Name: a porcine heterotopic heart transplantation protocol for delivery of therapeutics to a cardiac allograft
Uploaded: 2022-02-14T14:30:00
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デューク・ラージ・アニマル・サージカル・コアとデューク・パーフュージョン・サーフュージョン・サービシズには、これらの処置中の支援に感謝します。また、Paul LezbergとTransMedics, Inc.のサポートにも感謝します。

注:2頭の雌のユカタン豚が選択され、1頭は心臓移植片ドナー、もう1頭はレシピエントとして指定されます。生後6〜8ヶ月、体重約30 kg、互換性のある血液型を持つ豚が推奨されます。このプロトコルの概要を 図 1 に示します。豚の飼育および治療手順は、デューク大学医療センターの動物ケアおよび使用委員会のガイドラインに従って行われます。
<...

<ol>
	<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2021+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2021 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 143 (8), 254 (2021).</li><li>Stehlik, J., Kobashigawa, J., Hunt, S. A., Reichenspurner, H., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honoring+50+years+of+clinical+heart+transplantation+in+circulation:+in-depth+state-of-the-art+review.">Honoring 50 years of clinical heart transplantation in circulation: in-depth state-of-the-art review.</a> Circulation. 137 (1), 71-87 (2018).</li><li>Kadner, A., Chen, R. H., Adams, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation:+experimental+development+and+clinical+experience.">Heterotopic heart transplantation: experimental development and clinical experience.</a> European Journal of Cardiothorac Surgery. 17 (4), 474-481 (2000).</li><li>Hastings, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+and+cell+delivery+for+cardiac+regeneration.">Drug and cell delivery for cardiac regeneration.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 84, 85-106 (2015).</li><li>Sahoo, S., Kariya, T., Ishikawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+therapeutic+agents+to+the+heart.">Targeted delivery of therapeutic agents to the heart.</a> Nature Reviews. Cardiology. 18 (6), 389-399 (2021).</li><li>Stamp, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+heart+transplant+after+ten+hours+out-of-body+time+using+the+TransMedics+Organ+Care+System.">Successful heart transplant after ten hours out-of-body time using the TransMedics Organ Care System.</a> Heart, Lung &amp; Circulation. 24 (6), 611-613 (2015).</li><li>Ragalie, W. S., Ardehali, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+normothermic+ex-vivo+perfusion+of+cardiac+allografts.">Current status of normothermic ex-vivo perfusion of cardiac allografts.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 25 (3), 237-240 (2020).</li><li>Koerner, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+allograft+blood+perfusion+in+clinical+heart+transplantation.">Normothermic ex vivo allograft blood perfusion in clinical heart transplantation.</a> Heart Surgery Forum. 17 (3), 141-145 (2014).</li><li>Rosenbaum, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion+preservation+versus+static+preservation+for+cardiac+transplantation:+effects+on+myocardial+function+and+metabolism.">Perfusion preservation versus static preservation for cardiac transplantation: effects on myocardial function and metabolism.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 27 (1), 93-99 (2008).</li><li>Cullen, P. P., Tsui, S. S., Caplice, N. M., Hinchion, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+state-of-the-art+review+of+the+current+role+of+cardioprotective+techniques+in+cardiac+transplantation.">A state-of-the-art review of the current role of cardioprotective techniques in cardiac transplantation.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 32 (5), 683-694 (2021).</li><li>Rurik, J. G., Aghajanian, H., Epstein, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+and+immunotherapy+for+cardiac+injury+and+repair.">Immune cells and immunotherapy for cardiac injury and repair.</a> Circulation Research. 128 (11), 1766-1779 (2021).</li><li>Rincon, M. Y., VandenDriessche, T., Chuah, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+cardiovascular+disease:+advances+in+vector+development,+targeting,+and+delivery+for+clinical+translation.">Gene therapy for cardiovascular disease: advances in vector development, targeting, and delivery for clinical translation.</a> Cardiovascular Research. 108 (1), 4-20 (2015).</li><li>Kieserman, J. M., Myers, V. D., Dubey, P., Cheung, J. Y., Feldman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+landscape+of+heart+failure+gene+therapy.">Current landscape of heart failure gene therapy.</a> Journal of the American Heart Association. 8 (10), 012239 (2019).</li><li>Perin, E. C., Perin, E. C., Miller, L. W., Taylor, D. A., Wilkerson, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Stem cell and gene therapy for cardiovascular disease. , 279-287 (2016).</li><li>Bishawi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+normothermic+ex+vivo+organ+perfusion+delivery+method+for+cardiac+transplantation+gene+therapy.">A normothermic ex vivo organ perfusion delivery method for cardiac transplantation gene therapy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 8029 (2019).</li><li>Hulot, J. S., Ishikawa, K., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+the+treatment+of+heart+failure:+promise+postponed.">Gene therapy for the treatment of heart failure: promise postponed.</a> European Heart Journal. 37 (21), 1651-1658 (2016).</li><li>Ho, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+swine+leucocyte+antigen+class+I+genes+in+outbred+pig+populations.">Molecular characterization of swine leucocyte antigen class I genes in outbred pig populations.</a> Animal Genetics. 40 (4), 468-478 (2009).</li><li>Ho, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+swine+leucocyte+antigen+class+II+genes+in+outbred+pig+populations.">Molecular characterization of swine leucocyte antigen class II genes in outbred pig populations.</a> Animal Genetics. 41 (4), 428-432 (2010).</li></ol>

心臓移植におけるエクスビボ灌流中の治療薬の送達は、同種移植片を修正し、移植転帰を潜在的に改善する戦略を提供する。ここで提示されるプロトコールは、最先端の正常温熱エキソビボ正気灌流保存を組み込み、同種移植片への細胞、遺伝子、または免疫療法の単離送達を試験する有望な可能性を提供する11、12、13。<sup c...

心不全は、米国で推定600万人の成人に影響を与える状態であり、2030年までに800万人の成人に増加すると予測されています1。心臓移植は、末期心不全のゴールドスタンダード治療です。しかし、それはその限界と複雑さがないわけではありません。利用可能なドナー心臓の数、一次移植片機能障害、心臓の拒絶反応、および長期免疫抑制の副作用によって制限されたままである2。これらの制限は、同種移植不全を経験する可能性があり、正常な平均余命を達成するためにその後の再移植を必要とする若いレシピエントにおいて特に重要である。
これらの制限を克服するための理想的な介入は、同種移植片の生存率を改善し、「心臓保護」を与えることができるレシピエントへの移植前に治療薬で心臓同種移植片全体を治療することである。このような介入は、虚血性侮辱、同種移植片拒絶、心臓同種移植血管障害の発生率を最小限に抑え、さらには辺縁同種移植片を修復するために予防的に与えられるであろう。これらのタイプの介入を開発するためのトランスレーショナル研究は、心臓移植片の長期サーベイランスを可能にするために、心臓移植の大型動物モデルを必要とする。腹腔内位置におけるブタ、ヘテロトピック心臓移植モデルは、この目的に理想的であることが証明されている。この位置での心臓移植は、新規療法の効果をテストし、移植片拒絶反応の免疫病理を評価することを可能にする。さらに、ヘテロトピックモデルは、レシピエントのより良い全生存期間、心肺バイパスの要件、およびレシピエントの循環を維持するための移植片の要件がないため、同所性モデルよりも有利である3。
遺伝子、細胞、または免疫療法などの心臓への治療的介入の効果的な送達は、臨床応用に対する重大な障壁である4,5。ex vivo灌流装置によって導入された技術は、移植片を継続的に灌流させ、非機能的ではあるが代謝的に活性な状態に維持することを可能にする6,7,8,9。これは、全身送達の潜在的な副作用を最小限に抑えながら、高度な治療薬で心臓全体を治療するためのユニークな機会を提供します10,11,12,13。治療送達のためにエキソビボ灌流デバイスを利用することの別の利点は、従来の寒冷静的保存法を使用して実現不可能な長期間にわたる冠状動脈循環への薬物の投与を可能にすることである。これにより、移植片14への治療薬のよりグローバルな送達が可能になる。ここで提示したプロトコールを用いて、我々は、アデノウイルスベクター15を用いてブタ心臓移植片全体にホタルルシフェラーゼ遺伝子を送達することに成功した。このプロトコールの目的は、移植前に心臓同種移植片全体への治療の送達を達成するための再現可能で堅牢なアプローチを提供することである。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0 Looped Maxon suture</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>GMM-341L</td>
			<td>Used to close fascia of the laparotomy incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0 Silk ties</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>S346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G Angiocath</td>
			<td>BD</td>
			<td>381144</td>
			<td>Used to de-air the left ventricle of the donor heart after implantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 Fr LV vent</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>12002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk sutures</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>SA11G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk ties</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>SA65H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>J259H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Fr venous cannula</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>68124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 Prolene sutures</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>8522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Monocryl suture</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>Y469G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Prolene sutures</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>8521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal hair cutting clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>8786-452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aortic clamp</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH6201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Army Navy retractor</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>SU3660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATF 40, Cell saver disposable set</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>9108494</td>
			<td>Cell saver device insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balfour retractor</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>SU3042</td>
			<td>Used as an abdominal wall retractor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C.A.T.S cell saver</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>ES0019</td>
			<td>Cell saver device used to wash donor blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac defibrillator</td>
			<td>Zoll</td>
			<td>M Series</td>
			<td>Cardiac defibrillator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castro needle holder</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH8589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CG4 iStat cartridges</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>03P85-25</td>
			<td>POC testing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CG8 iStat cartridges</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>03P88-25</td>
			<td>POC testing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey forceps</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH5902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrocautery disposable pencil</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>E2450H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gerald forceps</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>NL1451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemotherm 400CE Dual Reservoir Cooler/Heater</td>
			<td>Cincinnati Sub-Zero</td>
			<td>86022</td>
			<td>Heater cooler used to regulate perfusion temperature on the ex vivo perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iSTAT 1</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>04P75-03</td>
			<td>POC testing device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kocher clamp</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>SU2790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large clip applier</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>50-4300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large clips</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large soft pledgets</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8886867901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium clip applier</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>50-4335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium clips</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum scissor</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH2006-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 10 scalpel blade</td>
			<td>Swann-Mortan</td>
			<td>301</td>
			<td>Used for skin incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 11 scalpel blade</td>
			<td>Kiato Plus</td>
			<td>18111</td>
			<td>Used for vascular incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCS device with base</td>
			<td>TransMedics, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Ex vivo perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCS disposable</td>
			<td>TransMedics, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Ex vivo perfusion device insert with perfusion kits</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pacing cable</td>
			<td>Remington Medical</td>
			<td>FL-601-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pediatric cardioplegia catheter (4Fr)</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>10218</td>
			<td>Used to deliver cardioplegia to the donor aortic root</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pediatric Foley catheter</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>RSH170003080</td>
			<td>Placed pre-op to decompress the recipient&#39;s bladder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potts scissors</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH13038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure bag x2 (1,000 mL)</td>
			<td>Novaplus</td>
			<td>V4010H</td>
			<td>Used to deliver cardioplegia at a set pressure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Satinsky clamp</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH7305</td>
			<td>Vascular clamp used for creating anastomoses between donor heart and recipient vessels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Felco</td>
			<td>FELCO 200A-50</td>
			<td>Used to perform sternotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small hard pledgets</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8886867701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sternal retractor</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH6950-007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temporary cardiac pacing wires</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>TPW32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temporary dual chamber pacemaker</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>5388</td>
			<td>Cardiac pacing device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tourniquet kit</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>79005</td>
			<td>Rummel tourniquets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umbilical tape</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8886861903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel loops</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>31145686</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a porcine heterotopic heart transplantation protocol for delivery of therapeutics to a cardiac allograft

心臓移植は、末期心不全のゴールドスタンダード治療です。しかしながら、利用可能なドナー心臓の数および一次移植片機能障害および移植片拒絶などの合併症によって制限されたままである。心臓移植におけるex vivo灌流装置の最近の臨床的使用は、機能を改善し、有害なレシピエント応答を回避するために、治療介入で心臓同種移植片を治療するためのユニークな機会を導入する。同種移植片全体への治療送達のための翻訳型大型動物モデルを確立することは、心臓移植における新規治療アプローチを試験するために不可欠である。腹腔内位置におけるブタ、異所性心臓移植モデルは、新規介入の効果および移植片拒絶の免疫病理学を評価するための優れたモデルとして役立つ。このモデルはさらに、移植片がレシピエントの循環を維持するために必要ではないことを考えると、ブタの長期生存を提供する。このプロトコールの目的は、移植前に心臓同種移植片全体への治療のエキソビボ送達を達成するための再現可能で堅牢なアプローチを提供し、エキソビボ灌流心臓の生存ヘテロトピック移植を行うための技術的詳細を提供することである。

このグループは、研究デザインに応じて、ここに提示されたプロトコルに従って5〜35日間、9匹のブタを首尾よく生存させました。このプロトコールを受けた10頭のブタのうち、外科的合併症で早期に死亡したのは1頭だけで、90%の生存率が得られました。 図2 に実証された、ブタの腹腔内位置に移植された異所性心の構成図である。同種移植片の吻合部位を決定するとき...

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A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

我々は、ブタ異所性心臓移植モデルにおける心臓同種移植片全体への治療薬の送達のために、正常温熱 エクスビボ 正気灌流システムを利用するためのプロトコルを提示する。

心臓同種移植への治療薬の送達のためのブタヘテロトピック心臓移植プロトコル

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...

このプロトコールは、心臓移植の大型動物モデルにおいて、治療薬が心臓同種移植片全体に効果的に投与され得る方法を記述した最初のものである。このプロトコルの主な利点は、治験責任医師が移植後の長期間にわたって心臓同種移植片全体に対する治療の効果を試験できることである。この技術は、心臓同種移植片拒絶反応、一次移植片機能障害を予防し、術後免疫抑制の必要性を最小限に抑え、または心臓同種移植片の寿命を延ばす介入を調査するために使用することができる。ばく露を最適化することは、移植手順の最も困難な部分であり、完了するために複数のチームメンバーが必要です。同様に、経験豊富な灌流医は、エキソビボ灌流を調整し、監視するために必要とされる。まず、ブタのサイズに応じて、マヌブリウムから剣状突起までの10枚の刃を使用して、長さ20〜30センチメートルの切開を行います。胸骨の正中線に沿って分割するように注意しながら、胸骨から剣状突起に大胸骨を分割するために電気焼灼法を使用してください。胸骨まで下がったら、正中線を得点し、重いはさみで割って剣状突起から胸骨切除を開始します。その後、各カット後に胸骨切除セファラドを延長する。指のスイープを使用して心臓を胸骨から鈍く分離し、マヌブリウムを通して胸骨切除を完了します。胸骨リトラクターを用いて手術野ばく露を最適化した後、横隔膜から大動脈まで縦方向に心膜に入り、シルク縫合糸を用いて心膜クレードルを作成することによって、電気焼灼で胸腺を同定して除去する。大動脈と肺動脈の間の組織を完全に分割し、大動脈弓と短頭幹の位置を視覚化して、大動脈クロスクランプの適切な配置を容易にします。はさみと鈍い解剖を使用して、上大静脈を円周方向に解放し、上大静脈の周りにサイズゼロの2つの絹縫合糸を結ぶ。サイズ4-0のポリプロピレン縫合糸を上行大動脈にUステッチ方式で、右心房に財布紐方式で塗布する。以前に配置したUステッチで固定された小児大動脈根カニューレを挿入します。そして、カニューレを放映解除した後、Rummel止血帯で所定の位置に固定します。大動脈根カニューレを心筋麻痺チューブに接続し、チューブをデルニド心麻痺で洗い流した後にします。以前に配置した財布の紐の中に右の動脈切開術を作成します。静脈カニューレを右心房に挿入し、ルンメル止血帯で固定します。静脈カニューレをセルセーバー心臓切開術に接続された滅菌吸引ラインに接続し、約1〜1.3リットルの血液を採取する。次に、大動脈クロスクランプを適用し、クランプが上行大動脈を完全に閉塞するように慎重に確認します。心臓に滅菌アイススラッシュを置いた後、アジゴス静脈のすぐ近位にある下大静脈と上大静脈を分割する。弓のレベルの大動脈は、無嘢動脈と分岐部の主肺動脈にちょうど遠位にある。肺静脈を特定してなだめ、胸部から心臓を取り出し、滅菌氷を入れた容器に入れます。大動脈コネクタを配置するために大動脈を準備するには、4つの誓約されたサイズ4-0ポリプロピレン縫合糸を、切り口から5ミリメートル下の深さで遠位大動脈の内側の周りに単純な水平マットレス状に配置し、それらを結び付けます。誓約された大動脈縫合糸をかざしながら、大動脈コネクタを大動脈に挿入し、大動脈の周りに臍帯テープを結び付けてコネクタを固定します。サイズ4-0のポリプロピレン製財布紐を主肺動脈の遠位切断縁の周りに置きます。肺動脈カニューレを挿入し、カニューレを固定するために財布のひもの端を結びます。次に、肺動脈カニューレをデバイスの肺動脈コネクタに接続し、ネクタイで固定します。準備した移植片をバックテーブルからエクスビボ灌流装置に持ち帰り、大動脈コネクタを装置の場所に接続します。左心室の通気口は、縛られていない肺静脈を通って左心房に流れ込み、僧帽弁を横切って左心室に入ります。10番の刃を用いて、長さ20~30センチの皮膚切開を行い、電気焼灼法を用いて筋膜まで郭清を続けます。2つのコーチャークランプで筋膜と腹膜を持ち上げた後、メッツェンバウムはさみを使用して腹腔に慎重に小さな切開を行います。電気焼灼法を用いて切開部の全長にわたって腹膜開口部を延長する。下にある内臓を保護するために指を下に置きます。バルフォアリトラクターを配置して露出を最適化し、濡れたタオルを使用して頭蓋方向に小腸に引っ込めます。下大静脈の腹部大動脈まで解剖を行い、中程度および大きなクリップでリンパ管を滑らかにします。バックテーブル上で、左心室の通気口が挿入されていた肺静脈左開口が縫い付けられた場合には、大動脈の遠位側をトリミングし、カニューレへの付着が組織を粉砕した可能性がある肺動脈とする。下大静脈にサチンスキークランプを置き、11番の刃とポットのはさみを使用して約1.5センチメートルの縦静脈切除術を作成します。ランニングサイズ4-0ポリプロピレン縫合糸を用いて、レシピエントの腎下大静脈への肺動脈移植片をエンドツーサイド方式で吻合する。次いで、ランニングサイズ4−0ポリプロピレン縫合糸を用いて、エンドツーサイド方式で大動脈移植片をレシピエントの眼底大動脈に吻合する。心臓を適切な後腹膜腔に慎重に置き、血管の吻合やねじれの緊張を防ぎます。その後、小腸を交換してください。ループサイズゼロのマクソン縫合糸で筋膜を閉じ、切開部の両端から始まり、中央で結ばれ、腸への傷害を避けます。ランニングファッションでサイズ2-0 Vicrylの深部真皮層を閉じ、ランニングファッションでサイズ4-0モノクリルの皮膚を閉じます。いくつかの異なる灌流パラメータが取得された。循環流速は、肺動脈、大動脈、および冠状動脈から測定した。平均圧、収縮期圧、拡張期圧を含む大動脈圧も測定した。エクスビボ灌流の間、心臓同種移植片の心拍数および温度も測定された。灌流期間中、混合静脈酸素飽和度およびヘマトクリット値を灌流液から測定した。35日目のその場での腹腔内ヘテロトピック心臓の生存率は、このプロトコールを用いた移植の成功を示す。覚えておくべき最も重要なことは、吻合の緊張とねじれの可能性を最小限に抑える同種移植片の部位を選択することです。この手順に従うことにより、治験責任医師は、同種移植片に対する免疫学的応答に対するそれらの効果を決定するために、ならびに同種移植片に対する治療効果の寿命を決定するために、いくつかの異なるタイプの治療薬を試験することができる。このプロトコルを開発した後、私たちのグループは、ウイルスベクターを用いた拒絶反応の病態生理学と遺伝子送達の有効性を理解するために、遺伝子送達のためのさまざまなウイルスベクタービヒクル、ならびに急性アログラフ拒絶反応のモデルをテストすることができました。

Research

JoVE Journal

Medicine

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