Name: measuring photophysiology of attached stage of colacium sp. by a cuvette-type fast repetition rate fluorometer
Uploaded: 2021-11-12T13:00:00
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इस काम को शिगा प्रीफेक्चर से सहयोगात्मक अनुसंधान कोष द्वारा समर्थित किया गया था जिसका शीर्षक था "जल पर्यावरण की सुदृढ़ता की सुरक्षा के लिए पानी की गुणवत्ता और झील के नीचे के वातावरण पर अध्ययन" क्षेत्रीय पुनरुद्धार के लिए जापानी अनुदान और पर्यावरण अनुसंधान और प्रौद्योगिकी विकास निधि (संख्या 5-1607) पर्यावरण मंत्रालय, जापान के तहत। https://www.kantei.go.jp/jp/singi/tiiki/tiikisaisei/souseikoufukin.html। लेखक अंग्रेजी भाषा की समीक्षा के लिए एनागो (www.enago.jp) को धन्यवाद देना चाहते हैं।

1. नमूना
<ol><li>एक बाल्टी द्वारा सतह से झील के पानी को इकट्ठा करें। कोलाशियम को लक्षित करने के लिए एस mucronata (चित्रा 1A-C) फ़िल्टर 0.5-10 एल झील के पानी के एक 100 μm नायलॉन जाल net52 का उ...

इस प्रोटोकॉल ने पहली बार प्रदर्शित किया कि प्राकृतिक वातावरण में संलग्न चरण के दौरान कोलासियम एसपी की फोटोफिजियोलॉजी एएफ -6 माध्यम में इसके प्लवक चरण के बराबर है। इसके अतिरिक्त, भूखे एस म्यूक्रोन...

क्लोरोफिल चर प्रतिदीप्ति अल्गल फोटोसिस्टम II (PSII) फोटोफिजियोलॉजी को मापने के लिए एक उपयोगी उपकरण है। शैवाल विभिन्न पर्यावरणीय तनावों का जवाब देते हैं, जैसे कि अतिरिक्त प्रकाश और पोषक तत्वों की कमी, उनके पीएसआईआई फोटोफिजियोलॉजी को बदलकर। फास्ट पुनरावृत्ति दर फ्लोरोमीटर (FRRf) PSII फोटोफिजियोलॉजी 1,2 को मापने और प्राथमिक उत्पादकता 1,3,4 का अनुमान लगाने के लिए एक सामान्य विधि है, जो फाइटोप्लांकटन PSII फोटोफिजियोलॉजी की निगरानी करने में सक्षम बनाता है, साथ ही साथ व्यापक स्थानिक और अस्थायी तराजू में प्राथमिक उत्पादकता 5,6,7। FRRf एक साथ PSII (σ PSII) अवशोषण क्रॉस सेक्शन, प्रतिक्रिया केंद्र ([RCII]) एकाग्रता, अधिकतम फोटोकैमिकल दक्षता (Fv / Fm), प्रभावी फोटोकैमिकल दक्षता (Fq′/Fm′), और गैर-फोटोकैमिकल शमन (NPQNSV) (तालिका 1) को माप सकता है। सामान्य तौर पर, Fv / Fm और Fq′/Fm' को PSII activity8 के रूप में परिभाषित किया जाता है, जबकि NPQNSV को सापेक्ष गर्मी-विलुप्त ऊर्जा 9 के रूप में परिभाषित किया गया है।
महत्वपूर्ण रूप से, FRRf के एकल टर्नओवर (एसटी) चमक पूरी तरह से प्राथमिक क्विनोन इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता, क्यूए को कम करते हैं, लेकिन प्लास्टोक्विनोन पूल नहीं। इसके विपरीत, पल्स आयाम मॉडुलन (पीएएम) फ्लोरोमीटर से कई टर्नओवर (एमटी) चमक दोनों को कम कर सकते हैं। एसटी विधि एमटी विधि पर एक स्पष्ट लाभ है जब एक साथ Fv / Fm, Fq'/ Fm', NPQNSV, और σ PSII10 की वसूली कैनेटीक्स को मापने के द्वारा NPQNSV के संभावित मूल की पहचान। आज तक, कई प्रकार के FRRf उपकरण, जैसे पनडुब्बी-प्रकार, क्यूवेट-प्रकार, और प्रवाह-थ्रू-प्रकार, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं। पनडुब्बी-प्रकार FRRf महासागरों और झीलों में सीटू माप में सक्षम बनाता है, जबकि cuvette-प्रकार FRRf छोटे नमूना मात्रा को मापने के लिए उपयुक्त है। प्रवाह के माध्यम से प्रकार का उपयोग आमतौर पर सतह के पानी में फाइटोप्लांकटन के फोटोफिजियोलॉजी को लगातार मापने के लिए किया जाता है।
पीएएम फ्लोरोमीटर के विकास को देखते हुए, जिसमें क्यूवेट-प्रकार भी शामिल है, विषयों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए 11, पीएएम फ्लोरोमीटर अभी भी अल्गल फोटोफिजियोलॉजी रिसर्च 12 में एफआरआरएफ की तुलना में अधिक आम हैं। उदाहरण के लिए, हालांकि इन उपकरणों के बीच नमूना कक्ष संरचना और क्यूवेट क्षमता केवल थोड़ी भिन्न होती है, लेकिन क्यूवेट-प्रकार पीएएम को फाइटोप्लांकटन 13,14,15, बेंथिक माइक्रोएल्गे 16,17,18, बर्फ शैवाल 19, और एपिज़ोइक शैवाल 20 पर लागू किया गया है, जबकि क्यूवेट-प्रकार के एफआरआरएफ को मुख्य रूप से फाइटोप्लांकटन 21,22,23 पर लागू किया गया है। और बर्फ algal समुदायों की एक सीमित संख्या24,25. इसकी प्रभावशीलता को देखते हुए, क्यूवेट-प्रकार के एफआरआरएफ बेंथिक और एपिज़ोइक शैवाल पर समान रूप से लागू होते हैं। इसलिए, इसके आवेदन का विस्तार PSII फोटोफिजियोलॉजी में काफी अंतर्दृष्टि प्रदान करेगा, विशेष रूप से कम ज्ञात एपिज़ोइक अल्गल फोटोफिजियोलॉजी के लिए।
एपिज़ोइक शैवाल को बहुत कम ध्यान दिया गया है, कुछ अध्ययनों ने अपने पीएसआईआई फोटोफिजियोलॉजी 20,26 की जांच की है, सबसे अधिक संभावना है कि जलीय खाद्य जाल 27,28 में उनकी मामूली भूमिकाओं के कारण। हालांकि, एपिजोइक शैवाल सहित एपिबियोंट, सकारात्मक रूप से ज़ोप्लांकटन सामुदायिक गतिशीलता को प्रभावित कर सकते हैं, जैसे कि प्रजनन और उत्तरजीविता दर 29,30 में वृद्धि, साथ ही नकारात्मक रूप से प्रभाव प्रक्रियाएं, जैसे कि डूबने की दर 29,31 और दृश्य शिकारियों के लिए भेद्यता 32,33,34,35,36 . इसलिए, ज़ोप्लांकटन समुदायों में एपिबायोंट गतिशीलता को नियंत्रित करने वाले पर्यावरणीय और जैविक कारकों की खोज करना महत्वपूर्ण है।
एपिज़ोइक शैवाल के बीच, कोलेसियम एहरेनबर्ग 1834 (यूग्लेनोफाइटा) एक आम, मीठे पानी, अल्गल समूह 32,37,38,39 है, जिसमें संलग्न (चित्रा 1 ए-डी), गैर-गतिशील प्लवक (चित्रा 1ई, एफ), और गतिशील प्लवक चरण40,41 सहित विभिन्न जीवन चरणों के साथ शामिल हैं। . गैर-गतिशील प्लवक चरण के दौरान, कोशिकाएं एकल-सेल प्लवक, एकत्रित कॉलोनियों, या एक-परत शीट कॉलोनियों के रूप में रहती हैं, जो म्यूसिलेज 42 द्वारा कवर की जाती हैं। संलग्न चरण में, कोलासियम एसपी सब्सट्रेट जीवों (basibionts), विशेष रूप से microcrustaceans41,43 से जुड़ने के लिए सेल 37,39,41 के पूर्वकाल के अंत से उत्सर्जित म्यूसिलेज का उपयोग करता है। उनके जीवन चक्र में पिघले हुए एक्सोस्केलेटन या मृत बेसिबियोंट से अलग होना और एक और सब्सट्रेट जीव 39 खोजने के लिए अपने फ्लैगेला के साथ तैरना भी शामिल है। प्लवक और संलग्न दोनों चरण माइटोसिस 40 द्वारा अपनी आबादी के आकार को बढ़ा सकते हैं। यद्यपि उनके संलग्न चरण को संसाधनों को इकट्ठा करने के लिए एक विकासवादी विशेषता होने की परिकल्पना की गई है, जैसे कि light44 और ट्रेस तत्व41,45,46, या एक फैलाव रणनीति 27 के रूप में, इन पहलुओं के बारे में बहुत कम प्रयोगात्मक सबूत उपलब्ध हैं37,41,44 और प्रमुख अनुलग्नक तंत्र काफी हद तक अज्ञात हैं। उदाहरण के लिए, रोसोव्स्की और कुग्रेन्स को उम्मीद थी कि कोलाशियम सब्सट्रेट कोपपोड्स 41 से मैंगनीज (एमएन) प्राप्त करता है, जो एक्सोस्केलेटन 47 में केंद्रित है।
यहां, हम वर्णन करते हैं कि प्लवक शैवाल के पीएसआईआई फोटोफिजियोलॉजी को कैसे मापा जाए और कोलेट-प्रकार के एफआरआरएफ का उपयोग करके कोलेसियम एसपी कोशिकाओं के साथ संलग्न शैवाल (ज़ोप्लांकटन से संलग्न) को लक्षित करने के लिए संबंधित आवेदन विधि। हम तीन प्रकाश उत्सर्जक डायोड (एलईडी) से लैस एक्ट 2 सिस्टम का उपयोग करते हैं जो 444 एनएम, 512 एनएम और 633 एनएम 48 पर केंद्रित फ्लैश उत्तेजना ऊर्जा प्रदान करते हैं। यहां, 444 एनएम (नीला) क्रोफिल ए (सीएचएल-ए) के अवशोषण शिखर से मेल खाती है, जबकि 512 एनएम (हरा) और 633 एनएम (नारंगी) क्रमशः फाइकोएरिथ्रिन और फाइकोसायनिन के अवशोषण चोटियों के अनुरूप है। फ्लोरोसेंट सिग्नल डिटेक्शन पीक 30 एनएम आधा बैंडविड्थ के साथ 682 एनएम है। चूंकि प्राकृतिक वातावरण में कोलाशियम एसपी के प्लवक चरण को ढूंढना मुश्किल है, इसलिए प्रयोगों के लिए उनके संलग्न चरण को एकत्र किया गया था। कई सब्सट्रेट जीवों में, स्कैफोलेबेरिस म्यूक्रोनाटा ओ.एफ. मुलर 1776 (ब्रांचिओपोडा, डैफनिइडे; चित्रा 1A, B, G) उनकी धीमी तैराकी की गति, बड़े शरीर के आकार (400-650 μm), और अद्वितीय व्यवहार (पानी की सतह पर उल्टा लटका) के कारण संभालने के लिए सबसे सरल में से एक है। इसलिए, यह प्रोटोकॉल कोलाशियम-बेसिबियोंट सिस्टम के मामले के अध्ययन के रूप में एस म्यूक्रोनाटा पर संलग्न कोलासियम एसपी का उपयोग करता है। आंत की सामग्री से प्राप्त प्रतिदीप्ति से बचने के लिए, एस म्यूक्रोनेटा को भूखा रखा गया था। जैसा कि पिछले अध्ययन ने बताया कि आंत सामग्री (निगला शैवाल) से प्रतिदीप्ति संकेत 40 मिनट 49 के बाद पांच गुना कमी प्रदर्शित करता है, हमें उम्मीद थी कि 90 मिनट भुखमरी आंत सामग्री प्रतिदीप्ति की संभावना को कम करने के लिए पर्याप्त होगी जो एफआरआरएफ माप को प्रभावित करती है, जैसे कि कोलेसियम एसपी के लिए प्रयोगात्मक तनाव के न्यूनतम प्रभावों के साथ, जैसे पोषक तत्वों की कमी। इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल को कोलासियम एसपी के संलग्न तंत्र को स्पष्ट करने और यह निर्धारित करने के लिए लागू किया गया था कि दो धातुओं, कैल्शियम (सीए) और मैंगनीज (एमएन) प्लवक और संलग्न दोनों चरणों के फोटोफिजियोलॉजी को कैसे प्रभावित करते हैं। कैल्शियम प्रकाश संश्लेषक pathways50 में कई तरीकों से महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, और दोनों धातुओं को PSII51 के ऑक्सीजन-विकसित परिसरों का निर्माण करने की आवश्यकता होती है। जैसा कि कैल्शियम और मैंगनीज क्रस्टेशियन ज़ोप्लांकटन 47 के कैरापेस में अत्यधिक केंद्रित हैं, हम परिकल्पना करते हैं कि कोलासियम एसपी फोटोफिजियोलॉजी प्लवक चरण के दौरान सीए और एमएन संवर्धन के लिए अधिक प्रमुखता से प्रतिक्रिया दे सकता है यदि यह जीवन चरण संलग्न चरण के दौरान एस म्यूक्रोनेटा से इन तत्वों को प्राप्त करता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acrodisc syringe filter</td>
			<td>Pall Corporation, Ann Arbor, MI, USA</td>
			<td></td>
			<td>0.2 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Act2Run</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Wako</td>
			<td>023-08711</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183;2H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>031-25031</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-00382</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-05522</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoCl2&#183;6H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>036-03682</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concentrated Chlorella</td>
			<td>Recenttec, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td>20 mg C&#183;mL&#8722;1 ; store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FastOcean Act2</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fe-citrate</td>
			<td>Wako</td>
			<td>093-00952</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeCl3&#183;6H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>091-00872</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCLP-880PF</td>
			<td>Nippon Medical and Chemical Instruments 
			&#160;Co., Ltd., Osaka, Japan</td>
			<td></td>
			<td>With LED light bulbs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>160-04292</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>167-04241</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>137-00402</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl3&#183;4H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>139-00722</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2EDTA</td>
			<td>Wako</td>
			<td>343-01861</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2MoO4</td>
			<td>Wako</td>
			<td>196-02472</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaNO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>191-02542</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4NO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>015-03231</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plankton Counter</td>
			<td>Matsunami Glass, Osaka, Japan</td>
			<td>S6300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pylex test tube</td>
			<td>CTG Ltd., West Molesey, UK</td>
			<td></td>
			<td>With rim, 16 x 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B1</td>
			<td>Wako</td>
			<td>203-00851</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B12</td>
			<td>Wako</td>
			<td>226-00343</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vit. B6</td>
			<td>Wako</td>
			<td>165-05401</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Wako</td>
			<td>264-00402</td>
			<td>AF-6 medium</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring photophysiology of attached stage of colacium sp. by a cuvette-type fast repetition rate fluorometer

फास्ट पुनरावृत्ति दर फ्लोरोमीटर (एफआरआरएफ) फोटोसिस्टम II (PSII) फोटोफिजियोलॉजी और प्राथमिक उत्पादकता को मापने के लिए एक लाभकारी विधि है। यद्यपि FRRf PSII अवशोषण क्रॉस-सेक्शन (σ PSII), अधिकतम फोटोकैमिकल दक्षता (Fv / Fm), प्रभावी फोटोकैमिकल दक्षता (Fq′/Fm′), और विभिन्न यूकेरियोटिक शैवाल और साइनोबैक्टीरिया के लिए गैर-फोटोकैमिकल शमन (NPQNSV) को माप सकता है, आज तक लगभग सभी FRRf अध्ययनों ने फाइटोप्लांकटन पर ध्यान केंद्रित किया है। यहां, प्रोटोकॉल का वर्णन करता है कि एक एपिज़ोइक एल्गा कोलाशियम एसपी के पीएसआईआई फोटोफिजियोलॉजी को कैसे मापा जाए। Ehrenberg 1834 (Euglenophyta), अपने संलग्न चरण में (zooplankton से जुड़ा हुआ), cuvette-प्रकार FRRf का उपयोग कर। सबसे पहले, हमने बेसलाइन प्रतिदीप्ति पर सब्सट्रेट ज़ोप्लांकटन (Scapholeberis mucronata O.F. Müller 1776, Cladocera, Daphniidae) के प्रभावों का अनुमान लगाया और σ PSII, Fv / Fm, Fq′/Fm′, और प्लवक कोलाशियम एसपी के NPQNSV। इस पद्धति को मान्य करने के लिए, हमने एस म्यूक्रोनाटा पर संलग्न कोलाशियम एसपी के फोटोफिजियोलॉजी माप दर्ज किए और इन परिणामों की तुलना इसके प्लवक चरण के साथ की। प्रतिनिधि परिणामों से पता चला है कि कैसे प्रोटोकॉल कोलासियम एसपी फोटोफिजियोलॉजी पर कैल्शियम (सीए) और मैंगनीज (एमएन) के प्रभावों को निर्धारित कर सकता है और संलग्न और प्लवक चरणों के बीच एमएन संवर्धन के विभिन्न प्रभावों की पहचान कर सकता है। अंत में, हम अन्य पेरिफाइटिक शैवाल के लिए इस प्रोटोकॉल की अनुकूलन क्षमता पर चर्चा करते हैं।

बेसलाइन प्रतिदीप्ति (चित्रा 5) या Chl-a प्रतिदीप्ति (चित्रा 6) का कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं था S. mucronata द्वारा 5 व्यक्तियों (inds.) mL−1 तक। हालांकि, Fv/Fm और NPQNSV का?...

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Measuring Photophysiology of Attached Stage of Colacium sp. by a Cuvette-Type Fast Repetition Rate Fluorometer

फास्ट पुनरावृत्ति दर फ्लोरोमीटर (FRRf) फोटोसिस्टम II फोटोफिजियोलॉजी और प्राथमिक उत्पादकता को मापने के लिए एक लाभकारी विधि है। यहां हम एक प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए epizoic alga के PSII photophysiology को मापने के लिए, Colacium sp. सब्सट्रेट zooplankton पर cuvette-प्रकार FRRf का उपयोग कर.

एक Cuvette-प्रकार तेजी से पुनरावृत्ति दर फ्लोरोमीटर द्वारा कोलाशियम एसपी के संलग्न चरण के फोटोफिजियोलॉजी को मापने

Fast repetition rate fluorometer (FRRf) is a beneficial method for measuring photosystem II (PSII) photophysiology and primary productivity. Although FRRf ...

यह प्रोटोकॉल संलग्न शैवाल की प्रकाश संश्लेषक गतिविधि को मापता है, जबकि वे अभी भी प्लवक से जुड़ रहे हैं, जैसे कि प्रकृति में। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि फोटोफिजियोलॉजी का माप नमूना व्याकुलता के बिना वास्तविक समय में किया जा सकता है। बेसलाइन प्रतिदीप्ति पर zooplankton व्यक्तियों के प्रभावों की जांच करने के लिए, किसी भी संलग्न जीवों के बिना संस्कृति से वयस्क scapholeberis mucronata तैयार करें।अब आंत की सामग्री से प्रतिदीप्ति से बचने के लिए कम से कम 90 मिनट के लिए FLW में व्यक्तियों को 20 डिग्री सेल्सियस पर भूखा रखें। एक cuvette में FWL के 1.5-milliliters डालो. s की वांछित संख्या उठाएं।100 गुना आवर्धन पर एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत एक पिपेट का उपयोग करने वाले म्यूक्रोनेटा व्यक्ति और उन्हें क्यूवेट में स्थानांतरित करते हैं। 2-मिलीलीटर तक नमूना मात्रा लाने के लिए FLW जोड़ें और इसे 20 डिग्री सेल्सियस पर कम प्रकाश के तहत acclimate करने की अनुमति तेजी से पुनरावृत्ति दर फ्लोरोमीटर माप से पहले 15 मिनट के लिए है। फिर चलाने के लिए अधिनियम पर क्लिक करें "माप शुरू करने के लिए और प्रति नमूना तीन बार से अधिक माप को दोहराने के लिए।परिणामी प्लॉट से F0 मान पढ़ें। 100 बार आवर्धन पर एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत एक पिपेट का उपयोग करके एक पिघला हुआ कैरापेस के साथ कोलाशियम प्रजातियों को उठाएं और उन्हें FLW के साथ धोएं। एक साफ बेंच पर 10-मिलीलीटर ग्लास ट्यूब में एएफ -6 माध्यम में एसेप्टिक रूप से कोलेसियम प्रजातियों को संक्रमित करें।एक विकास कक्ष में NC2 तापमान पर संस्कृति को बनाए रखें, सेल निपटान को रोकने के लिए प्रति दिन कम से कम एक बार कांच की ट्यूब को धीरे-धीरे हाथ से हिलाते हुए। कोलेसियम प्रजातियों से क्लोरोफिल एक प्रतिदीप्ति पर ज़ोप्लांकटन व्यक्तियों के प्रभावों की जांच करने के लिए, किसी भी संलग्न जीवों के बिना वयस्क एस म्यूक्रोनाटा का उपयोग करें।आंत सामग्री से प्रतिदीप्ति से बचने के लिए, FLW में व्यक्तियों को कम से कम 90 मिनट के लिए भूखा रखें। एक क्यूवेट-प्रकार की तेजी से पुनरावृत्ति दर फ्लोरोमीटर सेट करें। अब एक क्यूवेट में पूर्व-सुसंस्कृत कोलेसियम प्रजातियों के उप-नमूने के 1.5-मिलीलीटर डालें।फिर इन क्यूवेट में एस म्यूक्रोनाटा व्यक्तियों की वांछित संख्या को स्थानांतरित करें और नमूना मात्रा को फ़िल्टर किए गए माध्यम के साथ 2-मिलीलीटर तक लाएं। तेजी से पुनरावृत्ति दर फ्लोरोमीटर माप लेने से पहले 15 मिनट के लिए 20 डिग्री सेल्सियस पर कम रोशनी वाले व्यक्तियों को acclimate करें।पर क्लिक करें अधिनियम चलाने के लिए "माप शुरू करने के लिए, प्रति नमूना तीन बार से अधिक माप दोहराने के लिए। परिणामस्वरूप प्लॉट से F0 और FM मान पढ़ें। बेसलाइन प्रतिदीप्ति को सही करने के लिए, 0.2-माइक्रोमीटर डालने के आकार के फ़िल्टर का उपयोग करके संस्कृति माध्यम को फ़िल्टर करें और प्रतिदीप्ति को मापें।कोलाशियम प्रजातियों के F0 और FM से आधारभूत नमूने के F0 को घटाएं या विकल्प टैब में सेटिंग्स में रिक्त सुधार मान को संशोधित करें। ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत एक पिपेट का उपयोग करके कोलेसियम प्रजातियों के साथ s. mucronata व्यक्तियों को अलग करें।फिर FLW का उपयोग करके s. mucronata धोएं। स्थानांतरण एस।FLW के 100-milliliters में mucronata और भुखमरी के लिए 90 मिनट के लिए NC2 तापमान पर अंधेरे परिस्थितियों में उन्हें रखने के लिए। एक cuvette में FLW के 1.5-milliliters डालो. लगभग दस सेकंड के आसपास स्थानांतरण।एक cuvette में colacium प्रजातियों के साथ mucronata व्यक्तियों और FLW जोड़ने के लिए 2-milliliters तक नमूना लाने के लिए. 15 मिनट के लिए N2C तापमान पर कम रोशनी के तहत व्यक्तियों acclimate और क्लोरोफिल एक प्रतिदीप्ति उपाय, जैसा कि पाठ पांडुलिपि में उल्लेख किया गया है। संलग्न कोशिकाओं की संख्या की गणना करने के लिए, तेजी से पुनरावृत्ति दर फ्लोरोमीटर माप लेने के बाद नमूने को 2% ग्लूटाराल्डिहाइड के साथ ठीक करें।फिर एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत कई फोकल गहराई और एस म्यूक्रोनेटा की स्थिति पर तस्वीरें लें। बेसलाइन प्रतिदीप्ति या क्लोरोफिल पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ा एस द्वारा एक प्रतिदीप्ति।mucronata अप करने के लिए 5 व्यक्तियों के लिए प्रति milliliter. हालांकि, अधिकतम फोटोकैमिकल दक्षता और गैर-फोटोकैमिकल शमन काफी प्रभावित हुए थे जब एस म्यूक्रोनेटा घनत्व 7.5 व्यक्ति प्रति मिलीलीटर था।अनुलग्नक चरण के दौरान कोलासियम प्रजातियों के फाइटोफिजियोलॉजी में मौसमी भिन्नता और एएफ -6 माध्यम में स्थिर चरण के लिए प्लवक चरण ने समान माध्य अधिकतम फोटोकैमिकल दक्षता और गैर-फोटोकैमिकल शमन दिखाया। अंधेरे परिस्थितियों में कोलेसियम प्रजातियों के संलग्न चरण के लिए, फोटोफिजियोलॉजिकल मापदंडों में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था, सिवाय इसके कि गैर-फोटोकैमिकल शमन तीन घंटे के बाद कैल्शियम की तुलना में मैंगनीज के लिए अधिक था, और 21 घंटे में कम प्रकाश तीव्रता पर। प्लवक चरण के लिए, PS2 अवशोषण क्रॉस-सेक्शन तीन घंटे में कैल्शियम उपचार की तुलना में मैंगनीज में काफी कम था।प्रभावी फोटोकैमिकल दक्षता काफी अधिक थी, लेकिन गैर-फोटोकैमिकल शमन 21 घंटे में नियंत्रण की तुलना में मैंगनीज उपचार में कम था। बढ़ते प्रकाश के तहत, मैंगनीज ने तीन घंटे में पीएस 2 अवशोषण क्रॉस-सेक्शन को कम करने की प्रवृत्ति की, गैर-फोटोकैमिकल शमन में 21 घंटे में, जबकि तीन घंटे में प्रभावी फोटोकैमिकल दक्षता में वृद्धि की। कैल्शियम ने प्रकाश में वृद्धि के तहत गैर-फोटोकैमिकल शमन में थोड़ा सुधार किया।हालांकि, इसने तीन घंटे में प्रभावी फोटोकैमिकल दक्षता को कम कर दिया। सबसे महत्वपूर्ण बात सब्सट्रेट जीवों का प्रभाव है। यदि शैवाल विभिन्न प्रजातियों या सामग्रियों से जुड़ा हुआ है, तो प्रभाव अलग हो सकता है।इस प्रोटोकॉल के अलावा, कार्बन निर्धारण या ऑक्सीजन उत्पादन दरों का माप प्रयोगात्मक जोड़तोड़ के लिए कैल्शियम उत्पादकता की प्रतिक्रिया को स्पष्ट करने के लिए उपयोगी है। यह प्रोटोकॉल हमें यह स्पष्ट करने में सक्षम बनाता है कि संलग्न शैवाल की प्रकाश संश्लेषक गतिविधि पर्यावरणीय परिवर्तनों का जवाब कैसे देती है।

Research

JoVE Journal

Biology

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In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

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वयस्क माउस Calvarial अस्थि मज्जा में hematopoietic स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के Vivo 4 आयामी ट्रैकिंग में

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generation of Enterobacter sp. YSU Auxotrophs Using Transposon Mutagenesis

Generation of Enterobacter sp. YSU Auxotrophs Using Transposon Mutagenesis

की पीढ़ी<em&gt; Enterobacter</em&gt; सपा. YSU Auxotrophs transposon mutagenesis का उपयोग

Prototrophic bacteria grow on M-9 minimal salts medium supplemented with glucose (M-9 medium), which is used as a carbon and energy source. Auxotrophs can ...

Floral-Dip Transformation of Flax (Linum usitatissimum) to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Floral-Dip Transformation of Flax Linum usitatissimum to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

सन के पुष्प डुबकी परिवर्तन (<em&gt; Linum usitatissimum</em&gt;) एक उच्च परिवर्तन दर के साथ ट्रांसजेनिक संततियों उत्पन्न करने के लिए

Agrobacterium-mediated plant transformation via floral-dip is a widely used technique in the field of plant transformation and has been reported to be ...