Name: a porcine heterotopic heart transplantation protocol for delivery of therapeutics to a cardiac allograft
Uploaded: 2022-02-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft at JoVE.com

Gostaríamos de agradecer ao Duke Large Animal Surgical Core e ao Duke Perfusion Services por sua assistência durante estes procedimentos. Também gostaríamos de agradecer a Paul Lezberg e à TransMedics, Inc. pelo apoio.

NOTA: São selecionados dois suínos yucatán fêmeas, com um designado para ser o doador de enxerto cardíaco e o outro o receptor. Recomenda-se suínos de 6 a 8 meses, pesando aproximadamente 30 kg e com tipos sanguíneos compatíveis. A visão geral do protocolo é demonstrada na Figura 1. Os procedimentos de moradia e tratamento dos suínos são realizados de acordo com as diretrizes do Comitê de Cuidados e Uso de Animais do Duke University Medical Center.
<str...

<ol>
	<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics-2021+update:+A+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics-2021 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 143 (8), 254 (2021).</li><li>Stehlik, J., Kobashigawa, J., Hunt, S. A., Reichenspurner, H., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honoring+50+years+of+clinical+heart+transplantation+in+circulation:+in-depth+state-of-the-art+review.">Honoring 50 years of clinical heart transplantation in circulation: in-depth state-of-the-art review.</a> Circulation. 137 (1), 71-87 (2018).</li><li>Kadner, A., Chen, R. H., Adams, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation:+experimental+development+and+clinical+experience.">Heterotopic heart transplantation: experimental development and clinical experience.</a> European Journal of Cardiothorac Surgery. 17 (4), 474-481 (2000).</li><li>Hastings, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+and+cell+delivery+for+cardiac+regeneration.">Drug and cell delivery for cardiac regeneration.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 84, 85-106 (2015).</li><li>Sahoo, S., Kariya, T., Ishikawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+therapeutic+agents+to+the+heart.">Targeted delivery of therapeutic agents to the heart.</a> Nature Reviews. Cardiology. 18 (6), 389-399 (2021).</li><li>Stamp, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+heart+transplant+after+ten+hours+out-of-body+time+using+the+TransMedics+Organ+Care+System.">Successful heart transplant after ten hours out-of-body time using the TransMedics Organ Care System.</a> Heart, Lung &amp; Circulation. 24 (6), 611-613 (2015).</li><li>Ragalie, W. S., Ardehali, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+normothermic+ex-vivo+perfusion+of+cardiac+allografts.">Current status of normothermic ex-vivo perfusion of cardiac allografts.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 25 (3), 237-240 (2020).</li><li>Koerner, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+allograft+blood+perfusion+in+clinical+heart+transplantation.">Normothermic ex vivo allograft blood perfusion in clinical heart transplantation.</a> Heart Surgery Forum. 17 (3), 141-145 (2014).</li><li>Rosenbaum, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion+preservation+versus+static+preservation+for+cardiac+transplantation:+effects+on+myocardial+function+and+metabolism.">Perfusion preservation versus static preservation for cardiac transplantation: effects on myocardial function and metabolism.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 27 (1), 93-99 (2008).</li><li>Cullen, P. P., Tsui, S. S., Caplice, N. M., Hinchion, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+state-of-the-art+review+of+the+current+role+of+cardioprotective+techniques+in+cardiac+transplantation.">A state-of-the-art review of the current role of cardioprotective techniques in cardiac transplantation.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 32 (5), 683-694 (2021).</li><li>Rurik, J. G., Aghajanian, H., Epstein, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+and+immunotherapy+for+cardiac+injury+and+repair.">Immune cells and immunotherapy for cardiac injury and repair.</a> Circulation Research. 128 (11), 1766-1779 (2021).</li><li>Rincon, M. Y., VandenDriessche, T., Chuah, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+cardiovascular+disease:+advances+in+vector+development,+targeting,+and+delivery+for+clinical+translation.">Gene therapy for cardiovascular disease: advances in vector development, targeting, and delivery for clinical translation.</a> Cardiovascular Research. 108 (1), 4-20 (2015).</li><li>Kieserman, J. M., Myers, V. D., Dubey, P., Cheung, J. Y., Feldman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+landscape+of+heart+failure+gene+therapy.">Current landscape of heart failure gene therapy.</a> Journal of the American Heart Association. 8 (10), 012239 (2019).</li><li>Perin, E. C., Perin, E. C., Miller, L. W., Taylor, D. A., Wilkerson, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Stem cell and gene therapy for cardiovascular disease. , 279-287 (2016).</li><li>Bishawi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+normothermic+ex+vivo+organ+perfusion+delivery+method+for+cardiac+transplantation+gene+therapy.">A normothermic ex vivo organ perfusion delivery method for cardiac transplantation gene therapy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 8029 (2019).</li><li>Hulot, J. S., Ishikawa, K., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+the+treatment+of+heart+failure:+promise+postponed.">Gene therapy for the treatment of heart failure: promise postponed.</a> European Heart Journal. 37 (21), 1651-1658 (2016).</li><li>Ho, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+swine+leucocyte+antigen+class+I+genes+in+outbred+pig+populations.">Molecular characterization of swine leucocyte antigen class I genes in outbred pig populations.</a> Animal Genetics. 40 (4), 468-478 (2009).</li><li>Ho, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+swine+leucocyte+antigen+class+II+genes+in+outbred+pig+populations.">Molecular characterization of swine leucocyte antigen class II genes in outbred pig populations.</a> Animal Genetics. 41 (4), 428-432 (2010).</li></ol>

A entrega de terapêutica durante a ex vivo perfusão em transplante cardíaco oferece uma estratégia para modificar o aoenxerto e potencialmente melhorar os resultados do transplante. O protocolo aqui apresentado incorpora o armazenamento de perfusão normoérmico de última geração e oferece potencial promissor para testar a entrega isolada de células, genes ou imunoterápicos ao alusão 11,12,13. Até o ...

A insuficiência cardíaca é uma condição que afeta cerca de 6 milhões de adultos nos Estados Unidos e deve aumentar para 8 milhões de adultos até o ano de 20301. Transplante cardíaco é o tratamento padrão ouro para insuficiência cardíaca em estágio final. No entanto, não é sem suas limitações e complicações. Permanece limitado pelo número de corações doadores disponíveis, disfunção do enxerto primário, rejeição do coração e os efeitos colaterais da imunossupressão de longo prazo2. Essas limitações são particularmente importantes em jovens receptores que podem sofrer falha de aoenxerto e requerem posterior reco transplante para alcançar a expectativa de vida normal.
Uma intervenção ideal para superar essas limitações trataria a loenxertos cardíacos inteiros com terapêutica antes da implantação no receptor que pode melhorar a viabilidade do aoenxerto e conferir "cardioproteção". Tais intervenções seriam dadas profilaticamente para minimizar a incidência de insultos isquêmicos, rejeição de aloenxerto, vasculopatia de aloenxerto cardíaco e até mesmo reparar aloenxertos marginais. Estudos translacionais para o desenvolvimento desses tipos de intervenções requerem um modelo animal de transplante cardíaco para permitir a vigilância a longo prazo do enxerto cardíaco. O modelo de transplante de coração suíno e heterotópico na posição intraabdominal tem se mostrado ideal para este fim. O transplante de coração nesta posição permite testar os efeitos de novas terapias e avaliar a imunopatologia da rejeição do enxerto. Além disso, o modelo heterotópico é vantajoso sobre o modelo ortotópico devido à melhor sobrevida geral do receptor, sem necessidade de bypass cardiopulmonar e sem necessidade do enxerto para manter a circulação do receptor3.
A efetiva entrega de intervenções terapêuticas ao coração, como gene, celular ou imunoterapia, é uma barreira significativa para a aplicação clínica 4,5. A tecnologia introduzida pelos dispositivos de perfusão ex vivo permite que os enxertos sejam continuamente perfundidos, mantendo-os em um estado não trabalhador, mas metabolicamente ativo 6,7,8,9. Isso oferece uma oportunidade única para tratar um coração inteiro com terapêutica avançada, minimizando os potenciais efeitos colaterais do parto sistêmico 10,11,12,13. Outra vantagem de utilizar dispositivos de perfusão ex vivo para entrega terapêutica é que eles permitem a administração de medicamentos para a circulação coronariana por períodos prolongados que não são viáveis usando métodos tradicionais de armazenamento estático frio. Isso permite uma entrega mais global da terapêutica ao enxerto14. Usando o protocolo aqui apresentado, entregamos com sucesso o gene luciferase de vagalume a um enxerto cardíaco porcino inteiro usando vetores adenovirais15. O objetivo deste protocolo é fornecer uma abordagem reprodutível e robusta para a realização da entrega de um terapêutico para toda a alusão cardíaca antes do transplante.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0 Looped Maxon suture</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>GMM-341L</td>
			<td>Used to close fascia of the laparotomy incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0 Silk ties</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>S346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G Angiocath</td>
			<td>BD</td>
			<td>381144</td>
			<td>Used to de-air the left ventricle of the donor heart after implantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 Fr LV vent</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>12002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk sutures</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>SA11G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk ties</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>SA65H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>J259H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Fr venous cannula</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>68124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 Prolene sutures</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>8522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Monocryl suture</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>Y469G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Prolene sutures</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>8521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal hair cutting clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>8786-452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aortic clamp</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH6201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Army Navy retractor</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>SU3660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATF 40, Cell saver disposable set</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>9108494</td>
			<td>Cell saver device insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balfour retractor</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>SU3042</td>
			<td>Used as an abdominal wall retractor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C.A.T.S cell saver</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>ES0019</td>
			<td>Cell saver device used to wash donor blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac defibrillator</td>
			<td>Zoll</td>
			<td>M Series</td>
			<td>Cardiac defibrillator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castro needle holder</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH8589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CG4 iStat cartridges</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>03P85-25</td>
			<td>POC testing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CG8 iStat cartridges</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>03P88-25</td>
			<td>POC testing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeBakey forceps</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH5902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrocautery disposable pencil</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>E2450H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gerald forceps</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>NL1451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemotherm 400CE Dual Reservoir Cooler/Heater</td>
			<td>Cincinnati Sub-Zero</td>
			<td>86022</td>
			<td>Heater cooler used to regulate perfusion temperature on the ex vivo perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iSTAT 1</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>04P75-03</td>
			<td>POC testing device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kocher clamp</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>SU2790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large clip applier</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>50-4300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large clips</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large soft pledgets</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8886867901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium clip applier</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>50-4335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium clips</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum scissor</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH2006-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 10 scalpel blade</td>
			<td>Swann-Mortan</td>
			<td>301</td>
			<td>Used for skin incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 11 scalpel blade</td>
			<td>Kiato Plus</td>
			<td>18111</td>
			<td>Used for vascular incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCS device with base</td>
			<td>TransMedics, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Ex vivo perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCS disposable</td>
			<td>TransMedics, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Ex vivo perfusion device insert with perfusion kits</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pacing cable</td>
			<td>Remington Medical</td>
			<td>FL-601-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pediatric cardioplegia catheter (4Fr)</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>10218</td>
			<td>Used to deliver cardioplegia to the donor aortic root</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pediatric Foley catheter</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>RSH170003080</td>
			<td>Placed pre-op to decompress the recipient&#39;s bladder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potts scissors</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH13038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure bag x2 (1,000 mL)</td>
			<td>Novaplus</td>
			<td>V4010H</td>
			<td>Used to deliver cardioplegia at a set pressure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Satinsky clamp</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH7305</td>
			<td>Vascular clamp used for creating anastomoses between donor heart and recipient vessels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Felco</td>
			<td>FELCO 200A-50</td>
			<td>Used to perform sternotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small hard pledgets</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8886867701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sternal retractor</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH6950-007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temporary cardiac pacing wires</td>
			<td>Ethicon, Inc.</td>
			<td>TPW32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temporary dual chamber pacemaker</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>5388</td>
			<td>Cardiac pacing device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tourniquet kit</td>
			<td>Medtronic, Inc</td>
			<td>79005</td>
			<td>Rummel tourniquets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umbilical tape</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8886861903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel loops</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>31145686</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a porcine heterotopic heart transplantation protocol for delivery of therapeutics to a cardiac allograft

Transplante cardíaco é o tratamento padrão ouro para insuficiência cardíaca em estágio final. No entanto, permanece limitado pelo número de corações doadores disponíveis e complicações, como disfunção primária do enxerto e rejeição do enxerto. O recente uso clínico de um dispositivo de perfusão ex vivo em transplante cardíaco introduz uma oportunidade única para o tratamento de a lotoxeris cardíacos com intervenções terapêuticas para melhorar a função e evitar respostas deletérios do receptor. Estabelecer um modelo translacional e animal grande para entrega terapêutica a todo o aoenxerto é essencial para testar novas abordagens terapêuticas no transplante cardíaco. O modelo de transplante de coração suíno e heterotópico na posição intraabdominal serve como um excelente modelo para avaliar os efeitos de novas intervenções e a imunopatologia da rejeição do enxerto. Este modelo também oferece sobrevida a longo prazo para o suíno, uma vez que o enxerto não é necessário para manter a circulação do receptor. O objetivo deste protocolo é fornecer uma abordagem reprodutível e robusta para alcançar a entrega ex vivo de um terapêutico a toda a alusão cardíaca antes do transplante e fornecer detalhes técnicos para realizar um transplante heterotópico de sobrevivência do coração ex vivo perfumado.

Esse grupo sobreviveu com sucesso a 9 suínos entre 5 e 35 dias após o protocolo apresentado aqui, dependendo do desenho do estudo. Dos 10 suínos submetidos a este protocolo, apenas 1 morreu prematuramente por complicações cirúrgicas, gerando uma taxa de sobrevivência de 90%. Demonstrado na Figura 2 é um diagrama da configuração de um coração heterotópico transplantado na posição intraabdominal em um porco. Ao determinar o local para anastomose do alusão, selecione um site que...

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A Porcine Heterotopic Heart Transplantation Protocol for Delivery of Therapeutics to a Cardiac Allograft

Apresentamos um protocolo para a utilização de um sistema de perfusão normal ex vivo sanguinous para a entrega de terapêutica a um aoentrato cardíaco inteiro em um modelo de transplante de coração heterotópico porcina.

Um Protocolo de Transplante de Coração Heterotópico Porcino para Entrega de Terapêutica a um Aoenxerto Cardíaco

Cardiac transplantation is the gold standard treatment for end-stage heart failure. However, it remains limited by the number of available donor hearts ...

Este protocolo é o primeiro a descrever como a terapêutica pode ser efetivamente administrada a toda uma alusão cardíaca no grande modelo animal de transplante cardíaco. A principal vantagem deste protocolo é que permite aos pesquisadores testar os efeitos de uma terapêutica em toda uma alusão cardíaca durante longos períodos de tempo após o transplante. Esta técnica pode ser usada para investigar intervenções que previnem a rejeição do a looenxerto cardíaco, disfunção primária do enxerto, minimizar a necessidade de imunossupressão pós-operatória ou prolongar a vida útil de um aoenxerto cardíaco.Otimizar a exposição é a parte mais desafiadora do procedimento de transplante e requer que vários membros da equipe completem. Da mesma forma, perfusionistas experientes são necessários para coordenar e monitorar a perfusão ex vivo. Para começar, faça uma incisão de 20 a 30 centímetros de comprimento usando a lâmina número 10 do manúbrio até o xifoide, dependendo do tamanho do porco.Use eletrocauteria para dividir o peitoral maior do esterno até o xifoide ter o cuidado de dividir ao longo da linha média do esterno. Uma vez até o esterno, marque a linha média e comece a esternotomia a partir do xiphoide dividindo-o com uma tesoura pesada. Em seguida, estenda a cefaleia de esternotomia após cada corte.Separe sem rodeio o coração do esterno usando varreduras de dedos e complete a esternotomia através do manúbrio. Depois de otimizar a exposição do campo cirúrgico usando um retrátil severo, identifique e remova o timo com eletrocauteria entrando no pericárdio longitudinalmente do diafragma até a aorta e criando um berço pericárdico usando suturas de seda. Divida totalmente o tecido entre a aorta e a artéria pulmonar e visualize a localização do arco aórtico e do tronco braquicefálico para facilitar a colocação adequada do grampo cruzado aórtico.Usando tesoura e dissecção contundente, liberte circunferencialmente a veia cava superior e amarre duas suturas de seda de tamanho zero ao redor da veia cava superior. Aplique sutura de polipropileno tamanho 4-0 à aorta ascendente de forma u-stitch e ao átrio direito de forma de bolsa-corda. Insira uma cânula de raiz aórtica pediátrica presa pelo ponto U previamente colocado.E depois de des-arejar a cânula, fixe no lugar com um torniquete Rummel. Conecte a cânula raiz aórtica à tubulação de cardioplegia depois que a tubulação tiver sido lavada com cardioplegia del Nido. Crie uma atriotomia direita dentro da corda de bolsa previamente colocada.Insira uma cânula venosa no átrio direito e fixe com um torniquete Rummel. Conecte a cânula venosa a uma linha de sucção estéril conectada à cardiotomia do protetor celular e colete aproximadamente 1 a 1,3 litros de sangue. Em seguida, aplique o grampo cruzado aórtico, garantindo cuidadosamente que o grampo oclui completamente a aorta ascendente.Depois de colocar lama de gelo estéril no coração, divida a veia cava inferior e superior apenas proximal à veia azígo. A aorta ao nível do arco apenas distal para a artéria innominada e a artéria pulmonar principal na bifurcação. Identifique e liga as veias pulmonares, depois remova o coração do peito e coloque-o em um recipiente com gelo estéril.Para preparar a aorta para colocação do conector aórtico, coloque quatro suturas de polipropileno tamanho 4-0 em uma forma simples de colchão horizontal ao redor do interior da aorta distal a uma profundidade de cinco milímetros abaixo da borda de corte, e depois amarre-as para baixo. Enquanto segura as suturas aórticas penhoradas, insira o conector aórtico na aorta e amarre uma fita umbilical ao redor da aorta para fixar o conector. Coloque uma bolsa de polipropileno tamanho 4-0 ao redor da borda do corte distal da artéria pulmonar principal.Insira a cânula da artéria pulmonar e amarre as extremidades da corda da bolsa para fixar a cânula. Em seguida, conecte-se à cânula da artéria pulmonar ao conector da artéria pulmonar no dispositivo e fixá-la com a gravata. Leve o enxerto preparado da mesa de trás para o dispositivo de perfusão ex vivo e conecte o conector aórtico ao local do dispositivo.A ventilação ventrículo esquerda escorre pela veia pulmonar desamasteada no átrio esquerdo e através da válvula mitral para o ventrículo esquerdo. Usando a lâmina número 10, faça uma incisão de pele de 20 a 30 centímetros de comprimento e, em seguida, continue a dissecção até a fáscia usando eletrocauteria. Depois de levantar a fáscia e o peritônio com dois grampos Kocher, faça cuidadosamente uma pequena incisão na cavidade peritoneal usando uma tesoura Metzenbaum.Estenda a abertura peritoneal para toda a extensão da incisão usando eletrocauteria. Colocando um dedo por baixo para proteger as vísceras subjacentes. Coloque um retratedor Balfour para otimizar a exposição e retrair-se ao intestino delgado cranialmente usando uma toalha molhada.Leve a dissecção até a aorta abdominal em veia cava inferior, em seguida, liga os linfáticos com clipes médios e grandes. Na mesa de trás, quando a veia pulmonar deixou atriotomia onde a ventilação ventrículo esquerda foi inserida é sobresewed, corte o aspecto distal da aorta e artéria pulmonar onde a fixação às cânulas pode ter esmagado o tecido. Coloque um grampo satinsky na cava vena inferior e crie uma venotomia longitudinal medindo aproximadamente 1,5 centímetros usando a lâmina número 11 e a tesoura de Pott.Anastomose o enxerto de artéria pulmonar para a veia infra-renal inferior do receptor, de forma de ponta a ponta usando uma sutura de polipropileno tamanho 4-0. Em seguida, anastomose o enxerto de aorta para a aorta infrarenal do destinatário de forma de ponta a ponta usando uma sutura de polipropileno tamanho 4-0. Coloque cuidadosamente o coração no espaço retroperitoneal direito, evitando tensão na anastomose e torção dos vasos.Em seguida, substitua o intestino delgado. Feche a fáscia com sutura maxon tamanho zero em uma forma de corrida começando de ambas as extremidades da incisão e amarrando no meio, evitando qualquer lesão no intestino. Feche a camada dérmica profunda com tamanho 2-0 Vicryl em uma forma de corrida e a pele com tamanho 4-0 Monocril em uma forma de corrida.Foram adquiridos vários parâmetros diferentes de perfusão. As taxas de fluxo circulatório foram medidas a partir da artéria pulmonar, da aorta e das artérias coronárias. A pressão aórtica, incluindo pressão média, pressão sistólica, pressão diastólica também foram medidas.Durante a perfusão ex vivo, a frequência cardíaca e a temperatura do artorgrafo cardíaco também foram medidas. Durante o período de perfusão, a saturação de oxigênio venoso misto e os valores hematócritos foram medidos a partir do perfusato. A viabilidade do coração heterotópico intrabdominal em 35 dias indica transplante bem sucedido usando este protocolo.A coisa mais importante a se lembrar é selecionar um site para o aloenxerto que minimize o potencial de tensão e torção das anastomoses. Seguindo este procedimento, o pesquisador poderá testar vários tipos diferentes de terapêuticas para determinar seus efeitos sobre as respostas imunológicas contra o aoenxerto, bem como determinar a longevidade de um efeito terapêutico no aoenxerto. Após o desenvolvimento deste protocolo, nosso grupo tem sido capaz de testar diferentes veículos vetoriais virais para entrega de genes, bem como um modelo de rejeição aguda de alograma para obter uma compreensão da fisiopatologia da rejeição e eficácia da entrega de genes usando vetores virais.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Um método modificado para heterotópico Rato coração transplante

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Medicina

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

Técnica de transplante heterotópico Murino Coração

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

O transplante de válvula pulmonar Usando um modelo do rato de Heterotópica Transplante de Coração

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Rat heterotópico abdominal coração / pulmão Transplante Single-carregado em uma configuração-Volume

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Heterotopic Cervical Transplante Cardíaco em Ratos

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Heterotópico Renal autotransplante em um modelo suíno: Um Protocolo Passo-a-Passo

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Um modelo pré-clínico porcino de transplante cardíaco ortotópico

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

Um modelo simplificado para transplante de válvula cardíaca heterotópica em roedores

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of ...

Left Lung Orthotopic Transplantation in a Juvenile Porcine Model for ESLP

Transplante ortotópico de pulmão esquerdo em modelo suíno juvenil para PESL

Lung transplantation is the gold-standard treatment for end-stage lung disease, with over 4,600 lung transplantations performed worldwide annually. ...

A Modified Cuff Technique for Mouse Cervical Heterotopic Heart Transplantation Model

Técnica de Cuff Modificada para Modelo de Transplante Cardíaco Heterotópico Cervical:

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for ...