Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

نود أن نشكر الأعضاء في معهدنا (معهد تكساس للبحوث الطبية الحيوية) على جهودهم في الحفاظ على تشغيل منشآتنا بالكامل وآمنة خلال جائحة COVID-19. ونود أيضا أن نشكر لجنتنا المؤسسية للسلامة الأحيائية (IBC) و spell (IACUC) على مراجعة بروتوكولاتنا بطريقة فعالة من حيث الوقت. نشكر الدكتور توماس موران في كلية إيكان للطب في ماونت سيناي على توفير الجسم المضاد أحادي النسيلة للبروتين أحادي النسيلة 1C7C7 التفاعلي 1C7C7 (N). يتم دعم أبحاث SARS-CoV-2 في مختبر مارتينيز سوبريدو حاليا من خلال منح NIAID / NIH RO1AI161363-01 و RO1AI161175-01A1 و R43AI165089-01 ؛ تمنح وزارة الدفاع (DoD) W81XWH2110095 و W81XWH2110103 ؛ شراكة سان أنطونيو من أجل العلاج الدقيق؛ منتدى معهد تكساس للبحوث الطبية الحيوية؛ مركز العلوم الصحية بجامعة تكساس في سان أنطونيو ؛ مؤسسة سان أنطونيو الطبية؛ ومن قبل مركز البحوث المتعلقة بإمراض الأنفلونزا وانتقالها (CRIPT) ، وهو مركز للتميز في أبحاث الأنفلونزا والاستجابة لها تموله NIAID (CEIRR ، العقد رقم 75N93021C00014).

تمت الموافقة على البروتوكولات التي تنطوي على الفئران المعدلة وراثيا K18 hACE2 من قبل اللجنة المؤسسية للسلامة البيولوجية (IBC) التابعة لمعهد تكساس للبحوث الطبية الحيوية (TBRI) واللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC). تتبع جميع التجارب التوصيات الواردة في دليل رعاية واستخدام المختبر ال?...

<ol>
	<li>V'Kovski, P., Kratzel, A., Steiner, S., Stalder, H., Thiel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronavirus+biology+and+replication:+implications+for+SARS-CoV-2.">Coronavirus biology and replication: implications for SARS-CoV-2.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (3), 155-170 (2021).</li><li>Pal, M., Berhanu, G., Desalegn, C., Kandi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus-2+(SARS-CoV-2):+An+update.">Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2): An update.</a> Cureus. 12 (3), 7423 (2020).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+genetic+recombination,+and+pathogenesis+of+coronaviruses.">Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coronaviruses.</a> Trends in Microbiology. 24 (6), 490-502 (2016).</li><li>Cui, J., Li, F., Shi, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+evolution+of+pathogenic+coronaviruses.">Origin and evolution of pathogenic coronaviruses.</a> Nature Reviews Microbiology. 17 (3), 181-192 (2019).</li><li>Lu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+characterisation+and+epidemiology+of+2019+novel+coronavirus:+implications+for+virus+origins+and+receptor+binding.">Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding.</a> Lancet. 395 (10224), 565-574 (2020).</li><li>Evans, J. P., Liu, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+host+factors+in+SARS-CoV-2+entry.">Role of host factors in SARS-CoV-2 entry.</a> Journal of Biological Chemistry. 297 (1), 100847 (2021).</li><li>Petersen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+SARS-CoV-2+with+SARS-CoV+and+influenza+pandemics.">Comparing SARS-CoV-2 with SARS-CoV and influenza pandemics.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (9), 238-244 (2020).</li><li>Alfaraj, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+predictors+of+mortality+of+Middle+East+Respiratory+Syndrome+Coronavirus+(MERS-CoV)+infection:+A+cohort+study.">Clinical predictors of mortality of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV) infection: A cohort study.</a> Travel Medicine and Infectious Disease. 29, 48-50 (2019).</li><li>Harvey, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+variants,+spike+mutations+and+immune+escape.">SARS-CoV-2 variants, spike mutations and immune escape.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (7), 409-424 (2021).</li><li>Dong, E., Du, H., Gardner, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+interactive+web-based+dashboard+to+track+COVID-19+in+real+time.">An interactive web-based dashboard to track COVID-19 in real time.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (5), 533-534 (2020).</li><li>Bar-On, Y. M., Flamholz, A., Phillips, R., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARS-CoV-2+(COVID-19)+by+the+numbers.">ARS-CoV-2 (COVID-19) by the numbers.</a> Elife. 9, 57309 (2020).</li><li>Roussel, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+fear+versus+data.">SARS-CoV-2: fear versus data.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 55 (5), 105947 (2020).</li><li>Scialo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+One+year+in+the+pandemic.+What+have+we+learned,+the+new+vaccine+era+and+the+threat+of+SARS-CoV-2+variants.">SARS-CoV-2: One year in the pandemic. What have we learned, the new vaccine era and the threat of SARS-CoV-2 variants.</a> Biomedicines. 9 (6), 611 (2021).</li><li>. Coronavirus (COVID-19) update: FDA authorizes additional monoclonal antibody for treatment of COVID-19 Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19">https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19</a> (2021)</li><li>Dougan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bamlanivimab+plus+Etesevimab+in+Mild+or+Moderate+Covid-19.">Bamlanivimab plus Etesevimab in Mild or Moderate Covid-19.</a> New England Journal of Medicine. 385 (15), 1382-1392 (2021).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COVID+antibody+treatments+show+promise+for+preventing+severe+disease.">COVID antibody treatments show promise for preventing severe disease.</a> Nature. 591 (7851), 513-514 (2021).</li><li>Tuccori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+the+preclinical+discovery+and+development+of+bamlanivimab+for+the+treatment+of+novel+coronavirus+infection+(COVID-19):+reasons+for+limited+clinical+use+and+lessons+for+the+future.">An overview of the preclinical discovery and development of bamlanivimab for the treatment of novel coronavirus infection (COVID-19): reasons for limited clinical use and lessons for the future.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. , 1-12 (2021).</li><li>Phan, A. T., Gukasyan, J., Arabian, S., Wang, S., Neeki, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergent+inpatient+administration+of+casirivimab+and+imdevimab+antibody+cocktail+for+the+treatment+of+COVID-19+pneumonia.">Emergent inpatient administration of casirivimab and imdevimab antibody cocktail for the treatment of COVID-19 pneumonia.</a> Cureus. 13 (5), 15280 (2021).</li><li>O'Brien, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+REGEN-COV+antibody+combination+in+early+SARS-CoV-2+infection.">Subcutaneous REGEN-COV antibody combination in early SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Beigel, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remdesivir+for+the+treatment+of+Covid-19+-+Final+report.">Remdesivir for the treatment of Covid-19 - Final report.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1813-1826 (2020).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+convalescent+plasma+therapy+on+time+to+clinical+improvement+in+patients+with+severe+and+life-threatening+COVID-19:+A+randomized+clinical+trial.">Effect of convalescent plasma therapy on time to clinical improvement in patients with severe and life-threatening COVID-19: A randomized clinical trial.</a> Journal of the American Medical Association. 324 (5), 460-470 (2020).</li><li>Polack, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+the+BNT162b2+mRNA+Covid-19+vaccine.">Safety and efficacy of the BNT162b2 mRNA Covid-19 vaccine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (27), 2603-2615 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Pfizer-BioNTech+COVID-19+vaccine+-+United+States,+December+2020.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Pfizer-BioNTech COVID-19 vaccine - United States, December 2020.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 69 (50), 1922-1924 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Janssen+COVID-19+vaccine+-+United+States,+February+2021.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Janssen COVID-19 vaccine - United States, February 2021.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 70 (9), 329-332 (2021).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emission+spectra+of+bioluminescent+reporters+and+interaction+with+mammalian+tissue+determine+the+sensitivity+of+detection+in+vivo.">Emission spectra of bioluminescent reporters and interaction with mammalian tissue determine the sensitivity of detection in vivo.</a> Journal of Biomedical Optics. 10 (4), 41210 (2005).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescent+and+bioluminescent+bireporter+Influenza+A+Virus+to+evaluate+viral+infections.">A novel fluorescent and bioluminescent bireporter Influenza A Virus to evaluate viral infections.</a> Journal of Virology. 93 (10), 00032 (2019).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-competent+fluorescent-expressing+influenza+B+virus.">Replication-competent fluorescent-expressing influenza B virus.</a> Virus Research. 213, 69-81 (2016).</li><li>Welsh, D. K., Noguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bioluminescence+imaging.">Cellular bioluminescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (8), (2012).</li><li>Tran, V., Moser, L. A., Poole, D. S., Mehle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+real-time+in+vivo+imaging+of+an+influenza+reporter+virus+reveals+dynamics+of+replication+and+spread.">Highly sensitive real-time in vivo imaging of an influenza reporter virus reveals dynamics of replication and spread.</a> Journal of Virology. 87 (24), 13321-13329 (2013).</li><li>Schoggins, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+reporter+viruses+reveal+viral+dynamics+in+interferon+receptor-deficient+mice+and+sensitivity+to+interferon+effectors+in+vitro.">Dengue reporter viruses reveal viral dynamics in interferon receptor-deficient mice and sensitivity to interferon effectors in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (36), 14610-14615 (2012).</li><li>Luker, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+and+therapy+in+living+mice.">Noninvasive bioluminescence imaging of herpes simplex virus type 1 infection and therapy in living mice.</a> Journal of Virology. 76 (23), 12149-12161 (2002).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rapid+antiviral+screening+assay+based+on+eGFP+reporter+virus+of+Mayaro+virus.">Development of a rapid antiviral screening assay based on eGFP reporter virus of Mayaro virus.</a> Antiviral Research. 168, 82-90 (2019).</li><li>Kirui, J., Freed, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+validation+of+a+highly+sensitive+bioluminescent+HIV-1+reporter+vector+that+simplifies+measurement+of+virus+release.">Generation and validation of a highly sensitive bioluminescent HIV-1 reporter vector that simplifies measurement of virus release.</a> Retrovirology. 17 (1), 12 (2020).</li><li>Shang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+eGFP+enterovirus+71+for+antiviral+screening.">Development and characterization of a stable eGFP enterovirus 71 for antiviral screening.</a> Antiviral Research. 97 (2), 198-205 (2013).</li><li>Zou, G., Xu, H. Y., Qing, M., Wang, Q. Y., Shi, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+luciferase+dengue+virus+for+high-throughput+screening.">Development and characterization of a stable luciferase dengue virus for high-throughput screening.</a> Antiviral Research. 91 (1), 11-19 (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+SARS-CoV-2+from+a+single+bacterial+artificial+chromosome.">Rescue of SARS-CoV-2 from a single bacterial artificial chromosome.</a> mBio. 11 (5), 02168 (2020).</li><li>Avila-Perez, G., Park, J. G., Nogales, A., Almazan, F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+recombinant+Zika+virus+from+a+bacterial+artificial+chromosome+cDNA+clone.">Rescue of recombinant Zika virus from a bacterial artificial chromosome cDNA clone.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59537 (2019).</li><li>Chiem, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bifluorescent-based+assay+for+the+identification+of+neutralizing+antibodies+against+SARS-CoV-2+variants+of+concern+in+vitro+and+in+vivo.">A bifluorescent-based assay for the identification of neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 variants of concern in vitro and in vivo.</a> Journal of Virology. , (2021).</li><li>Committee for the update of the guide for the care and use of laboratory animals., Institute for laboratory animal research (U.S) &amp; National Academies Press (U.S.). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals.+8th+edn.">Guide for the care and use of laboratory animals. 8th edn.</a> National Research Council (US). , (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+SARS-CoV-2+infection+dynamic+in+vivo+using+reporter-expressing+viruses.">Analysis of SARS-CoV-2 infection dynamic in vivo using reporter-expressing viruses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (41), (2021).</li></ol>

يوضح هذا البروتوكول جدوى استخدام هذه الجينات rSARS-CoV-2 التي تعبر عن جينات المراسل لمراقبة العدوى الفيروسية في الجسم الحي. يوفر كل من الفيروسات المؤتلفة التي يعبر عنها المراسل أداة ممتازة لدراسة عدوى SARS-CoV-2 في الجسم الحي. تمثل أنظمة التصوير خارج الجسم الحي الموصوفة (rSARS-CoV-2 / Venus) <...

فيروس كورونا 2 المسبب للمتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (SARS-CoV-2) هو فيروس RNA مغلف ، إيجابي الحس ، أحادي الخيط ينتمي إلى سلالة Betacoronavirus في عائلة Coronaviridae 1. تنقسم هذه العائلة الفيروسية إلى ألفا وبيتا وجاما ودلتا فيروس كورونا1. تصيب فيروسات ألفا وبيتا كورونا الثدييات بشكل رئيسي ، في حين أن فيروس جاما ودلتا يصيب الطيور بشكل حصري تقريبا2. حتى الآن، عبرت سبعة فيروسات تاجية حواجز الأنواع وظهرت كفيروسات تاجية بشرية (HCoV): اثنان من فيروسات ألفا (HCoV-229E و HCoV-NL63) وخمسة فيروسات بيتا (HCoV-OC43 و HCoV-HKU1 و SARS-CoV وفيروس كورونا المسبب لمتلازمة الشرق الأوسط التنفسية [MERS-CoV] و SARS-CoV-2) 3,4,5,6. SARS-CoV و MERS-CoV و SARS-CoV-2 شديدة الإمراض ، مما يسبب عدوى حادة في الجهاز التنفسي السفلي7. وقبل ظهور السارس - كوف-2، كانت هناك فاشيتان وبائيتان ناجمتان عن فيروس كورونا المستجد (سارس) في قوانغدونغ بروفيدانس، الصين، في الفترة من 2002 إلى 2003، بمعدل إماتة للحالات بلغ حوالي 9.7 في المائة؛ وفاشيات وبائية في قوانغدونغ بروفيدانس بالصين، في الفترة من 2002 إلى 2003، بلغ معدل إماتة الحالات حوالي 9.7 في المائة؛ وفاشيات وباء في قوانغدونغ بروفيدانس بالصين، في الفترة من 2002 إلى 2003، حيث بلغ معدل إماتة الحالات حوالي 9.7 في المائة؛ وفاشيات وباء في قوانغدونغ بروفيدانس بالصين، في الفترة من 2002 إلى 2003؛ وفاشية وباء في قوانغدونغ بروفيدانس بالصين، في الفترة من 2 وفيروس كورونا المسبب لمتلازمة الشرق الأوسط التنفسية في الشرق الأوسط من عام 2012 إلى الوقت الحاضر، حيث بلغت نسبة CFR حوالي 34٪ 7,8. يحتوي SARS-CoV-2 على CFR إجمالي يتراوح بين 3.4٪ -49٪ ، مع مساهمة الظروف الأساسية في ارتفاع CFR 8,9. منذ اكتشافه في ديسمبر 2019 ، في ووهان ، الصين ، كان SARS-CoV-2 مسؤولا عن أكثر من 242 مليون إصابة بشرية وأكثر من 4.9 مليون حالة وفاة بشرية في جميع أنحاء العالم 7,10,11,12. ومن الجدير بالذكر أنه منذ أواخر عام 2020، أثرت المتغيرات الجديدة المثيرة للقلق من SARS-CoV-2 (VoC) والمتغيرات ذات الأهمية (VoI) على خصائص الفيروس، بما في ذلك انتقال العدوى والمستضدات 9,13، والاتجاه العام لجائحة كوفيد-19. لعلاج عدوى SARS-CoV-2 ، لا يوجد حاليا سوى ولاية أمريكية واحدة (الولايات المتحدة) إدارة الغذاء والدواء (FDA) العلاجية المضادة للفيروسات (ريمديسيفير) ودواء واحد ترخيص الاستخدام الطارئ (EUA) (baricitinib ، ليتم إعطاؤه بالاشتراك مع ريمديسيفير)14. هناك أيضا 6 أجسام مضادة وحيدة النسيلة معتمدة من EUA: REGEN-COV (casirivimab و imdevimab ، تدار معا) ، sotrovimab ، tocilizumab ، و bamlanivimab و etesevimab تدار معا15،16،17،18،19. لا يوجد حاليا سوى لقاح وقائي واحد معتمد من إدارة الأغذية والعقاقير ، Pfizer-BioNTech ، واثنين من اللقاحات الوقائية الأخرى (Moderna و Janssen) تمت الموافقة عليهما من EUA20،21،22،23،24. ومع ذلك ، مع معدل العدوى غير المنضبط وظهور VoC و VoI ، لا يزال SARS-CoV-2 يشكل تهديدا لصحة الإنسان. لذلك، هناك حاجة ماسة إلى نهج جديدة لتحديد الوقاية والعلاجات الفعالة للسيطرة على عدوى SARS-CoV-2 وجائحة COVID-19 التي لا تزال مستمرة.
تتطلب دراسة SARS-CoV-2 تقنيات شاقة ومناهج ثانوية لتحديد وجود الفيروس في الخلايا المصابة و / أو النماذج الحيوانية المصادق عليها للعدوى. سمح استخدام علم الوراثة العكسي لتوليد الفيروسات المؤتلفة بالإجابة على أسئلة مهمة في بيولوجيا الالتهابات الفيروسية. على سبيل المثال، وفرت تقنيات الوراثة العكسية وسائل للكشف عن آليات العدوى الفيروسية والإمراض والمرض وفهمها. وبالمثل، مهدت مناهج علم الوراثة العكسي الطريق لهندسة الفيروسات المؤتلفة التي تفتقر إلى البروتينات الفيروسية لفهم مساهمتها في التسبب الفيروسي. وبالإضافة إلى ذلك، استخدمت تقنيات علم الوراثة العكسية لتوليد فيروسات مؤتلفة تعبر عن جينات مراسلة للتطبيقات المختبرية والحيوية، بما في ذلك تحديد النهج الوقائية و/أو العلاجية لعلاج الالتهابات الفيروسية. البروتينات الفلورية والمضيئة الحيوية هي الجينات الصحفية الأكثر استخداما بسبب حساسيتها واستقرارها وسهولة اكتشافها بناء على تحسين التقنيات الجديدة25,26. في المختبر ، ثبت أن البروتينات الفلورية تعمل كخيار أفضل لتوطين الفيروسات في الخلايا المصابة ، في حين أن luciferases أكثر ملاءمة لدراسات القياس الكمي27،28،29. في الجسم الحي ، يفضل luciferases على البروتينات الفلورية للتصوير الحيواني الكامل ، في حين يفضل البروتينات الفلورية لتحديد الخلايا المصابة أو التصوير خارج الجسم الحي 30،31،32. كان استخدام الفيروسات المؤتلفة التي يعبر عنها المراسلون بمثابة أداة قوية لدراسة الفيروسات في العديد من العائلات ، بما في ذلك ، من بين أمور أخرى ، فيروسات فلافي ، والفيروسات المعوية ، والفيروسات ألفا ، وفيروسات lentivirus ، وفيروسات الساحة ، وفيروسات الأنفلونزا28،33،34،35،36.
للتغلب على الحاجة إلى نهج ثانوية لدراسة SARS-CoV-2 وتوصيف عدوى SARS-CoV-2 في الوقت الفعلي في الجسم الحي ، قمنا بإنشاء مؤتلف مختص بالنسخ المتماثل (r) SARS-CoV-2 الذي يعبر عن البروتينات الحيوية (nanoluciferase ، Nluc) أو الفلورسنت (Venus) باستخدام علم الوراثة العكسي القائم على الكروموسومات الاصطناعية البكتيرية (BAC) الموصوفة سابقا ، والتي يتم الاحتفاظ بها كنسخة واحدة في E. coli من أجل تقليل سمية تسلسل الفيروسات أثناء انتشارها في البكتيريا37,38. ومن الجدير بالذكر أن rSARS-CoV-2/Nluc و rSARS-CoV-2/Venus أظهرا إمراضا شبيها ب rSARS-CoV-2/WT في الجسم الحي. سمح المستوى العالي من تعبير الزهرة من rSARS-CoV-2 / Venus باكتشاف العدوى الفيروسية في رئتي الفئران المعدلة وراثيا K18 hACE2 المصابة باستخدام نظام تصوير في الجسم الحي (IVIS)39. ارتبطت مستويات تعبير كوكب الزهرة بشكل جيد مع العيار الفيروسي المكتشف في الرئتين ، مما يدل على جدوى استخدام تعبير الزهرة كبديل صالح لعدوى SARS-CoV-2. باستخدام rSARS-CoV-2 / Nluc ، تمكنا من تتبع ديناميكيات العدوى الفيروسية في الوقت الفعلي وتقييم عدوى SARS-CoV-2 طوليا في الجسم الحي باستخدام نفس نهج IVIS في الفئران المعدلة وراثيا K18 hACE2.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

تسببت جائحة مرض فيروس كورونا 2019 (COVID-19) في فيروس كورونا 2 المسبب للمتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (SARS-CoV-2). وحتى الآن، كان SARS-CoV-2 مسؤولا عن أكثر من 242 مليون إصابة وأكثر من 4.9 مليون حالة وفاة في جميع أنحاء العالم. على غرار الفيروسات الأخرى ، تتطلب دراسة SARS-CoV-2 استخدام طرق تجريبية للكشف عن وجود الفيروس في الخلايا المصابة و / أو في النماذج الحيوانية. للتغلب على هذا القيد ، قمنا بإنشاء مؤتلف مختص بالنسخ المتماثل (r) SARS-CoV-2 الذي يعبر عن البروتينات الحيوية (nanoluciferase ، Nluc) أو الفلورسنت (Venus). تسمح هذه المراسلات التي تعبر عن rSARS-CoV-2 بتتبع الالتهابات الفيروسية في المختبر وفي الجسم الحي بناء على التعبير عن جينات مراسل Nluc و Venus. تصف الدراسة هنا استخدام rSARS-CoV-2 / Nluc و rSARS-CoV-2 / Venus للكشف عن عدوى SARS-CoV-2 وتتبعها في نموذج الفأر المحول للأنجيوتنسين البشري K18 الموصوف سابقا 2 (hACE2) للعدوى باستخدام أنظمة التصوير في الجسم الحي (IVIS). هذا rSARS-CoV-2 / Nluc و rSARS-CoV-2 / Venus تظهر الإمراض الشبيهة ب rSARS-CoV-2 / WT والتكاثر الفيروسي في الجسم الحي. الأهم من ذلك ، أن تعبير Nluc و Venus يسمح لنا بتتبع الالتهابات الفيروسية مباشرة في الجسم الحي والجسم الحي السابق ، في الفئران المصابة. تمثل هذه rSARS-CoV-2 / Nluc و rSARS-CoV-2 / Venus خيارا ممتازا لدراسة بيولوجيا SARS-CoV-2 في الجسم الحي ، لفهم العدوى الفيروسية ومرض COVID-19 المرتبط بها ، وتحديد العلاجات الوقائية و / أو العلاجية الفعالة لمكافحة عدوى SARS-CoV-2.

عدوى rSARS-CoV-2/Nluc في الفئران المعدلة وراثيا K18 hACE2 (الشكلان 1 و2) ويبين الشكل 1 ألف تمثيلا تخطيطيا ل rSARS-CoV-2/WT (أعلى) و rSARS-CoV-2/Nluc (أسفل) المستخدمة لتقييم العدوى في الجسم الحي. ويبين الشكل 1 باء مخطط التدفق التخطيطي المطبق لتقيي...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

يصف هذا البروتوكول ديناميكيات الالتهابات الفيروسية باستخدام الفئران المؤتلفة (r) SARS-CoV-2 المعبرة عن اللوسيفيراز والتألق وأنظمة التصوير في الجسم الحي (IVIS) في الفئران المعدلة وراثيا K18 hACE2 للتغلب على الحاجة إلى النهج الثانوية المطلوبة لدراسة عدوى SARS-CoV-2 في الجسم الحي.

التصوير الحي والقياس الكمي للعدوى الفيروسية في الفئران المعدلة وراثيا K18 hACE2 باستخدام SARS-CoV-2 المؤتلف الذي يعبر عنه المراسل

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

وصف بروتوكولنا استخدام SARS-CoV-2 المؤتلف الفلورسنت أو المعبر عن الإنارة للكشف عن الفيروسات الحية في الجسم الحي وخارج الجسم الحي وتتبع الفيروسات في نموذج الفأر المعدل وراثيا ACE2 البشري K18 لعدوى SARS-CoV-2. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي تطبيق وجدوى الكشف عن الفيروسات وتتبعها في الجسم الحي والدراسات خارج الجسم الحي ل SARS-CoV-2 في نموذج الفأر المعدل وراثيا ACE2 البشري K18. يمثل استخدام التصوير الحي ل SARS-CoV-2 في نموذج الفأر المعدل وراثيا ACE2 البشري K18 خيارا ممتازا لتقييم العلاجات لعلاج عدوى SARS-CoV-2 في الجسم الحي.يمثل تنفيذ المراسلين SARS-CoV-2 خيارا ممتازا لتقييم الإمراض والتكاثر الفيروسي والكأس في الجسم الحي. بالنسبة للدراسات في الجسم الحي مع لوسيفيراز الذي يعبر عن SARS-CoV-2 ، يوصى بحلاقة الفئران والتصوير الفوري بعد حقن الركيزة لتحسين إشارة التلألؤ الحيوي. ابدأ مراقبة التلألؤ الحيوي عن طريق بدء تشغيل نظام التصوير في الجسم الحي ، أو IVIS ، وإعداد المعلمات ، وانقر فوق وضع الصورة إلى التلألؤ الحيوي ثم افتح المرشح واضبط وقت التعرض على تلقائي.بعد ذلك ، قم بإزالة فأر محلوق ومخدر بالفعل من غرفة العزل واستخدم إبرة قياس 25 لإدارة 100 ميكرولتر من ركيزة luciferase المخففة من 1 إلى 10 في PBS إلى الفأر. ثم ضع الماوس مرة أخرى في غرفة العزل ، ونقل غرفة العزل إلى جهاز IVIS ، المجهز بمكون تسخين لمنع انخفاض حرارة الجسم ، وإغلاق باب تصوير IVIS لتهيئة التصوير عن طريق تحديد Acquisition في البرنامج البرمجي. لتحليل صور التلألؤ الحيوي المكتسبة ، استخدم أداة عائد الاستثمار أو المنطقة ذات الأهمية في البرنامج لتعيين الإشارة الدقيقة وقياس التدفق.بدء تشغيل برنامج التصوير وإعداد المعلمات. انقر فوق وضع الصورة إلى Fluorescence ، واضبط الإثارة على 500 نانومتر ومرشحات الانبعاثات على 530 نانومتر ، واضبط وقت التعرض على Auto. قم بإجراء تنظير النخر واستئصال الرئتين من الفئران.ضع الرئتين المقطوعتين في صفيحة من 6 آبار تحتوي على ملليلترين من 1X PBS وشطفها لإزالة الدم الزائد. تطهير وتنظيف أدوات الجراحة بين العينات باستخدام 70٪ من الإيثانول. بعد تهيئة جهاز IVIS ، ضع الرئتين على ورقة سوداء وافصل الأنسجة عن بعضها البعض.ثم ضع الدرج داخل غرفة العزل داخل خزانة السلامة البيولوجية ثم انقل غرفة العزل إلى IVIS. أغلق باب تصوير IVIS وانقر على Acquisition لبدء تشغيل نظام التصوير. لتحليل التألق ، استخدم أداة عائد الاستثمار وارسم عائد الاستثمار حول كل من الرئتين الفرديتين.قم بقياس كل عائد استثمار يدويا ثم استخدم متوسط قيم كفاءة الإشعاع المعطاة واطرحها من الفئران المصابة الوهمية. بمجرد اكتمال التصوير ، ضع الأنسجة في أنبوب تبريد لتجميد الثلج الجاف لتخزينه عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لمعالجتها لاحقا. باستخدام supernate التي تم الحصول عليها من متجانسات الأنسجة ، وإجراء تخفيف تسلسلي عشرة أضعاف وإصابة الطبقات الأحادية المتقاربة من خلايا Vero E6 مع ملليلتر واحد من كل تخفيف supernatant في ثلاثة أضعاف.دع الفيروس يمتص لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حاضنة رطوبة 5٪ من ثاني أكسيد الكربون. بمجرد الانتهاء من ذلك ، اغسل الخلايا بملليلتر واحد من 1X PBS ثم احتضن الخلايا في ملليلترين من وسائط ما بعد العدوى التي تحتوي على 1٪ أجار في حاضنة ثاني أكسيد الكربون الرطبة بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية لمدة 72 ساعة. بعد الحضانة ، قم بتعطيل الألواح في الفورمالين المخزن مؤقتا بنسبة 10٪ لمدة 24 ساعة عند أربع درجات مئوية ، مما يضمن غمر اللوحة بأكملها.أخرج الألواح من مستوى السلامة البيولوجية الثالث واغسل الخلايا ثلاث مرات بملليلتر واحد من 0.5٪ Triton X-100 لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم بحظر الخلايا المتخلل بملليلتر واحد من 2.5 ألبومين مصل البقر أو BSA و PBS لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية تليها الحضانة في ملليلتر واحد من ميكروغرام واحد لكل ملليلتر من بروتين SARS-CoV النووي عبر الجسم المضاد أحادي النسيلة التفاعلي 1C7C7 المخفف في 2.5 BSA لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. اغسل الخلايا ثلاث مرات بملليلتر واحد من 1X PBS وطور اللويحات باستخدام مجموعات ركيزة ABC و diaminobenzene ، أو DAB ، البيروكسيديز وفقا لتعليمات الشركة المصنعة ، ثم احسب العيار الفيروسي كوحدات لتشكيل البلاك لكل ملليلتر.في الدراسة ، لوحظ أن نانولوسيفيراز المضيئة بيولوجيا ، أو Nluc ، تم اكتشافها بسهولة وأن الفئران المصابة ب rSARS-CoV-2 Nluc ، ولكن ليس تلك المصابة بالنوع البري rSARS-CoV-2 أو الوهمية المصابة. أظهرت التحليلات الكمية شدة Nluc في أيام مختلفة بعد الإصابة. كانت الآفات الإجمالية على سطح الرئة للفئران المصابة ب rSARS-CoV-2 Nluc مماثلة لتلك الموجودة في المجموعة المصابة من النوع البري rSARS-CoV-2.بالإضافة إلى ذلك ، كانت العيار الفيروسي المكتشف والفئران المصابة ب rSARS-CoV-2 Nluc قابلة للمقارنة مع تلك المصابة بالنوع البري rSARS-CoV-2 في جميع الأعضاء في أيام مختلفة بعد الإصابة. في الوقت نفسه ، تم اكتشاف نشاط Nluc فقط في الأعضاء من الفئران المصابة ب rSARS-CoV-2 Nluc. تمت مراقبة مجموعة منفصلة من الفئران الوهمية المصابة والفيروسات لمدة 12 يوما للتغيرات في وزن الجسم والبقاء على قيد الحياة.فقدت الفئران المصابة ب rSARS-CoV-2 Nluc و rSARS-CoV-2 من النوع البري ما يصل إلى 25٪ من وزن الجسم وتستسلم جميعها للعدوى الفيروسية بين سبعة إلى ثمانية أيام بعد الإصابة. بعد عدوى الزهرة rSARS-CoV-2 ، تم اكتشاف تعبير كوكب الزهرة بسهولة في جميع الرئتين من الفئران المصابة ب rSARS-CoV-2 Venus ولكن ليس تلك المصابة ب rSARS-CoV-2 من النوع البري أو المصاب الوهمي. وأظهرت التحليلات الكمية أن شدة كوكب الزهرة تبلغ ذروتها بعد يومين من الإصابة وتنخفض على مدار العدوى ورئتي الفئران المصابة.كشفت صور سطح الرئة أن الآفات الإجمالية للفئران المصابة بفيروس rSARS-CoV-2 Venus كانت مماثلة لتلك التي كانت لدى الفئران المصابة من النوع البري rSARS-CoV-2. كما أدت العدوى بزهرة rSARS-CoV-2 إلى عيارات فيروسية مماثلة لتلك التي لوحظت في الفئران المصابة بالنوع البري rSARS-CoV-2 في جميع الأعضاء. فقدت الفئران المصابة ب rSARS-CoV-2 Venus و rSARS-CoV-2 من النوع البري ما يصل إلى 25٪ من وزن جسمها واستسلمت للعدوى الفيروسية بحلول اليوم التاسع بعد الإصابة دون البقاء على قيد الحياة.أظهرت النتائج من المراسل الذي يعبر عن SARS-CoV-2 أنها بدائل صالحة للعدوى الفيروسية. وبالتالي ، يمكن أن يؤدي ذلك إلى تحديد وتقييم سريع للتدابير المضادة لعلاج عدوى SARS-CoV-2.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

في الجسم الحي التصوير الطفيليات الليشمانية المعدلة وراثيا في مضيف لايف

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

إنتاج وناقلات Titering الغدة المؤتلف المرتبطة الفيروسية

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

فيروس أنفلونزا مراسل لوسيفيراز الفلورسنت للتصوير الحي والقياس الكمي للعدوى الفيروسية

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

تصور سارس-CoV-2 باستخدام الحمض النووي الريبي المناعي-فلورسينس في التهجين في الموقع

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

الكشف عن الأجسام المضادة المحايدة للسارس-CoV-2 باستخدام التصوير الفلوري عالي الإنتاجية للعدوى بالفيروس الزائف

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

سريع، متعدد المراسل المزدوج IgG وIgM سارس-CoV-2 تحييد المقايسة لنظام تحليل التدفق متعددة الخرز القائم

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

الكشف عن الأجسام المضادة للمجال الملزمة للمستقبلات من سارس-CoV-2 باستخدام جهاز تقرير حيوي قائم على HiBiT

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

استراتيجية فعالة لتشخيص اللعاب باستخدام روبوتات السحب العكسي الكمية ل SARS-CoV-2 باستخدام روبوتات السحب مفتوحة المصدر

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

الفيروسات الزائفة كأداة جزيئية لمراقبة الاستجابات المناعية الخلطية ضد SARS-CoV-2 عن طريق مقايسة التحييد

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...