Name: chemiluminescence-based assays for detection of nitric oxide and its derivatives from autoxidation and nitrosated compounds
Uploaded: 2022-02-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chemiluminescence-based Assays for Detection of Nitric Oxide and its Derivatives from Autoxidation and Nitrosated Compounds at JoVE.com

本手稿中报告的协议是由马萨诸塞州总医院麻醉科Warren Zapol博士的重症监护麻醉研究实验室的先前研究员的累积贡献而实现的。我们感谢Akito Nakagawa，Francesco Zadek，Emanuele Vassena，Chong Lei，Yasuko Nagasaka，Ester Spagnolli和Emanuele Rezoagli博士的贡献。

该协议中指明的程序符合马萨诸塞州总医院的审查委员会。所使用的血液样本是在先前的一项研究中收集的，并且出于当前目的进行了去识别化 18.
注：有关管道和构成吹扫容器的玻璃器皿之间的最佳连接、清洗和一般维护的具体指导，请参阅制造商的说明。连接需要牢固且小心，以免损坏玻璃器皿。识别玻璃吹扫容器的组件：进气管路、带加热夹套和冷凝?...

由于灵敏度高，用于测定NO和相关化合物的基于化学发光的测定具有NO2- 污染的高风险。实验中使用的每种试剂（特别是NO2- 封闭溶液）和稀释剂（包括ddH2O）都应测试其NO2- 含量以校正背景信号。亚硝酸盐反应性极强，全血半衰期约为10分钟，并迅速产生NO3-。因此，血液采集和离心之间的时间或NO2- 阻断可能...

自从萨尔瓦多·蒙卡达（Salvador Moncada）和诺贝尔奖获得者罗伯特·富奇戈特（Robert Furchgott）、路易斯·伊格纳罗（Louis Ignarro）和费里德·穆拉德（Ferid Murad）将一氧化氮（NO）确定为先前已知的内皮源性松弛因子（EDRF）以来，NO的核心作用已在整个血管生物学、神经科学、代谢和宿主反应1，2、3、4、5、6、7等几个关键机制中得到确立。.外源性给予NO气体已成为新生儿肺动脉高压引起的呼吸衰竭的既定治疗方法8。一氧化氮气体也已被研究用于治疗呼吸道合胞病毒（RSV）感染，疟疾和其他感染性疾病，缺血再灌注损伤以及预防接受心脏手术的患者的急性肾损伤9，10，11，12。对精确测量技术的需求，以评估NO，其代谢物及其靶蛋白和化合物的水平来自机制和介入研究。
由于其高反应性，NO可能会根据其产生和/或释放的生物基质进行不同的反应。在没有血红蛋白（Hb）或其他氧血蛋白的情况下，NO几乎完全氧化成亚硝酸盐（NO2-）。
2常开 + O2 → 2常开 2
否2 + 否 → N2O3
N2O3 + H2O → NO2- + H+
NO首先与分子氧（O2）进行自氧化以产生二氧化氮（NO2），并与NO2 本身反应生成三氧化二氮（N2O3）。一个分子N2O3 与水（H2O）反应形成两个NO2-分子和 一个质子（H+）13。在全血中，14，15，NO和NO2- 迅速转化为硝酸盐（NO3-），因为这些分子与Hb的氧化血红素基团[Hb-Fe2 + -O2 或氧合血红蛋白（oxyHb）]发生激烈反应以产生NO3-。该反应与血红素基团向铁态[Hb-Fe3 + 或高铁血红蛋白（metHb）]的转变相结合：
Hb-Fe2+-O2 + NO → Hb-Fe3+ + NO3-
红细胞（RBC）屏障和紧邻内皮的空间是限制这种反应的主要因素，并允许内皮释放的一小部分NO作为EDRF16，17。事实上，循环中的无细胞Hb已知会破坏实验和临床环境中的血管舒张17，18。在红细胞内，根据氧合和NO2- 浓度，一部分NO与脱氧血红蛋白（Hb-Fe2 +）反应形成亚硝基铁Hb（Hb-Fe2 + - NO或HbNO）：
Hb-Fe2+ + NO → Hb-Fe2+-NO
在RBC15，17中，NO2- 可以通过减少Hb-Fe 2+ 形成Hb-Fe3+ ，导致NO的释放，而NO又结合Hb-Fe2+-O2 （优先）或Hb-Fe2+。
NO衍生物的产生不应被视为严格单向的，因为NO可以从各种组织和不同酶（例如，肠道细菌或线粒体内，特别是在缺氧条件下）的NO2和NO3-再生19，20。
产生（或施用）的可变量的NO导致S-亚硝基硫醇的下游生成，主要是通过在亲核试剂存在下从N2O3 中转硝化硫醇，产生NO + 供体中间体（Nuc-NO+-NO2-）：
N2O3 + RS- → RS-NO + NO2-
S-亚硝基硫醇产生的另一种可能性是氧化硫醇的亚硝基化（不与氧化硫醇反应）：
RS• + NO → RS-NO
这种机理和NO2 的直接硫醇氧化可能只有在非常具体的条件下才有可能，这些条件在别处21中进行了描述。S-亚硝基硫醇的范围从轻分子（如S-亚硝基谷胱甘肽）到大的含硫醇蛋白质。S-亚硝基血红蛋白（S-NO-Hb）是通过β链（β93C）22中保守半胱氨酸残基的硫醇基团亚硝化形成的。
S-亚硝基硫醇的产生和代谢是重要调节机制的一部分。例子包括调节谷胱甘肽，半胱天冬酶，N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）和ryanodine受体23，24，25，26，27，28。亚硝化白蛋白（S-亚硝基白蛋白）先前被认为是体内NO生物学的主要介质，似乎是一种NO / NO + 转运蛋白，没有任何特定的附加生物活性29。
在测量生物基质中特定生物样品的NO及其衍生物的浓度时，重要的是要考虑酸度，氧化，温度和试剂的存在等特性。例子包括施用外源性NO供体，并且在急性炎症的情况下，过氧化氢（H2O2）与NO2 反应导致产生过氧亚硝酸盐（ONOO-）21等自由基的超正常浓度。除了采用的分析方法外，样品制备和储存的预分析阶段也是基础。应预测、考虑和阻断不代表 体内 NO活性的下游反应。一个有效的例子是S-NO-Hb的不稳定性，当血液样本被靶向测量22时，需要对血液样本进行专门的处理。
基于化学发光的测定是检测任何生物体液中NO及其主要代谢物[NO2-，NO3-，S-NO和铁- 亚硝酰基复合物（Fe-NO）]水平的金标准，包括组织匀浆30，31。这些方法依赖于化学发光检测器（CLD），这是一种容纳NO与臭氧（O3）反应的装置，在激发态（NO2 •）下产生NO2。NO2•的弛豫引起光子的发射，光子由光电倍增管检测到，产生与采样气体混合物32的NO含量成正比的电信号。表示CLD的简化原理图。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63107/63107fig01.jpg"> 图 1：一氧化氮气体化学发光检测器的简化示意图。 基于化学发光的一氧化氮（NO）检测是在化学发光检测器（CLD）中引入的每个NO气体分子的化学计量生成一个光子。化学发光反应是在指定的腔室中获得的，该腔室由内部发生器提供臭氧（O3），该发生器通过与外部泵连接保持在负压，允许样品气体连续和恒定地流入。O3 的产生需要双原子氧（O2），该氧气由与CLD连接的专用O2 罐供应（其他制造商提供使用环境空气操作的CLD）。在反应室内，样品气体中含有的每一分子NO气体与氧气反应，产生一分子处于活化状态（NO2 *）的二氧化氮。通过返回到其基态，每个NO2 *分子发射一个光子，该光子由位于反应室附近的光电倍增管（PMT）检测。PMT与相关的放大器和中央处理单元产生与光子数和反应室中NO分子数量成比例的信号。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63107/63107fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的大图。</a>
CLD的进样口可以连接到包含液体样品反应室的玻璃器皿系统。系统用氮气、氦气或氩气等惰性气体连续吹扫，将NO从反应室转移到CLD。液相样品通过专用膜注入吹扫容器。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63107/63107fig02.jpg"> 图 2：用于化学发光检测一氧化氮气体的吹扫容器的结构 吹扫容器（右）允许检测一氧化氮 （NO） 气体或任何其他化合物，当从液相试剂中释放时，可以很容易地转化为 NO 气体。惰性气体入口连接到惰性气体的源（罐），例如氩气，至强或双原子氮（N2）。针阀（向左打开）用于吹扫容器内的压力控制，可以完全拆卸以清洁容器。进样口由带有膜隔的盖子覆盖，用于样品进样。应经常更换膜。加热的夹套包围反应室并连接到热水浴中以在HCl测定中进行VCl3 。吹扫容器出口连接到化学发光检测器（CLD）或NaOH捕集器（HCl测定中VCl3 需要）。要排出反应室内容物，首先关闭惰性气体入口和吹扫容器出口处的旋塞阀，关闭针阀，取下注射口处的盖子，最后打开排放口处的旋塞阀。如果由于HCl的腐蚀性而进行HCl测定中的VCl3 ，则需要将NaOH陷阱（左）放置在吹扫容器和CLD之间。与CLD的连接始终需要在CLD和吹扫容器（或NaOH陷阱，如果使用）的输出之间放置一个强场电介质（IFD）滤波器。IFD过滤器去除空气中的颗粒物，并阻止液体通过吹扫容器。PTFE = 聚四氟乙烯。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63107/63107fig02large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的大图。</a>
因此，任何可以通过特定和受控化学反应转化为NO的化合物都可以在任何生物体液和组织匀浆24中以高灵敏度检测到。通过化学发光直接测量气相NO是在实验和临床环境中进行的。这些技术在别处有33，34，35的广泛描述。NO2-、S-亚硝基硫醇、S-亚硝化物蛋白和Fe-NOs的测量可以通过在三碘化物（I 3-）的反应混合物中加入样品来进行，三碘化物（I3-）化学计量法从所有这些化合物中释放出NO气体：
I3- → I2 + I-
2常2− +2I− +4H+ → 2常数 + I2 +2H2O
I3− + 2RS-NO → 3I− + RSSR + 2NO+
2NO+ + 2I− → 2NO + I2
而I3-不与NO 3-15反应。通过用酸化磺胺（AS）预处理样品等分试样（含或不含氯化汞（HgCl2），可以对每种化合物进行精确测量。具体而言，AS预处理去除所有NO2-含量。因此，CLD测量的NO含量仅反映了S-NOs和Fe-NOs浓度的总和。在AS注射之前，在样品等分试样中注射HgCl 2会导致NO2-由S-NO释放。用AS处理（导致NO2-去除）确保测量的NO含量仅反映Fe-NOs的浓度。评估之间的一系列减法允许计算三个NO导数22的精确浓度。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63107/63107fig03.jpg"> 图3：在乙酸化学发光测定中I3-样品制备的步骤。说明了制备乙酸化学发光测定中I3-的顺序步骤。需要使用避光离心管。试管1，2和3是用于准备测定的试管。如果需要测量硝酸盐（NO3-），则需要另一个样品等分试样（管4）用于HCl测定中的VCl3。步骤由红色的数字表示。在加入样品体积之前，用磷酸盐缓冲盐水（PBS）或HgCl2预填充（步骤1）。按照指示加入样品体积（2），涡旋，并在室温（RT）下孵育2分钟。按照指示加入（3）PBS或酸化磺胺（AS），涡旋，并在室温下孵育3分钟。通过测定测量的浓度是每个管下报告的化合物浓度的总和。1号管将允许测量亚硝酸盐（NO2-），S-亚硝基硫醇（S-NO）和铁 - 亚硝基配合物（Fe-NOs）作为单个信号。对于硝酸盐（NO3-）测量，样品应同时在乙酸中与I3-和VCl3一起在HCl测定中运行，并且从管1获得的值应从从管4中获得的值中减去。*建议用于Hb分析以测定残留NO2-，S-亚硝基血红蛋白和铁-亚硝酰血红蛋白的量。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63107/63107fig03large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的大图。</a>
对于 NO3- 测量，盐酸 （HCl） 中的氯化钒 （III） （VCl3） 用于将吹扫容器中的 NO3- 转化为 NO，以便使用 CLD 以化学计量法测量 NO3- ：
2 无3-+ 3V+3 + 2H2O → 2NO + 3VO2+ + 4H+
为了实现足够快的转化，反应需要在90-95°C下进行。 从NO3- 减少到NO2- 与HCl将NO2- 还原为NO相结合，钒金属也减少了S-NOs，释放了它们的NO部分22，36。CLD在HCl中用VCl3 获得的最终浓度反映了NO3-，NO2和其他亚硝化化合物的总浓度。用I3- 从CLD产生的浓度中减去后一个值，可以计算NO3- 浓度36，37 （图3）。
在NO消耗测定中，NO供体如（Z）-1-[2-（2-氨基乙基）-N-（2-氨乙基）氨基]二禅-1-鎓-1，2-二乙酸（DETA-NONO酸酯）在吹扫容器中连续释放NO产生稳定的信号，允许定量注射样品中的无细胞氧Hb。吹扫容器中消耗的NO的量与样品38中oxyHb的量呈化学计量关系。
图中说明了测量血浆样品中 NO2-、NO3-、S-亚硝基硫醇、亚硝酰铁配合物和无细胞 Hb 消耗的实验方案。对红细胞环境中的NO的研究需要特定的样品处理，然后进行排阻色谱法以测量极其脆弱的S-NO-Hb和Hb-NO，并测定总Hb浓度15，22。样品制备有助于校正测量。在测定过程中，H2 O中NO2-的预先存在和NO2-的释放可导致人为测量更高浓度的NO衍生物，例如S-NO-Hb14，39。还介绍了样品制备的重要方面。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>45754</td>
			<td>500 mL - liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam B Emulsion</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5757</td>
			<td>250 mL - liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DETA NONOate</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>82120</td>
			<td>10 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco DPBS (1x) no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190144</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroochloric Acid 37% (1 M)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>258148</td>
			<td>500 mL - liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine</td>
			<td>SAFC</td>
			<td>207772</td>
			<td>100 g - solid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimtech</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercury (II) Chloride ACS reagent&#62; 99.5%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>215465</td>
			<td>100 g - solid (dissolve in water)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mili-Q Water Purification System</td>
			<td>Millipore</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 705 RN 50 &#956;L syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80530</td>
			<td>Microliter syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 802 N 25 &#956;L Syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>84854</td>
			<td>Microliter syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-ethylmaleimide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>4260</td>
			<td>25 g - crystalline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitric Oxide Analyzer + Bundle Software - Purge Vessel</td>
			<td>Zysense</td>
			<td>NOA 280i</td>
			<td>Chemiluminescence Detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonidet p-40&#160; (NP-40)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>85125</td>
			<td>10% - 500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hexacyanoferrate (III) ACS reagent&#8805; 99%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>244023</td>
			<td>100 g - powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Iodide ACS reagent&#62; 99%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221945</td>
			<td>100 g - solid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Nitrite cryst. For analysis EMSURE ACS</td>
			<td>Supelco</td>
			<td>105067</td>
			<td>250 g - crystalline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerGen 125</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-359-251</td>
			<td>Mechanic Homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RV3 Two Stage Rotary Vane Pump</td>
			<td>Edwards</td>
			<td>A65201906</td>
			<td>Vacuum Pump - Bundled with analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Heparin - BD Hemogard Clo</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>BD367871</td>
			<td>75 USP Units</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide anhydrous ACS reagent &#8805; 97%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>795429</td>
			<td>1 kg - pelletts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Nitrate ACS reagent &#8805; 99%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221341</td>
			<td>500 g - powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite &#8805; 99%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2252</td>
			<td>500 g - crystalline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfanilamide &#8805; 98%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9251</td>
			<td>100 g - solid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vanadium (III) Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>112393</td>
			<td>25 g - solid - Caution (exothermic)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman 1 Filter Paper</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA10010155</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chemiluminescence-based assays for detection of nitric oxide and its derivatives from autoxidation and nitrosated compounds

体内一氧化氮（NO）活性是其直接作用，其衍生物由NO自氧化产生的作用以及亚硝化化合物的作用的综合结果。测量NO代谢物对于研究血管水平和其他组织中的NO活性至关重要，特别是在施用外源性NO的实验环境中。基于臭氧的化学发光测定可以精确测量液体（包括血浆，组织匀浆，细胞培养物）和气体混合物（例如，呼出的呼吸）中的NO和NO代谢物。NO与臭氧反应，在激发态下生成二氧化氮。随之而来的光发射允许光探测和产生反映样品NO含量的电信号。来自同一样品的等分试样可用于测量特定的NO代谢物，例如硝酸盐，亚硝酸盐，S-亚硝基硫醇和铁 - 亚硝酰基复合物。此外，无细胞血红蛋白消耗的NO也通过化学发光分析进行量化。提供了所有这些技术的说明。

通过无细胞Hb测定的NO消耗用于含有已知浓度的无细胞氧Hb的样品（图4）。由于氧肝素的一个血红素在化学计量法中释放出一个NO分子，因此纯化的无细胞氧肝素用于构建测定的校准曲线（补充图3）。
无细胞Hb（用比色测定法测量）与心脏手术期间体外循环（CPB）患者NO消耗之间的剂量 - 反应关系如图 5所示。可以假设?...

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Chemiluminescence-based Assays for Detection of Nitric Oxide and its Derivatives from Autoxidation and Nitrosated Compounds

在这里，我们提出了使用基于化学发光的高灵敏度测定来检测一氧化氮及其生物相关衍生物的方案。

基于化学发光的检测方法，用于检测自氧化和亚硝化化合物中的一氧化氮及其衍生物

Nitric oxide (NO) activity in vivo is the combined results of its direct effects, the action of its derivatives generated from NO autoxidation, and the ...

该协议使研究人员能够熟练地使用化学发光检测器测量一氧化氮代谢物，而无需在现场雇用专职人员的指导或费用。基于化学发光的测定是检测任何给定生物样品中一氧化氮及其代谢物水平最小变化的最灵敏方法。吸入性一氧化氮是一种用于各种疾病的治疗气体。至关重要的是，疾病的进展和恢复必须与一氧化氮代谢物水平准确相关。吸入性一氧化氮是一种抗菌剂，在治疗气道传染病患者方面显示出希望。化学发光方法可以深入了解一氧化氮剂量及其代谢物与微生物和病理生理学变化的相关性。为了制备DETA-NONOATE溶液，在pH 7.4的PBS中加入10毫克DETA-NONOate到610微升的10毫摩尔氢氧化钠中，以产生100毫摩尔DETA-NONOate并将其保存在冰上。要继续，将氧气管连接到化学发光检测器，并根据文本中提供的制造商说明在压力下打开氧气罐。然后，将强场电介质滤波线连接到化学发光检测器。在化学发光检测器接口上，开始运行液相检测的检测程序，确保氧气供应充足，检测器将开始采样，以毫伏为单位的信号指示检测，否则提示阴性诊断信号。要准备吹扫容器，请将针阀完全拧紧到右侧并关闭入口和出口止动旋塞，从而关闭所有三个端口上的吹扫容器。从吹扫容器中取出盖子。将足够量的计划测定特异性试剂添加到反应室中，以便用于注射样品的注射器针头可以到达流体柱，同时验证是否存在稳定的，所需的基线。要启动吹扫气流，请确保惰性气罐装有两级调节器，并将惰性气罐与容器的进气口连接。然后，打开吹扫容器的出口，并在调节器处以每平方英寸一至五磅的出口压力打开气体。然后，打开吹扫容器的入口，慢慢打开吹扫容器的针阀，以允许气体流入并验证吹扫容器内的鼓泡。为了调节气体流量，用强场介质过滤管路采样环境空气记录化学发光检测器测量的电池压力。将盖子重新定位在吹扫容器上，并将强场介质过滤器管路连接到吹扫容器。使用针阀在化学发光检测器水平处达到与环境空气中记录的相同的细胞压力。要启动化学发光信号采集程序，请将化学发光检测器的串行端口连接到安装了采集程序的计算机串行端口。然后，运行分析程序。单击“获取”，然后选择要保存数据文件的文件夹，键入文件名，然后单击“保存”。在准备样品进样时，通过单击最小和/或最大按钮，然后输入所需值，调整屏幕上的电压标度以控制目标基线。要进行样品进样，在取出每个样品之前，用去离子水和蒸馏水冲洗注射器至少两次或更多次，并确保在任务擦拭时无阻碍地喷射水。然后，将注射器插入样品管中，同时将注射器和管保持近距离，并将柱塞拉至所需体积，同时确保没有气泡或未均质的固体部件被捕获。用任务刮水器清洁注射器的尖端，然后将注射器插入注射口的设置器盖中。在验证注射器的尖端在液相内后，将样品注入反应室。要在软件程序中标记注射，请单击“样品名称”下的灰色框键入样品名称，然后单击“标记注射”，同时验证注射是否通过无细胞血红蛋白测定导致信号向上变化或一氧化氮消耗量下降。通过体外循环后通过化学发光法测定无细胞血红蛋白与一氧化氮消耗之间的剂量反应关系。可以假设在氧化状态清除一氧化氮中存在高浓度的血红素基团。相反，在体外循环期间接受一氧化氮的患者中，大多数血红素组减少并且不消耗一氧化氮。无细胞血红蛋白浓度的测量表明，在体外循环后12小时内，血浆中缓慢消除。然而，一氧化氮消耗量在15分钟达到峰值，并没有反映无细胞血红蛋白的消除。无细胞血红蛋白消耗一氧化氮的线性回归曲线显示，在 15 分钟时氧化和一氧化氮消耗血红蛋白的患病率，而在基线 4 小时和 12 小时时，体外循环后 12 小时血红蛋白的患病率更高。监测一氧化氮气体给药对一氧化氮消耗量的影响。当患者在术中和术后用一氧化氮气体治疗时，体外循环后观察到的游离血红蛋白的增加与一氧化氮消耗量的任何增加无关。结果表明，外源性一氧化氮可减少大部分游离血红蛋白，防止一氧化氮清除。仅当所有条件保持不变时，实验才有效。如果液位的高度超过反应塔，我们必须停止并进行新的校准。

Research

JoVE Journal

Medicine

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科研

医学

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