Name: an epithelial abrasion model for studying corneal wound healing
Uploaded: 2021-12-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing at JoVE.com

Finansman: Destekleyen: NIH EY018239 (A.R.B., C.W.S. ve R.E.R.), P30EY007551 (A.R.B.) ve Sigma Xi Grant in Aid of Research (P.K.A.). İçerik yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri veya Sigma Xi'nin resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

Tüm hayvan protokolleri, Houston Üniversitesi ve Baylor Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komiteleri tarafından onaylanmıştır. Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği (ARVO) bildirisinde özetlenen ve hayvanların görme ve oftalmik araştırmalarda kullanımına ilişkin kılavuzlar, farelerin ele alınmasında ve kullanılmasında takip edilmiştir.
1. Hazırlık
<ol><li>Floresein çözeltisinin hazırlanması<ol>
<li>10 mg sodyum flores...

Bu yöntem makalesinin amacı, bir trefin ve künt bir golf sopası tükürüğü kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokolü tanımlamaktı. Bu murin modeli, kornea iltihabını ve yara iyileşmesine katkısını incelemek için kullanılmıştır. Bu tip bir model, normal fizyolojik koşullar altında vepatolojilerde kornea yarası iyileşme mekanizmalarını incelemek için kullanılabilir 17,28,29,41,42.<su...

Kornea gözün üçte birinin saydam ön kısmıdır. Kornea gözün iç yapılarını korumak ve gözü enfeksiyonlara karşı koruyan yapısal bir bariyer oluşturmak da dahil olmak üzere çeşitli işlevlere hizmet eder1. Daha da önemlisi, kornea görme için kritik öneme sahiptir ve gözün kırılma gücünün yaklaşık üçte ikisini sağlar 2,3. Korneanın vizyondaki rolü için çok önemli olan şey şeffaflığıdır. Bununla birlikte, dışa doğru pozisyonu nedeniyle, kornea günlük olarak bariyer fonksiyonunun bozulmasına, şeffaflık kaybına ve nihai körlüğe yol açabilecek çok çeşitli yaralanmalara maruz kalmaktadır. Kornea saydamlık kaybı tüm dünyada görme bozukluğunun önde gelen nedenlerinden biridir 4,5. Kornea sıyrıkları, acil servise (ER) yapılan ziyaretlerin yaygın bir nedenidir ve ER6'da sunulan gözle ilgili vakaların yarısını oluşturur. Amerika Birleşik Devletleri'nde yılda 1 milyondan fazla kişinin gözle ilgili yaralanmalardan muzdarip olduğu tahmin edilmektedir7. Bu yaralanmalara yanıt olarak etkili kornea yarasının iyileşmesi, kornea homeostazının korunması, şeffaflığının ve kırma yeteneklerinin korunması için çok önemlidir. Tehlikeye giren kornea yarasının iyileşmesi durumunda, kornea enfeksiyonlara, ülserasyonlara ve yara izlerine karşı savunmasız hale gelir 8,9. Ayrıca, refraktif ameliyatların artan popülaritesi, kornea10'a benzersiz bir travmatik zorluk getirmektedir. Kornea yaralanması iyileşmesinin kornea şeffaflığının ve görmenin korunmasındaki temel önemi göz önüne alındığında, normal kornea yarası iyileşme sürecinin daha iyi anlaşılması, enfeksiyon ve hastalıkla ilişkili bozulmuş kornea yarasının iyileşmesini anlamak için bir ön koşuldur.
Bu amaçla, kornea yara iyileşmesinin çeşitli hayvan modelleri geliştirilmiştir11,12,13,14,15. Kornea yarasının iyileşmesinin murin modellerinin, normal fizyolojik koşullar altında çalışan kornea yarası iyileşme mekanizmalarını anlamamızı sağlamada yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Kornea yarasının iyileşmesini incelemek için her biri yara iyileşme sürecinin farklı yönlerini araştırmak için uygun olan farklı kornea yaraları türleri kullanılmıştır. Kornea yara iyileşmesi çalışmalarında kullanılan en yaygın yara modeli tipleri mekanik ve kimyasal yara modelleridir. Çoğunlukla korneada alkali yanıkların oluşumunu içeren kimyasal kornea yaraları, kornea ülserlerini, opaklaşmayı ve neovaskülarizasyonu incelemek için yararlıdır13. Mekanik kornea yaraları debridman (aşınma) yaralarını ve keratektomi yaralarını içerir14,15,16. Sağlam veya kırılmış kornea epitel bazal membranı sırasıyla debridman ve keratektomi yaralarını tanımlar. Debridman yaralarında epitel bazal membranı sağlam kalırken, keratektomi yaralarında çoğunlukla anterior stromaya penetrasyon ile bazal membran kırılır. Debridman yaraları, kornea yaralanmasını takiben yeniden epitelizasyon, epitel hücre proliferasyonu, immün yanıt ve sinir rejenerasyonunu incelemek için en yararlı olanlardır. Keratektomi yaraları ise kornea skarlaşmasının incelenmesinde en yararlı olanıdır14,15.
Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu basit kornea yara iyileşmesi modeli oldukça tekrarlanabilir ve iyi yayınlanmıştır ve şimdi hastalık bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır17.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-CD31 antibody</td>
			<td>BD Bioscience, Pharmingen</td>
			<td>550274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD41 antibody</td>
			<td>BD Bioscience, Pharmingen</td>
			<td>553847</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ly6G antibody</td>
			<td>BD Bioscience, Pharmingen</td>
			<td>551459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>ThermoFisher scientific</td>
			<td>B14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeltaVision wide-field deconvolution fluorescence microscope</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Toploading Balances (Weighing scale)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>ThermoFisher scientific</td>
			<td>T038181000CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Golf-club spud</td>
			<td>Stephens instruments</td>
			<td>S2-1135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris curve scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>31212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Patterson veterinary</td>
			<td>07-890-8598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phospate buffered saline (PBS)</td>
			<td>ThermoFisher scientific</td>
			<td>AM9624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium fluorescein salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>46970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade (scapel blade)</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>10022-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trephine</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>33-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TritonX -100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-295-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11923-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Patterson veterinary</td>
			<td>07-808-1947</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an epithelial abrasion model for studying corneal wound healing

Kornea görme için kritik öneme sahiptir ve gözün kırılma gücünün yaklaşık üçte ikisini oluşturur. Korneanın vizyondaki rolü için çok önemli olan şey şeffaflığıdır. Bununla birlikte, dış pozisyonu nedeniyle, kornea, kornea şeffaflığının kaybına ve nihai körlüğe yol açabilecek çok çeşitli yaralanmalara karşı oldukça hassastır. Bu yaralanmalara yanıt olarak etkili kornea yarasının iyileşmesi, kornea homeostazının korunmasında ve kornea saydamlığının ve kırma yeteneklerinin korunmasında çok önemlidir. Tehlikeye giren kornea yarası iyileşmesi durumunda, kornea enfeksiyonlara, ülserasyonlara ve yara izlerine karşı savunmasız hale gelir. Kornea yaralanması iyileşmesinin kornea şeffaflığının ve görmenin korunmasındaki temel önemi göz önüne alındığında, normal kornea yarası iyileşme sürecinin daha iyi anlaşılması, enfeksiyon ve hastalıkla ilişkili bozulmuş kornea yarasının iyileşmesini anlamak için bir ön koşuldur. Bu amaç doğrultusunda, kornea yaralanmasının murin modellerinin, normal fizyolojik koşullar altında çalışan kornea yarası iyileşme mekanizmalarını daha iyi anlamamızda yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitel aşınması oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu modelde, yara bölgesini ayırmak için kornea üzerinde ortalanmış 2 mm çapında dairesel bir trefin kullanılır. Golf sıçrayışı, epiteli debride etmek ve kornea epitel bazal membranına zarar vermeden dairesel bir yara oluşturmak için özenle kullanılır. Ortaya çıkan enflamatuar yanıt, etkili yara iyileşmesi için kritik olan iyi karakterize edilmiş hücresel ve moleküler olayların bir kaskadı olarak ilerler. Bu basit kornea yara iyileşmesi modeli oldukça tekrarlanabilir ve iyi yayınlanmıştır ve şimdi hastalık bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır.

Şekil 3 , künt golf sopası spud'u ile oluşturulan bir kornea yarasının iletim elektron mikrografını göstererek, epitel bazal membranının yaralanmadan sonra gerçekten sağlam olduğunu göstermektedir.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63112/63112fig03.jpg"> Şekil 3: Epitelyal bazal membran kornea aşınmasından sonra bozulmadan kalır. Künt g...

Watch this Scientific Journal Video about An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing at JoVE.com

An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu kornea yara iyileşmesi modeli yüksek oranda tekrarlanabilir ve şimdi hastalıklar bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır.

Kornea Yara İyileşmesini İncelemek İçin Epitelyal Aşınma Modeli

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...

Bu protokol önemlidir, çünkü kornea iltihabını ve normal ve patolojik koşullar altında yara iyileşmesine katkısını incelemek için mükemmel bir modeldir. Bu tekniğin temel avantajı, bazal membranı ihlal etmeden hassas ve tekrarlanabilir bir epitel yarası oluşturmasıdır. Bu kornea yaralama modeli basit ve hızlı bir şekilde gerçekleştirilir.Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan doktora öğrencisi olan Prens Akowuah olacak. Başlamak için, bir mililitre steril salin veya PBS içinde 10 miligram sodyum floresein tuzu çözerek% 1'lik bir floresein çözeltisi hazırlayın. Daha sonra, anestezi için, iki mililitre ketamin, bir mililitre ksilazin ve yedi mililitre steril PBS karıştırarak 10 mililitre ketamin-ksilazin kokteyli hazırlayın.8-12 haftalık C57 siyah 6 vahşi tip fareyi uyuşturduktan sonra, ayak parmağını sıkıştırdıktan sonra pedal refleksini değerlendirerek anestezi derinliğini değerlendirin. Epitel kornea yarası oluşturmak için, anestezi uygulanan fareyi diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin. Sadece sağ veya sol gözü sarın ve fareden fareye geçerken yaralanan gözle tutarlılığı koruyun.Göz kapaklarını başparmak ve işaret parmağı ile tutarak gözü tamamen açık tutun. Daha sonra, iki milimetre çapında steril bir trefin kullanarak, korneanın merkezini sınırlayın ve kornea epiteli üzerinde bir izlenim bırakmak için trefin'i yavaşça döndürün. Aşırı basınç uygulamayın, çünkü bu kornea perforasyonuna neden olabilir.Daha sonra, steril künt golf sopası püskürtülmesini kornea yüzeyinden yaklaşık 45 derecelik bir açıyla tutarak, spud'u kullanarak sınırlandırılmış alanda dikkatli ve sürekli kazıma ile epiteli debride debride edin. Aşırı kuvvet uygulamayın ve gerekirse steril PBS kullanarak hidrasyon sağlayın. Yara kapanmasını ve yeniden epitelizasyonu izlemek için, yaralı yüzeye 1 ila 1,5 mikrolitre% 1 floresein çözeltisi pipet yerleştirin ve mavi ışık kaynağına sahip dijital bir mikroskop kullanarak korneayı görüntüler.Yaralı korneayı yaraladıktan sonra belirli zamanlarda görüntüleyin. Çözeltinin çevredeki epitele yayılmasını önlemek için floresan çözeltisinin ilk dakikasında görüntü alın, bu da yara boyutunun abartılmasına neden olabilir. Daha sonra, bir görüntü analiz yazılımı kullanarak, yara alanını izleyin ve her zaman noktasında yara alanını, sıfır saatte orijinal yara alanının bir yüzdesi olarak ifade edin.Kornea yarasının iletim elektron mikrografisi, epitel bazal membranının yaralanmadan sonra bile bozulmadan kaldığını göstermektedir. 8 ila 12 haftalık vahşi tip farelerde, yara kapanması yaralanmadan 24 saat sonra tamamlanır. Yaralanmaya inflamatuar yanıt, limbusta hücre görüntüleme ile karakterizedir.Burada ekstravasküler nötrofillere sahip yaralanmamış bir korneanın limbal vaskülatürü ve aşınmadan 30 saat sonra ekstravasküler trombositler ve nötrofiller ile yaralı bir korneanın vaskülatürü gösterilmektedir. Bu protokolü başarılı bir şekilde yeniden üretmek için, her fare aralığında aynı gerinim kullanılmalı ve yara boyutu ve derinliği açıklandığı gibi oluşturulmalıdır.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

Bir İskemik Yara Model üretmek için Basitleştirilmiş Tekniği

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Murine Model of Wound Healing

Yara Şifa murin Modeli

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Fare Kornea Neovaskülarizasyonunun bir Alkali-yanık Yaralanma Modeli

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Multimodal Quantitative Phase Imaging with Digital Holographic Microscopy Accurately Assesses Intestinal Inflammation and Epithelial Wound Healing

Dijital Holografik Mikroskop ile multimodal Kantitatif Faz Görüntüleme Doğru Bağırsak İltihabı ve Epitel Yara Şifa Değerlendirdi

The incidence of inflammatory bowel disease, i.e., Crohn&#39;s disease and Ulcerative colitis, has significantly increased over the last decade. The ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Oluşturma ve diyabetik yara iyileşmesi manken bir yağ elde edilen kök hücre (ASC) Sheet nakli

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Pulpa Değerlendirilmesi için Doğrudan Selüloz-kapatma Modelinin Geliştirilmesi Yara İyileşmesi ve Farelerde Onarım dentin oluşumu

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During In Vitro Wound Healing

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During  In Vitro Wound Healing

Mikroskopi Vitro yara iyileşmesi sırasında epitel hücre göç değerlendirilmesi için yöntemleri temel

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Kornea epitel aşınma oküler Burr ile bir Model olarak kornea için yara iyileşme

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

Ex vivo kornea Organ kültür modeli için yaranın çalışmaları

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

Targeting Gray Rami Communicantes in Selective Chemical Lumbar Sympathectomy

Seçmeli kimyasal Lomber sempatektomi gri Rami Communicantes hedefleme

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the ...