Name: an epithelial abrasion model for studying corneal wound healing
Uploaded: 2021-12-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing at JoVE.com

फंडिंग: द्वारा समर्थित: एनआईएच ईवाई 018239 (एआरबी, सीडब्ल्यूएस, और आरईआर), पी 30 ईवाई 007551 (एआरबी), और सिग्मा शी ग्रांट इन एड ऑफ रिसर्च (पीकेए)। सामग्री पूरी तरह से लेखकों की ज़िम्मेदारी है और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान, या सिग्मा शी के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व नहीं करती है।

सभी पशु प्रोटोकॉल को ह्यूस्टन विश्वविद्यालय और बेलोर कॉलेज ऑफ मेडिसिन में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समितियों द्वारा अनुमोदित किया गया था। दृष्टि और नेत्र अनुसंधान में जानवरों के उपयोग पर एसोसिए?...

इस विधियों के पेपर का उद्देश्य एक ट्रेफिन और एक कुंद गोल्फ क्लब स्पड का उपयोग करके माउस में एक केंद्रीय कॉर्नियल उपकला घर्षण घाव बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करना था। इस मूत्र मॉडल का उपयोग कॉर्न?...

कॉर्निया आंख का पारदर्शी पूर्वकाल एक तिहाई है। कॉर्निया आंख की आंतरिक संरचनाओं की रक्षा करने और एक संरचनात्मक बाधा बनाने सहित कई कार्यों में कार्य करता है जो आंख को संक्रमण1 से बचाता है। इससे भी महत्वपूर्ण बात यह है कि कॉर्निया दृष्टि के लिए महत्वपूर्ण है, जो आंख 2,3 की अपवर्तक शक्ति का लगभग दो-तिहाई प्रदान करता है। दृष्टि में कॉर्निया की भूमिका के लिए महत्वपूर्ण इसकी पारदर्शिता है। हालांकि, इसकी बाहरी स्थिति के कारण, कॉर्निया को दिन-प्रतिदिन के आधार पर विभिन्न प्रकार की चोटों के संपर्क में लाया जाता है जिससे इसके बाधा कार्य में व्यवधान, पारदर्शिता का नुकसान और अंतिम अंधापन हो सकता है। कॉर्नियल पारदर्शिता का नुकसान दुनिया भर में दृश्य हानि का एक प्रमुख कारण है 4,5. कॉर्नियल घर्षण आपातकालीन कक्ष (ईआर) की यात्राओं का एक सामान्य कारण है, जो ईआर 6 में प्रस्तुत आंखों से संबंधित मामलों के आधे हिस्से के लिए लेखांकन करताहै। संयुक्त राज्य अमेरिका में सालाना 1 मिलियन से अधिक व्यक्तियों को आंखों से संबंधित चोटों से पीड़ित होने का अनुमानहै 7. इन चोटों के जवाब में कुशल कॉर्नियल घाव भरने कॉर्नियल होमियोस्टेसिस को बनाए रखने और इसकी पारदर्शिता और अपवर्तक क्षमताओं के संरक्षण के लिए निर्णायक है। समझौता किए गए कॉर्नियल घाव भरने की घटनाओं में, कॉर्निया संक्रमण, अल्सर और 8,9 को निशान देने के लिए कमजोर हो जाता है। इसके अलावा, अपवर्तक सर्जरी की बढ़ती लोकप्रियता कॉर्निया10 पर एक अद्वितीय दर्दनाक चुनौती रखती है। कॉर्नियल पारदर्शिता और दृष्टि के संरक्षण के लिए कॉर्नियल घाव भरने के मौलिक महत्व को देखते हुए, सामान्य कॉर्नियल घाव भरने की प्रक्रिया की बेहतर समझ संक्रमण और बीमारी से जुड़े बिगड़ा कॉर्नियल घाव भरने को समझने के लिए एक शर्त है।
उस अंत तक, कॉर्नियल घाव भरने के कई पशु मॉडल 11,12,13,14,15 विकसित किए गए हैं। कॉर्नियल घाव भरने के मूत्र मॉडल सामान्य शारीरिक स्थितियों के तहत काम करने वाले कॉर्नियल घाव भरने के तंत्र की हमारी समझ को आगे बढ़ाने में उपयोगी साबित हुए हैं। कॉर्नियल घाव भरने के अध्ययन में विभिन्न प्रकार के कॉर्नियल घावों को नियोजित किया गया है, प्रत्येक घाव भरने की प्रक्रिया के विभिन्न पहलुओं की जांच के लिए उपयुक्त है। कॉर्नियल घाव भरने के अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले सबसे आम प्रकार के घाव मॉडल यांत्रिक और रासायनिक घाव मॉडल हैं। रासायनिक कॉर्नियल घाव, ज्यादातर कॉर्निया पर क्षारीय जलने के निर्माण को शामिल करते हैं, कॉर्नियल अल्सर, ओपेसिफिकेशन और नियोवैस्कुलराइजेशन13 का अध्ययन करने के लिए उपयोगी होते हैं। यांत्रिक कॉर्नियल घावों में डिब्राइडमेंट (घर्षण) घाव और केराटेक्टॉमी घाव 14,15,16 शामिल हैं। एक बरकरार या भंग कॉर्नियल उपकला तहखाने झिल्ली क्रमशः डिब्राइडमेंट और केराटेक्टॉमी घावों को परिभाषित करती है। डिब्राइडमेंट घावों में, उपकला तहखाने झिल्ली बरकरार रहती है, जबकि केराटेक्टॉमी घावों में, तहखाने झिल्ली को ज्यादातर पूर्वकाल स्ट्रोमा में प्रवेश के साथ भंग कर दिया जाता है। कॉर्नियल घावों के बाद पुन: उपकलाकरण, उपकला कोशिका प्रसार, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और तंत्रिका पुनर्जनन का अध्ययन करने के लिए डिब्राइडमेंट घाव सबसे उपयोगी होते हैं। दूसरी ओर, केराटेक्टॉमी घाव, कॉर्नियल स्कारिंग14,15 का अध्ययन करने के लिए सबसे उपयोगी हैं।
यहां, ट्रेफिन और एक कुंद गोल्फ क्लब स्पड का उपयोग करके माउस में एक केंद्रीय कॉर्नियल उपकला घर्षण घाव बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है। यह सरल कॉर्नियल घाव भरने वाला मॉडल अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और अच्छी तरह से प्रकाशित है और अब इसका उपयोग रोग17 के संदर्भ में समझौता किए गए कॉर्नियल घाव भरने का मूल्यांकन करने के लिए किया जा रहा है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-CD31 antibody</td>
			<td>BD Bioscience, Pharmingen</td>
			<td>550274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD41 antibody</td>
			<td>BD Bioscience, Pharmingen</td>
			<td>553847</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ly6G antibody</td>
			<td>BD Bioscience, Pharmingen</td>
			<td>551459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>ThermoFisher scientific</td>
			<td>B14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeltaVision wide-field deconvolution fluorescence microscope</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Toploading Balances (Weighing scale)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>ThermoFisher scientific</td>
			<td>T038181000CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Golf-club spud</td>
			<td>Stephens instruments</td>
			<td>S2-1135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris curve scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>31212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Patterson veterinary</td>
			<td>07-890-8598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phospate buffered saline (PBS)</td>
			<td>ThermoFisher scientific</td>
			<td>AM9624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium fluorescein salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>46970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade (scapel blade)</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>10022-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trephine</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>33-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TritonX -100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-295-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11923-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Patterson veterinary</td>
			<td>07-808-1947</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an epithelial abrasion model for studying corneal wound healing

कॉर्निया दृष्टि के लिए महत्वपूर्ण है, आंख की अपवर्तक शक्ति के लगभग दो-तिहाई के लिए लेखांकन। दृष्टि में कॉर्निया की भूमिका के लिए महत्वपूर्ण इसकी पारदर्शिता है। हालांकि, इसकी बाहरी स्थिति के कारण, कॉर्निया विभिन्न प्रकार की चोटों के लिए अतिसंवेदनशील होता है जिससे कॉर्नियल पारदर्शिता और अंतिम अंधापन का नुकसान हो सकता है। इन चोटों के जवाब में कुशल कॉर्नियल घाव भरने कॉर्नियल होमियोस्टेसिस को बनाए रखने और कॉर्नियल पारदर्शिता और अपवर्तक क्षमताओं के संरक्षण के लिए निर्णायक है। समझौता कॉर्नियल घाव भरने की घटनाओं में, कॉर्निया संक्रमण, अल्सर और स्कारिंग के लिए कमजोर हो जाता है। कॉर्नियल पारदर्शिता और दृष्टि के संरक्षण के लिए कॉर्नियल घाव भरने के मौलिक महत्व को देखते हुए, सामान्य कॉर्नियल घाव भरने की प्रक्रिया की बेहतर समझ संक्रमण और बीमारी से जुड़े बिगड़ा कॉर्नियल घाव भरने को समझने के लिए एक शर्त है। इस लक्ष्य की ओर, कॉर्नियल घायल होने के मूत्र मॉडल सामान्य शारीरिक स्थितियों के तहत काम करने वाले कॉर्नियल घाव भरने के तंत्र की हमारी समझ को आगे बढ़ाने में उपयोगी साबित हुए हैं। यहां, ट्रेफिन और एक ब्लंट गोल्फ क्लब स्पड का उपयोग करके माउस में एक केंद्रीय कॉर्नियल उपकला घर्षण बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है। इस मॉडल में, कॉर्निया पर केंद्रित एक 2 मिमी व्यास गोलाकार ट्रेफिन का उपयोग घाव क्षेत्र को सीमांकित करने के लिए किया जाता है। गोल्फ क्लब स्पड का उपयोग उपकला को डिब्राइड करने और कॉर्नियल उपकला तहखाने झिल्ली को नुकसान पहुंचाए बिना एक परिपत्र घाव बनाने के लिए देखभाल के साथ किया जाता है। परिणामी भड़काऊ प्रतिक्रिया सेलुलर और आणविक घटनाओं के एक अच्छी तरह से विशेषता वाले कैस्केड के रूप में आगे बढ़ती है जो कुशल घाव भरने के लिए महत्वपूर्ण हैं। यह सरल कॉर्नियल घाव भरने वाला मॉडल अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और अच्छी तरह से प्रकाशित है और अब इसका उपयोग बीमारी के संदर्भ में समझौता किए गए कॉर्नियल घाव भरने का मूल्यांकन करने के लिए किया जा रहा है।

चित्रा 3 ब्लंट गोल्फ क्लब स्पड के साथ बनाए गए कॉर्नियल घाव के ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोग्राफ को दर्शाता है, यह दर्शाता है कि चोट के बाद उपकला तहखाने झिल्ली वास्तव में बरकरार है।
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An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

यहां, ट्रेफिन और एक कुंद गोल्फ क्लब स्पड का उपयोग करके माउस में एक केंद्रीय कॉर्नियल उपकला घर्षण घाव बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है। यह कॉर्नियल घाव भरने वाला मॉडल अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है और अब इसका उपयोग बीमारियों के संदर्भ में समझौता किए गए कॉर्नियल घाव भरने का मूल्यांकन करने के लिए किया जा रहा है।

कॉर्नियल घाव हीलिंग का अध्ययन करने के लिए एक उपकला घर्षण मॉडल

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...

यह प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है क्योंकि यह कॉर्नियल सूजन और सामान्य और रोग संबंधी स्थितियों के तहत घाव भरने में इसके योगदान का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह तहखाने झिल्ली को तोड़ने के बिना एक सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य उपकला घाव बनाता है। कॉर्नियल घायल होने का यह मॉडल सीधा और प्रदर्शन करने के लिए त्वरित है।प्रक्रिया का प्रदर्शन प्रिंस अकोवुआ, मेरी प्रयोगशाला से पीएचडी छात्र होगा। शुरू करने के लिए, बाँझ खारा या पीबीएस के एक मिलीलीटर में सोडियम फ्लोरोसिसिन नमक के 10 मिलीग्राम को भंग करके 1% फ्लोरोसिसिन समाधान तैयार करें। इसके बाद, संज्ञाहरण के लिए, केटामाइन के दो मिलीलीटर, जाइलाज़िन के एक मिलीलीटर और बाँझ पीबीएस के सात मिलीलीटर मिलाकर केटामाइन-ज़ाइलाज़िन कॉकटेल के 10 मिलीलीटर तैयार करें।8 से 12 सप्ताह के सी 57 काले 6 जंगली-प्रकार के माउस को एनेस्थेटाइज करने के बाद, पैर की अंगुली चुटकी के बाद पेडल रिफ्लेक्स का आकलन करके संज्ञाहरण की गहराई का मूल्यांकन करें। उपकला कॉर्नियल घाव बनाने के लिए, एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत एनेस्थेटाइज्ड माउस रखें। केवल दाईं या बाईं आंख को घाव करें और माउस से माउस में जाने पर आंख को घायल होने के साथ स्थिरता बनाए रखें।अंगूठे और तर्जनी उंगली से पलकों को पकड़कर आंख को चौड़ा रखें। फिर, दो मिलीमीटर व्यास बाँझ ट्रेफिन का उपयोग करके, कॉर्निया के केंद्र को सीमांकित करें और कॉर्नियल उपकला पर प्रभाव डालने के लिए ट्रेफिन को धीरे-धीरे घुमाएं। अत्यधिक दबाव लागू न करें, क्योंकि इसके परिणामस्वरूप कॉर्नियल छिद्र हो सकता है।इसके बाद, कॉर्निया की सतह से लगभग 45 डिग्री के कोण पर बाँझ कुंद गोल्फ क्लब स्पड को पकड़ना, स्पड का उपयोग करके सीमांकित क्षेत्र के भीतर सावधानीपूर्वक और निरंतर स्क्रैपिंग द्वारा उपकला को डिब्राइड करें। यदि आवश्यक हो तो अत्यधिक बल लागू न करें और बाँझ पीबीएस का उपयोग करके हाइड्रेशन बनाए रखें। घाव बंद करने और पुन: उपकलाकरण की निगरानी के लिए, घायल सतह पर 1% फ्लोरोसिसिन समाधान के 1 से 1.5 माइक्रोलीटर पिपेट करें और नीले प्रकाश स्रोत के साथ डिजिटल माइक्रोस्कोप का उपयोग करके कॉर्निया की छवि बनाएं।घायल होने के बाद विशिष्ट समय पर घायल कॉर्निया की छवि बनाएं। आसपास के उपकला के समाधान के प्रसार से बचने के लिए फ्लोरोसिसिन समाधान के पहले मिनट के भीतर छवियों को लें, जिससे घाव के आकार की अतिवृद्धि हो सकती है। इसके बाद, एक छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके, घाव क्षेत्र का पता लगाएं और शून्य घंटे में मूल घाव क्षेत्र के प्रतिशत के रूप में प्रत्येक समय बिंदु पर घाव क्षेत्र को व्यक्त करें।कॉर्नियल घाव का एक ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोग्राफ दर्शाता है कि एपिथेलियम बेसमेंट झिल्ली चोट के बाद भी बरकरार रहती है। 8 से 12 सप्ताह के जंगली प्रकार के चूहों में, घाव बंद होने के 24 घंटे बाद पूरा हो जाता है। घायल होने के लिए भड़काऊ प्रतिक्रिया लिम्बस पर सेल इमेजिंग की विशेषता है।यहां दिखाया गया है कि अतिरिक्त संवहनी न्यूट्रोफिल के साथ एक अनियंत्रित कॉर्निया का लिम्बल वास्कुलचर है, और घर्षण के 30 घंटे बाद अतिरिक्त संवहनी प्लेटलेट्स और न्यूट्रोफिल के साथ एक घायल कॉर्निया का है। इस प्रोटोकॉल को सफलतापूर्वक पुन: पेश करने के लिए, माउस की प्रत्येक श्रेणी में एक ही तनाव का उपयोग किया जाना चाहिए, और घाव का आकार और गहराई वर्णित के रूप में बनाई जानी चाहिए।

Research

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Medicine

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