Name: 3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis
Uploaded: 2022-02-25T13:30:00
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हम तकनीकी मदद के लिए हेसुक पार्क को धन्यवाद देते हैं। इस शोध को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ डायबिटीज एंड डाइजेस्टिव एंड किडनी डिजीज (एनआईडीडीके), एनआईएच (आर01 2डीके083283, एनजेटी), नेशनल इंस्टीट्यूट ऑन एजिंग (एनआईए), एनआईएच (1आर01एजी060726, एनजेटी) से वित्त पोषण द्वारा समर्थित किया गया था। हम दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के साथ तकनीकी सहायता के लिए बेकमैन सेंटर में सेल साइंसेज इमेजिंग सुविधा के जॉन मुलहोलैंड और किट्टी ली को कृतज्ञतापूर्वक स्वीकार करते हैं।

स्टैनफोर्ड विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समितियों (आईएसीओसी) और पालो अल्टो में वेटरन्स अफेयर्स अस्पताल द्वारा अनुमोदित प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के अनुसार पशु प्रयोग किए जाते हैं। 6-8 ...

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	<li>Friedman, S. L., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+fibrosis:+2022+unmet+needs+and+a+blueprint+for+the+future.">Hepatic fibrosis: 2022 unmet needs and a blueprint for the future.</a> Hepatology. 75 (2), 473-488 (2021).</li><li>Ye, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence,+incidence,+and+outcomes+of+non-obese+or+lean+non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence, incidence, and outcomes of non-obese or lean non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Gastroenterology and Hepatology. 5 (8), 739-752 (2020).</li><li>Schwabe, R. F., Tabas, I., Pajvani, U. 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X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonphagocytic+activation+of+NOX2+is+implicated+in+progressive+non-alcoholic+steatohepatitis+during+aging.">Nonphagocytic activation of NOX2 is implicated in progressive non-alcoholic steatohepatitis during aging.</a> Hepatology. 72 (4), 1204-1218 (2020).</li><li>Dehnad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGER1+downregulation+associates+with+fibrosis+in+non-alcoholic+steatohepatitis+and+type+2+diabetes.">AGER1 downregulation associates with fibrosis in non-alcoholic steatohepatitis and type 2 diabetes.</a> Journal of Clinical Investigation. 130 (8), 4320-4330 (2020).</li><li>Mayorca-Guiliani, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+and+antibody+staining+of+mouse+tissues+to+map+native+extracellular+matrix+structures+in+3D.">Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D.</a> Nature Protocols. 14 (12), 3395-3425 (2019).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cirrhotic+human+liver+extracellular+matrix+3D+scaffolds+promote+smad-dependent+tgf-beta1+epithelial+mesenchymal+transition.">Cirrhotic human liver extracellular matrix 3D scaffolds promote smad-dependent tgf-beta1 epithelial mesenchymal transition.</a> Cells. 9 (1), 83 (2019).</li><li>Klaas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alterations+in+the+extracellular+matrix+composition+guide+the+repair+of+damaged+liver+tissue.">The alterations in the extracellular matrix composition guide the repair of damaged liver tissue.</a> Scientific Reports. 6, 27398 (2016).</li><li>Mattei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanostructure+and+composition+of+highly+reproducible+decellularized+liver+matrices.">Mechanostructure and composition of highly reproducible decellularized liver matrices.</a> Acta Biomaterialia. 10 (2), 875-882 (2014).</li><li>Ren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+two+decellularization+methods+in+the+development+of+a+whole-organ+decellularized+rat+liver+scaffold.">Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold.</a> Liver International. 33 (3), 448-458 (2013).</li><li>Piersma, B., Hayward, M. 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S., Kalhori, D., Zakeri, N., Azarpira, N., Solati-Hashjin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+tissue+engineering+as+an+emerging+alternative+for+liver+disease+treatment.">Liver tissue engineering as an emerging alternative for liver disease treatment.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (2), 145-163 (2020).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+human+liver+as+a+natural+3D-scaffold+for+liver+bioengineering+and+transplantation.">Decellularized human liver as a natural 3D-scaffold for liver bioengineering and transplantation.</a> Scientific Reports. 5, 13079 (2015).</li><li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+culture+system+for+liver+tissue+mimicking+hepatic+plates+for+improvement+of+human+hepatocyte+(C3A)+function+and+polarity.">3D culture system for liver tissue mimicking hepatic plates for improvement of human hepatocyte (C3A) function and polarity.</a> BioMed Research International. 2020, 6354183 (2020).</li><li>Shimoda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+liver+scaffolds+promote+liver+regeneration+after+partial+hepatectomy.">Decellularized liver scaffolds promote liver regeneration after partial hepatectomy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 12543 (2019).</li></ol>

वर्तमान प्रोटोकॉल से पता चलता है कि सीटू छिड़काव में कम प्रवाह दर डीओसी के माध्यम से डीसेल्युलराइजेशन फ्रैंबल ट्रिपल-हेलिकल और देशी फाइब्रिलर कोलेजन संरचनाओं को संरक्षित करता है, जो एनएएसएच लिवर ...

गैर-अल्कोहल फैटी लीवर रोग (एनएएफएलडी) सबसे आम यकृत रोग है, जो वयस्क आबादी के 20% -25% को प्रभावित करता है। एनएएफएलडी रोगियों का 25% गैर-मादक स्टीटोहेपेटाइटिस (एनएएसएच) में प्रगतिकरता है, जहां सिरोसिस, यकृत की विफलता और हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा का खतरा बढ़ जाता है। अगले 20 वर्षों में, यह अनुमानलगाया गया है कि एनएएसएच अमेरिका 2 में 2 मिलियन यकृत से संबंधित मौतों के लिए जिम्मेदार होगा। चूंकि कोई अनुमोदित उपचार नहीं हैं, इसलिए एनएएसएच रोगियों में यकृत फाइब्रोसिस का कारण बनने वाले तंत्र को समझने और लक्षित उपचार विकसित करने की तत्काल आवश्यकताहै।
बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) एक गतिशील, जटिल माइक्रोएन्वायरमेंट है जो ऊतक होमियोस्टेसिसको विनियमित करने के लिए कोशिकाओं के साथ द्वि-दिशात्मक संचार करता है। यकृत ईसीएम संरचनात्मक तत्वों जैसे प्रोटिओग्लाइकेन्स, कोलेजन, फाइब्रोनेक्टिन, इलास्टिन और अन्य गैर-संरचनात्मक प्रोटीन (जैसे, ओल्फैक्टोमेडिन और थ्रोम्बोस्पोंडिन) से बना है जो शारीरिक औरसंरचनात्मक सहायता प्रदान करता है।
लिवर फाइब्रोसिस एनएएसएच3 सहित विभिन्न ईटियोलॉजी के यकृत क्षति के लिए एक पुरानी घाव-उपचार प्रतिक्रिया है। यह गतिशील ईसीएम मैट्रिक्स रीमॉडेलिंग प्रक्रिया में असंतुलन के परिणामस्वरूप होता है और घायल यकृत4 में अत्यधिक संरचनात्मक प्रोटीन की विशेषता है। फाइब्रोजेनेसिस विभिन्न यकृत कोशिका प्रकारों के बीच गतिशील सेल-सेल संचार पर निर्भर करता है। हेपेटिक स्टेलेट कोशिकाएं (एचएससी), सक्रिय होने पर, चिकनी मांसपेशी अल्फा 2 एक्टिन-अभिव्यक्ति, माइग्रेटिंग और मायोफाइब्रोब्लास्ट जैसी कोशिकाओं के प्रसार में अंतर करती हैं और घाव-बंद करने वाली कार्रवाई के रूप में ईसीएम प्रोटीन को संश्लेषित करती हैं। सक्रिय एचएससी यकृत में केंद्रीय कोलेजन उत्पादक कोशिकाएं हैं।
ईसीएम रीमॉडेलिंग का आणविक तंत्र, फाइब्रोसिस के पैटर्न, और सेलुलर घटनाओं के साथ उनका संबंध स्पष्ट नहीं है। त्रि-आयामी (3 डी) ईसीएम संरचना की बेहतर समझ अभी भी आवश्यक है, भले ही मास स्पेक्ट्रोमेट्री तकनीकों ने ईसीएम प्रोटीन संरचना 4 का विश्लेषण करने में मदद कीहै। परंपरागत रूप से, मैसन के ट्राइक्रोम दाग, पिकरो सिरियस रेड दाग, और दूसरी हार्मोनिक पीढ़ी (एसएचजी) इमेजिंग को दो-आयामी (2 डी) पतले यकृत वर्गों पर किया गया है। एनएएसएच के विशिष्ट फाइब्रोसिस पैटर्न को "चिकन तार" कहा जाता है, जो ज़ोन 3 तक फैला हुआ है और पेरिसिनसॉइडल / पेरीसेलुलर फाइब्रोसिस 5,6 है। हालांकि, देशी यकृत की 3 डी संरचना पर ध्यान केंद्रित करने वाले अध्ययनों की कमी रही है, विशेष रूप से वे जिनमें ऊतक अनुभागन शामिल नहीं है। यकृत फाइब्रोसिस में गतिशील ईसीएम रीमॉडेलिंग के दौरान फाइब्रोसिस के पैटर्न और विशेषताओं की पहचान करने के लिए मजबूत इमेजिंग दृष्टिकोण एनएएसएच तंत्र की समझ को काफी मजबूत करेगा और नए चिकित्सीय लक्ष्यों की पहचान करेगा।
इन चुनौतियों का समाधान करने के लिए, डीसेलुलराइजेशन7 के माध्यम से देशी यकृत ईसीएम की छवि बनाने के लिए एक तेज़ और कुशल प्रोटोकॉल अनुकूलित किया गया था। डिटर्जेंट छिड़काव के माध्यम से देशी 3 डी ईसीएम नेटवर्क को बनाए रखते हुए यकृत सेलुलर सामग्री को हटाने के लिए पूरे-यकृत डीसेल्युलराइजेशन एक दृष्टिकोण है। चूहों को 14 सप्ताह के लिए या तो चाउ या फास्ट-फूड आहार (एफएफडी) खिलाया गया था। ट्रिपल-हेलिकल और देशी फाइब्रिलर कोलेजन संरचनाओं को संरक्षित करने के लिए हल्के डिटर्जेंट और कम प्रवाह दर के साथ सीटू पोर्टल नस छिड़काव के बाद डीसेल्युलराइजेशन किया गया था। ईसीएम में कोलेजन संरचनाओं में परिवर्तन का विश्लेषण करने के लिए दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी लागू किया गया था। सामान्य और एनएएसएच लिवर में देशी ईसीएम संरचना की 3 डी छवियों का पुनर्गठन और विश्लेषण किया गया था। सीटू छिड़काव डीसेल्यूलराइजेशन में प्रदर्शन करना और दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा मचान का विश्लेषण करना यकृत में गतिशील ईसीएम रीमॉडेलिंग की कल्पना करने के लिए एक व्यावहारिक और किफायती मंच प्रदान करता है।

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		<tr>
			<td>4-0 MONOCRYL UNDYED 1 x 18&#34; P-3</td>
			<td>MONOCRYL</td>
			<td>Y494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 suture</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>10-000-649</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/monomid-nylon-non-absorbable-sutures-7/10000649?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AnaSed Injection (xylazine)</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td>this drug to use by or on the order of a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD INSYTE AUTOGUARD I.V. CATHETER WITH BC TECHNOLOGY</td>
			<td>BD</td>
			<td>382612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chow diet</td>
			<td>Envigo</td>
			<td># 2918</td>
			<td>Control diet. A fixed formula, non-autoclavable diet manufactured with high quality ingredients and designed to support gestation, lactation, and growth of rodents.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast-food diet (AIN76A Western Diet)</td>
			<td>Test Diet</td>
			<td>1810060</td>
			<td>https://www.testdiet.com/cs/groups/lolweb/@testdiet/documents/web_content/mdrf/mdux/~edisp/ducm04_051601.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-3502</td>
			<td>https://vectorlabs.com/hematoxylin-and-eosin-stain-kit.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kent Scientific Rat Surgical Kit</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>13-005-205</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/rat-surgical-kit/13005205#?keyword=mouse%20surgery%20kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>NDC 50989-996-06 - 10 mL - vial.</td>
			<td>KetaVed has been clinically studied in subhuman primates in addition to those species listed under Administration and Dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP5 upright Confocal, multi-photon</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer connector (Three-way stopcock with SPIN-LOCK&#174;)</td>
			<td>bbraun</td>
			<td>D300</td>
			<td>https://www.bbraunusa.com/en/products/b0/three-way-stopcockwithspin-lock.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrosirius Red Stain Kit</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>24901</td>
			<td>https://www.polysciences.com/default/picrosirius-red-stain-kit-40771</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rayon tipped applicator</td>
			<td>puritan</td>
			<td>25-806 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>sigmaaldrich</td>
			<td>D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrup</td>
			<td>www.target.com</td>
			<td>24 fl oz</td>
			<td>https://www.target.com/p/pancake-syrup-24-fl-oz-market-pantry-8482/-/A-13007801</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable Speed Peristaltic Pump</td>
			<td>INTLLAB</td>
			<td>BT100</td>
			<td>https://www.amazon.com/gp/product/B082K97W5W/ref=ox_sc_saved_title_2?smid=A12NUUP87ZRRAR&#38;psc=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>https://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium.html</td>
		</tr>
	</tbody>
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3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis

गैर-मादक स्टीटोहेपेटाइटिस (एनएएसएच) संयुक्त राज्य अमेरिका में सबसे आम पुरानी जिगर की बीमारी है, जो 70 मिलियन से अधिक अमेरिकियों को प्रभावित करती है। एनएएसएच फाइब्रोसिस और अंततः सिरोसिस में प्रगति कर सकता है, जो हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा के लिए एक महत्वपूर्ण जोखिम कारक है। बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) संरचनात्मक सहायता प्रदान करता है और मातृकोशिकीय संकेतों के माध्यम से यकृत होमियोस्टैसिस को बनाए रखता है। लिवर फाइब्रोसिस गतिशील ईसीएम रीमॉडेलिंग प्रक्रिया में असंतुलन के परिणामस्वरूप होता है और संरचनात्मक तत्वों के अत्यधिक संचय और ग्लाइकोसामिनोग्लाइकेन्स में संबंधित परिवर्तनों की विशेषता है। एनएएसएच के विशिष्ट फाइब्रोसिस पैटर्न को "चिकन तार" कहा जाता है, जिसमें आमतौर पर मैसन के ट्राइक्रोम दाग और पिकरोसिरियस रेड दाग द्वारा देखी गई विशेषताओं के आधार पर ज़ोन 3 पेरिसिनसॉइडल / पेरीसेलुलर फाइब्रोसिस होता है। हालांकि, ये पारंपरिक पतली दो-आयामी (2 डी) ऊतक स्लाइड-आधारित इमेजिंग तकनीक विस्तृत त्रि-आयामी (3 डी) ईसीएम संरचनात्मक परिवर्तनों का प्रदर्शन नहीं कर सकती है, जिससे यकृत फाइब्रोसिस में गतिशील ईसीएम रीमॉडेलिंग की समझ सीमित हो जाती है।
वर्तमान कार्य ने उपरोक्त चुनौतियों का समाधान करने के लिए डीसेल्यूलराइजेशन के माध्यम से यकृत में देशी ईसीएम संरचना की छवि बनाने के लिए एक तेज और कुशल प्रोटोकॉल का अनुकूलन किया। चूहों को 14 सप्ताह के लिए चाउ या फास्ट-फूड आहार के साथ खिलाया गया था। सीटू पोर्टल नस छिड़काव के बाद डीसेल्युलराइजेशन किया गया था, और दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी तकनीकों को देशी ईसीएम में परिवर्तनों की छवि और विश्लेषण करने के लिए लागू किया गया था। सामान्य और एनएएसएच लिवर की 3 डी छवियों का पुनर्गठन और विश्लेषण किया गया था। सीटू छिड़काव डीसेलुलराइजेशन में प्रदर्शन करना और दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा मचान का विश्लेषण करना यकृत में गतिशील ईसीएम रीमॉडेलिंग की कल्पना करने के लिए एक व्यावहारिक और विश्वसनीय मंच प्रदान करता है।

कोलेजन फाइबर को दूसरी हार्मोनिक पीढ़ी और दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी के साथ पता लगाया गया था। संकेत फ्रैंजिबल ट्रिपल-हेलिकल और देशी फाइब्रिलर कोलेजन संरचनाओं से है। कोलेजन उपप्रकारों का विश्लेषण करने क?...

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3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis

वर्तमान प्रोटोकॉल गैर-अल्कोहल स्टीटोहेपेटाइटिस (एनएएसएच) के दौरान बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) रीमॉडेलिंग की गतिशीलता की कल्पना करने के लिए एक विश्वसनीय मंच स्थापित करने के लिए सीटू छिड़काव / डीसेल्युलराइजेशन और दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी विधियों में यकृत का अनुकूलन करता है।

गैर-अल्कोहलिक स्टीटोहेपेटाइटिस के माउस मॉडल में लिवर एक्स्ट्रासेल्युलर मैट्रिक्स की 3 डी इमेजिंग

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most common chronic liver disease in the United States, affecting more than 70 million Americans. NASH can ...

एनएएसएच दुनिया में सबसे महत्वपूर्ण पुरानी जिगर की बीमारी में से एक है। यह फाइब्रोसिस, सिरोसिस और अंततः यकृत कैंसर में प्रगति कर सकता है। एनएएसएच में ईसीएम के गतिशील परिवर्तन का अध्ययन फाइब्रोसिस को बेहतर ढंग से समझने में मदद कर सकता है।पारंपरिक से इमेजिंग 3 डी ईसीएम संरचना परिवर्तनों का प्रदर्शन नहीं कर सकता है, यकृत फाइब्रोसिस में गतिशील ईसीएम रीमॉडेलिंग प्रक्रिया की समझ को सीमित करता है। शुरू करने के लिए, प्रक्रिया से पहले माउस का वजन करें। माउस को एनेस्थेटाइज करने के बाद हेयर क्लिपर का उपयोग करके वेंट्रल क्षेत्र को शेव करें और 70% इथेनॉल के साथ त्वचा को कीटाणुरहित करें।माउस को अपनी पीठ पर रखें और टेप के साथ सर्जिकल बोर्ड पर पैरों को स्थिर करें। पेट के निचले हिस्से में तीन सेंटीमीटर का चीरा लगाने के लिए मेयो कैंची और एडसन फोर्सप्स का उपयोग करें। और फिर छाती गुहा को खोले बिना पेट के निचले हिस्से से ज़िफॉइड प्रक्रिया तक लंबवत रूप से पांच सेंटीमीटर चीरा।पेरिटोनियम खोलने के बाद, धीरे से आंतों को जानवर के बाईं ओर रखें और पोर्टल नस को उजागर करने के लिए एक रेयान टिम्प्ड एप्लिकेटर के साथ यकृत के दाहिने लोब को ऊपर उठाएं। पोर्टल नस को कैथेटर करने के लिए, पोर्टल नस के बाहर के छोर में 24 गेज IV कैथेटर को प्रेरित करें। पोर्टल नस शाखाओं को यकृत लोब में बाहर निकालने से पहले कैथेटर टिप रखें।कैथेटर के नस में प्रवेश करने पर सुई को तुरंत वापस ले लें। जांचें कि कैथेटर को कैथेटर के माध्यम से एक मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करके पीबीएस के साथ यकृत को जोड़कर नस के अंदर सही ढंग से तैनात किया गया है। पोर्टल नस की शाखाओं के नीचे एक सिलाई रखने के लिए ड्यूमोंट माइक्रो फोर्स, एक कैस्ट्रोविजो माइक्रोनीडल और 4-0 सीवन का उपयोग करें और कैथेटर को सुरक्षित करने के लिए एक सेंटीमीटर नीचे दूसरा स्टिच करें।कैथेटर को एक मीटर लंबाई, तीन मिलीमीटर आंतरिक व्यास और 4.1 मिलीमीटर बाहरी व्यास के सिलिकॉन ट्यूबिंग से एक लालच कनेक्टर के साथ कनेक्ट करें। सिलिकॉन ट्यूबिंग को एक पेरिस्टालिक पंप और एक जलाशय से कनेक्ट करें जिसमें विआयनीकृत पानी होता है। ट्यूब के अंदर हवा के बुलबुले को सावधानीपूर्वक हटा दें और छिड़काव के दौरान नए बुलबुले पैदा करने से बचें।पेरिस्टालिक पंप को 0.2 मिलीलीटर प्रति मिनट के प्रवाह उत्पादन पर सेट करें। दो घंटे के लिए विआयनीकृत पानी के साथ पहले अवलोकन करें और छिड़काव के दौरान यकृत का रंग लाल से पीले रंग में बदल जाएगा। छिड़काव समाधान को 0.5% सोडियम डीऑक्सीकोलेट पर स्विच करें और रात भर जारी रखें और छिड़काव के अंत में यकृत सफेद हो जाएगा।छिड़काव समाधान को विआयनीकृत पानी में स्विच करें और दो घंटे के लिए छिड़काव करें। डीसेल्यूलराइज्ड लीवर को इकट्ठा करने के लिए ड्यूमोंट माइक्रो फोर्स और माइक्रोस स्प्रिंगिंग कैंची का उपयोग करें और इसे पीबीएस के साथ पेट्री डिश में सावधानी से धोएं। डीसेल्यूलराइज्ड लिवर के एक छोटे से टुकड़े को माइक्रोस्कोप स्लाइड में स्थानांतरित करें और ऊतक को बीच में रखें।ऊतक सुखाने से बचने के लिए पिपेट के साथ ऊतक में एंटीफेड माउंटिंग माध्यम के 10 माइक्रोलीटर जोड़ें। ऊतक को कवर ग्लास के साथ कवर करें और नमूने को समतल करने के लिए एक छोटा बल लागू करें। रंगहीन और पारदर्शी नेल पॉलिश के साथ कवर ग्लास के किनारों को सील करें।कवर ग्लास के शीर्ष पर विसर्जन तेल की एक बूंद रखें और माइक्रोस्कोप स्लाइड धारक पर स्लाइड रखें। 20एक्स तेल उद्देश्य लेंस को कम करें जब तक कि यह विसर्जन तेल से संपर्क न करे। तरंगदैर्ध्य 405 नैनोमीटर के बैंगनी चैनल पर स्विच करें।शटर चालू करें और नमूना केंद्रित करें। इमेजिंग के लिए रुचि के क्षेत्र को नेविगेट करें और स्थिति दें। लेजर लाइट का उपयोग करके छवि अधिग्रहण पर जाने से पहले शटर बंद करें।दो फोटॉन लेजर शुरू करने के लिए, कंप्यूटर नियंत्रण पर स्विच करें और पहले दो फोटॉन लेजर चालू करें। फिर दो फोटॉन लेजर नियंत्रक और शटर चालू करें यह सुनिश्चित करते हुए कि आउटपुट पावर 2.5 वाट से अधिक है। प्रतिदीप्ति शमन को रोकने के लिए लेजर शक्ति को कम करें।चुने हुए फ्लोरोफोरे को समायोजित करने के लिए फोटो गुणक और हाइब्रिड दोनों डिटेक्टरों का चयन करें और समायोजित करें। एक साथ या अनुक्रमिक छवि अधिग्रहण चुनें। पिनहोल को उच्चतम मान पर समायोजित करें।लेजर तरंग दैर्ध्य समायोजित करें, लाभ, शक्ति, पिक्सेल निवास समय, पिक्सेल आकार औसत और ज़ूम को ऑफसेट करें। कंप्यूटर Z नियंत्रक स्क्रॉल करें और Z आयाम सेट करें। प्रारंभ और समापन बिंदुओं को परिभाषित करें और वॉल्यूम के भीतर दी गई छवियों की संख्या चुनें।छवियाँ प्राप्त करें. दो फोटॉन माइक्रोस्कोपी करने के बाद, डीसेलुलराइजेशन के बिना कोलेजन फाइबर ने कोलेजन नेटवर्क की कम रिज़ॉल्यूशन छवि का खुलासा किया। डीसेल्यूलराइज्ड एक्स्ट्रासेल्युलर मैट्रिक्स में, चाउ और फास्ट फूड आहार यकृत के बीच आकृति विज्ञान और स्थानिक वितरण में स्पष्ट अंतर देखा गया था।चाउ आहार पर कोलेजन फाइबर और चूहों ने एक इंटरवीविंग और अच्छी तरह से संगठित नेटवर्क का प्रदर्शन किया, जबकि फास्ट फूड आहार पर चूहों ने कम कनेक्टिविटी के साथ कोलेजन बंडल दिखाए। यकृत बाह्य मैट्रिक्स की तीन आयामी संरचना से पता चलता है कि चाउ आहार पर चूहों में कोलेजन फाइबर ने एक अच्छी तरह से संगठित नेटवर्क दिखाया, लेकिन फास्ट फूड आहार चूहों में नहीं। डीसेलुलराइज्ड एक्स्ट्रासेल्युलर मैट्रिक्स में फाइब्रिलर कोलेजन की गुणवत्ता की पुष्टि करने के लिए, स्लाइड्स को हेमेटॉक्सिलिन ईओसिन और पिकरोसिरियस लाल रंग से दाग दिया गया था।हेमेटॉक्सिलिन और ईओसिन से पता चलता है कि सभी कोशिकाओं को हटा दिया गया है। पिकरोसिरियस लाल धुंधला छवियों में, चाउ खिलाए गए चूहों से बाह्य मैट्रिक्स ने एक सुव्यवस्थित नेटवर्क का खुलासा किया। और इसके विपरीत, फास्ट फूड आहार पर चूहों ने सघन कोलेजन फाइबर दिखाया।छिड़काव से पहले एक ट्यूब के अंदर बुलबुले को सावधानीपूर्वक हटा दें। बुलबुला यकृत में पोत को अवरुद्ध करेगा और छिड़काव को प्रभावित करेगा।

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

मौखिक स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा के एक Orthotopic माउस मॉडल में ट्यूमर सेल आक्रमण की मल्टी फोटॉन इमेजिंग

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

Ciliopathy माउस उत्परिवर्ती कोक्लीअ में Planar सेल Polarity phenotypes का मूल्यांकन

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

सामरिक Endothelial सेल ट्यूब गठन परख: मुकाबले बाह्य मैट्रिक्स और विकास फैक्टर कम बाह्य मैट्रिक्स

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

माउस के Isometric सिकुड़ना माप Mesenteric धमनी का उपयोग तार Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

गैर शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस (नैश) संकल्प का आकलन करने के लिए चूहों में एक जीवित जिगर बायोप्सी प्रक्रिया का समावेश

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

लिवर बायोलॉजी के एक पूर्व वीवो मॉडल के रूप में Murine परिशुद्धता-कट जिगर स्लाइस

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Drug Treatment by Central Venous Catheter in a Mouse Model of Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm and Monitoring by 3D Ultrasound

एंजियोटेंसिन द्वितीय प्रेरित पेट महाधमनी धमनीविस्फार के माउस मॉडल में केंद्रीय शिरापरक कैथेटर द्वारा दवा उपचार और 3 डी अल्ट्रासाउंड द्वारा निगरानी

Since pharmaceutical treatment options are lacking in the clinical management of abdominal aortic aneurysm (AAA), animal models, in particular mouse ...

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

एक पाल्मिटिक एसिड-प्रेरित इन विट्रो मॉडल में गैर-अल्कोहल फैटी लीवर रोग पर प्लाटिकोडिन डी के सुरक्षात्मक प्रभावों की जांच

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...

Delivery of Cardioactive Therapeutics in a Porcine Myocardial Infarction Model

पोर्सिन मायोकार्डियल रोधगलन मॉडल में कार्डियोएक्टिव थेरेप्यूटिक्स का वितरण

Myocardial infarction is one of the leading causes of death and disability worldwide, and there is an urgent need for novel cardioprotective or ...

Liver Transplantation in Mouse and Analyzing Allograft Patency

Successful Orthotopic Liver Transplantation in Mice Utilizing Microcomputed Tomography Angiography

Enhancing Transplantation Research Through MicroCT Angiography in Murine Models (Video) | JoVE

माइक्रोकंप्यूटेड टोमोग्राफी एंजियोग्राफी का उपयोग करके चूहों में सफल ऑर्थोटोपिक लिवर प्रत्यारोपण

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality ...