Name: measuring photophysiology of attached stage of colacium sp. by a cuvette-type fast repetition rate fluorometer
Uploaded: 2021-11-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Photophysiology of Attached Stage of Colacium sp. by a Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer at JoVE.com

העבודה נתמכה על ידי קרן המחקר השיתופית ממחוז שיגה תחת הכותרת "מחקר על איכות המים וסביבת קרקעית האגם להגנה על יציבות סביבת המים" במסגרת המענק היפני להתחדשות אזורית והקרן למחקר סביבתי ופיתוח טכנולוגיה (מס '5-1607) של המשרד לאיכות הסביבה, יפן. https://www.kantei.go.jp/jp/singi/tiiki/tiikisaisei/souseikoufukin.html. המחברים רוצים להודות לאנגו (www.enago.jp) על סקירת השפה האנגלית.

1. דגימה
<ol><li>לאסוף מי אגם מפני השטח על ידי דלי. כדי למקד Colacium sp. מחובר S. mucronata (איור 1A-C) לסנן 0.5-10 L של מי אגם באמצעות רשת רשת ניילון 100 מיקרומטר net52. הערה: S. mmorronata לעתים קרובות לצבור בצפיפות במים רדודים, אוטרופיים, בוציים, כגון בין ק...

פרוטוקול זה הדגים בפעם הראשונה כי פוטופיזיולוגיה של Colacium sp. במהלך השלב המצורף בסביבה טבעית דומה לשלב הפלנקטוני שלה במדיום AF-6. בנוסף, תכולת המעיים של S. mucronata מורעב לא השפיעה על קו הבסיס ועל פלואורסצנטיות Chl-a כאשר הצפיפות הייתה ≤5 inds·mL−1 (איור 5 <strong class="xfig"...

פלואורסצנטיות משתנה כלורופיל היא כלי שימושי למדידת פוטו-מערכת אצות II (PSII) פוטופיזיולוגיה. אצות מגיבות ללחצים סביבתיים שונים, כגון מחסור עודף באור וחומרים מזינים, על ידי שינוי הפוטופיזיולוגיה של PSII שלהן. פלואורומטר קצב חזרה מהיר (FRRf) היא שיטה נפוצה למדידת פוטופיזיולוגיה PSII1,2 והערכת הפרודוקטיביות הראשונית1,3,4, המאפשרת ניטור פיטופלנקטון PSII פוטופיזיולוגיה, כמו גם פרודוקטיביות ראשונית על פני סולמות מרחביים וטמפורליים רחבים5,6,7. FRRf יכול למדוד בו זמנית חתך ספיגה PSII (σ PSII), ריכוז מרכז התגובה ([RCII]), יעילות פוטוכימית מרבית (Fv/Fm), יעילות פוטוכימית יעילה (Fq′/Fm′) ומרווה לא פוטוכימית (NPQNSV) (טבלה 1). באופן כללי, Fv/ Fm ו- Fq′/Fm′ מוגדרים כפעילות PSII8, בעוד NPQNSV מוגדר כאנרגיה יחסית מפוזרת חום9.
חשוב לציין, הבזקי מחזור יחיד (ST) של FRRf מפחיתים באופן מלא את מקבל האלקטרונים העיקרי של קינון, QA, אך לא את בריכת הפלסטוקווינון. לעומת זאת, תחלופה מרובה (MT) הבזקים מאפנון משרעת דופק (PAM) פלואורומטר יכול להפחית את שניהם. לשיטת ST יש יתרון ברור על פני שיטת MT בעת זיהוי המקורות האפשריים של NPQNSV על ידי מדידת קינטיקה של התאוששות בו זמנית של Fv / Fm, Fq ′/ Fm′, NPQNSV ו- σ PSII10. עד כה, מספר סוגים של מכשירי FRRf, כגון סוג צוללת, סוג קובט וסוג זרימה, זמינים מסחרית. FRRf מסוג צוללת מאפשר מדידות מיקום באוקיינוסים ובאגמים, ואילו FRRf מסוג cuvette מתאים למדידת נפחי מדגם קטנים. סוג הזרימה משמש בדרך כלל כדי למדוד ברציפות את הפוטופיזיולוגיה של פיטופלנקטון במים על פני השטח.
בהתחשב בהתפתחות של פלואורומטרים PAM, כולל סוג הקובט, עבור מגוון רחב של נושאים11, פלואורומטרים PAM עדיין נפוצים יותר מאשר FRRfs במחקר פוטופיזיולוגיה אצות12. לדוגמה, למרות מבנה תא המדגם ואת קיבולת cuvette בין כלים אלה רק שונה במקצת, PAM מסוג cuvette הוחל על phytoplanktons13,14,15, מיקרו-אצות בנטיות16,17,18, אצות קרח19, ואצות אפיזואיות20, בעוד FRRf מסוג cuvette הוחל בעיקר על פיטופלנקטונים21,22,23 ומספר מוגבל של קהילות אצות קרח24,25. בהתחשב ביעילותו, FRRf מסוג cuvette ישים באותה מידה לאצות בנטיות ואפיזואיות. לכן, הרחבת היישום שלה תספק תובנה ניכרת לתוך פוטופיזיולוגיה PSII, במיוחד עבור פוטופיזיולוגיה אצות אצות פחות ידוע.
אצות אפיזואיות קיבלו תשומת לב מועטה, עם מחקרים מעטים שבוחנים את הפוטופיזיולוגיה PSII שלהם20,26, ככל הנראה בשל תפקידיהם המשניים ברשתות מזון ימי27,28. עם זאת, אפיביונטים, כולל אצות אפיזואיות, יכולים להשפיע באופן חיובי על הדינמיקה הקהילתית של זואופלנקטון, כגון הגדלת שיעורי הרבייה וההישרדות29,30, כמו גם תהליכי השפעה שלילית, כגון הגדלת שיעור הטביעה22,31 ופגיעות לטורפים חזותיים32,33,34,35,36 . לכן, חקר הגורמים הסביבתיים והביולוגיים השולטים בדינמיקת האפיביונט בקהילות זואופלנקטון הוא קריטי.
בין אצות אפיזואיות, קולאקיום ארנברג 1834 (Euglenophyta) הוא קבוצה נפוצה, מים מתוקים, אצות 32,37,38,39 עם שלבי חיים שונים, כולל מצורף (איור 1A-D), פלנקטוני לא רגשן (איור 1E, F) ושלבים פלנקטוניים מוטיבים40,41 . במהלך השלב הפלנקטוני הלא-מוטיב, תאים חיים כפלנקטונים חד-תאיים, מושבות מצטברות או מושבות גיליון בשכבה אחת, המכוסות על ידי ריריות42. בשלב המצורף, Colacium sp. משתמש ברירית המופרשת מהקצה הקדמי של התא37,39,41 כדי לצרף אורגניזמים מצע (basibionts), במיוחד microcrustaceans41,43. מחזור החיים שלהם כרוך גם בהתנתקות מהשלד החיצוני המותך או מהבסיס המת ובשחייה עם הפלאגלה שלהם כדי למצוא אורגניזם מצע אחר39. הן שלבים פלנקטוניים והן שלבים מצורפים יכולים להגדיל את גודל האוכלוסייה שלהם על ידי mitosis40. למרות שהשלב המצורף שלהם הוא ההשערה כתכונה אבולוציונית לאיסוף משאבים, כגון אור44 ואלמנטים קורט41,45,46, או כאסטרטגיית פיזור27, מעט ראיות ניסיוניות זמינות על היבטים אלה37,41,44 ומנגנוני ההתקשרות העיקריים אינם ידועים ברובם. לדוגמה, רוסובסקי וקוגרנס ציפו שקולכסיום יקבל מנגן (Mn) ממצע קופפודס41, המרוכז בשלד החיצוני47.
כאן, אנו מתארים כיצד למדוד פוטופיזיולוגיה PSII של אצות פלנקטוניות ואת שיטת היישום הקשורה למיקוד אצות מצורפות (צירוף לזואופלנקטון) עם תאי קולאציום sp. באמצעות FRRf מסוג cuvette. אנו משתמשים במערכת Act2 המצוידת בשלוש דיודות פולטות אור (נורות LED) המספקות אנרגיית עירור הבזק המרוכזת ב- 444 ננומטר, 512 ננומטר ו- 633 nm48. כאן, 444 ננומטר (כחול) מתאים לשיא הקליטה של chrophyll a (Chl-a), בעוד 512 ננומטר (ירוק) ו 633 ננומטר (כתום) תואמים את פסגות הקליטה של phycoerythrin ו phycocyanin, בהתאמה. שיא זיהוי האותות הפלואורסצנטיים הוא 682 ננומטר עם רוחב פס של 30 ננומטר. מאז קשה למצוא את השלב הפלנקטוני של Colacium sp. בסביבות טבעיות, השלב המצורף שלהם נאסף עבור הניסויים. בין האורגניזמים הרבים של המצע, Scapholeberis mucronata O.F. Müller 1776 (Branchiopoda, דפניידה; איור 1A, B, G) הוא אחד הפשוטים ביותר לטיפול בשל מהירות השחייה האיטית שלהם, גודל הגוף הגדול שלהם (400-650 מיקרומטר) והתנהגות ייחודית (תלויה הפוך על פני המים). לכן, פרוטוקול זה משתמש Colacium sp. מצורף על S. mucronata כמקרה מבחן של מערכת קולציום-basibiont. כדי למנוע פלואורסצנטיות הנגזרת מתכולת המעיים, S. mucronata היה מורעב. כמו מחקר קודם דיווח כי אות פלואורסצנטיות מתכולת המעיים (אצות בלע) מציג ירידה של פי חמישה לאחר 40 דקות49, ציפינו כי 90 דקות רעב יהיה מספיק כדי למזער את האפשרות של פלואורסצנטיות תוכן המעי המשפיע על מדידת FRRf עם השפעות מינימליות של מתח ניסיוני Colacium sp., כגון מחסור בחומרים מזינים. יתר על כן, פרוטוקול זה יושם כדי להבהיר את מנגנון ההצמדה של Colacium sp. ולקבוע כיצד שתי מתכות, סידן (Ca) ומנגן (Mn) להשפיע על הפוטופיזיולוגיה של שני שלבים פלנקטוניים מצורפים. סידן ממלא תפקידי מפתח במסלולים הפוטוסינתטיים50 בדרכים מרובות, ושתי המתכות נדרשות כדי לבנות את הקומפלקסים המתפתחים בחמצן של PSII51. כמו סידן ומנגן מרוכזים מאוד carapace של zooplankton47 הסרטני, אנו משערים כי Colacium sp. פוטופיזיולוגיה עשוי להגיב באופן בולט יותר Ca ו Mn העשרה במהלך השלב הפלנקטוני אם שלב זה בחיים מקבל אלמנטים אלה מ S. mucronata במהלך השלב המצורף.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acrodisc syringe filter</td>
			<td>Pall Corporation, Ann Arbor, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>0.2 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Act2Run</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Wako</td>
			<td>023-08711</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183;2H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>031-25031</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-00382</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-05522</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoCl2&#183;6H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-03682</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concentrated Chlorella</td>
			<td>Recenttec, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td>20 mg C&#183;mL&#8722;1 ; store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FastOcean Act2</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fe-citrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>093-00952</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeCl3&#183;6H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>091-00872</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCLP-880PF</td>
			<td>Nippon Medical and Chemical Instruments 
			&#160;Co., Ltd., Osaka, Japan</td>
			<td></td>
			<td>With LED light bulbs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>160-04292</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>167-04241</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>137-00402</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl3&#183;4H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>139-00722</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2EDTA</td>
			<td>Wako</td>
			<td>343-01861</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2MoO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>196-02472</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaNO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>191-02542</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4NO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>015-03231</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plankton Counter</td>
			<td>Matsunami Glass, Osaka, Japan</td>
			<td>S6300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pylex test tube</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td>With rim, 16 x 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B1</td>
			<td>Wako</td>
			<td>203-00851</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B12</td>
			<td>Wako</td>
			<td>226-00343</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B6</td>
			<td>Wako</td>
			<td>165-05401</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>264-00402</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring photophysiology of attached stage of colacium sp. by a cuvette-type fast repetition rate fluorometer

פלואורומטר קצב חזרה מהיר (FRRf) היא שיטה מועילה למדידת פוטו-מערכת II (PSII) פוטופיזיולוגיה ופרודוקטיביות ראשונית. למרות ש-FRRf יכול למדוד חתך רוחב של ספיגת PSII (σ PSII), יעילות פוטוכימית מרבית (Fv/Fm), יעילות פוטוכימית יעילה (Fq′/Fm′), ומרווה לא פוטוכימית (NPQNSV) עבור אצות אוקריוטיות שונות וציאנובקטריה, כמעט כל מחקרי FRRf עד כה התמקדו בפיטופלנקטון. כאן, הפרוטוקול מתאר כיצד למדוד פוטופיזיולוגיה PSII של אצה אפיזואית Colacium sp. Ehrenberg 1834 (Euglenophyta), בשלב המצורף שלה (מצורף זואופלנקטון), באמצעות FRRf מסוג cuvette. ראשית, הערכנו את ההשפעות של זואופלנקטון מצע (Scapholeberis mucronata O.F. Müller 1776, Cladocera, Daphniidae) על פלואורסצנטיות בסיסית σ PSII, Fv / Fm, Fq ′/ Fm ′, ו- NPQNSV של קולקיום sp פלנקטוני. כדי לאמת מתודולוגיה זו, הקלטנו מדידות פוטופיזיולוגיות של קולאקיום sp. מצורף על S. mucronata והשווינו תוצאות אלה עם השלב הפלנקטוני שלה. תוצאות מייצגות הראו כיצד הפרוטוקול יכול לקבוע את ההשפעות של סידן (Ca) ומנגן (Mn) על Colacium sp. פוטופיזיולוגיה ולזהות את ההשפעות השונות של העשרת Mn בין שלבים מצורפים פלנקטוניים. לבסוף, אנו דנים בהסתגלות של פרוטוקול זה לאצות פריפיטיות אחרות.

לא הייתה השפעה משמעותית של פלואורסצנטיות בסיסית (איור 5) או פלואורסצנטיות Chl-a (איור 6) על ידי S. mucronata עד 5 אנשים (inds.) mL−1. עם זאת, Fv / Fm ו- NPQNSV הושפעו באופן משמעותי כאשר S. mucronata היה 7.5 inds·mL−1. לכן, למדידת הפו...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Photophysiology of Attached Stage of Colacium sp. by a Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer at JoVE.com

Measuring Photophysiology of Attached Stage of Colacium sp. by a Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer

פלואורומטר קצב חזרה מהיר (FRRf) היא שיטה מועילה למדידת פוטו-פיזיולוגיה של פוטו-מערכת II ופרודוקטיביות ראשונית. כאן אנו מתארים פרוטוקול כדי למדוד פוטופיזיולוגיה PSII של אצה אפיזואית, Colacium sp. על מצע zooplankton באמצעות FRRf סוג cuvette.

מדידת פוטופיזיולוגיה של השלב המצורף של קולאקיום sp. על ידי פלואורומטר קצב חזרה מהירה מסוג Cuvette

Fast repetition rate fluorometer (FRRf) is a beneficial method for measuring photosystem II (PSII) photophysiology and primary productivity. Although FRRf ...

פרוטוקול זה מודד את הפעילות הפוטוסינתטית של אצות מחוברות, בעוד הן עדיין מחוברות לפלנקטון, בדיוק כמו בטבע. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי המדידה של פוטופיזיולוגיה ניתן לעשות בזמן אמת ללא הסחת דעת מדגם. כדי לבחון את ההשפעות של אנשים zooplankton על פלואורסצנטיות בסיסית, להכין mucronata scapholeberis מבוגר מהתרבות ללא כל אורגניזמים מחוברים.עכשיו להרעיב את האנשים ב FLW ב 20 מעלות צלזיוס לפחות 90 דקות, כדי למנוע פלואורסצנטיות מתכולת המעיים. יוצקים 1.5 מיליליטר של FWL לתוך cuvette. לאסוף את המספר הרצוי של s.אנשי mucronata באמצעות פיפטה תחת מיקרוסקופ אופטי בהגדלה של פי 100 ומעבירים אותם לקובט. הוסף FLW כדי להביא את נפח המדגם עד 2 מיליליטר ולאפשר לו להתאקלם תחת אור נמוך ב 20 מעלות צלזיוס הוא במשך 15 דקות לפני מדידת פלואורומטר קצב החזרה המהירה. לאחר מכן לחץ על act כדי לרוץ"כדי להתחיל את המדידה ולחזור על המדידות יותר משלוש פעמים לכל מדגם.קרא את ערך F0 מהתוויה המתקבלת. לאסוף מינים קולאקיום עם קרפאצ'ה מותך באמצעות פיפטה תחת מיקרוסקופ אופטי בהגדלה של פי 100 ולשטוף אותם עם FLW. מינים של קולקיום מחוסנים באופן אספטי במדיום AF-6 בצינור זכוכית של 10 מיליליטר על ספסל נקי.לשמור על התרבות בטמפרטורה NC2 בתא צמיחה, רועד צינור הזכוכית בעדינות ביד לפחות פעם ביום כדי למנוע התיישבות התא. כדי לבחון את ההשפעות של אנשים zooplankton על כלורופיל פלואורסצנטיות ממיני קולציום, להשתמש s. mucronata למבוגרים ללא כל אורגניזמים מחוברים.כדי למנוע פלואורסצנטיות מתכולת המעיים, הרעיבו את האנשים ב- FLW למשך 90 דקות לפחות. הגדירו פלואורומטר קצב חזרה מהיר מסוג קובט. עכשיו לשפוך 1.5 מיליליטר של תת מדגם של מינים מראש תרבית קולציום לתוך cuvette.לאחר מכן להעביר את המספר הרצוי של s. mucronata אנשים לתוך cuvettes אלה ולהביא את נפח המדגם עד 2 מיליליטר עם המדיום המסונן. התאקלם האנשים תחת אור נמוך ב 20 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות לפני נטילת מדידת פלואורומטר קצב החזרה המהירה.לחץ על מעשה כדי לרוץ"כדי להתחיל את המדידה, חוזר על המדידות יותר משלוש פעמים לכל מדגם. קרא את ערכי F0 ו- FM מהתוויה המתקבלת. כדי לתקן את הפלואורסצנטיות הבסיסית, סנן את מדיום התרבות באמצעות מסנן בגודל 0.2 מיקרומטר ומדוד את הפלואורסצנטיות.הפחת F0 של הדגימה הבסיסית מ- F0 ו- FM של מיני קולציום או שנה את ערך התיקון הריק בהגדרות בכרטיסיית האפשרויות.לאחר מכן לשטוף s. mucronata באמצעות FLW. העברה s.mucronata לתוך 100 מיליליטר של FLW ולשמור אותם בתנאים כהים בטמפרטורת NC2 במשך 90 דקות לרעב. יוצקים 1.5 מיליליטר של FLW לתוך cuvette. העברה סביב עשר שניות.אנשים mucronata עם מינים קולציום לתוך cuvette ולהוסיף FLW להביא את המדגם עד 2 מיליליטר. התאקלמו האנשים תחת אור נמוך בטמפרטורת N2C במשך 15 דקות ולמדוד כלורופיל פלואורסצנטיות, כפי שהוזכר בכתב היד של הטקסט. כדי למנות את מספר התאים המצורפים, לתקן את המדגם עם 2% glutaraldehyde לאחר נטילת מדידת פלואורומטר קצב החזרה המהירה.לאחר מכן צלם תמונות בכמה עומקים ממוקדים ועמדות של s. mucronata תחת מיקרוסקופ אור. לא הייתה השפעה משמעותית על פלואורסצנטיות בסיסית או כלורופיל פלואורסצנטיות על ידי s.mucronata עד 5 אנשים למיליליטר. עם זאת, יעילות פוטוכימית מקסימלית ומרווה לא פוטוכימית הושפעו באופן משמעותי כאשר צפיפות s. mucronata היה 7.5 אנשים למיליליטר.וריאציה עונתית בפיטופיזיאולוגיה של מיני קולציום בשלב ההתקשרות ובשלב הפלנקטוני לשלב הנייח במדיום AF-6 הראתה יעילות פוטוכימית מקסימלית ממוצעת דומה ומרווה לא פוטוכימי. עבור השלב המצורף של מיני קולציום בתנאים כהים, לא היה הבדל משמעותי בפרמטרים פוטופיזיולוגיים, למעט מרווה לא פוטוכימי להיות גבוה יותר עבור מנגן מאשר סידן לאחר שלוש שעות, ובעוצמה נמוכה אור ב 21 שעות. בשלב הפלנקטוני, חתך ספיגת PS2 היה נמוך משמעותית במנגן מאשר טיפול בסידן בשלוש שעות.יעילות פוטוכימית יעילה הייתה גבוהה משמעותית, אך מרווה לא פוטוכימי היה נמוך יותר בטיפול במנגן מאשר שליטה ב -21 שעות. תחת אור הולך וגובר, מנגן נטה להפחית את חתך ספיגת PS2 בשלוש שעות, במרווה לא פוטוכימי ב 21 שעות, תוך הגדלת היעילות פוטוכימית יעילה בשלוש שעות. סידן השתפר מעט מרווה לא פוטוכימי תחת אור הולך וגובר.עם זאת, זה הפחית את היעילות פוטוכימית יעילה בשלוש שעות. הדבר החשוב ביותר הוא ההשפעה של אורגניזמים מצע. אם אצות מחוברות למינים או חומרים שונים, ההשפעה יכולה להיות שונה.בנוסף לפרוטוקול זה, מדידה של קיבוע פחמן או שיעורי ייצור חמצן שימושיים כדי להבהיר את התגובה של פרודוקטיביות הסידן למניפולציות הניסיוניות. פרוטוקול זה מאפשר לנו להבהיר כיצד הפעילות הפוטוסינתטית של אצות מצורפות מגיבה לשינויים סביבתיים.

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Photophysiology of Attached Stage of Colacium sp. by a Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

הכנת תרבויות העצבית מ Midgastrula עוברים שלב תסיסנית

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Chromatin Immunoprecipitation Assay for Tissue-specific Genes using Early-stage Mouse Embryos

הכרומטין Assay immunoprecipitation עבור גנים ספציפיים רקמות באמצעות שלבים מוקדמים של עוברי עכברים

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful tool to identify protein:chromatin interactions that occur in the context of living cells 1-3. This ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

מדידת Fluxes סידן מהיר ב cardiomyocytes

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

שיפור שיעור ההצלחה של התגבשות חלבון על ידי Microseed מטריקס אקראי הקרנה

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Monitoring Functionality and Morphology of Vasculature Recruited by Factors Secreted by Fast-growing Tumor-generating Cells

פונקציונליות ניטור ומורפולוגיה של כלי דם גויס על ידי גורמים מופרשים על ידי תאים מניבי גידול בצמיחה מהיר

The subcutaneous matrigel plug assay in mice is a method of choice for the in vivo evaluation of pro- and anti-angiogenic factors. In this method, desired ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

הקלטת תיקון מהדק מצורף תא אחד ערוצים

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generation of Enterobacter sp. YSU Auxotrophs Using Transposon Mutagenesis

Generation of Enterobacter sp. YSU Auxotrophs Using Transposon Mutagenesis

דור של<em&gt; Enterobacter</em&gt; Sp. YSU Auxotrophs שימוש transposon mutagenesis

Prototrophic bacteria grow on M-9 minimal salts medium supplemented with glucose (M-9 medium), which is used as a carbon and energy source. Auxotrophs can ...

Floral-Dip Transformation of Flax (Linum usitatissimum) to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Floral-Dip Transformation of Flax Linum usitatissimum to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

טרנספורמציה הפרחוני-Dip של פשתן (<em&gt; Linum usitatissimum</em&gt;) כדי ליצור progenies טרנסגניים עם שיעור שינוי גבוה

Agrobacterium-mediated plant transformation via floral-dip is a widely used technique in the field of plant transformation and has been reported to be ...