Name: 3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis
Uploaded: 2022-02-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis at JoVE.com

Vi tackar Hyesuk Park för den tekniska hjälpen. Denna forskning stöddes av finansiering från National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK), NIH (R01 2DK083283, till NJT), National Institute on Aging (NIA), NIH (1R01AG060726, till NJT). Vi tackar Jon Mulholland och Kitty Lee från Cell Sciences Imaging Facility i Beckman Center för teknisk hjälp med tvåfotonmikroskopiavbildning.

Djurförsök utförs enligt de experimentella förfaranden som godkänts av de institutionella djurvårds- och användningskommittéerna (IACUCs) vid Stanford University och Veterans Affairs Hospital i Palo Alto. 6-8 veckor gamla manliga C57BL / 6J-möss matades antingen chow eller en snabbmatdiet kompletterad med 4,2% majssirap med hög fruktos (se materialtabell) i dricksvatten i 14 veckor5. Mössen hölls i standardburar vid en 12 h mörk / ljus cykel.
<p class="jove_title"...

<ol>
	<li>Friedman, S. L., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+fibrosis:+2022+unmet+needs+and+a+blueprint+for+the+future.">Hepatic fibrosis: 2022 unmet needs and a blueprint for the future.</a> Hepatology. 75 (2), 473-488 (2021).</li><li>Ye, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence,+incidence,+and+outcomes+of+non-obese+or+lean+non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence, incidence, and outcomes of non-obese or lean non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Gastroenterology and Hepatology. 5 (8), 739-752 (2020).</li><li>Schwabe, R. F., Tabas, I., Pajvani, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+fibrosis+development+in+non-alcoholic+steatohepatitis.">Mechanisms of fibrosis development in non-alcoholic steatohepatitis.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1913-1928 (2020).</li><li>Arteel, G. E., Naba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+liver+matrisome+-+looking+beyond+collagens.">The liver matrisome - looking beyond collagens.</a> JHEP Reports. 2 (4), 100115 (2020).</li><li>Jiang, J. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonphagocytic+activation+of+NOX2+is+implicated+in+progressive+non-alcoholic+steatohepatitis+during+aging.">Nonphagocytic activation of NOX2 is implicated in progressive non-alcoholic steatohepatitis during aging.</a> Hepatology. 72 (4), 1204-1218 (2020).</li><li>Dehnad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGER1+downregulation+associates+with+fibrosis+in+non-alcoholic+steatohepatitis+and+type+2+diabetes.">AGER1 downregulation associates with fibrosis in non-alcoholic steatohepatitis and type 2 diabetes.</a> Journal of Clinical Investigation. 130 (8), 4320-4330 (2020).</li><li>Mayorca-Guiliani, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+and+antibody+staining+of+mouse+tissues+to+map+native+extracellular+matrix+structures+in+3D.">Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D.</a> Nature Protocols. 14 (12), 3395-3425 (2019).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cirrhotic+human+liver+extracellular+matrix+3D+scaffolds+promote+smad-dependent+tgf-beta1+epithelial+mesenchymal+transition.">Cirrhotic human liver extracellular matrix 3D scaffolds promote smad-dependent tgf-beta1 epithelial mesenchymal transition.</a> Cells. 9 (1), 83 (2019).</li><li>Klaas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alterations+in+the+extracellular+matrix+composition+guide+the+repair+of+damaged+liver+tissue.">The alterations in the extracellular matrix composition guide the repair of damaged liver tissue.</a> Scientific Reports. 6, 27398 (2016).</li><li>Mattei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanostructure+and+composition+of+highly+reproducible+decellularized+liver+matrices.">Mechanostructure and composition of highly reproducible decellularized liver matrices.</a> Acta Biomaterialia. 10 (2), 875-882 (2014).</li><li>Ren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+two+decellularization+methods+in+the+development+of+a+whole-organ+decellularized+rat+liver+scaffold.">Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold.</a> Liver International. 33 (3), 448-458 (2013).</li><li>Piersma, B., Hayward, M. K., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrosis+and+cancer:+A+strained+relationship.">Fibrosis and cancer: A strained relationship.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1873 (2), 188356 (2020).</li><li>Cox, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+matrix+in+cancer.">The matrix in cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 21 (4), 217-238 (2021).</li><li>Mirdamadi, E. S., Kalhori, D., Zakeri, N., Azarpira, N., Solati-Hashjin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+tissue+engineering+as+an+emerging+alternative+for+liver+disease+treatment.">Liver tissue engineering as an emerging alternative for liver disease treatment.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (2), 145-163 (2020).</li><li>Mazza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+human+liver+as+a+natural+3D-scaffold+for+liver+bioengineering+and+transplantation.">Decellularized human liver as a natural 3D-scaffold for liver bioengineering and transplantation.</a> Scientific Reports. 5, 13079 (2015).</li><li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+culture+system+for+liver+tissue+mimicking+hepatic+plates+for+improvement+of+human+hepatocyte+(C3A)+function+and+polarity.">3D culture system for liver tissue mimicking hepatic plates for improvement of human hepatocyte (C3A) function and polarity.</a> BioMed Research International. 2020, 6354183 (2020).</li><li>Shimoda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+liver+scaffolds+promote+liver+regeneration+after+partial+hepatectomy.">Decellularized liver scaffolds promote liver regeneration after partial hepatectomy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 12543 (2019).</li></ol>

Det nuvarande protokollet visar att decellularisering genom en låg flödeshastighet DOC in situ perfusion bevarar de frangible trippelspiralformade och inhemska fibrillära kollagenstrukturerna, vilket ger en pålitlig och kostnadseffektiv plattform för att fånga dynamisk ECM-remodellering i NASH-leverfibros. Även om decellularisering utfördes i normala och fibrotiska lever innan ECM-komponenter identifierades eller biologiska byggnadsställningar genererades för cellodling, har dynamiken i ECM-remodelleri...

Icke-alkoholhaltig fettleversjukdom (NAFLD) är den vanligaste leversjukdomen och drabbar 20% -25% av den vuxna befolkningen. 25% av NAFLD-patienterna utvecklas till alkoholfri steatohepatit (NASH), där risken för cirros, leversvikt och hepatocellulärt karcinom ökar1. Under de kommande 20 åren beräknas NASH stå för 2 miljoner leverrelaterade dödsfall i USA2. Eftersom det inte finns några godkända behandlingar finns det ett akut behov av att dechiffrera de mekanismer som orsakar leverfibros hos NASH-patienter och utveckla riktad behandling3.
Den extracellulära matrisen (ECM) är en dynamisk, komplex mikromiljö som utövar dubbelriktad kommunikation med celler för att reglera vävnadshomeostas4. Leverns ECM består av strukturella element såsom proteoglykaner, kollagener, fibronektin, elastin och andra icke-strukturella proteiner (t.ex. olfactomedin och trombospondin) för att ge fysiskt och strukturellt stöd4.
Leverfibros är ett kroniskt sårläkningssvar på leverskador av olika etiologier, inklusive NASH3. Det beror på en obalans i den dynamiska ECM-matrisremodelleringsprocessen och kännetecknas av överdrivna strukturella proteiner i den skadade levern4. Fibrogenes beror på den dynamiska cell-cellkommunikationen mellan olika levercelltyper. Hepatiska stellatceller (HSC), när de aktiveras, differentieras till glatt muskulatur alfa 2 Actin-uttryckande, migrerande och prolifererande myofibroblastliknande celler och syntetiserar ECM-proteiner som en sårstängande verkan. Aktiverade HSC är de centrala kollagenproducerande cellerna i levern1.
Den molekylära mekanismen för ECM-remodellering, fibrosmönster och deras förhållande till cellulära händelser är inte klarlagda. En bättre förståelse av den tredimensionella (3D) ECM-strukturen behövs fortfarande, även om masspektrometritekniker har hjälpt till att analysera ECM-proteinsammansättning4. Traditionellt har Massons trikroma fläck, Picro Sirius Red-fläckar och andra harmoniska generationens (SHG) avbildning utförts på tvådimensionella (2D) tunna leversektioner. Det typiska fibrosmönstret för NASH kallas "kycklingtråd", som sträcker sig till zon 3 och är perisinusformad / pericellulär fibros 5,6. Det har dock saknats studier som fokuserar på 3D-strukturen hos den inhemska levern, särskilt de som inte involverar vävnadssnitt. Robusta avbildningsmetoder för att identifiera mönster och egenskaper hos fibros under dynamisk ECM-remodellering vid leverfibros skulle avsevärt stärka förståelsen för NASH-mekanismer och identifiera nya terapeutiska mål.
För att ta itu med dessa utmaningar optimerades ett snabbt och effektivt protokoll för att avbilda den ursprungliga lever-ECM via decellularisering7. Helleverdecellularisering är ett tillvägagångssätt för att avlägsna det hepatiska cellulära innehållet samtidigt som det ursprungliga 3D ECM-nätverket upprätthålls genom tvättmedelsperfusion. Möss matades antingen chow eller snabbmatdiet (FFD) i 14 veckor. Decellularisering utfördes efter in situ portalvenperfusion med milt rengöringsmedel och låga flödeshastigheter för att bevara trippelspiralformade och inhemska fibrillära kollagenstrukturer. Tvåfotonmikroskopi användes för att analysera förändringar i kollagenstrukturer i ECM. 3D-bilderna av den ursprungliga ECM-strukturen i normala och NASH-lever rekonstituerades och analyserades. Att utföra in situ perfusionsdecellularisering och analysera ställningen med tvåfotonmikroskopi ger en praktisk och prisvärd plattform för att visualisera den dynamiska ECM-ombyggnaden i levern.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 MONOCRYL UNDYED 1 x 18&#34; P-3</td>
			<td>MONOCRYL</td>
			<td>Y494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 suture</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>10-000-649</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/monomid-nylon-non-absorbable-sutures-7/10000649?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AnaSed Injection (xylazine)</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td>this drug to use by or on the order of a licensed veterinarian.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD INSYTE AUTOGUARD I.V. CATHETER WITH BC TECHNOLOGY</td>
			<td>BD</td>
			<td>382612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chow diet</td>
			<td>Envigo</td>
			<td># 2918</td>
			<td>Control diet. A fixed formula, non-autoclavable diet manufactured with high quality ingredients and designed to support gestation, lactation, and growth of rodents.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast-food diet (AIN76A Western Diet)</td>
			<td>Test Diet</td>
			<td>1810060</td>
			<td>https://www.testdiet.com/cs/groups/lolweb/@testdiet/documents/web_content/mdrf/mdux/~edisp/ducm04_051601.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain Kit</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-3502</td>
			<td>https://vectorlabs.com/hematoxylin-and-eosin-stain-kit.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kent Scientific Rat Surgical Kit</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>13-005-205</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/rat-surgical-kit/13005205#?keyword=mouse%20surgery%20kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>NDC 50989-996-06 - 10 mL - vial.</td>
			<td>KetaVed has been clinically studied in subhuman primates in addition to those species listed under Administration and Dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP5 upright Confocal, multi-photon</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer connector (Three-way stopcock with SPIN-LOCK&#174;)</td>
			<td>bbraun</td>
			<td>D300</td>
			<td>https://www.bbraunusa.com/en/products/b0/three-way-stopcockwithspin-lock.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrosirius Red Stain Kit</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>24901</td>
			<td>https://www.polysciences.com/default/picrosirius-red-stain-kit-40771</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rayon tipped applicator</td>
			<td>puritan</td>
			<td>25-806 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>sigmaaldrich</td>
			<td>D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrup</td>
			<td>www.target.com</td>
			<td>24 fl oz</td>
			<td>https://www.target.com/p/pancake-syrup-24-fl-oz-market-pantry-8482/-/A-13007801</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable Speed Peristaltic Pump</td>
			<td>INTLLAB</td>
			<td>BT100</td>
			<td>https://www.amazon.com/gp/product/B082K97W5W/ref=ox_sc_saved_title_2?smid=A12NUUP87ZRRAR&#38;psc=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>vectorlabs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td>https://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium.html</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d imaging of the liver extracellular matrix in a mouse model of non-alcoholic steatohepatitis

Icke-alkoholisk steatohepatit (NASH) är den vanligaste kroniska leversjukdomen i USA och påverkar mer än 70 miljoner amerikaner. NASH kan utvecklas till fibros och så småningom till cirros, en signifikant riskfaktor för hepatocellulärt karcinom. Den extracellulära matrisen (ECM) ger strukturellt stöd och upprätthåller leverhomeostas via matricellulära signaler. Leverfibros är resultatet av en obalans i den dynamiska ECM-remodelleringsprocessen och kännetecknas av överdriven ackumulering av strukturella element och associerade förändringar i glykosaminoglykaner. Det typiska fibrosmönstret för NASH kallas "kycklingtråd", som vanligtvis består av zon 3 perisinusformad / pericellulär fibros, baserat på funktioner som observerats av Massons trikroma fläck och Picrosirius röda fläckar. Dessa traditionella tunna tvådimensionella (2D) vävnadsglidbaserade avbildningstekniker kan emellertid inte visa de detaljerade tredimensionella (3D) ECM-strukturella förändringarna, vilket begränsar förståelsen för den dynamiska ECM-ombyggnaden vid leverfibros.
Det nuvarande arbetet optimerade ett snabbt och effektivt protokoll för att avbilda den ursprungliga ECM-strukturen i levern via decellularisering för att ta itu med ovanstående utmaningar. Möss matades antingen med chow eller snabbmat diet i 14 veckor. Decellularisering utfördes efter in situ portalvenperfusion, och tvåfotonmikroskopiteknikerna tillämpades för att avbilda och analysera förändringar i den ursprungliga ECM. 3D-bilderna av normal- och NASH-lever rekonstituerades och analyserades. Att utföra in situ perfusionsdecellularisering och analysera ställningen med tvåfotonmikroskopi gav en praktisk och pålitlig plattform för att visualisera den dynamiska ECM-ombyggnaden i levern.

Kollagenfibrerna detekterades med andra harmoniska generationen och tvåfotonmikroskopi. Signalen kommer från de frangible trippel-spiralformade och inhemska fibrillära kollagenstrukturerna. Specifika antikroppar användes inte för att analysera kollagensubtyper; Detta kan dock läggas till bildtekniken.
När levervävnaden studeras utan decellularisering är det utmanande att få högupplösta bilder av kollagennätverket (Figur 5A). I decellu...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis at JoVE.com

3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis

Det nuvarande protokollet optimerar leverns in situ-perfusion /decellularisering och tvåfotonmikroskopimetoder för att etablera en tillförlitlig plattform för att visualisera dynamiken i extracellulär matris (ECM) remodellering under alkoholfri steatohepatit (NASH).

3D-avbildning av leverns extracellulära matris i en musmodell av alkoholfri steatohepatit

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most common chronic liver disease in the United States, affecting more than 70 million Americans. NASH can ...

NASH är en av de viktigaste kroniska leversjukdomarna i världen. Det kan utvecklas till fibros, cirros och så småningom levercancer. Studera den dynamiska förändringen av ECM i NASH kan hjälpa till att förstå fibrosen bättre.Traditionell för avbildning kan inte visa 3D ECM-strukturförändringar, vilket begränsar förståelsen av dynamisk ECM-remodelleringsprocess i leverfibrosen. För att börja, väga musen före proceduren. Efter bedövning av musen, raka det ventrala området med en hårklippare och desinficera huden med 70% etanol.Placera musen på ryggen och immobilisera benen på operationskortet med tejp. Använd Mayo sax och Adson-pincett för att göra ett tre centimeter snitt i sidled i underlivet. Och sedan ett snitt på fem centimeter vertikalt från den låga buken till xiphoidprocessen utan att öppna bröstkaviteten.Efter att ha öppnat bukhinnan, placera försiktigt tarmarna till djurets vänstra och höj leverns högra lob med en rayonspetsad applikator för att exponera portalvenen. För att kateterisera portalvenen, inducera en 24 gauge IV-kateter i den distala änden av portalvenen. Placera kateterspetsen innan portalvenen grenar ut i leverloberna.Dra ut nålen omedelbart när katetern kommer in i venen. Kontrollera att katetern är korrekt placerad inuti venen genom att perfusera levern med PBS med en milliliter spruta via katetern. Använd Dumont mikropincett, en Castroviejo-mikronål och 4-0 sutur för att placera ett stygn under förgreningen av portalvenen och ett andra stygn en centimeter under för att säkra katetern.Anslut katetern till en silikonslang med en meters längd, tre millimeter innerdiameter och 4,1 millimeter ytterdiameter med en lockanslutning. Anslut silikonslangen till en peristaltisk pump och en behållare som innehåller avjoniserat vatten. Ta försiktigt bort luftbubblorna inuti röret och undvik att generera nya bubblor under perfusionen.Ställ in den peristaltiska pumpen på en flödesutgång på 0,2 ml per minut. Läs först med avjoniserat vatten i två timmar och leverns färg kommer att ändras från rött till gult under perfusion. Byt perfusionslösningen till 0,5% natriumdeoxikolat och fortsätt över natten och levern blir vit i slutet av perfusionen.Byt perfusionslösningen till avjoniserat vatten och perfusera i två timmar. Använd Dumont mikropincett och mikrofjädrande sax för att samla den decellulariserade levern och tvätta den försiktigt i en petriskål med PBS. Överför en liten bit decellulariserad lever till ett mikroskopglas och placera vävnaden i mitten.Tillsätt 10 mikroliter antifade monteringsmedium till vävnaden med en pipett för att undvika vävnadstorkning. Täck vävnaden med ett täckglas och applicera en liten kraft för att platta provet. Försegla kanterna på täckglaset med färglöst och transparent nagellack.Placera en droppe av en nedsänkningsolja på toppen av täckglaset och placera bilden på mikroskophållaren. Sänk 20X oljeobjektivet tills det kommer i kontakt med nedsänkningsoljan. Byt till den violetta kanalen med våglängd 405 nanometer.Slå på slutaren och fokusera provet. Navigera och placera intresseområdet för avbildning. Stäng av slutaren innan du går över till bildinsamling med laserljus.För att starta tvåfotonlasern, växla till datorkontrollen och slå på de två fotonlasern först. Slå sedan på tvåfotonlaserstyrenheten och slutaren och se till att uteffekten är högre än 2,5 watt. Minska lasereffekten för att förhindra fluorescenskylning.Välj och justera detektorer både fotomultiplikatorer och hybrid för att rymma de valda fluoroforerna. Välj samtidiga eller sekventiella bildförvärv. Justera pinhålet till det högsta värdet.Justera laservåglängder, förstärkning, effekt, förskjut pixeluppehållstiden, pixelstorleken i genomsnitt och zoom. Bläddra i datorns Z-kontroller och ställ in Z-måtten. Definiera start och slutpunkter och välj antalet bilder som ges inom en volym.Hämta bilder. Efter att ha utfört de två fotonmikroskopin avslöjade kollagenfibrer utan decellularisering en lågupplöst bild av kollagennätverket. I den decellulariserade extracellulära matrisen observerades uppenbara skillnader i morfologi och rumslig fördelning mellan chow och snabbmat diet lever.Kollagenfibrer och möss på en chow-diet uppvisade ett sammanvävt och välorganiserat nätverk, medan mössen på snabbmatdiet visade kollagenbuntar med mindre anslutning. Den tredimensionella strukturen hos leverns extracellulära matris visar att kollagenfibrerna hos möss på chowdieten visade ett välorganiserat nätverk, men inte i snabbmatdietmöss. För att bekräfta kvaliteten på det fibrillära kollagenet i den decellulariserade extracellulära matrisen färgades objektglasen med hematoxylin Eosin och Picrosirius röd.Hematoxylin och Eosin visar att alla celler har tagits bort. I Picrosirius röda färgningsbilder avslöjade den extracellulära matrisen från de chowmatade mössen ett välorganiserat nätverk. Och däremot visade möss på snabbmatdiet tätare kollagenfibrer.Ta försiktigt bort bubblan inuti ett rör före perfusionen. Bubblan blockerar kärlet i levern och påverkar perfusionen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-photon avbildning av tumörcellen invasion i ett Orthotopic musmodell av oral skivepitelcancer

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

Utvärdering av Planar-Cell-polaritet fenotyper i Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

Strategisk Endothelial Cell Tube Formation analys: Jämföra Extracellulär Matrix och tillväxtfaktor Minskad Extracellulär Matrix

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet mätning av mus mesenterica artär med Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

Införlivandet av ett Survivable leverbiopsi förfarande hos möss att bedöma alkoholfria Steatohepatitis (NASH) upplösning

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Murine Precision-Cut leverskivor som en Ex Vivo modell av leverbiologi

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Drug Treatment by Central Venous Catheter in a Mouse Model of Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm and Monitoring by 3D Ultrasound

Läkemedelsbehandling med central venkateter i en musmodell av angiotensin II inducerad bukaortaaneurysm och övervakning med 3D-ultraljud

Since pharmaceutical treatment options are lacking in the clinical management of abdominal aortic aneurysm (AAA), animal models, in particular mouse ...

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Undersöker de skyddande effekterna av Platycodin D på alkoholfri fettleversjukdom i en palmitinsyrainducerad in vitro-modell

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...

Delivery of Cardioactive Therapeutics in a Porcine Myocardial Infarction Model

Leverans av kardioaktiva läkemedel i en modell för hjärtinfarkt hos svin

Myocardial infarction is one of the leading causes of death and disability worldwide, and there is an urgent need for novel cardioprotective or ...

Liver Transplantation in Mouse and Analyzing Allograft Patency

Successful Orthotopic Liver Transplantation in Mice Utilizing Microcomputed Tomography Angiography

Enhancing Transplantation Research Through MicroCT Angiography in Murine Models (Video) | JoVE

Framgångsrik ortotopisk levertransplantation hos möss med hjälp av mikrodatortomografiangiografi

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality ...