Name: measuring photophysiology of attached stage of colacium sp. by a cuvette-type fast repetition rate fluorometer
Uploaded: 2021-11-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Photophysiology of Attached Stage of Colacium sp. by a Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer at JoVE.com

Die Arbeit wurde vom Collaborative Research Fund der Präfektur Shiga mit dem Titel "Study on water quality and lake-bottom environment for the protection of the solidness of water environment" im Rahmen des Japanese Grant for Regional Revitalization and the Environment Research and Technology Development Fund (No. 5-1607) des japanischen Umweltministeriums unterstützt. https://www.kantei.go.jp/jp/singi/tiiki/tiikisaisei/souseikoufukin.html. Die Autoren danken Enago (www.enago.jp) für die englischsprachige Rezension.

1. Probenahme
<ol><li>Sammeln Sie Seewasser von der Oberfläche mit einem Eimer. Um Colacium sp. an S. mucronata (Abbildung 1A-C) zu richten, filtern Sie 0,5-10 l Seewasser mit einem 100 μm Nylonnetz net52. HINWEIS: S. mucronata aggregiert oft dicht in flachem, eutrophem, schlammigem Wasser, wie z.B. in Schilfgebieten (Phragmiten).</li>
	<li>Lagern Sie die konzentrierten Proben in 500 mL Plastikflasche...

Dieses Protokoll zeigte zum ersten Mal, dass die Photophysiologie von Colacium sp. während des angeschlossenen Stadiums in einer natürlichen Umgebung mit seinem planktonischen Stadium in AF-6-Medium vergleichbar ist. Darüber hinaus hatten die Darmgehalte von ausgehungertem S. mucronata keinen Einfluss auf die Ausgangs- und Chl-a-Fluoreszenz, wenn die Dichte ≤5 inds·mL−1 betrug (Abbildung 5 und Abbildung 6). Diese Erg...

Die variable Fluoreszenz des Chlorophylls ist ein nützliches Werkzeug zur Messung der Photophysiologie des Algenphotosystems II (PSII). Algen reagieren auf verschiedene Umweltbelastungen wie überschüssiges Licht und Nährstoffmangel, indem sie ihre PSII-Photophysiologie verändern. Das Fast Repetition Rate Fluorometer (FRRf) ist eine gängige Methode zur Messung der PSII-Photophysiologie1,2 und zur Schätzung der Primärproduktivität1,3,4, die die Überwachung der Phytoplankton-PSII-Photophysiologie sowie der Primärproduktivität über weite räumliche und zeitliche Skalen ermöglicht5,6,7. FRRf kann gleichzeitig den PSII (σ PSII)-Absorptionsquerschnitt, die Reaktionszentrumskonzentration ([RCII]), die maximale photochemische Effizienz (Fv/Fm), die effektive photochemische Effizienz (Fq′/Fm′) und die nicht-photochemische Abschreckung (NPQNSV) messen (Tabelle 1). Im Allgemeinen werden Fv/Fm und Fq′/Fm′ als PSII-Aktivität8 definiert, während NPQNSV als relative wärmeabgeführte Energie definiert ist9.
Wichtig ist, dass Einzelumsatzblitze (ST) von FRRf den primären Chinonelektronenakzeptor, QA, vollständig reduzieren, aber nicht den Plastochinonpool. Umgekehrt können Mehrfachumsatzblitze (MT) von einem PAM-Fluorometer (Pulse Amplitude Modulation) beide reduzieren. Die ST-Methode hat einen klaren Vorteil gegenüber der MT-Methode bei der Identifizierung der möglichen Ursprünge von NPQNSV durch gleichzeitige Messung der Rückgewinnungskinetik von Fv/Fm, Fq′/Fm′, NPQNSV und σ PSII10. Bis heute sind verschiedene Arten von FRRf-Instrumenten, wie z. B. Tauch-, Küvetten- und Durchfluss-Typ, im Handel erhältlich. Der Tauchtyp FRRf ermöglicht In-situ-Messungen in Ozeanen und Seen, während der Küvettentyp FRRf für die Messung kleiner Probenvolumina geeignet ist. Der Durchflusstyp wird häufig verwendet, um die Photophysiologie von Phytoplankton in Oberflächengewässern kontinuierlich zu messen.
Angesichts der Entwicklung von PAM-Fluorometern, einschließlich des Küvettentyps, für ein breites Spektrum von Probanden11, sind PAM-Fluorometer in der algenphotophysiologischen Forschung immer noch häufiger als FRRfs12. Obwohl sich beispielsweise die Probenkammerstruktur und die Küvettenkapazität zwischen diesen Werkzeugen nur geringfügig unterscheiden, wurde das PAM vom Küvettentyp auf Phytoplankton13,14,15, benthische Mikroalgen16,17,18, Eisalgen19 und epizoische Algen20 angewendet, während die FRRf vom Küvettentyp hauptsächlich auf Phytoplankton21,22,23 angewendet wurde. und eine begrenzte Anzahl von Eisalgengemeinschaften24,25. Aufgrund seiner Wirksamkeit ist der Küvettentyp FRRf gleichermaßen auf benthische und epizoische Algen anwendbar. Daher wird die Erweiterung seiner Anwendung erhebliche Einblicke in die PSII-Photophysiologie geben, insbesondere für die weniger bekannte Epizoikaalgen-Photophysiologie.
Epizoische Algen haben wenig Aufmerksamkeit erhalten, wobei nur wenige Studien ihre PSII-Photophysiologie untersuchten20,26, höchstwahrscheinlich aufgrund ihrer geringen Rolle in aquatischen Nahrungsnetzen27,28. Epibionten, einschließlich epizoischer Algen, können jedoch die Dynamik der Zooplanktongemeinschaft, wie z. B. die Erhöhung der Fortpflanzungs- und Überlebensraten29,30, positiv beeinflussen und Prozesse wie die Erhöhung der Absinkrate29,31 und die Anfälligkeit für visuelle Raubtiere negativ beeinflussen32,33,34,35,36 . Daher ist die Erforschung der Umwelt- und biologischen Faktoren, die die Epibiontendynamik in Zooplanktongemeinschaften steuern, von entscheidender Bedeutung.
Unter den epizoischen Algen ist Colacium Ehrenberg 1834 (Euglenophyta) eine häufige Süßwasser-Algengruppe32,37,38,39 mit verschiedenen Lebensstadien, einschließlich angehängter (Abbildung 1A-D), nicht beweglicher planktonischer (Abbildung 1E,F) und beweglicher planktonischer Stadien40,41 . Während des nicht-beweglichen Planktonstadiums leben Zellen als einzellige Plankton, aggregierte Kolonien oder einschichtige Blattkolonien, die von Schleim bedeckt sind42. Im angehängten Stadium verwendet Colacium sp. Schleim, der vom vorderen Ende der Zelle ausgeschieden wird37,39,41, um sich an Substratorganismen (Basibionts), insbesondere Mikrokrebse41,43, zu binden. Ihr Lebenszyklus besteht auch darin, sich vom gehäuteten Exoskelett oder toten Basibiont zu lösen und mit ihren Flagellen zu schwimmen, um einen anderen Substratorganismus zu finden39. Sowohl planktonische als auch angehängte Stadien können ihre Populationsgröße um Mitose erhöhen40. Obwohl angenommen wird, dass ihr angehängtes Stadium ein evolutionäres Merkmal für die Sammlung von Ressourcen wie Licht44 und Spurenelementen41,45,46 oder als Ausbreitungsstrategie27 ist, gibt es nur wenige experimentelle Beweise für diese Aspekte37,41,44 und die wichtigsten Bindungsmechanismen sind weitgehend unbekannt. Zum Beispiel erwarteten Rosowski und Kugrens, dass Colacium Mangan (Mn) aus Substrat-Copepoden41 gewinnt, die im Exoskelett konzentriert sind47.
Hier beschreiben wir, wie die PSII-Photophysiologie von Planktonalgen gemessen werden kann und die damit verbundene Applikationsmethode für das Targeting von angehängten Algen (an Zooplankton bindend) mit Colacium sp.-Zellen unter Verwendung des Küvettentyps FRRf. Wir verwenden das Act2-System, das mit drei Leuchtdioden (LEDs) ausgestattet ist, die eine Blitzanregungsenergie mit einer Mitte von 444 nm, 512 nm und 633 nm48 liefern. Dabei entspricht 444 nm (blau) dem Absorptionspeak von Chrophyll a (Chl-a), während 512 nm (grün) und 633 nm (orange) den Absorptionspeaks von Phycoerythrin bzw. Phycocyanin entsprechen. Der Fluoreszenzsignal-Detektionspeak beträgt 682 nm bei 30 nm halber Bandbreite. Da es schwierig ist, das planktonische Stadium von Colacium sp. in natürlichen Umgebungen zu finden, wurde ihre angeschlossene Stufe für die Experimente gesammelt. Unter den zahlreichen Substratorganismen ist Scapholeberis mucronata O.F. Müller 1776 (Branchiopoda, Daphniidae; Abbildung 1A, B, G) ist aufgrund ihrer langsamen Schwimmgeschwindigkeit, ihrer großen Körpergröße (400-650 μm) und ihres einzigartigen Verhaltens (kopfüber auf der Wasseroberfläche hängend) eine der einfachsten zu handhaben. Daher verwendet dieses Protokoll Colacium sp., das an S. mucronata angebracht ist, als Fallstudie des Colacium-Basibont-Systems. Um Fluoreszenz aus dem Darminhalt zu vermeiden, wurde S. mucronata ausgehungert. Da eine frühere Studie berichtete, dass das Fluoreszenzsignal von Darminhalten (aufgenommene Algen) nach 40 min49 eine fünffache Abnahme aufweist, erwarteten wir, dass 90 Minuten Hunger ausreichen würden, um die Möglichkeit einer Darminhaltfluoreszenz, die die FRRf-Messung beeinflusst, mit minimalen Auswirkungen von experimentellem Stress auf Colacium sp., wie Nährstoffmangel, zu minimieren. Darüber hinaus wurde dieses Protokoll angewendet, um den Bindungsmechanismus von Colacium sp. zu klären und zu bestimmen, wie zwei Metalle, Calcium (Ca) und Mangan (Mn), die Photophysiologie sowohl planktonischer als auch angeschlossener Stadien beeinflussen. Kalzium spielt auf vielfältige Weise eine Schlüsselrolle in den Photosynthesewegen50, und beide Metalle werden benötigt, um die sauerstoffentwickelnden Komplexe des PSII51 zu konstruieren. Da Calcium und Mangan im Panzer des Krebstier-Zooplanktons47 hoch konzentriert sind, vermuten wir, dass die Photophysiologie von Colacium sp. während des planktonischen Stadiums stärker auf die Anreicherung von Ca und Mn reagieren könnte, wenn dieses Lebensstadium diese Elemente während des angehängten Stadiums aus S. mucronata erhält.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acrodisc syringe filter</td>
			<td>Pall Corporation, Ann Arbor, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>0.2 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Act2Run</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Wako</td>
			<td>023-08711</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183;2H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>031-25031</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-00382</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-05522</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoCl2&#183;6H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-03682</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concentrated Chlorella</td>
			<td>Recenttec, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td>20 mg C&#183;mL&#8722;1 ; store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FastOcean Act2</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fe-citrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>093-00952</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeCl3&#183;6H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>091-00872</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCLP-880PF</td>
			<td>Nippon Medical and Chemical Instruments 
			&#160;Co., Ltd., Osaka, Japan</td>
			<td></td>
			<td>With LED light bulbs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>160-04292</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>167-04241</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>137-00402</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl3&#183;4H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>139-00722</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2EDTA</td>
			<td>Wako</td>
			<td>343-01861</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2MoO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>196-02472</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaNO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>191-02542</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4NO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>015-03231</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plankton Counter</td>
			<td>Matsunami Glass, Osaka, Japan</td>
			<td>S6300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pylex test tube</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td>With rim, 16 x 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B1</td>
			<td>Wako</td>
			<td>203-00851</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B12</td>
			<td>Wako</td>
			<td>226-00343</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B6</td>
			<td>Wako</td>
			<td>165-05401</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>264-00402</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring photophysiology of attached stage of colacium sp. by a cuvette-type fast repetition rate fluorometer

Das Fast Repetition Rate Fluorometer (FRRf) ist eine nützliche Methode zur Messung der Photophysiologie und Primärproduktivität des Photosystems II (PSII). Obwohl FRRf den PSII-Absorptionsquerschnitt (σ PSII), die maximale photochemische Effizienz (Fv/Fm), die effektive photochemische Effizienz (Fq′/Fm′) und die nicht-photochemische Abschreckung (NPQNSV) für verschiedene eukaryotische Algen und Cyanobakterien messen kann, haben sich fast alle FRRf-Studien bisher auf Phytoplankton konzentriert. Hier beschreibt das Protokoll, wie die PSII-Photophysiologie einer Epizoenalge Colacium sp gemessen werden kann. Ehrenberg 1834 (Euglenophyta), in seinem angehängten Stadium (an Zooplankton befestigt), unter Verwendung von FRRf vom Küvettentyp. Zunächst schätzten wir die Auswirkungen von Substrat-Zooplankton (Scapholeberis mucronata O.F. Müller 1776, Cladocera, Daphniidae) auf die Baseline-Fluoreszenz und σ PSII, Fv/Fm, Fq′/Fm′ und NPQNSV von planktonischer Colacium sp. Um diese Methodik zu validieren, haben wir photophysiologische Messungen von angehängtem Colacium sp. an S. mucronata aufgezeichnet und diese Ergebnisse mit seinem planktonischen Stadium verglichen. Repräsentative Ergebnisse zeigten, wie das Protokoll die Auswirkungen von Calcium (Ca) und Mangan (Mn) auf die Photophysiologie von Colacium sp. bestimmen und die verschiedenen Auswirkungen der Mn-Anreicherung zwischen angeschlossenen und planktonischen Stadien identifizieren konnte. Schließlich diskutieren wir die Anpassungsfähigkeit dieses Protokolls an andere periphytische Algen.

Es gab keinen signifikanten Effekt der Baseline-Fluoreszenz (Abbildung 5) oder der Chl-a-Fluoreszenz (Abbildung 6) durch S. mucronata bis zu 5 Individuen (inds.) mL−1. Fv/Fm und NPQNSV waren jedoch signifikant betroffen, wenn S. mucronata 7,5 inds·mL−1 betrug. Daher wählten wir zur Messung der Photophysiologie von Colacium sp. während des angeschlo...

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Measuring Photophysiology of Attached Stage of Colacium sp. by a Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer

Das Fast Repetition Rate Fluorometer (FRRf) ist eine nützliche Methode zur Messung der Photophysiologie des Photosystems II und der Primärproduktivität. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Messung der PSII-Photophysiologie der Epizoenalge Colacium sp. auf Substratzooplankton mit Küvettentyp FRRf.

Messung der Photophysiologie des angeschlossenen Stadiums von Colacium sp. mit einem Küvetten-Fluorometer mit schneller Wiederholungsrate

Fast repetition rate fluorometer (FRRf) is a beneficial method for measuring photosystem II (PSII) photophysiology and primary productivity. Although FRRf ...

Dieses Protokoll misst die photosynthetische Aktivität von gebundenen Algen, während sie sich wie in der Natur noch an das Plankton binden. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass die Messung der Photophysiologie in Echtzeit ohne Ablenkung der Proben durchgeführt werden kann. Um die Auswirkungen von Zooplankton-Individuen auf die Ausgangsfluoreszenz zu untersuchen, bereiten Sie adulte Scapholeberis mucronata aus der Kultur ohne angeschlossene Organismen vor.Verhungern Sie nun die Individuen in FLW bei 20 Grad Celsius für mindestens 90 Minuten, um Fluoreszenz aus dem Darminhalt zu vermeiden. Gießen Sie 1,5 Milliliter FWL in eine Küvette. Holen Sie sich die gewünschte Anzahl von s.Mucronata-Personen verwenden eine Pipette unter einem optischen Mikroskop mit 100-facher Vergrößerung und übertragen sie in die Küvette. Fügen Sie FLW hinzu, um das Probenvolumen auf 2 Milliliter zu bringen, und lassen Sie es sich bei schwachem Licht bei 20 Grad Celsius für 15 Minuten vor der schnellen Wiederholungsraten-Fluorometermessung akklimatisieren. Klicken Sie dann auf "Handeln, um auszuführen", um die Messung zu starten und die Messungen mehr als dreimal pro Probe zu wiederholen.Lesen Sie den F0-Wert aus dem resultierenden Diagramm. Nehmen Sie Kolazienarten mit einem gehäuteten Panzer mit einer Pipette unter einem optischen Mikroskop bei 100-facher Vergrößerung auf und waschen Sie sie mit FLW. Aseptisch impfen Kolaziumspezies im AF-6-Medium in einem 10-Milliliter-Glasröhrchen auf einer sauberen Bank.Halten Sie die Kultur bei einer NC2-Temperatur in einer Wachstumskammer und schütteln Sie die Glasröhre mindestens einmal täglich sanft von Hand, um eine Zellablagerung zu verhindern. Um die Auswirkungen von Zooplankton-Individuen auf Chlorophyll a Fluoreszenz von Colacium-Arten zu untersuchen, verwenden Sie adulte S. mucronata ohne angehängte Organismen.Um Fluoreszenz aus dem Darminhalt zu vermeiden, verhungern Sie die Personen in FLW für mindestens 90 Minuten. Richten Sie ein küvettenartiges Fluorometer mit schneller Wiederholungsrate ein. Gießen Sie nun eine 1,5-Milliliter-Teilprobe vorkultivierter Kolazienarten in eine Küvette.Anschließend die gewünschte Anzahl von s. mucronata-Individuen in diese Küvetten überführen und das Probenvolumen mit dem filtrierten Medium auf bis zu 2 Milliliter bringen. Akklimatisieren Sie die Personen bei schwachem Licht bei 20 Grad Celsius für 15 Minuten, bevor Sie die schnelle Wiederholungsraten-Fluorometermessung durchführen.Klicken Sie auf "Handeln, um auszuführen", um die Messung zu starten, und wiederholen Sie die Messungen mehr als dreimal pro Probe. Lesen Sie die F0- und FM-Werte aus dem resultierenden Diagramm. Um die Basisfluoreszenz zu korrigieren, filtern Sie das Kulturmedium mit einem 0,2-Mikrometer-Gießfilter und messen Sie die Fluoreszenz.Subtrahieren Sie F0 der Ausgangsprobe von F0 und FM von Kolaziumspezies, oder ändern Sie den leeren Korrekturwert in den Einstellungen auf der Registerkarte Optionen. Isolieren Sie S. mucronata-Individuen mit Kolaziumspezies mit einer Pipette unter einem optischen Mikroskop.Dann s. mucronata mit FLW waschen. Übertragung s.Mucronata in 100 Milliliter FLW und halten Sie sie unter dunklen Bedingungen bei NC2-Temperatur für 90 Minuten zum Verhungern. Gießen Sie 1,5 Milliliter FLW in eine Küvette. Transfer ca. zehn s.Mucronata-Individuen mit Colacium-Spezies in eine Küvette und fügen Sie FLW hinzu, um die Probe auf 2-Milliliter zu bringen. Akklimatisieren Sie die Individuen bei schwachem Licht bei N2C-Temperatur für 15 Minuten und messen Sie Chlorophyll eine Fluoreszenz, wie im Textmanuskript erwähnt. Um die Anzahl der angeschlossenen Zellen aufzulisten, fixieren Sie die Probe mit 2% Glutaraldehyd, nachdem Sie die schnelle Wiederholungsraten-Fluorometermessung durchgeführt haben.Nehmen Sie dann Bilder in mehreren Brenntiefen und Positionen von s. mucronata unter einem Lichtmikroskop auf. Es gab keinen signifikanten Effekt auf die Baseline-Fluoreszenz oder Chlorophyll eine Fluoreszenz durch s.Mucronata bis zu 5 Individuen pro Milliliter. Die maximale photochemische Effizienz und die nicht-photochemische Abschreckung wurden jedoch signifikant beeinflusst, wenn die Dichte von s. mucronata 7,5 Individuen pro Milliliter betrug.Saisonale Schwankungen in der Phytophysiologie von Kolaziumspezies während der Anheftungsphase und der planktonischen Phase für die stationäre Phase im AF-6-Medium zeigten eine ähnliche mittlere maximale photochemische Effizienz und nicht-photochemische Abschreckung. Für das angehängte Stadium von Kolaziumspezies unter dunklen Bedingungen gab es keinen signifikanten Unterschied in den photophysiologischen Parametern, außer dass die nicht-photochemische Abschreckung für Mangan höher war als Kalzium nach drei Stunden und bei einer geringen Lichtintensität nach 21 Stunden. Für das planktonische Stadium war der PS2-Absorptionsquerschnitt im Mangan mit drei Stunden signifikant niedriger als bei der Calciumbehandlung.Die effektive photochemische Effizienz war signifikant höher, aber die nicht-photochemische Abschreckung war bei der Manganbehandlung geringer als die Kontrolle nach 21 Stunden. Unter zunehmendem Licht neigte Mangan dazu, den PS2-Absorptionsquerschnitt um drei Stunden zu verringern, bei nicht-photochemischer Abschreckung um 21 Stunden, während die effektive photochemische Effizienz bei drei Stunden erhöht wurde. Calcium verbesserte die nicht-photochemische Abschreckung bei zunehmendem Licht leicht.Es verringerte jedoch die effektive photochemische Effizienz um drei Stunden. Das Wichtigste ist die Wirkung von Substratorganismen. Wenn Algen an verschiedene Arten oder Materialien gebunden sind, kann der Effekt unterschiedlich sein.Zusätzlich zu diesem Protokoll sind die Messung der Kohlenstofffixierung oder der Sauerstoffproduktionsraten nützlich, um die Reaktion der Kalziumproduktivität auf die experimentellen Manipulationen zu klären. Mit diesem Protokoll können wir klären, wie die photosynthetische Aktivität der angehängten Algen auf Umweltveränderungen reagiert.

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