Name: 3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis
Uploaded: 2022-02-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis at JoVE.com

Vi takker Hyesuk Park for teknisk hjelp. Denne forskningen ble støttet av finansiering fra National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK), NIH (R01 2DK083283, til NJT), National Institute on Aging (NIA), NIH (1R01AG060726, til NJT). Vi takker Jon Mulholland og Kitty Lee fra Cell Sciences Imaging Facility i Beckman Center for teknisk assistanse med to-foton mikroskopiavbildning.

Dyreforsøk utføres i henhold til eksperimentelle prosedyrer godkjent av institusjonelle dyrepleie- og brukskomiteer (IACUC) ved Stanford University og Veterans Affairs Hospital i Palo Alto. 6-8 uker gamle mannlige C57BL / 6J-mus ble matet enten chow eller en fastfood diett supplert med 4,2% høy fruktose mais sirup (se tabell over materialer) i drikkevann i 14 uker5. Musene ble holdt i standardbur i en 12 timers mørk / lys syklus.
1. Kirurgisk ...

<ol>
	<li>Friedman, S. L., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+fibrosis:+2022+unmet+needs+and+a+blueprint+for+the+future.">Hepatic fibrosis: 2022 unmet needs and a blueprint for the future.</a> Hepatology. 75 (2), 473-488 (2021).</li><li>Ye, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence,+incidence,+and+outcomes+of+non-obese+or+lean+non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence, incidence, and outcomes of non-obese or lean non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Gastroenterology and Hepatology. 5 (8), 739-752 (2020).</li><li>Schwabe, R. F., Tabas, I., Pajvani, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+fibrosis+development+in+non-alcoholic+steatohepatitis.">Mechanisms of fibrosis development in non-alcoholic steatohepatitis.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1913-1928 (2020).</li><li>Arteel, G. E., Naba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+liver+matrisome+-+looking+beyond+collagens.">The liver matrisome - looking beyond collagens.</a> JHEP Reports. 2 (4), 100115 (2020).</li><li>Jiang, J. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonphagocytic+activation+of+NOX2+is+implicated+in+progressive+non-alcoholic+steatohepatitis+during+aging.">Nonphagocytic activation of NOX2 is implicated in progressive non-alcoholic steatohepatitis during aging.</a> Hepatology. 72 (4), 1204-1218 (2020).</li><li>Dehnad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGER1+downregulation+associates+with+fibrosis+in+non-alcoholic+steatohepatitis+and+type+2+diabetes.">AGER1 downregulation associates with fibrosis in non-alcoholic steatohepatitis and type 2 diabetes.</a> Journal of Clinical Investigation. 130 (8), 4320-4330 (2020).</li><li>Mayorca-Guiliani, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+and+antibody+staining+of+mouse+tissues+to+map+native+extracellular+matrix+structures+in+3D.">Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D.</a> Nature Protocols. 14 (12), 3395-3425 (2019).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cirrhotic+human+liver+extracellular+matrix+3D+scaffolds+promote+smad-dependent+tgf-beta1+epithelial+mesenchymal+transition.">Cirrhotic human liver extracellular matrix 3D scaffolds promote smad-dependent tgf-beta1 epithelial mesenchymal transition.</a> Cells. 9 (1), 83 (2019).</li><li>Klaas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alterations+in+the+extracellular+matrix+composition+guide+the+repair+of+damaged+liver+tissue.">The alterations in the extracellular matrix composition guide the repair of damaged liver tissue.</a> Scientific Reports. 6, 27398 (2016).</li><li>Mattei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanostructure+and+composition+of+highly+reproducible+decellularized+liver+matrices.">Mechanostructure and composition of highly reproducible decellularized liver matrices.</a> Acta Biomaterialia. 10 (2), 875-882 (2014).</li><li>Ren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+two+decellularization+methods+in+the+development+of+a+whole-organ+decellularized+rat+liver+scaffold.">Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold.</a> Liver International. 33 (3), 448-458 (2013).</li><li>Piersma, B., Hayward, M. K., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrosis+and+cancer:+A+strained+relationship.">Fibrosis and cancer: A strained relationship.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1873 (2), 188356 (2020).</li><li>Cox, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+matrix+in+cancer.">The matrix in cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 21 (4), 217-238 (2021).</li><li>Mirdamadi, E. S., Kalhori, D., Zakeri, N., Azarpira, N., Solati-Hashjin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+tissue+engineering+as+an+emerging+alternative+for+liver+disease+treatment.">Liver tissue engineering as an emerging alternative for liver disease treatment.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (2), 145-163 (2020).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+human+liver+as+a+natural+3D-scaffold+for+liver+bioengineering+and+transplantation.">Decellularized human liver as a natural 3D-scaffold for liver bioengineering and transplantation.</a> Scientific Reports. 5, 13079 (2015).</li><li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+culture+system+for+liver+tissue+mimicking+hepatic+plates+for+improvement+of+human+hepatocyte+(C3A)+function+and+polarity.">3D culture system for liver tissue mimicking hepatic plates for improvement of human hepatocyte (C3A) function and polarity.</a> BioMed Research International. 2020, 6354183 (2020).</li><li>Shimoda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+liver+scaffolds+promote+liver+regeneration+after+partial+hepatectomy.">Decellularized liver scaffolds promote liver regeneration after partial hepatectomy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 12543 (2019).</li></ol>

Den nåværende protokollen viser at decellularisering gjennom en lav strømningshastighet DOC in situ perfusjon bevarer de skjørbare trippelspiralformede og native fibrillære kollagenstrukturene, og gir en pålitelig og kostnadseffektiv plattform for å fange dynamisk ECM-remodellering i NASH leverfibrose. Selv om decellularisering ble utført i normale og fibrotiske lever før identifisering av ECM-komponenter eller generering av biologiske stillaser for cellekultur, har dynamikken i ECM-remodellering i leve...

Ikke-alkoholholdig fettleversykdom (NAFLD) er den vanligste leversykdommen, som påvirker 20% -25% av den voksne befolkningen. 25% av NAFLD-pasientene utvikler seg til ikke-alkoholisk steatohepatitt (NASH), hvor risikoen for skrumplever, leversvikt og hepatocellulært karsinom øker1. I de neste 20 årene er det anslått at NASH vil stå for 2 millioner leverrelaterte dødsfall i USA2. Siden det ikke finnes godkjente behandlinger, er det et presserende behov for å tyde mekanismene som forårsaker leverfibrose hos NASH-pasienter og utvikle målrettet behandling3.
Den ekstracellulære matrisen (ECM) er et dynamisk, komplekst mikromiljø som utøver toveis kommunikasjon med celler for å regulere vevshomeostase4. Leveren ECM består av strukturelle elementer som proteoglykaner, kollagen, fibronektin, elastin og andre ikke-strukturelle proteiner (f.eks. olfactomedin og trombospondin) for å gi fysisk og strukturell støtte4.
Leverfibrose er en kronisk sårhelingsrespons på leverskade av ulike etiologier, inkludert NASH3. Det skyldes en ubalanse i den dynamiske ECM-matrisemodelleringsprosessen og er preget av overdreven strukturelle proteiner i den skadede leveren4. Fibrogenese avhenger av den dynamiske celle-cellekommunikasjonen mellom forskjellige levercelletyper. Hepatiske stellatceller (HSC), når de aktiveres, skiller seg ut i Smooth Muscle Alpha 2 Actin-uttrykkende, migrerende og prolifererende myofibroblastlignende celler og syntetiserer ECM-proteiner som en sårlukkende virkning. Aktiverte HSCs er de sentrale kollagenproduserende cellene i leveren1.
Den molekylære mekanismen for ECM-remodellering, mønstre av fibrose og deres forhold til cellulære hendelser er ikke klare. En bedre forståelse av den tredimensjonale (3D) ECM-strukturen er fortsatt nødvendig, selv om massespektrometriteknikker har bidratt til å analysere ECM-proteinsammensetning4. Tradisjonelt har Massons trichrome flekk, Picro Sirius Red flekker og andre harmoniske generasjon (SHG) avbildning blitt utført på todimensjonale (2D) tynne leverseksjoner. Det typiske fibrosemønsteret til NASH kalles "kyllingeting", som strekker seg til sone 3 og er perisinusoidal / pericellulær fibrose 5,6. Imidlertid har det vært mangel på studier som fokuserer på 3D-strukturen til den opprinnelige leveren, spesielt de som ikke involverer vevsseksjonering. Robuste bildebehandlingsmetoder for å identifisere mønstre og karakteristika ved fibrose gjennom dynamisk ECM-remodellering ved leverfibrose vil styrke forståelsen av NASH-mekanismer betydelig og identifisere nye terapeutiske mål.
For å møte disse utfordringene ble en rask og effektiv protokoll optimalisert for å avbilde den opprinnelige lever-ECM via decellularisering7. Decellularisering av hele leveren er en tilnærming for å fjerne det hepatiske cellulære innholdet samtidig som det opprinnelige 3D ECM-nettverket opprettholdes gjennom vaskemiddelperfusjon. Mus ble matet enten chow eller fast-food diett (FFD) i 14 uker. Decellularisering ble utført etter in situ portveneperfusjon med mildt vaskemiddel og lave strømningshastigheter for å bevare trippelspiralformede og native fibrillære kollagenstrukturer. To-foton mikroskopi ble brukt for å analysere endringer i kollagenstrukturer i ECM. 3D-bildene av den opprinnelige ECM-strukturen i normal- og NASH-lever ble rekonstituert og analysert. Å utføre in situ perfusjonsdecellularisering og analysere stillaset ved to-foton mikroskopi gir en praktisk og rimelig plattform for å visualisere den dynamiske ECM-remodelleringen i leveren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 MONOCRYL UNDYED 1 x 18&#34; P-3</td>
			<td>MONOCRYL</td>
			<td>Y494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 suture</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>10-000-649</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/monomid-nylon-non-absorbable-sutures-7/10000649?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AnaSed Injection (xylazine)</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td>this drug to use by or on the order of a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD INSYTE AUTOGUARD I.V. CATHETER WITH BC TECHNOLOGY</td>
			<td>BD</td>
			<td>382612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chow diet</td>
			<td>Envigo</td>
			<td># 2918</td>
			<td>Control diet. A fixed formula, non-autoclavable diet manufactured with high quality ingredients and designed to support gestation, lactation, and growth of rodents.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast-food diet (AIN76A Western Diet)</td>
			<td>Test Diet</td>
			<td>1810060</td>
			<td>https://www.testdiet.com/cs/groups/lolweb/@testdiet/documents/web_content/mdrf/mdux/~edisp/ducm04_051601.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-3502</td>
			<td>https://vectorlabs.com/hematoxylin-and-eosin-stain-kit.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kent Scientific Rat Surgical Kit</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>13-005-205</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/rat-surgical-kit/13005205#?keyword=mouse%20surgery%20kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>NDC 50989-996-06 - 10 mL - vial.</td>
			<td>KetaVed has been clinically studied in subhuman primates in addition to those species listed under Administration and Dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP5 upright Confocal, multi-photon</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer connector (Three-way stopcock with SPIN-LOCK&#174;)</td>
			<td>bbraun</td>
			<td>D300</td>
			<td>https://www.bbraunusa.com/en/products/b0/three-way-stopcockwithspin-lock.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrosirius Red Stain Kit</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>24901</td>
			<td>https://www.polysciences.com/default/picrosirius-red-stain-kit-40771</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rayon tipped applicator</td>
			<td>puritan</td>
			<td>25-806 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>sigmaaldrich</td>
			<td>D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrup</td>
			<td>www.target.com</td>
			<td>24 fl oz</td>
			<td>https://www.target.com/p/pancake-syrup-24-fl-oz-market-pantry-8482/-/A-13007801</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable Speed Peristaltic Pump</td>
			<td>INTLLAB</td>
			<td>BT100</td>
			<td>https://www.amazon.com/gp/product/B082K97W5W/ref=ox_sc_saved_title_2?smid=A12NUUP87ZRRAR&#38;psc=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>https://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium.html</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis

Ikke-alkoholisk steatohepatitt (NASH) er den vanligste kroniske leversykdommen i USA, som påvirker mer enn 70 millioner amerikanere. NASH kan utvikle seg til fibrose og til slutt til skrumplever, en betydelig risikofaktor for hepatocellulært karsinom. Den ekstracellulære matriksen (ECM) gir strukturell støtte og opprettholder leverhomeostase via matricellulære signaler. Leverfibrose skyldes en ubalanse i den dynamiske ECM-remodelleringsprosessen og er preget av overdreven akkumulering av strukturelle elementer og tilhørende endringer i glykosaminoglykaner. Det typiske fibrosemønsteret til NASH kalles "kyllingeting", som vanligvis består av sone 3 perisinusoidal / pericellulær fibrose, basert på funksjoner observert av Massons trikrome flekk og Picrosirius Red flekker. Imidlertid kan disse tradisjonelle tynne todimensjonale (2D) vevslysbildebaserte bildebehandlingsteknikkene ikke demonstrere de detaljerte tredimensjonale (3D) ECM-strukturelle endringene, noe som begrenser forståelsen av den dynamiske ECM-remodelleringen i leverfibrose.
Det nåværende arbeidet optimaliserte en rask og effektiv protokoll for å avbilde den opprinnelige ECM-strukturen i leveren via decellularisering for å løse de ovennevnte utfordringene. Mus ble matet enten med chow eller fastfood diett i 14 uker. Decellularisering ble utført etter in situ portveneperfusjon, og tofotonmikroskopiteknikkene ble anvendt til å avbilde og analysere forandringer i native ECM. 3D-bildene av normal- og NASH-lever ble rekonstituert og analysert. Å utføre in situ perfusjonsdecellularisering og analysere stillaset ved to-foton mikroskopi ga en praktisk og pålitelig plattform for å visualisere den dynamiske ECM-remodelleringen i leveren.

Kollagenfibrene ble påvist ved andre harmoniske generasjon og to-foton mikroskopi. Signalet er fra de skjørbare trippelspiralformede og innfødte fibrillære kollagenstrukturene. Spesifikke antistoffer ble ikke brukt til å analysere kollagensubtyper; Dette kan imidlertid legges til bildebehandlingsteknikken.
Når levervevet studeres uten decellularisering, er det utfordrende å få høyoppløselige bilder av kollagennettverket (figur 5A). I dec...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis at JoVE.com

3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis

Den nåværende protokollen optimaliserer leveren in situ perfusjon / decellularisering og to-foton mikroskopi metoder for å etablere en pålitelig plattform for å visualisere dynamikken i ekstracellulær matriks (ECM) remodeling under ikke-alkoholisk steatohepatitt (NASH).

3D-avbildning av leverens ekstracellulære matriks i en musemodell av ikke-alkoholisk steatohepatitt

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most common chronic liver disease in the United States, affecting more than 70 million Americans. NASH can ...

NASH er en av de viktigste kroniske leversykdommene i verden. Det kan utvikle seg til fibrose, skrumplever, og til slutt leverkreft. Studere den dynamiske endringen av ECM i NASH kan bidra til å forstå fibrose bedre.Tradisjonell til avbildning kan ikke demonstrere 3D ECM-strukturendringer, noe som begrenser forståelsen av dynamisk ECM-remodelleringsprosess i leverfibrose. For å begynne, veie musen før prosedyren. Etter bedøvelse barberer musen det ventrale området ved hjelp av en hårklipper og desinfiserer huden med 70% etanol.Plasser musen på ryggen og immobiliser bena på operasjonsbordet med tape. Bruk Mayo saks og Adson tang for å lage et tre centimeter snitt lateralt i underlivet. Og så et fem centimeter snitt vertikalt fra underlivet til xiphoidprosessen uten å åpne brysthulen.Etter å ha åpnet bukhinnen, plasser forsiktig tarmene til dyrets venstre og løft høyre lobe av leveren med en rayon tipped applikator for å eksponere portalvenen. For å kateterisere portvenen, indusere et 24 gauge IV kateter inn i den distale enden av portalvenen. Plasser kateterspissen før portalvenen forgrener seg ut i leverlappene.Trekk ut nålen umiddelbart når kateteret kommer inn i venen. Kontroller at kateteret er riktig plassert inne i venen ved å perfusjonere leveren med PBS ved hjelp av en milliliter sprøyte via kateteret. Bruk Dumont mikrotang, en Castroviejo mikronål og 4-0 sutur for å plassere en søm under forgreningen av portalvenen og en annen søm en centimeter under for å feste kateteret.Koble kateteret til et silikonrør med en meter lengde, tre millimeter indre diameter og 4,1 millimeter ytre diameter med lokkekobling. Koble silikonslangen til en peristaltisk pumpe og et reservoar som inneholder avionisert vann. Fjern forsiktig luftboblene inne i slangen og unngå å generere nye bobler under perfusjonen.Sett den peristaltiske pumpen med en strømningseffekt på 0,2 milliliter per minutt. Les først med avionisert vann i to timer, og fargen på leveren vil skifte fra rød til gul under perfusjon. Bytt perfusjonsoppløsningen til 0,5 % natriumdeoksykolat og fortsett over natten, så blir leveren hvit på slutten av perfusjonen.Bytt perfusjonsoppløsningen til avionisert vann og perfus i to timer. Bruk Dumont mikrotang og mikros springende saks for å samle den decellulariserte leveren og vask den forsiktig i en petriskål med PBS. Overfør et lite stykke decellularisert lever til et mikroskopglass og plasser vevet i midten.Tilsett 10 mikroliter antifademonteringsmedium til vevet med en pipette for å unngå tørking av vev. Dekk vevet med et dekselglass og påfør en liten kraft for å flate prøven. Forsegl kantene på dekselglasset med fargeløs og gjennomsiktig neglelakk.Plasser en dråpe nedsenkningsolje på toppen av dekselglasset og plasser lysbildet på mikroskopglideholderen. Senk objektivlinsen på 20X oljen til den kommer i kontakt med nedsenkningsoljen. Bytt til den fiolette kanalen med bølgelengde 405 nanometer.Slå på lukkeren og fokuser prøven. Naviger og plasser interesseområdet for avbildning. Slå av lukkeren før du går over til bildeopptak ved hjelp av laserlys.For å starte de to fotonlaserne, bytt til datamaskinkontrollen og slå på tofotonlaseren først. Slå deretter på de to fotonlaserkontrollerne og lukkeren, slik at utgangseffekten er høyere enn 2,5 watt. Reduser lasereffekten for å forhindre fluorescensslukking.Velg og juster detektorer både fotomultiplikatorer og hybrid for å imøtekomme de valgte fluoroforene. Velg samtidige eller sekvensielle bildeopptak. Juster knappenålshullet til den høyeste verdien.Juster laserbølgelengder, forsterkning, kraft, forskyvning av pikseloppholdstid, gjennomsnitt av pikselstørrelse og zoom. Rull datamaskinens Z-kontroller og angi Z-dimensjonene. Definer start- og sluttpunktene og velg antall bilder gitt i et volum.Skaff bilder. Etter å ha utført de to fotonmikroskopiene, avslørte kollagenfibre uten decellularisering et lavoppløselig bilde av kollagennettverket. I den decellulariserte ekstracellulære matriksen ble det observert tydelige forskjeller i morfologi og romlig fordeling mellom chow og hurtigmatdiettlever.Kollagenfibre og mus på en chow diett viste et sammenvevd og godt organisert nettverk, mens musene på fastfood diett viste kollagenbunter med mindre tilkobling. Den tredimensjonale strukturen i leveren ekstracellulær matrise viser at kollagenfibrene i mus på chow-dietten viste et godt organisert nettverk, men ikke i fastfood diettmus. For å bekrefte kvaliteten på det fibrillære kollagenet i den decellulariserte ekstracellulære matrisen ble lysbildene farget med hematoksylin, eosin og Picrosirius rød.Hematoksylin og Eosin viser at alle cellene er fjernet. I Picrosirius røde fargebilder avslørte den ekstracellulære matrisen fra chow-matede mus et godt organisert nettverk. Og i kontrast viste mus på fastfood diett tettere kollagenfibre.Fjern forsiktig boblen inne i et rør før perfusjonen. Boblen vil blokkere karet i leveren og påvirke perfusjonen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

Evaluering av Planar-Cell-polaritet fenotyper i Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

Strategisk endotelcelle Tube Dannelse analyse: Sammenligning ekstracellulær matriks og Growth Factor Redusert ekstracellulær matriks

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk Contractility måling av musen hvem arterien bruker Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

Innlemmelse av en overlevingsdyktige leveren biopsiprosedyre i mus å vurdere alkoholfrie Steatohepatitis (NASH) oppløsning

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Murine Precision-Cut Leverskiver som en Ex Vivo-modell av leverbiologi

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Drug Treatment by Central Venous Catheter in a Mouse Model of Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm and Monitoring by 3D Ultrasound

Medikamentell behandling med sentralt venekateter i musemodell av angiotensin II-indusert abdominal aortaaneurisme og overvåking ved 3D-ultralyd

Since pharmaceutical treatment options are lacking in the clinical management of abdominal aortic aneurysm (AAA), animal models, in particular mouse ...

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Undersøke de beskyttende effektene av platycodin d på ikke-alkoholholdig fettleversykdom i en palmitinsyreindusert in vitro-modell

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...

Delivery of Cardioactive Therapeutics in a Porcine Myocardial Infarction Model

Levering av kardioaktive terapier i en myokardinfarktmodell hos svin

Myocardial infarction is one of the leading causes of death and disability worldwide, and there is an urgent need for novel cardioprotective or ...

Liver Transplantation in Mouse and Analyzing Allograft Patency

Successful Orthotopic Liver Transplantation in Mice Utilizing Microcomputed Tomography Angiography

Enhancing Transplantation Research Through MicroCT Angiography in Murine Models (Video) | JoVE

Vellykket ortotopisk levertransplantasjon hos mus ved bruk av mikrocomputertomografi angiografi

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality ...