Name: isolation of primary patient-specific aortic smooth muscle cells and semiquantitative real-time contraction measurements in vitro
Uploaded: 2022-02-15T13:30:00
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Gostaríamos de reconhecer com gratidão Tara van Merrienboer, Albert van Wijk, Jolanda van der Velden, Jan D. Blankensteijn, Lan Tran, Peter L. Hordijk, a equipe DO PAREL-AAA, e todos os cirurgiões vasculares do UmC de Amsterdã, Zaans Medisch Centrum e Dijklander por fornecerem materiais e apoio para este estudo.

NOTA: Biópsias aórticas foram obtidas durante reparo de aneurisma aberto em Amsterdam University Medical Centers, VU University Medical center, Amsterdam, Zaans Medisch Centrum, Zaandam e Dijklander hospital, Hoorn, holanda. O tecido aórtico de controle foi obtido a partir do pedaço da aorta ligado à artéria renal colhida para transplantes renais. Apenas pacientes acima de 18 anos foram incluídos, e todos os pacientes deram seu consentimento informado para participar do estudo. Todo o material foi coletado de acor...

<ol>
	<li>Milewicz, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+basis+of+thoracic+aortic+aneurysms+and+dissections:+focus+on+smooth+muscle+cell+contractile+dysfunction.">Genetic basis of thoracic aortic aneurysms and dissections: focus on smooth muscle cell contractile dysfunction.</a> Annual Review of Genomics and Human Genetics. 9, 283-302 (2008).</li><li>Milewicz, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+smooth+muscle+cell+force+generation+as+a+driver+of+thoracic+aortic+aneurysms+and+dissections.">Altered smooth muscle cell force generation as a driver of thoracic aortic aneurysms and dissections.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (1), 26-34 (2017).</li><li>Groeneveld, M. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+gradients+in+single+smooth+muscle+cells+revealed+by+the+digital+imaging+microscope+using+Fura-2.">Calcium gradients in single smooth muscle cells revealed by the digital imaging microscope using Fura-2.</a> Nature. 318 (6046), 558-561 (1985).</li><li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NLRP3+(nucleotide+oligomerization+domain-like+receptor+family,+pyrin+domain+containing+3)-caspase-1+inflammasome+degrades+contractile+proteins:+implications+for+aortic+biomechanical+dysfunction+and+aneurysm+and+dissection+formation.">NLRP3 (nucleotide oligomerization domain-like receptor family, pyrin domain containing 3)-caspase-1 inflammasome degrades contractile proteins: implications for aortic biomechanical dysfunction and aneurysm and dissection formation.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (4), 694-706 (2017).</li><li>Bogunovic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+smooth+muscle+cell+contractility+as+a+novel+concept+of+abdominal+aortic+aneurysm+pathophysiology.">Impaired smooth muscle cell contractility as a novel concept of abdominal aortic aneurysm pathophysiology.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-14 (2019).</li><li>Hurst, V., Goldberg, P. L., Minnear, F. L., Heimark, R. L., Vincent, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rearrangement+of+adherens+junctions+by+transforming+growth+factor-&#946;1:+role+of+contraction.">Rearrangement of adherens junctions by transforming growth factor-&#946;1: role of contraction.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 276 (4), 582-595 (1999).</li><li>Hu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+between+ECIS+and+LAPS+for+establishing+a+cardiomyocyte-based+biosensor.">Comparison between ECIS and LAPS for establishing a cardiomyocyte-based biosensor.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 185, 238-244 (2013).</li><li>Peters, M. F., Lamore, S. D., Guo, L., Scott, C. W., Kolaja, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+cardiomyocytes+in+cellular+impedance+assays:+bringing+cardiotoxicity+screening+to+the+front+line.">Human stem cell-derived cardiomyocytes in cellular impedance assays: bringing cardiotoxicity screening to the front line.</a> Cardiovascular Toxicology. 15 (2), 127-139 (2015).</li><li>Zhang, S., Yang, Y., Kone, B. C., Allen, J. C., Kahn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-stimulated+cyclic+guanosine+monophosphate+inhibits+vascular+smooth+muscle+cell+migration+by+inhibiting+Ca/calmodulin-dependent+protein+kinase+II.">Insulin-stimulated cyclic guanosine monophosphate inhibits vascular smooth muscle cell migration by inhibiting Ca/calmodulin-dependent protein kinase II.</a> Circulation. 107 (11), 1539-1544 (2003).</li><li>Halterman, J. A., Kwon, H. M., Zargham, R., Bortz, P. D. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+factor+of+activated+T+cells+5+regulates+vascular+smooth+muscle+cell+phenotypic+modulation.">Nuclear factor of activated T cells 5 regulates vascular smooth muscle cell phenotypic modulation.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 31 (10), 2287-2296 (2011).</li><li>Bass, H. M., Beard, R. S., Cha, B. J., Yuan, S. Y., Nelson, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombomodulin+induces+a+quiescent+phenotype+and+inhibits+migration+in+vascular+smooth+muscle+cells+in+vitro.">Thrombomodulin induces a quiescent phenotype and inhibits migration in vascular smooth muscle cells in vitro.</a> Annals of Vascular Surgery. 30, 149-156 (2016).</li><li>Burger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+phenotyping+and+functional+assessment+of+smooth+muscle+like-cells+with+pathogenic+variants+in+aneurysm+genes+ACTA2,+MYH11,+SMAD3+and+FBN1.">Molecular phenotyping and functional assessment of smooth muscle like-cells with pathogenic variants in aneurysm genes ACTA2, MYH11, SMAD3 and FBN1.</a> Human Molecular Genetics. , (2021).</li><li>Yeung, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transdifferentiation+of+human+dermal+fibroblasts+to+smooth+muscle-like+cells+to+study+the+effect+of+MYH11+and+ACTA2+mutations+in+aortic+aneurysms.">Transdifferentiation of human dermal fibroblasts to smooth muscle-like cells to study the effect of MYH11 and ACTA2 mutations in aortic aneurysms.</a> Human Mutation. 38 (4), 439-450 (2017).</li></ol>

Este artigo apresenta um método para medir a contração do SMC in vitro, com base nas mudanças de impedância e ocupação superficial. Em primeiro lugar, descreve-se o isolamento, a culminação e a expansão de SMCs humanos primários específicos do paciente e fibroblastos de pele, seguidos de como usá-los para medidas de contração. 
Uma limitação do estudo está relacionada à obtenção das células através de um protocolo de explant. As células que se proliferam da bi?...

As células musculares lisas (SMCs) são o tipo de célula predominante na camada medial aórtica, a camada mais grossa da aorta. Dentro da parede, eles são radialmente orientados e estão envolvidos, entre outras funções, vasoconstrição e vasodilatação1. O maquinário contratado da SMC está envolvido na transmissão de força na aorta através do vínculo funcional com a matriz extracelular2. Mutações em genes codificados para as proteínas do aparelho contítil SMC, como a cadeia pesada de miosina muscular lisa (MYH11) e a actina muscular lisa (ACTA2), têm sido relacionadas a casos de aneurismas aórticos torácicos familiares, ressaltando a relevância da contração do SMC na manutenção da integridade estrutural e funcional da aorta 1,2 . Além disso, mutações na via de sinalização TGFβ também estão associadas a aneurismas de aoórtico, e seus efeitos na fisiopatologia aneurisma aórtica também podem ser estudados em fibroblastos de pele3.
A medição de alta produtividade da contração SMC in vitro é desafiadora. Como a contratude do SMC não pode ser medida in vivo em humanos, ensaios in vitro em células humanas apresentam uma alternativa viável. Além disso, o desenvolvimento do aneurisma de aoórtico abdominal (AAA) em modelos animais é quimicamente induzido por, por exemplo, perfusão elastase, ou causada por uma mutação específica. Portanto, os dados animais não são comparáveis ao desenvolvimento de AAA em humanos, que tem principalmente uma causa multifatorial, como tabagismo, idade e/ou aterosclerose. In vitro A contratilidade da SMC tem sido medida principalmente pela microscopia de forçade tração 4,5, quantificação dos fluxos de cálcio intracelular6 da Fluorescência Fura-2 e pelos ensaios de enrugamento de colágeno7. Embora a microscopia de força de tração forneça uma visão numérica inestimável das forças geradas por uma única célula, ela não é adequada para a triagem de alto rendimento devido ao complexo processamento de dados matemáticos e à análise de uma célula de cada vez, o que significa que é muito demorado medir um número representativo de células por doador. Os ensaios de enrugação de corante e colágeno fura-2 permitem a determinação superficial da contração e não dão uma saída numérica precisa, tornando-os menos adequados para discriminar diferenças específicas do paciente. A contração prejudicada do SMC em células derivadas da aorta de pacientes com aneurisma de aorta abdominal foi demonstrada pela primeira vez pela otimização de um novo método para medir a contração de SMC in vitro8. Isso foi feito redefinindo o método de sensor de sensoriamento de impedância de células elétricas (ECIS). O ECIS é um ensaio de média-produção em tempo real para quantificação do comportamento celular aderente e contração 9,10,11, como o crescimento e o comportamento do SMC na cicatrização de feridas e ensaios migratórios 12,13,14. O método exato está descrito na seção de protocolo. Dessa forma otimizada, o ECIS também pode ser usado para estudar a contração do fibroblasto devido ao seu tamanho e morfologia semelhantes.
O objetivo deste artigo é fornecer uma descrição passo a passo do método de medição da contração de SMC in vitro usando ECIS8 e comparando a contração entre controle e SMCs do paciente. Em primeiro lugar, explica-se o isolamento e o cultivo de SMCs primários a partir do controle e biópsias aórticas do paciente, que podem ser utilizadas para a medição da contração. Em segundo lugar, são descritas medidas de contração e análise, juntamente com a verificação da expressão do marcador SMC. Além disso, este artigo descreve o método de isolamento de fibroblastos dérmicos específicos do paciente cuja contração pode ser medida utilizando a mesma metodologia. Essas células podem ser usadas para estudos específicos do paciente focados em aneurisma de aorta ou outras patologias cardiovasculares15 ou estudos prognósticos usando um protocolo de transdiferenciação que permite a medição da contração antes da cirurgia de aneurisma16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well Array</td>
			<td>Applied Biophysics</td>
			<td>96W10idf PET</td>
			<td>Array used to measure contraction in the ECIS setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custodiol</td>
			<td>Dr. Franz H&#246;hler Chemie GmbH</td>
			<td>RVG 12801</td>
			<td>Solution used to transfer tissue in from surgery room to laboratorium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>472301</td>
			<td>Solution used to dilute ionomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140079</td>
			<td>Addition to cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F-10 Nutrient Mix</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11550043</td>
			<td>Medium used to culture skin fibroblasts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Vascular Smooth Muscle Cell Basal Medium (formerly &#39;&#39;Medium 231&#39;&#39;)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>M231500</td>
			<td>Medium used to culture smooth muscle cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen countess II</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td>Automated cell counter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin calcium salt from Streptomyces conglobatus</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I0634-1MG</td>
			<td>Compound used for contraction stimulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9%</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>B230561</td>
			<td>Solution used to transfer tissue in from surgery room to laboratorium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Antibiotics used for cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phospathe buffered saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Used to wash cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quick-RNA Miniprep Kit</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R1055</td>
			<td>Kit used for RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smooth Muscle Growth Supplement (SMGS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>S00725</td>
			<td>Supplement which is added to smooth muscle cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript VILO cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11754250</td>
			<td>Kit used for cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4309155</td>
			<td>Reagent for qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15400-054</td>
			<td>Used to trypsinize cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZTheta</td>
			<td>Applied Biophysics</td>
			<td>ZTheta</td>
			<td>ECIS instrument used for contraction measurements</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of primary patient-specific aortic smooth muscle cells and semiquantitative real-time contraction measurements in vitro

As células musculares lisas (SMCs) são o tipo de célula predominante na mídia aórtica. Sua máquina de fundição é importante para a transmissão da força na aorta e regula a vasoconstrição e vasodilatação. Mutações em genes codificados para as proteínas do aparelho contítil do SMC estão associadas a doenças aórticas, como aneurismas de aoórtico torácico. Medir a contração de SMC in vitro é desafiador, especialmente de forma de alto rendimento, o que é essencial para a triagem do material do paciente. Atualmente, os métodos disponíveis não são adequados para este fim. Este artigo apresenta um novo método baseado no sensor de impedância de células elétricas (ECIS). Primeiro, um protocolo de explant é descrito para isolar os SMCs primários humanos específicos do paciente de biópsias aórticas e fibroblastos dérmicos humanos específicos do paciente para o estudo de aneurismas àórtica. Em seguida, é dada uma descrição detalhada de um novo método de contração para medir a resposta contratil dessas células, incluindo a análise subsequente e sugestão para comparar diferentes grupos. Este método pode ser utilizado para estudar a contração de células aderentes no contexto de estudos translacionais (cardiovasculares) e estudos de triagem de pacientes e medicamentos.

Para testar a reprodutibilidade deste método, o método foi validado apenas utilizando SMCs de controle. Para determinar a reprodutibilidade da medição interexperimental, duas medidas independentes de todas as linhas de controle e células do paciente foram traçadas como um enredo Bland-Altman (Figura 3B). O enredo demonstrou que este método não mostra variabilidade fora do intervalo de confiança, exceto por uma linha celular outlier. Além disso, esses resultados demonstraram que doi...

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Isolation of Primary Patient-specific Aortic Smooth Muscle Cells and Semiquantitative Real-time Contraction Measurements In Vitro

Este artigo descreve um método baseado em cultura explant para o isolamento e cultivo de células musculares humanas aórticas humanas primárias e específicas do paciente e fibroblastos dérmicos. Além disso, é apresentado um novo método para medir a contração celular e a análise subsequente, que pode ser usado para estudar diferenças específicas do paciente nessas células.

Isolamento de células musculares lisas aórticas específicas do paciente primário e medidas de contração em tempo real semiquantitativas in vitro

Smooth muscle cells (SMCs) are the predominant cell type in the aortic media. Their contractile machinery is important for the transmission of force in ...

Este método permite que os pesquisadores estudem a contração celular da linha celular múltipla do paciente simultaneamente. Permite estudar doenças de forma mais rápida e eficiente. Esta técnica nos permite quantificar a contração celular em tempo real.Dentro de uma hora, podemos obter os valores de contração de dezenas de células. Demonstramos pela primeira vez que a contração celular muscular é diminuída em um grupo de pacientes com aneurismas de aoórtico. Este pode ser um novo biomarcador ou alvo para a terapia médica.Comece esterilizando dois pares de fórceps cirúrgicos e um bisturi, imergindo-os em 70% de etanol e, posteriormente, limpando-os secos. Em seguida, pipeta dois mililitros de meio SMC em uma placa de Petri em que a dissecção tecidual será realizada. Em seguida, pipeta 2,5 mililitros de meio SMC em dois frascos T-25.Gire os frascos ao redor para que o pequeno volume de meio cubra toda a superfície. Inspecione visualmente a biópsia, identificando as três camadas aórticas pela presença de placas ateroscleróticas no lado intimado e tecido conjuntivo viscoso no lado aventureiro para distinguir as camadas. Para isolar os SMCs da mídia, remova as outras duas camadas colocando o tecido com placa intima para cima primeiro, em seguida, remova a placa sólida puxando-a para longe do tecido com fórceps enquanto empurra o tecido para baixo com o segundo par de fórceps até que a camada medial uniforme rosa seja visível.Agora vire o tecido e repita o mesmo procedimento puxando a camada aventur se aventuralo, certificando-se de remover todas as partes visíveis em quantas tentativas for necessário, pois essa camada não se desprenderá da mídia facilmente. Uma vez que a camada de mídia esteja isolada, corte o tecido em cubos pressionando a mídia para baixo com fórceps e cortando o tecido em uma direção usando o bisturi fazendo cortes unidirecionais limpos para minimizar os danos. Coloque de 10 a 20 desses pedaços de tecido no quarto superior do frasco T-25 usando fórceps.Após a esterilização de dois pares de fórceps cirúrgicos e um bisturi como descrito anteriormente, pipeta dois mililitros de meio fibroblasto em uma placa de Petri na qual a dissecção tecidual será realizada. Em seguida, pipeta 2,5 mililitros de meio fibroblasto em dois frascos T-25 e redemoinho os frascos ao redor de modo que o pequeno volume de médio cobre toda a superfície. Inspecione visualmente a biópsia para identificar a epiderme com uma superfície de pele reconhecível, às vezes com cabelos visíveis, em seguida, procure por gordura subcutânea amarela e viscosa no lado oposto.A camada entre a epiderme e a gordura subcutânea é a derme, a fonte de fibroblastos viáveis. Para isolar os fibroblastos da dermis, remova as outras duas camadas colocando o tecido no lado da dermis para tornar as três camadas visíveis. Em seguida, segure o tecido com fórceps e corte toda a epiderme em uma linha limpa sem danificar o tecido.Agora vire o tecido e repita o mesmo procedimento cortando dentro da dermis paralela à borda com a gordura subcutânea. Uma vez que a dermis esteja isolada, corte o tecido em cubos pressionando o tecido com fórceps e cortando o tecido em uma direção usando o bisturi. Em seguida, coloque 10 a 20 desses pedaços de tecido no quarto superior do frasco T-25 usando os fórceps.Conte as células usando um contador celular automatizado e semee os SMCs em triplicado a uma densidade de semeadura de 30.000 células por poço em 200 microliters de meio SMC na placa ECIS revestida de gelatina. Coloque a placa com os SMCs no suporte de 96 poços do ECIS na incubadora de cultura celular. Clique duas vezes no software BioPhysics aplicado pelo ECIS para abrir o programa e pressionar o botão Configuração.Verifique se todos os eletrodos têm contato com o suporte no painel inferior esquerdo rotulado de Configuração de Poço. Se os eletrodos não estiverem conectados corretamente, ajuste a placa no suporte antes de iniciar a medição. Agora selecione o tipo de placa no mesmo painel clicando no tipo Array.Em seguida, prepare duas pipetas definidas em dois microliter e 150 microliter volume. Antes de iniciar a estimulação, pressione Mark no software e coloque um comentário. Para estimular as células, remova a tampa e coloque-a em uma superfície estéril dentro da incubadora.Em seguida, induzir a contração do SMC, pipetando dois microliters da solução de trabalho de ionomicina em cada um bem o mais rápido possível. Uma vez estimuladas todas as células, misture o meio nos poços usando a segunda pipeta. Para determinar a reprodutibilidade de medição interexperimental, duas medidas independentes de todas as linhas de controle e células do paciente foram traçadas como um enredo de Bland-Altman, demonstrando que este método não mostrou variabilidade fora do intervalo de confiança, exceto por uma linha celular outlier.Dois poços semeados com o mesmo experimento e estimulados simultaneamente mostraram praticamente a mesma curva de resposta contratual. Para validar se a resposta mostrada foi uma contração e não estresse osmótico por causa da estimulação da ionomicina, o meio foi substituído após a estimulação e o comportamento das células foi registrado, o que mostrou que as células estimuladas começaram a se espalhar sobre o eletrodo novamente. A resposta contratil em SMCs derivada de aortas saudáveis e não dilatadas mostrou uma resposta mediana de 61% em comparação com a resposta mediana de 52% de pacientes com aneurisma de aorta abdominal.A resposta contraída média do grupo controle foi utilizada para identificar quatro pacientes com valores de contração inferiores aos valores normais. A análise da mancha ocidental e a quantificação subsequente confirmaram que as células expressam marcadores SMC. Para determinação da capacidade proliferativa do SMC, foi realizada qPCR para Ki67.A expressão ki67 foi detectável em todas as células, mas não se correlaciona com a saída de aparelhos. Ao estimular as células para contração, lembre-se de não encanar muitos poços ao mesmo tempo e tentou encanar o mais rápido possível. Este procedimento pode precisar de alguma prática.Usando esse método, dividimos os pacientes com base em sua contração e para diminuir a contração normal que nos permitiu investigar esses pacientes e as ligações com suas características clínicas, como o tabagismo.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Primary Patient-specific Aortic Smooth Muscle Cells and Semiquantitative Real-time Contraction Measurements In Vitro

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

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Isolamento da Human Umbilical células musculares arteriais (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Biologia

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

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Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

Isolamento de artéria pulmonar células musculares lisas de camundongos recém-nascidos

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance (SPR)

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance SPR

Medições em tempo real de proteína de membrana: Receptor Interações Usando Superfície Plasmon Resonance (SPR)

Protein-protein interactions are pivotal to most, if not all, physiological processes, and  understanding the nature of such interactions is a central ...

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Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

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Lesão por esmagamento aórtico murino: um eficiente<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de proliferação de células musculares lisas e função endotelial

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Measuring Proliferation of Vascular Smooth Muscle Cells Using Click Chemistry

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Isolation of Mouse Interstitial Valve Cells to Study the Calcification of the Aortic Valve In Vitro

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