pour identifier les modèles et les caractéristiques de la fibrose tout au long du remodelage ECM dynamique dans la fibrose hépatique renforceraient considérablement la compréhension des mécanismes de la NASH et identifieraient de nouvelles cibles thérapeutiques.
Pour relever ces défis, un protocole rapide et efficace a été optimisé pour imager l’ECM hépatique native via la décellularisation7. La décellularisation du foie entier est une approche permettant d’éliminer le contenu cellulaire hépatique tout en maintenant le réseau ECM 3D natif grâce à la perfusion de détergent. Les souris ont été nourries avec du chow ou un régime de restauration rapide (FFD) pendant 14 semaines. La décellularisation a été réalisée après perfusion in situ de la veine porte avec un détergent doux et de faibles débits pour préserver les structures de collagène fibrillaire triple hélicoïdale et native. La microscopie à deux photons a été appliquée pour analyser les changements dans les structures de collagène dans l’ECM. Les images 3D de la structure ECM native dans les foies normaux et NASH ont été reconstituées et analysées. La réalisation d’une décellularisation par perfusion in situ et l’analyse de l’échafaudage par microscopie à deux photons fournissent une plate-forme pratique et abordable pour visualiser le remodelage dynamique de l’ECM dans le foie.

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		<tr>
			<td>4-0 MONOCRYL UNDYED 1 x 18&#34; P-3</td>
			<td>MONOCRYL</td>
			<td>Y494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 suture</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>10-000-649</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/monomid-nylon-non-absorbable-sutures-7/10000649?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AnaSed Injection (xylazine)</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td>this drug to use by or on the order of a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD INSYTE AUTOGUARD I.V. CATHETER WITH BC TECHNOLOGY</td>
			<td>BD</td>
			<td>382612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chow diet</td>
			<td>Envigo</td>
			<td># 2918</td>
			<td>Control diet. A fixed formula, non-autoclavable diet manufactured with high quality ingredients and designed to support gestation, lactation, and growth of rodents.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast-food diet (AIN76A Western Diet)</td>
			<td>Test Diet</td>
			<td>1810060</td>
			<td>https://www.testdiet.com/cs/groups/lolweb/@testdiet/documents/web_content/mdrf/mdux/~edisp/ducm04_051601.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-3502</td>
			<td>https://vectorlabs.com/hematoxylin-and-eosin-stain-kit.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kent Scientific Rat Surgical Kit</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>13-005-205</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/rat-surgical-kit/13005205#?keyword=mouse%20surgery%20kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>NDC 50989-996-06 - 10 mL - vial.</td>
			<td>KetaVed has been clinically studied in subhuman primates in addition to those species listed under Administration and Dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP5 upright Confocal, multi-photon</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer connector (Three-way stopcock with SPIN-LOCK&#174;)</td>
			<td>bbraun</td>
			<td>D300</td>
			<td>https://www.bbraunusa.com/en/products/b0/three-way-stopcockwithspin-lock.html</td>
		</tr>
		<tr>
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			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>24901</td>
			<td>https://www.polysciences.com/default/picrosirius-red-stain-kit-40771</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rayon tipped applicator</td>
			<td>puritan</td>
			<td>25-806 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>sigmaaldrich</td>
			<td>D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrup</td>
			<td>www.target.com</td>
			<td>24 fl oz</td>
			<td>https://www.target.com/p/pancake-syrup-24-fl-oz-market-pantry-8482/-/A-13007801</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable Speed Peristaltic Pump</td>
			<td>INTLLAB</td>
			<td>BT100</td>
			<td>https://www.amazon.com/gp/product/B082K97W5W/ref=ox_sc_saved_title_2?smid=A12NUUP87ZRRAR&#38;psc=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>https://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium.html</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis

La stéatohépatite non alcoolique (NASH) est la maladie hépatique chronique la plus courante aux États-Unis, affectant plus de 70 millions d’Américains. La NASH peut évoluer vers une fibrose et éventuellement vers une cirrhose, un facteur de risque important de carcinome hépatocellulaire. La matrice extracellulaire (MEC) fournit un soutien structurel et maintient l’homéostasie hépatique via des signaux matricellulaires. La fibrose hépatique résulte d’un déséquilibre dans le processus de remodelage dynamique de l’ECM et se caractérise par une accumulation excessive d’éléments structurels et des modifications associées des glycosaminoglycanes. Le schéma de fibrose typique de la NASH est appelé « fil de poulet », qui consiste généralement en une fibrose périsinusoïdale / péricellulaire de zone 3, basée sur les caractéristiques observées par la coloration trichrome de Masson et les taches rouge Picrosirius. Cependant, ces techniques traditionnelles d’imagerie bidimensionnelle mince (2D) basée sur des lames tissulaires ne peuvent pas démontrer les changements structurels détaillés de l’ECM tridimensionnelle (3D), ce qui limite la compréhension du remodelage dynamique de l’ECM dans la fibrose hépatique.
Les travaux actuels ont optimisé un protocole rapide et efficace pour imager la structure ECM native dans le foie via la décellularisation afin de relever les défis ci-dessus. Les souris ont été nourries avec du chow ou un régime de restauration rapide pendant 14 semaines. La décellularisation a été réalisée après perfusion in situ de la veine porte, et les techniques de microscopie à deux photons ont été appliquées pour imager et analyser les changements dans l’ECM natif. Les images 3D des foies normaux et NASH ont été reconstituées et analysées. La réalisation d’une décellularisation in situ de la perfusion et l’analyse de l’échafaudage par microscopie à deux photons ont fourni une plate-forme pratique et fiable pour visualiser le remodelage dynamique de l’ECM dans le foie.

Les fibres de collagène ont été détectées par deuxième génération d’harmoniques et microscopie à deux photons. Le signal provient des structures de collagène fibrillaire tricoïdale et hélicoïdale frangible. Des anticorps spécifiques n’ont pas été utilisés pour analyser les sous-types de collagène; Cependant, cela pourrait être ajouté à la technique d’imagerie.
Lorsque le tissu hépatique est étudié sans décellularisation, il est difficile d’obtenir des images ha...

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3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis

Le protocole actuel optimise les méthodes de perfusion/décellularisation in situ du foie et de microscopie à deux photons afin d’établir une plateforme fiable pour visualiser la dynamique du remodelage de la matrice extracellulaire (ECM) au cours de la stéatohépatite non alcoolique (NASH).

Imagerie 3D de la matrice extracellulaire hépatique dans un modèle murin de stéatohépatite non alcoolique

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most common chronic liver disease in the United States, affecting more than 70 million Americans. NASH can ...

La NASH est l’une des maladies chroniques du foie les plus importantes au monde. Il peut évoluer vers la fibrose, la cirrhose et éventuellement le cancer du foie. Étudier le changement dynamique de l’ECM dans la NASH peut aider à mieux comprendre la fibrose.L’imagerie traditionnelle ne peut pas démontrer les changements de structure ECM 3D, ce qui limite la compréhension du processus de remodelage ECM dynamique dans la fibrose hépatique. Pour commencer, pesez la souris avant la procédure. Après avoir anesthésié, la souris rase la région ventrale à l’aide d’une tondeuse à cheveux et désinfecte la peau avec de l’éthanol à 70%.Placez la souris sur son dos et immobilisez les jambes sur la planche chirurgicale avec du ruban adhésif. Utilisez des ciseaux Mayo et des pinces Adson pour faire une incision latérale de trois centimètres dans le bas-ventre. Et puis une incision de cinq centimètres verticalement du bas-ventre au processus xiphoïde sans ouvrir la cavité thoracique.Après avoir ouvert le péritoine, placez doucement les intestins à gauche de l’animal et élevez le lobe droit du foie avec un applicateur à pointe de rayonne pour exposer la veine porte. Pour cathétériser la veine porte, induisez un cathéter IV de calibre 24 dans l’extrémité distale de la veine porte. Placez l’embout du cathéter avant que la veine porte ne se ramifie dans les lobes hépatiques.Retirez l’aiguille immédiatement lorsque le cathéter pénètre dans la veine. Vérifiez que le cathéter est correctement positionné à l’intérieur de la veine en perfusant le foie avec du PBS à l’aide d’une seringue d’un millilitre via le cathéter. Utilisez des micro-pinces Dumont, une micro-aiguille Castroviejo et une suture 4-0 pour placer un point sous la ramification de la veine porte et un deuxième point un centimètre plus bas pour fixer le cathéter.Connectez le cathéter à un tube en silicone d’un mètre de longueur, de trois millimètres de diamètre intérieur et de 4,1 millimètres de diamètre extérieur avec un connecteur de leurre. Connectez le tube en silicone à une pompe péristaltique et à un réservoir contenant de l’eau désionisée. Retirez soigneusement les bulles d’air à l’intérieur du tube et évitez de générer de nouvelles bulles pendant la perfusion.Réglez la pompe péristaltique à un débit de 0,2 millilitre par minute. Lisez d’abord avec de l’eau désionisée pendant deux heures et la couleur du foie passera du rouge au jaune pendant la perfusion. Basculez la solution de perfusion en désoxycholate de sodium à 0,5% et continuez pendant la nuit et le foie deviendra blanc à la fin de la perfusion.Basculez la solution de perfusion dans de l’eau désionisée et perfusez pendant deux heures. Utilisez des micro-pinces Dumont et des ciseaux à ressort micros pour recueillir le foie décellularisé et le laver soigneusement dans une boîte de Petri avec du PBS. Transférez un petit morceau de foie décellularisé sur une lame de microscope et placez le tissu au milieu.Ajoutez 10 microlitres de support de montage antidécoloration au mouchoir avec une pipette pour éviter le dessèchement des tissus. Couvrez le tissu avec un verre de couverture et appliquez une petite force pour aplatir l’échantillon. Scellez les bords du verre de couverture avec du vernis à ongles incolore et transparent.Placez une goutte d’huile d’immersion sur le dessus du verre de couverture et placez la lame sur le support de lame du microscope. Abaissez la lentille d’objectif d’huile 20X jusqu’à ce qu’elle entre en contact avec l’huile d’immersion. Passez au canal violet de longueur d’onde 405 nanomètres.Allumez l’obturateur et concentrez l’échantillon. Naviguez et positionnez la zone d’intérêt pour l’imagerie. Éteignez l’obturateur avant de passer à l’acquisition d’image à l’aide de la lumière laser.Pour démarrer le laser à deux photons, passez à la commande de l’ordinateur et allumez d’abord le laser à deux photons. Allumez ensuite le contrôleur laser à deux photons et l’obturateur en vous assurant que la puissance de sortie est supérieure à 2,5 watts. Réduisez la puissance du laser pour éviter la trempe de fluorescence.Sélectionnez et ajustez les détecteurs à la fois les photomultiplicateurs et l’hybride pour s’adapter aux fluorophores choisis. Choisissez des acquisitions d’images simultanées ou séquentielles. Ajustez le trou d’épingle à la valeur la plus élevée.Ajustez les longueurs d’onde laser, le gain, la puissance, le décalage du temps d’arrêt des pixels, la moyenne de la taille des pixels et le zoom. Faites défiler le contrôleur Z de l’ordinateur et définissez les dimensions Z. Définissez le début et les points de terminaison et choisissez le nombre d’images fournies dans un volume.Acquérir des images. Après avoir effectué la microscopie à deux photons, les fibres de collagène sans décellularisation ont révélé une image à basse résolution du réseau de collagène. Dans la matrice extracellulaire décellularisée, des différences apparentes ont été observées dans la morphologie et la distribution spatiale entre les foies de chow et de restauration rapide.Les fibres de collagène et les souris suivant un régime chow présentaient un réseau entrelacé et bien organisé, tandis que les souris suivant un régime de restauration rapide présentaient des faisceaux de collagène avec moins de connectivité. La structure tridimensionnelle de la matrice extracellulaire du foie montre que les fibres de collagène chez les souris suivant le régime chow ont montré un réseau bien organisé, mais pas chez les souris de restauration rapide. Pour confirmer la qualité du collagène fibrillaire dans la matrice extracellulaire décellularisée, les lames ont été colorées avec de l’hématoxyline éosine et du rouge Picrosirius.L’hématoxyline et l’éosine montrent que toutes les cellules ont été enlevées. Dans les images de coloration rouge de Picrosirius, la matrice extracellulaire des souris nourries au chow a révélé un réseau bien organisé. Et en revanche, les souris suivant un régime de restauration rapide ont montré des fibres de collagène plus denses.Retirez délicatement la bulle à l’intérieur d’un tube avant la perfusion. La bulle bloquera le vaisseau dans le foie et affectera la perfusion.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Multi-photon imagerie de l&#39;invasion des cellules tumorales dans un modèle de souris orthotopique du carcinome épidermoïde oral

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Recherche

Médecine

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Myocardial infarction is one of the leading causes of death and disability worldwide, and there is an urgent need for novel cardioprotective or ...

Liver Transplantation in Mouse and Analyzing Allograft Patency

Successful Orthotopic Liver Transplantation in Mice Utilizing Microcomputed Tomography Angiography

Enhancing Transplantation Research Through MicroCT Angiography in Murine Models (Video) | JoVE

Transplantation hépatique orthotopique réussie chez la souris à l’aide de l’angiographie par microtomodensitométrie

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality ...