Name: 3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis
Uploaded: 2022-02-25T13:30:00
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Wir danken Hyesuk Park für die technische Hilfe. Diese Forschung wurde durch Mittel des National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK), des NIH (R01 2DK083283, an NJT), des National Institute on Aging (NIA) und des NIH (1R01AG060726, an NJT) unterstützt. Wir danken Jon Mulholland und Kitty Lee von der Cell Sciences Imaging Facility am Beckman Center für die technische Unterstützung bei der Zwei-Photonen-Mikroskopie-Bildgebung.

Tierversuche werden nach den experimentellen Verfahren durchgeführt, die von den Institutional Animal Care and Use Committees (IACUCs) der Stanford University und dem Veterans Affairs Hospital in Palo Alto genehmigt wurden. 6-8 Wochen alte männliche C57BL/6J-Mäuse wurden 14 Wochen lang entweder mit Chow oder einer Fast-Food-Diät gefüttert, die mit 4,2 % Maissirup mit hohem Fruktosegehalt (siehe Materialtabelle) ergänzt wurde5. Die Mäuse wurden in Standardkäfigen mit einem ...

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	<li>Friedman, S. L., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+fibrosis:+2022+unmet+needs+and+a+blueprint+for+the+future.">Hepatic fibrosis: 2022 unmet needs and a blueprint for the future.</a> Hepatology. 75 (2), 473-488 (2021).</li><li>Ye, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence,+incidence,+and+outcomes+of+non-obese+or+lean+non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence, incidence, and outcomes of non-obese or lean non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Gastroenterology and Hepatology. 5 (8), 739-752 (2020).</li><li>Schwabe, R. F., Tabas, I., Pajvani, U. 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K., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrosis+and+cancer:+A+strained+relationship.">Fibrosis and cancer: A strained relationship.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1873 (2), 188356 (2020).</li><li>Cox, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+matrix+in+cancer.">The matrix in cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 21 (4), 217-238 (2021).</li><li>Mirdamadi, E. S., Kalhori, D., Zakeri, N., Azarpira, N., Solati-Hashjin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+tissue+engineering+as+an+emerging+alternative+for+liver+disease+treatment.">Liver tissue engineering as an emerging alternative for liver disease treatment.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (2), 145-163 (2020).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+human+liver+as+a+natural+3D-scaffold+for+liver+bioengineering+and+transplantation.">Decellularized human liver as a natural 3D-scaffold for liver bioengineering and transplantation.</a> Scientific Reports. 5, 13079 (2015).</li><li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+culture+system+for+liver+tissue+mimicking+hepatic+plates+for+improvement+of+human+hepatocyte+(C3A)+function+and+polarity.">3D culture system for liver tissue mimicking hepatic plates for improvement of human hepatocyte (C3A) function and polarity.</a> BioMed Research International. 2020, 6354183 (2020).</li><li>Shimoda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+liver+scaffolds+promote+liver+regeneration+after+partial+hepatectomy.">Decellularized liver scaffolds promote liver regeneration after partial hepatectomy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 12543 (2019).</li></ol>

Das vorliegende Protokoll zeigt, dass die Dezellularisierung durch eine niedrige Flussrate der DOC-in-situ-Perfusion die zerbrechlichen dreifachhelikalen und nativen fibrillären Kollagenstrukturen bewahrt und eine zuverlässige und kostengünstige Plattform zur Erfassung des dynamischen ECM-Umbaus bei NASH-Leberfibrose bietet. Obwohl die Dezellularisierung in normalen und fibrotischen Lebern durchgeführt wurde, bevor EZM-Komponenten identifiziert oder biologische Gerüste für die Zellkultur erzeugt wurden, is...

Die nichtalkoholische Fettlebererkrankung (NAFLD) ist die häufigste Lebererkrankung und betrifft 20%-25% der erwachsenen Bevölkerung. 25 % der NAFLD-Patienten entwickeln eine nicht-alkoholische Steatohepatitis (NASH), bei der das Risiko für Zirrhose, Leberversagen und hepatozelluläres Karzinom steigt1. Es wird geschätzt, dass NASH in den nächsten 20 Jahren für 2 Millionen leberbedingte Todesfälle in den USAverantwortlich sein wird. Da es keine zugelassenen Behandlungen gibt, ist es dringend notwendig, die Mechanismen zu entschlüsseln, die eine Leberfibrose bei NASH-Patienten verursachen, und eine gezielte Behandlung zu entwickeln3.
Die extrazelluläre Matrix (EZM) ist eine dynamische, komplexe Mikroumgebung, die eine bidirektionale Kommunikation mit Zellen ausübt, um die Gewebehomöostasezu regulieren 4. Die Leber-EZM besteht aus Strukturelementen wie Proteoglykanen, Kollagenen, Fibronektin, Elastin und anderen Nichtstrukturproteinen (z. B. Olfactomedin und Thrombospondin), um die physikalische und strukturelle Unterstützung zu gewährleisten4.
Leberfibrose ist eine chronische wundheilende Reaktion auf Leberschäden verschiedener Ätiologien, einschließlich NASH3. Sie resultiert aus einem Ungleichgewicht im dynamischen Remodellierungsprozess der EZM-Matrix und ist durch einen Überschuss an Strukturproteinen in der geschädigten Leber gekennzeichnet4. Die Fibrogenese hängt von der dynamischen Zell-Zell-Kommunikation zwischen verschiedenen hepatischen Zelltypen ab. Hepatische Sternzellen (HSCs) differenzieren sich, wenn sie aktiviert werden, in Smooth Muscle Alpha 2 Actin-exprimierende, migrierende und proliferierende Myofibroblasten-ähnliche Zellen und synthetisieren EZM-Proteine als wundschließende Wirkung. Aktivierte HSZ sind die zentralen kollagenproduzierenden Zellen in der Leber1.
Der molekulare Mechanismus des EZM-Umbaus, die Muster der Fibrose und ihre Beziehung zu zellulären Ereignissen sind nicht klar. Ein besseres Verständnis der dreidimensionalen (3D) EZM-Struktur ist noch erforderlich, auch wenn Massenspektrometrietechniken zur Analyse der Zusammensetzung der ECM-Proteine beigetragen haben4. Traditionell wurden die Trichromfärbung nach Masson, die Picro Sirius Red-Färbung und die Bildgebung der zweiten harmonischen Generation (SHG) an zweidimensionalen (2D) dünnen Leberschnitten durchgeführt. Das typische Fibrosemuster von NASH wird als "Maschendraht" bezeichnet, der sich bis Zone 3 erstreckt und eine perisinusoidale/perizelluläre Fibrose 5,6 ist. Es fehlt jedoch an Studien, die sich auf die 3D-Struktur der nativen Leber konzentrieren, insbesondere an solchen, die keine Gewebeschnitte beinhalten. Robuste bildgebende Verfahren zur Identifizierung von Mustern und Merkmalen der Fibrose während des dynamischen EZM-Remodellings bei Leberfibrose würden das Verständnis der NASH-Mechanismen erheblich verbessern und neue therapeutische Ziele identifizieren.
Um diesen Herausforderungen zu begegnen, wurde ein schnelles und effizientes Protokoll optimiert, um die native Leber-EZM mittels Dezellularisierung abzubilden7. Die Dezellularisierung der gesamten Leber ist ein Ansatz, um den zellulären Inhalt der Leber zu entfernen und gleichzeitig das native 3D-EZM-Netzwerk durch Detergenzienperfusion aufrechtzuerhalten. Die Mäuse wurden 14 Wochen lang entweder mit Chow oder Fast-Food-Diät (FFD) gefüttert. Die Dezellularisierung wurde nach in situ Pfortaderperfusion mit milder Detergenzienz und niedrigen Flussraten durchgeführt, um triple-helikale und native fibrilläre Kollagenstrukturen zu erhalten. Die Zwei-Photonen-Mikroskopie wurde eingesetzt, um Veränderungen der Kollagenstrukturen in der EZM zu analysieren. Die 3D-Bilder der nativen EZM-Struktur in normaler und NASH-Leber wurden rekonstituiert und analysiert. Die Durchführung einer in situ Perfusionsdezellularisierung und die Analyse des Gerüsts mittels Zwei-Photonen-Mikroskopie bietet eine praktische und kostengünstige Plattform zur Visualisierung des dynamischen EZM-Umbaus in der Leber.

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		<tr>
			<td>4-0 MONOCRYL UNDYED 1 x 18&#34; P-3</td>
			<td>MONOCRYL</td>
			<td>Y494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 suture</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>10-000-649</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/monomid-nylon-non-absorbable-sutures-7/10000649?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AnaSed Injection (xylazine)</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td>this drug to use by or on the order of a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD INSYTE AUTOGUARD I.V. CATHETER WITH BC TECHNOLOGY</td>
			<td>BD</td>
			<td>382612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chow diet</td>
			<td>Envigo</td>
			<td># 2918</td>
			<td>Control diet. A fixed formula, non-autoclavable diet manufactured with high quality ingredients and designed to support gestation, lactation, and growth of rodents.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast-food diet (AIN76A Western Diet)</td>
			<td>Test Diet</td>
			<td>1810060</td>
			<td>https://www.testdiet.com/cs/groups/lolweb/@testdiet/documents/web_content/mdrf/mdux/~edisp/ducm04_051601.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-3502</td>
			<td>https://vectorlabs.com/hematoxylin-and-eosin-stain-kit.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kent Scientific Rat Surgical Kit</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>13-005-205</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/rat-surgical-kit/13005205#?keyword=mouse%20surgery%20kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>NDC 50989-996-06 - 10 mL - vial.</td>
			<td>KetaVed has been clinically studied in subhuman primates in addition to those species listed under Administration and Dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP5 upright Confocal, multi-photon</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer connector (Three-way stopcock with SPIN-LOCK&#174;)</td>
			<td>bbraun</td>
			<td>D300</td>
			<td>https://www.bbraunusa.com/en/products/b0/three-way-stopcockwithspin-lock.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrosirius Red Stain Kit</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>24901</td>
			<td>https://www.polysciences.com/default/picrosirius-red-stain-kit-40771</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rayon tipped applicator</td>
			<td>puritan</td>
			<td>25-806 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>sigmaaldrich</td>
			<td>D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrup</td>
			<td>www.target.com</td>
			<td>24 fl oz</td>
			<td>https://www.target.com/p/pancake-syrup-24-fl-oz-market-pantry-8482/-/A-13007801</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable Speed Peristaltic Pump</td>
			<td>INTLLAB</td>
			<td>BT100</td>
			<td>https://www.amazon.com/gp/product/B082K97W5W/ref=ox_sc_saved_title_2?smid=A12NUUP87ZRRAR&#38;psc=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>https://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium.html</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis

Die nichtalkoholische Steatohepatitis (NASH) ist die häufigste chronische Lebererkrankung in den Vereinigten Staaten und betrifft mehr als 70 Millionen Amerikaner. NASH kann zu einer Fibrose und schließlich zu einer Zirrhose fortschreiten, einem signifikanten Risikofaktor für ein hepatozelluläres Karzinom. Die extrazelluläre Matrix (EZM) bietet strukturelle Unterstützung und hält die Leberhomöostase über matrizelluläre Signale aufrecht. Die Leberfibrose resultiert aus einem Ungleichgewicht im dynamischen EZM-Umbauprozess und ist gekennzeichnet durch eine übermäßige Akkumulation von Strukturelementen und damit verbundene Veränderungen der Glykosaminoglykane. Das typische Fibrosemuster von NASH wird als "Maschendraht" bezeichnet, der in der Regel aus perisinusoidaler/perizellulärer Fibrose der Zone 3 besteht, basierend auf Merkmalen, die durch die Trichromfärbung von Masson und die Färbung von Picrosirius Red beobachtet wurden. Diese traditionellen dünnen zweidimensionalen (2D) Gewebeobjektträger-basierten Bildgebungsverfahren können jedoch die detaillierten dreidimensionalen (3D) EZM-Strukturveränderungen nicht darstellen, was das Verständnis des dynamischen EZM-Umbaus bei Leberfibrose einschränkt.
In der aktuellen Arbeit wurde ein schnelles und effizientes Protokoll zur Abbildung der nativen EZM-Struktur in der Leber mittels Dezellularisierung optimiert, um die oben genannten Herausforderungen zu bewältigen. Die Mäuse wurden 14 Wochen lang entweder mit Chow- oder Fast-Food-Diät gefüttert. Die Dezellularisierung wurde nach in situ Pfortaderperfusion durchgeführt, und die Zwei-Photonen-Mikroskopietechniken wurden angewendet, um Veränderungen in der nativen EZM abzubilden und zu analysieren. Die 3D-Bilder der Normal- und NASH-Leber wurden rekonstituiert und analysiert. Die Durchführung einer in situ Perfusionsdezellularisierung und die Analyse des Gerüsts mittels Zwei-Photonen-Mikroskopie boten eine praktische und zuverlässige Plattform zur Visualisierung des dynamischen EZM-Umbaus in der Leber.

Die Kollagenfasern wurden mit Hilfe der Erzeugung der zweiten Harmonischen und der Zwei-Photonen-Mikroskopie detektiert. Das Signal stammt von den zerbrechlichen dreifachhelikalen und nativen fibrillären Kollagenstrukturen. Spezifische Antikörper wurden nicht verwendet, um Kollagen-Subtypen zu analysieren; Dies könnte jedoch der Bildgebungstechnik hinzugefügt werden.
Wenn das Lebergewebe ohne Dezellularisierung untersucht wird, ist es schwierig, hochauflösende Bilder des Kollagennetzwerks...

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3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis

Das vorliegende Protokoll optimiert die Methoden der Leber-in-situ-Perfusion/Dezellularisierung und der Zwei-Photonen-Mikroskopie, um eine zuverlässige Plattform zur Visualisierung der Dynamik des Remodells der extrazellulären Matrix (EZM) während der nicht-alkoholischen Steatohepatitis (NASH) zu schaffen.

3D-Bildgebung der extrazellulären Matrix der Leber in einem Mausmodell der nicht-alkoholischen Steatohepatitis

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most common chronic liver disease in the United States, affecting more than 70 million Americans. NASH can ...

NASH ist eine der wichtigsten chronischen Lebererkrankungen der Welt. Es kann zu Fibrose, Leberzirrhose und schließlich Leberkrebs führen. Die Untersuchung der dynamischen Veränderung der EZM im NASH kann helfen, die Fibrose besser zu verstehen.Herkömmliche Bildgebung kann keine 3D-EZM-Strukturveränderungen darstellen, was das Verständnis des dynamischen EZM-Umbauprozesses in der Leberfibrose einschränkt. Wiegen Sie zunächst die Maus vor dem Eingriff. Nach der Betäubung der Maus rasieren Sie den Bauchbereich mit einer Haarschneidemaschine und desinfizieren Sie die Haut mit 70%igem Ethanol.Legen Sie die Maus auf den Rücken und fixieren Sie die Beine mit Klebeband auf dem chirurgischen Brett. Verwenden Sie eine Mayo-Schere und eine Adson-Pinzette, um einen drei Zentimeter langen Schnitt seitlich in den Unterbauch zu machen. Und dann ein fünf Zentimeter langer Schnitt senkrecht vom Unterbauch bis zum Processus xiphoideus, ohne die Brusthöhle zu öffnen.Nachdem Sie das Bauchfell geöffnet haben, platzieren Sie den Darm vorsichtig links vom Tier und heben Sie den rechten Leberlappen mit einem Viskoseapplikator an, um die Pfortader freizulegen. Um die Pfortader zu katheterisieren, wird ein 24-Gauge-IV-Katheter in das distale Ende der Pfortader eingeführt. Setzen Sie die Katheterspitze an, bevor sich die Pfortader in die Leberlappen verzweigt.Ziehen Sie die Nadel sofort zurück, wenn der Katheter in die Vene eintritt. Überprüfen Sie, ob der Katheter richtig in der Vene positioniert ist, indem Sie die Leber mit einer Ein-Milliliter-Spritze über den Katheter mit PBS durchbluten. Verwenden Sie eine Dumont-Mikrozange, eine Castroviejo-Mikronadel und eine 4-0-Naht, um einen Stich unter der Verzweigung der Pfortader und einen zweiten Stich einen Zentimeter darunter zu platzieren, um den Katheter zu sichern.Verbinden Sie den Katheter mit einem Köderanschluss mit einem Silikonschlauch von einem Meter Länge, drei Millimeter Innendurchmesser und 4,1 Millimeter Außendurchmesser. Schließen Sie den Silikonschlauch an eine Schlauchpumpe und einen Behälter mit deionisiertem Wasser an. Entfernen Sie vorsichtig die Luftblasen im Inneren des Röhrchens und vermeiden Sie die Bildung neuer Blasen während der Perfusion.Stellen Sie die Schlauchpumpe auf eine Förderleistung von 0,2 Millilitern pro Minute ein. Zuerst zwei Stunden lang mit deionisiertem Wasser betrachten, ändert sich die Farbe der Leber während der Perfusion von rot zu gelb. Stellen Sie die Perfusionslösung auf 0,5%iges Natriumdesoxycholat um und fahren Sie über Nacht fort, und die Leber wird am Ende der Perfusion weiß.Schalten Sie die Perfusionslösung auf deionisiertes Wasser um und durchbluten Sie sie zwei Stunden lang. Verwenden Sie eine Dumont-Mikrozange und eine Mikro-Federschere, um die dezellularisierte Leber zu sammeln und sie vorsichtig in einer Petrischale mit PBS zu waschen. Übertragen Sie ein kleines Stück dezellularisierter Leber auf einen Objektträger und legen Sie das Gewebe in die Mitte.Geben Sie 10 Mikroliter Antifade-Eindeckmittel mit einer Pipette in das Gewebe, um ein Austrocknen des Gewebes zu vermeiden. Decken Sie das Gewebe mit einem Deckglas ab und üben Sie eine kleine Kraft aus, um die Probe zu glätten. Versiegeln Sie die Ränder des Deckglases mit farblosem und transparentem Nagellack.Geben Sie einen Tropfen eines Immersionsöls auf die Oberseite des Deckglases und legen Sie den Objektträger auf den Objektträgerhalter. Senken Sie die 20-fache Ölobjektivlinse ab, bis sie das Immersionsöl berührt. Wechseln Sie in den violetten Kanal mit einer Wellenlänge von 405 Nanometern.Schalten Sie den Verschluss ein und fokussieren Sie die Probe. Navigieren und positionieren Sie den Interessenbereich für die Bildgebung. Schalten Sie den Verschluss aus, bevor Sie mit der Bildaufnahme mit Laserlicht fortfahren.Um den Zwei-Photonen-Laser zu starten, wechseln Sie zur Computersteuerung und schalten Sie zuerst den Zwei-Photonen-Laser ein. Schalten Sie dann den Zwei-Photonen-Lasercontroller und den Verschluss ein und stellen Sie sicher, dass die Ausgangsleistung höher als 2,5 Watt ist. Reduzieren Sie die Laserleistung, um eine Fluoreszenzlöschung zu verhindern.Wählen Sie die Detektoren aus und passen Sie sie sowohl für Photomultiplikatoren als auch für den Hybrid an, um die ausgewählten Fluorophore aufzunehmen. Wählen Sie zwischen simultanen oder sequenziellen Bildaufnahmen. Stellen Sie die Lochblende auf den höchsten Wert ein.Passen Sie Laserwellenlängen, Verstärkung, Leistung, Versatz der Pixelverweildauer, Mittelung der Pixelgröße und Zoom an. Scrollen Sie mit dem Z-Controller des Computers und stellen Sie die Z-Abmessungen ein. Definieren Sie den Start- und Endpunkt und wählen Sie die Anzahl der Bilder aus, die innerhalb eines Volumes angegeben werden.Erfassen Sie Bilder. Nach der Durchführung der Zwei-Photonen-Mikroskopie zeigten Kollagenfasern ohne Dezellularisierung ein niedrig aufgelöstes Bild des Kollagennetzwerks. In der dezellularisierten extrazellulären Matrix wurden offensichtliche Unterschiede in der Morphologie und räumlichen Verteilung zwischen Chow- und Fast-Food-Diätlebern beobachtet.Kollagenfasern und Mäuse, die eine Chow-Diät erhielten, zeigten ein verwobenes und gut organisiertes Netzwerk, während die Mäuse mit Fast-Food-Diät Kollagenbündel mit geringerer Konnektivität aufwiesen. Die dreidimensionale Struktur der extrazellulären Matrix der Leber zeigt, dass die Kollagenfasern bei Mäusen mit Chow-Diät ein gut organisiertes Netzwerk aufwiesen, nicht jedoch bei Fast-Food-Diät-Mäusen. Um die Qualität des fibrillären Kollagens in der dezellularisierten extrazellulären Matrix zu bestätigen, wurden die Objektträger mit Hämatoxylin, Eosin und Picrosiriusrot gefärbt.Hämatoxylin und Eosin zeigen, dass alle Zellen entfernt wurden. In den Bildern der Picrosirius-Rotfärbung zeigte die extrazelluläre Matrix der mit Chow gefütterten Mäuse ein gut organisiertes Netzwerk. Im Gegensatz dazu zeigten Mäuse mit Fast-Food-Diät dichtere Kollagenfasern.Entfernen Sie vorsichtig die Blase in einem Röhrchen vor der Perfusion. Die Blase blockiert das Gefäß in der Leber und beeinträchtigt die Durchblutung.

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-Photonen-Imaging der Tumorzellinvasion in einem orthotopen Mausmodell des oralen Plattenepithelkarzinoms

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Forschung

Medizin

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

Bewertung der Planar-Cell-Polarity Phänotypen in Ziliopathie Maus-Mutanten-Cochlea

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

Strategische Endothelzell Tubusbildung Assay: Ein Vergleich extrazellulären Matrix und Wachstumsfaktor Reduzierte Extrazellulärmatrix

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

Gründung einer Survivable Leberbiopsie Prozedur bei Mäusen zu beurteilen, nicht-alkoholische Steatohepatitis (NASH) Auflösung

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Murine Präzisionsgeschnittene Leberscheiben als Ex-Vivo-Modell der Leberbiologie

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Drug Treatment by Central Venous Catheter in a Mouse Model of Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm and Monitoring by 3D Ultrasound

Medikamentöse Behandlung mittels zentralvenösem Katheter in einem Mausmodell des Angiotensin-II-induzierten Bauchaortenaneurysmas und Überwachung mittels 3D-Ultraschall

Since pharmaceutical treatment options are lacking in the clinical management of abdominal aortic aneurysm (AAA), animal models, in particular mouse ...

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Untersuchung der protektiven Wirkung von Platycodin D auf die nicht-alkoholische Fettlebererkrankung in einem Palmitinsäure-induzierten In-vitro-Modell

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...

Delivery of Cardioactive Therapeutics in a Porcine Myocardial Infarction Model

Verabreichung kardioaktiver Therapeutika in einem Schweine-Myokardinfarkt-Modell

Myocardial infarction is one of the leading causes of death and disability worldwide, and there is an urgent need for novel cardioprotective or ...

Liver Transplantation in Mouse and Analyzing Allograft Patency

Successful Orthotopic Liver Transplantation in Mice Utilizing Microcomputed Tomography Angiography

Enhancing Transplantation Research Through MicroCT Angiography in Murine Models (Video) | JoVE

Erfolgreiche orthotope Lebertransplantation bei Mäusen mittels Mikrocomputertomographie-Angiographie

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality ...