Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Vi vil gerne takke medlemmer på vores institut (Texas Biomedical Research Institute) for deres indsats for at holde vores faciliteter fuldt operationelle og sikre under COVID-19-pandemien. Vi vil også gerne takke vores Institutional Biosafety Committee (IBC) og spell (IACUC) for at gennemgå vores protokoller på en tidseffektiv måde. Vi takker Dr. Thomas Moran ved Icahn School of Medicine på Mount Sinai for at levere SARS-CoV krydsreaktivt 1C7C7 nucleocapsid (N) protein monoklonalt antistof. SARS-CoV-2-forskning i Martinez-Sobridos laboratorium støttes i øjeblikket af NIAID / NIH-tilskud RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 og R43AI165089-01; Forsvarsministeriet (DoD) giver W81XWH2110095 og W81XWH2110103; San Antonio-partnerskabet for præcisionsterapi; Texas Biomedical Research Institute Forum; University of Texas Health Science Center i San Antonio; San Antonio Medical Foundation; og af Center for Forskning i Influenza Patogenese og Transmission (CRIPT), et NIAID-finansieret Center of Excellence for Influenza Research and Response (CEIRR, kontrakt nr. 75N93021C00014).

Protokoller, der involverer K18 hACE2 transgene mus, blev godkendt af Texas Biomedical Research Institute (TBRI) Institutional Biosafety Committee (IBC) og Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Alle forsøg følger anbefalingerne i Det Nationale Forskningsråds vejledning for pleje og brug af forsøgsdyr40. Det passende personlige beskyttelsesudstyr (PPE) er påkrævet, når du arbejder med mus.
1. Brug af K18 hACE2 transgene mus
<ol><l...

<ol>
	<li>V'Kovski, P., Kratzel, A., Steiner, S., Stalder, H., Thiel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronavirus+biology+and+replication:+implications+for+SARS-CoV-2.">Coronavirus biology and replication: implications for SARS-CoV-2.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (3), 155-170 (2021).</li><li>Pal, M., Berhanu, G., Desalegn, C., Kandi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus-2+(SARS-CoV-2):+An+update.">Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2): An update.</a> Cureus. 12 (3), 7423 (2020).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+genetic+recombination,+and+pathogenesis+of+coronaviruses.">Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coronaviruses.</a> Trends in Microbiology. 24 (6), 490-502 (2016).</li><li>Cui, J., Li, F., Shi, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+evolution+of+pathogenic+coronaviruses.">Origin and evolution of pathogenic coronaviruses.</a> Nature Reviews Microbiology. 17 (3), 181-192 (2019).</li><li>Lu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+characterisation+and+epidemiology+of+2019+novel+coronavirus:+implications+for+virus+origins+and+receptor+binding.">Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding.</a> Lancet. 395 (10224), 565-574 (2020).</li><li>Evans, J. P., Liu, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+host+factors+in+SARS-CoV-2+entry.">Role of host factors in SARS-CoV-2 entry.</a> Journal of Biological Chemistry. 297 (1), 100847 (2021).</li><li>Petersen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+SARS-CoV-2+with+SARS-CoV+and+influenza+pandemics.">Comparing SARS-CoV-2 with SARS-CoV and influenza pandemics.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (9), 238-244 (2020).</li><li>Alfaraj, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+predictors+of+mortality+of+Middle+East+Respiratory+Syndrome+Coronavirus+(MERS-CoV)+infection:+A+cohort+study.">Clinical predictors of mortality of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV) infection: A cohort study.</a> Travel Medicine and Infectious Disease. 29, 48-50 (2019).</li><li>Harvey, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+variants,+spike+mutations+and+immune+escape.">SARS-CoV-2 variants, spike mutations and immune escape.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (7), 409-424 (2021).</li><li>Dong, E., Du, H., Gardner, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+interactive+web-based+dashboard+to+track+COVID-19+in+real+time.">An interactive web-based dashboard to track COVID-19 in real time.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (5), 533-534 (2020).</li><li>Bar-On, Y. M., Flamholz, A., Phillips, R., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARS-CoV-2+(COVID-19)+by+the+numbers.">ARS-CoV-2 (COVID-19) by the numbers.</a> Elife. 9, 57309 (2020).</li><li>Roussel, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+fear+versus+data.">SARS-CoV-2: fear versus data.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 55 (5), 105947 (2020).</li><li>Scialo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+One+year+in+the+pandemic.+What+have+we+learned,+the+new+vaccine+era+and+the+threat+of+SARS-CoV-2+variants.">SARS-CoV-2: One year in the pandemic. What have we learned, the new vaccine era and the threat of SARS-CoV-2 variants.</a> Biomedicines. 9 (6), 611 (2021).</li><li>. Coronavirus (COVID-19) update: FDA authorizes additional monoclonal antibody for treatment of COVID-19 Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19">https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19</a> (2021)</li><li>Dougan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bamlanivimab+plus+Etesevimab+in+Mild+or+Moderate+Covid-19.">Bamlanivimab plus Etesevimab in Mild or Moderate Covid-19.</a> New England Journal of Medicine. 385 (15), 1382-1392 (2021).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COVID+antibody+treatments+show+promise+for+preventing+severe+disease.">COVID antibody treatments show promise for preventing severe disease.</a> Nature. 591 (7851), 513-514 (2021).</li><li>Tuccori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+the+preclinical+discovery+and+development+of+bamlanivimab+for+the+treatment+of+novel+coronavirus+infection+(COVID-19):+reasons+for+limited+clinical+use+and+lessons+for+the+future.">An overview of the preclinical discovery and development of bamlanivimab for the treatment of novel coronavirus infection (COVID-19): reasons for limited clinical use and lessons for the future.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. , 1-12 (2021).</li><li>Phan, A. T., Gukasyan, J., Arabian, S., Wang, S., Neeki, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergent+inpatient+administration+of+casirivimab+and+imdevimab+antibody+cocktail+for+the+treatment+of+COVID-19+pneumonia.">Emergent inpatient administration of casirivimab and imdevimab antibody cocktail for the treatment of COVID-19 pneumonia.</a> Cureus. 13 (5), 15280 (2021).</li><li>O'Brien, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+REGEN-COV+antibody+combination+in+early+SARS-CoV-2+infection.">Subcutaneous REGEN-COV antibody combination in early SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Beigel, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remdesivir+for+the+treatment+of+Covid-19+-+Final+report.">Remdesivir for the treatment of Covid-19 - Final report.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1813-1826 (2020).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+convalescent+plasma+therapy+on+time+to+clinical+improvement+in+patients+with+severe+and+life-threatening+COVID-19:+A+randomized+clinical+trial.">Effect of convalescent plasma therapy on time to clinical improvement in patients with severe and life-threatening COVID-19: A randomized clinical trial.</a> Journal of the American Medical Association. 324 (5), 460-470 (2020).</li><li>Polack, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+the+BNT162b2+mRNA+Covid-19+vaccine.">Safety and efficacy of the BNT162b2 mRNA Covid-19 vaccine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (27), 2603-2615 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Pfizer-BioNTech+COVID-19+vaccine+-+United+States,+December+2020.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Pfizer-BioNTech COVID-19 vaccine - United States, December 2020.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 69 (50), 1922-1924 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Janssen+COVID-19+vaccine+-+United+States,+February+2021.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Janssen COVID-19 vaccine - United States, February 2021.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 70 (9), 329-332 (2021).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emission+spectra+of+bioluminescent+reporters+and+interaction+with+mammalian+tissue+determine+the+sensitivity+of+detection+in+vivo.">Emission spectra of bioluminescent reporters and interaction with mammalian tissue determine the sensitivity of detection in vivo.</a> Journal of Biomedical Optics. 10 (4), 41210 (2005).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescent+and+bioluminescent+bireporter+Influenza+A+Virus+to+evaluate+viral+infections.">A novel fluorescent and bioluminescent bireporter Influenza A Virus to evaluate viral infections.</a> Journal of Virology. 93 (10), 00032 (2019).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-competent+fluorescent-expressing+influenza+B+virus.">Replication-competent fluorescent-expressing influenza B virus.</a> Virus Research. 213, 69-81 (2016).</li><li>Welsh, D. K., Noguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bioluminescence+imaging.">Cellular bioluminescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (8), (2012).</li><li>Tran, V., Moser, L. A., Poole, D. S., Mehle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+real-time+in+vivo+imaging+of+an+influenza+reporter+virus+reveals+dynamics+of+replication+and+spread.">Highly sensitive real-time in vivo imaging of an influenza reporter virus reveals dynamics of replication and spread.</a> Journal of Virology. 87 (24), 13321-13329 (2013).</li><li>Schoggins, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+reporter+viruses+reveal+viral+dynamics+in+interferon+receptor-deficient+mice+and+sensitivity+to+interferon+effectors+in+vitro.">Dengue reporter viruses reveal viral dynamics in interferon receptor-deficient mice and sensitivity to interferon effectors in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (36), 14610-14615 (2012).</li><li>Luker, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+and+therapy+in+living+mice.">Noninvasive bioluminescence imaging of herpes simplex virus type 1 infection and therapy in living mice.</a> Journal of Virology. 76 (23), 12149-12161 (2002).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rapid+antiviral+screening+assay+based+on+eGFP+reporter+virus+of+Mayaro+virus.">Development of a rapid antiviral screening assay based on eGFP reporter virus of Mayaro virus.</a> Antiviral Research. 168, 82-90 (2019).</li><li>Kirui, J., Freed, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+validation+of+a+highly+sensitive+bioluminescent+HIV-1+reporter+vector+that+simplifies+measurement+of+virus+release.">Generation and validation of a highly sensitive bioluminescent HIV-1 reporter vector that simplifies measurement of virus release.</a> Retrovirology. 17 (1), 12 (2020).</li><li>Shang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+eGFP+enterovirus+71+for+antiviral+screening.">Development and characterization of a stable eGFP enterovirus 71 for antiviral screening.</a> Antiviral Research. 97 (2), 198-205 (2013).</li><li>Zou, G., Xu, H. Y., Qing, M., Wang, Q. Y., Shi, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+luciferase+dengue+virus+for+high-throughput+screening.">Development and characterization of a stable luciferase dengue virus for high-throughput screening.</a> Antiviral Research. 91 (1), 11-19 (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+SARS-CoV-2+from+a+single+bacterial+artificial+chromosome.">Rescue of SARS-CoV-2 from a single bacterial artificial chromosome.</a> mBio. 11 (5), 02168 (2020).</li><li>Avila-Perez, G., Park, J. G., Nogales, A., Almazan, F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+recombinant+Zika+virus+from+a+bacterial+artificial+chromosome+cDNA+clone.">Rescue of recombinant Zika virus from a bacterial artificial chromosome cDNA clone.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59537 (2019).</li><li>Chiem, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bifluorescent-based+assay+for+the+identification+of+neutralizing+antibodies+against+SARS-CoV-2+variants+of+concern+in+vitro+and+in+vivo.">A bifluorescent-based assay for the identification of neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 variants of concern in vitro and in vivo.</a> Journal of Virology. , (2021).</li><li>Committee for the update of the guide for the care and use of laboratory animals., Institute for laboratory animal research (U.S) &amp; National Academies Press (U.S.). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals.+8th+edn.">Guide for the care and use of laboratory animals. 8th edn.</a> National Research Council (US). , (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+SARS-CoV-2+infection+dynamic+in+vivo+using+reporter-expressing+viruses.">Analysis of SARS-CoV-2 infection dynamic in vivo using reporter-expressing viruses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (41), (2021).</li></ol>

Denne protokol demonstrerer muligheden for at bruge disse rSARS-CoV-2-ekspressive reportergener til at overvåge virusinfektioner in vivo. Begge reporter-udtrykkende rekombinante vira giver et glimrende værktøj til at studere SARS-CoV-2-infektioner in vivo. De beskrevne ex vivo (rSARS-CoV-2/Venus) og in vivo (rSARS-CoV-2/Nluc) billeddannelsessystemer repræsenterer en glimrende mulighed for at forstå dynamikken i SARS-CoV-2-infektion, viral patogenese og identificere inficerede cell...

Alvorligt akut respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) er en indhyllet, positiv sans, enkeltstrenget RNA-virus, der tilhører Betacoronavirus-slægten i Coronaviridae-familien 1. Denne virale familie er opdelt i Alpha-, Beta-, Gamma- og Delta-coronavirus1. Alfa- og betacoronavirus inficerer hovedsageligt pattedyr, mens Gamma- og Deltacoronavirus næsten udelukkende inficerer fugle2. Til dato har syv coronavirus (CoV) krydset artsbarrierer og opstået som humane coronavirus (HCoV): to alfa-CoV'er (HCoV-229E og HCoV-NL63) og fem beta-CoV'er (HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, Mellemøsten respiratorisk syndrom coronavirus [MERS-CoV] og SARS-CoV-2)3,4,5,6. SARS-CoV, MERS-CoV og SARS-CoV-2 er højpatogene og forårsager alvorlig nedre luftvejsinfektion7. Før fremkomsten af SARS-CoV-2 var der to epidemiske udbrud forårsaget af CoV'er: SARS-CoV i Guangdong Providence, Kina, fra 2002-2003 med en dødelighed (CFR) på ca. 9,7%; og MERS-CoV i Mellemøsten fra 2012 til i dag med en CFR på ca. 34%7,8. SARS-CoV-2 har en samlet CFR mellem 3,4%-49%, hvor underliggende forhold bidrager til en højere CFR 8,9. Siden opdagelsen i december 2019 i Wuhan, Kina, har SARS-CoV-2 været ansvarlig for over 242 millioner menneskelige infektioner og mere end 4,9 millioner menneskelige dødsfald på verdensplan 7,10,11,12. Siden slutningen af 2020 har nye SARS-CoV-2-varianter af bekymring (VoC) og varianter af interesse (VoI) påvirket virusegenskaber, herunder transmission og antigenicitet 9,13, og den overordnede retning for COVID-19-pandemien. Til behandling af SARS-CoV-2-infektioner er der i øjeblikket kun et USA (USA) Food and Drug Administration (FDA) terapeutisk antiviral (remdesivir) og et lægemiddel til godkendelse af nødbrug (EUA) (baricitinib, der skal administreres i kombination med remdesivir)14. Der er også 6 godkendte MONOKLONALE ANTISTOFFER AF ERE: REGEN-COV (casirivimab og imdevimab, administreret sammen), sotrovimab, tocilizumab og bamlanivimab og etesevimab administreret sammen 15,16,17,18,19. Der er i øjeblikket kun en FDA-godkendt profylaktisk vaccine, Pfizer-BioNTech, og to andre profylaktiske vacciner (Moderna og Janssen) er blevet EUA godkendt 20,21,22,23,24. Men med den ukontrollerede infektionshastighed og fremkomsten af VoC og VoI udgør SARS-CoV-2 stadig en trussel mod menneskers sundhed. Der er derfor et presserende behov for nye tilgange til at identificere effektive profylaktiske midler og terapier til bekæmpelse af SARS-CoV-2-infektion og den stadig igangværende covid-19-pandemi.
At studere SARS-CoV-2 kræver besværlige teknikker og sekundære tilgange til at identificere tilstedeværelsen af virussen i inficerede celler og / eller validerede dyremodeller for infektion. Brugen af omvendt genetik har gjort det muligt for generering af rekombinante vira at besvare vigtige spørgsmål i biologien af virusinfektioner. For eksempel har omvendte genetikteknikker givet midler til at afdække og forstå mekanismerne for virusinfektion, patogenese og sygdom. Ligeledes har omvendte genetikmetoder banet vejen for at konstruere rekombinante vira, der mangler virale proteiner for at forstå deres bidrag til viral patogenese. Derudover er omvendte genetikteknikker blevet anvendt til at generere rekombinante vira, der udtrykker reportergener til in vitro- og in vivo-applikationer, herunder identifikation af profylaktiske og / eller terapeutiske tilgange til behandling af virusinfektioner. Fluorescerende og bioluminescerende proteiner er de mest almindeligt anvendte reportergener på grund af deres følsomhed, stabilitet og lette detektion baseret på forbedring af nye teknologier25,26. In vitro har fluorescerende proteiner vist sig at tjene som en bedre mulighed for lokalisering af vira i inficerede celler, mens luciferaser er mere bekvemme til kvantificeringsundersøgelser 27,28,29. In vivo foretrækkes luciferaser frem for fluorescerende proteiner til hel dyrebilleddannelse, mens fluorescerende proteiner foretrækkes til identifikation af inficerede celler eller ex vivo-billeddannelse 30,31,32. Brugen af indberettende rekombinante vira har fungeret som et kraftfuldt værktøj til undersøgelse af vira i mange familier, herunder blandt andet flavivirus, enterovirus, alphavirus, lentivirus, arenavirus og influenzavirus 28,33,34,35,36.
For at overvinde behovet for sekundære tilgange til at studere SARS-CoV-2 og karakterisere realtids SARS-CoV-2-infektion in vivo, har vi genereret replikationskompetente rekombinante (r) SARS-CoV-2, der udtrykker bioluminescerende (nanoluciferase, Nluc) eller fluorescerende (Venus) proteiner ved hjælp af vores tidligere beskrevne bakterielle kunstige kromosomer (BAC) -baserede omvendte genetik, som opretholdes som en enkelt kopi i E. coli for at minimere toksiciteten af virussekvenser under dens formering i bakterier 37,38. Navnlig viste rSARS-CoV-2/Nluc og rSARS-CoV-2/Venus rSARS-CoV-2/WT-lignende patogenicitet in vivo. Det høje niveau af Venus-ekspression fra rSARS-CoV-2/Venus gjorde det muligt at detektere virusinfektion i lungerne hos inficerede K18 hACE2 transgene mus ved hjælp af et in vivo-billeddannelsessystem (IVIS)39. Niveauerne af Venus-ekspression korrelerede godt med virale titere påvist i lungerne, hvilket demonstrerede muligheden for at bruge Venus-ekspression som en gyldig surrogat af SARS-CoV-2-infektion. Ved hjælp af rSARS-CoV-2 /Nluc var vi i stand til at spore dynamikken i virusinfektion i realtid og i længderetningen vurdere SARS-CoV-2-infektion in vivo ved hjælp af den samme IVIS-tilgang i K18 hACE2 transgene mus.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

Coronavirus sygdom 2019 (COVID-19) pandemi er forårsaget af alvorligt akut respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Til dato har SARS-CoV-2 været ansvarlig for over 242 millioner infektioner og mere end 4,9 millioner dødsfald på verdensplan. I lighed med andre vira kræver undersøgelse af SARS-CoV-2 anvendelse af eksperimentelle metoder til påvisning af tilstedeværelsen af virus i inficerede celler og / eller i dyremodeller. For at overvinde denne begrænsning genererede vi replikationskompetente rekombinante (r) SARS-CoV-2, der udtrykker bioluminescerende (nanoluciferase, Nluc) eller fluorescerende (Venus) proteiner. Disse reporter-udtrykkende rSARS-CoV-2 tillader sporing af virusinfektioner in vitro og in vivo baseret på ekspressionen af Nluc og Venus reportergener. Her beskriver undersøgelsen brugen af rSARS-CoV-2/Nluc og rSARS-CoV-2/Venus til at detektere og spore SARS-CoV-2-infektion i det tidligere beskrevne K18 humane angiotensin-konverterende enzym 2 (hACE2) transgene musemodel af infektion ved hjælp af in vivo imaging systems (IVIS). Denne rSARS-CoV-2/Nluc og rSARS-CoV-2/Venus viser rSARS-CoV-2/WT-lignende patogenicitet og viral replikation in vivo. Det er vigtigt, at Nluc og Venus udtryk giver os mulighed for direkte at spore virusinfektioner in vivo og ex vivo, i inficerede mus. Disse rSARS-CoV-2/Nluc og rSARS-CoV-2/Venus repræsenterer en glimrende mulighed for at studere biologien af SARS-CoV-2 in vivo, forstå virusinfektion og tilhørende COVID-19 sygdom og identificere effektive profylaktiske og / eller terapeutiske behandlinger til bekæmpelse af SARS-CoV-2-infektion.

rSARS-CoV-2/Nluc-infektion hos K18 hACE2 transgene mus (figur 1 og 2) Figur 1A viser en skematisk repræsentation af rSARS-CoV-2/WT (øverst) og rSARS-CoV-2/Nluc (nederst), der anvendes til at vurdere infektioner in vivo. Figur 1B viser det skematiske rutediagram, der anvendes til at vurdere rSARS-CoV-2/Nluc-infektionsdynamikken hos K18 hACE2-transgene mus. Fire til seks uger gamle K18 h...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Denne protokol beskriver dynamikken i virusinfektioner ved hjælp af luciferase- og fluorescensekspressive rekombinante (r) SARS-CoV-2 og et in vivo-billeddannelsessystem (IVIS) i K18 hACE2 transgene mus for at overvinde behovet for sekundære tilgange, der kræves for at studere SARS-CoV-2-infektioner in vivo.

Live imaging og kvantificering af virusinfektion i K18 hACE2 transgene mus ved hjælp af reporter-udtrykkende rekombinant SARS-CoV-2

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

Vores protokol beskrev brugen af fluorescerende eller selvlysende ekspressiv rekombinant SARS-CoV-2 til in vivo og ex vivo live billeddannelse viral detektion og viral sporing i K18 human ACE2 transgen musemodel af SARS-CoV-2-infektion. Den største fordel ved denne teknik er anvendelsen og gennemførligheden af viral detektion og sporing til in vivo- og ex vivo-undersøgelser af SARS-CoV-2 i K18 human ACE2 transgen musemodel. Anvendelsen af in vivo-billeddannelsen af SARS-CoV-2 i K18 human ACE2 transgen musemodel repræsenterer en glimrende mulighed for at evaluere terapi til behandling af SARS-CoV-2-infektion in vivo.Implementering af journalister SARS-CoV-2 repræsenterer en glimrende mulighed for at vurdere patogenicitet, viral replikation og trofisme in vivo. Til in vivo-undersøgelser med luciferase, der udtrykker SARS-CoV-2, anbefales barbering af musene og hurtig billeddannelse efter substratinjektion for at forbedre bioluminescenssignalet. Start overvågning af bioluminescens ved at starte in vivo-billeddannelsessystemet eller IVIS og konfigurere parametrene, klikke på billedtilstanden til Bioluminescens, og åbn derefter filteret, og indstil eksponeringstiden til Auto.Fjern derefter en allerede barberet og bedøvet mus fra isolationskammeret og brug en 25 gauge nål til retro-orbitalt at administrere 100 mikroliter af luciferasesubstratet fortyndet 1 til 10 i PBS til musen. Placer derefter musen tilbage i isolationskammeret, overfør isolationskammeret til IVIS-maskinen, som er udstyret med en varmekomponent for at forhindre hypotermi, og luk IVIS-billeddøren for at initialisere billeddannelse ved at vælge Anskaf i softwareprogrammet. For at analysere de erhvervede bioluminescensbilleder skal du bruge ROI eller interesseområdeværktøjet i softwaren til at udpege det nøjagtige signal og måle fluxen.Start billedbehandlingssoftwaren, og konfigurer parametrene. Klik på billedtilstanden til Fluorescens, indstil excitation til 500 nanometer og emissionsfiltre til 530 nanometer, og indstil eksponeringstiden for Auto.Anbring udskårne lunger i en 6-brønds plade indeholdende to milliliter 1X PBS og skyl for at fjerne overskydende blod. Desinficer og rengør operationsværktøjer mellem prøverne ved hjælp af 70% ethanol. Efter initialisering af IVIS-maskinen skal du placere lungerne på et sort ark og adskille vævene fra hinanden.Placer derefter bakken inde i isolationskammeret inde i biosikkerhedsskabet, og overfør derefter isolationskammeret til IVIS. Luk IVIS-billeddøren, og klik på Hent for at starte billedbehandlingssystemet. For at analysere fluorescens skal du bruge ROI-værktøjet og tegne ROI'er omkring hver af de enkelte lunger.Mål hvert investeringsafkast manuelt, og brug derefter de gennemsnitlige strålingseffektivitetsværdier, der er givet, og træk fra de mock-inficerede mus. Når billeddannelsen er afsluttet, skal du placere vævene i et kryorør til tørisfrysning for at opbevare ved minus 80 grader Celsius til senere behandling. Ved anvendelse af supernat opnået fra vævshomogenaterne udføres tifold seriel fortynding og inficerer sammenflydende monolag af Vero E6-celler med en milliliter af hver supernatantfortynding i tredoblinger.Lad virussen adsorbere i en time ved 37 grader Celsius i en befugtet 5% kuldioxidinkubator. Når det er gjort, vaskes cellerne med en milliliter 1X PBS og inkuberes derefter cellerne i to milliliter medier efter infektion indeholdende 1% agar i den befugtede 5% kuldioxidinkubator ved 37 grader Celsius i 72 timer. Efter inkubationen inaktiveres pladerne i 10% neutralt bufferet formalin i 24 timer ved fire grader Celsius, hvilket sikrer, at hele pladen er nedsænket.Tag plader ud af biosikkerhedsniveau tre og vask cellerne tre gange med en milliliter 0,5%Triton X-100 i 10 minutter ved stuetemperatur. Bloker derefter de permeabiliserede celler med en milliliter 2,5 bovint serumalbumin eller BSA og PBS i en time ved 37 grader Celsius efterfulgt af inkubation i en milliliter af et mikrogram pr. milliliter SARS-CoV-nucleocapsidprotein krydsreaktivt monoklonalt antistof 1C7C7 fortyndet i 2,5 BSA i en time ved 37 grader Celsius. Vask cellerne tre gange med en milliliter 1X PBS og udvikle plaques ved hjælp af ABC og diaminobenzen eller DAB, peroxidase substrat kits i henhold til producentens anvisninger, og beregn derefter de virale titere som plaque danner enheder pr. Milliliter.I undersøgelsen blev det observeret, at den bioluminescerende nanoluciferase eller Nluc let blev detekteret og mus inficeret med rSARS-CoV-2 Nluc, men ikke dem, der var inficeret med rSARS-CoV-2 vildtype eller mock inficeret. De kvantitative analyser viste Nluc-intensitet på forskellige dage efter infektion. Grove læsioner på lungeoverfladen hos mus inficeret med rSARS-CoV-2 Nluc var sammenlignelige med læsionerne i den vildtypeinficerede gruppe rSARS-CoV-2.Derudover var påviste virustitre og de rSARS-CoV-2 Nluc-inficerede mus sammenlignelige med dem, der var inficeret med rSARS-CoV-2-vildtype i alle organer på forskellige dage efter infektion. Samtidig blev Nluc-aktivitet kun påvist i organerne fra rSARS-CoV-2 Nluc-inficerede mus. En separat gruppe af mock inficerede og virusinficerede mus blev overvåget i 12 dage for ændringer i kropsvægt og overlevelse.Mus inficeret med rSARS-CoV-2 Nluc og rSARS-CoV-2 vildtype tabte op til 25% af deres kropsvægt, og alle bukkede under for virusinfektion mellem syv og otte dage efter infektion. Efter rSARS-CoV-2 Venus-infektion blev Venus-ekspression let påvist i alle lunger fra mus inficeret med rSARS-CoV-2 Venus, men ikke dem, der var inficeret med rSARS-CoV-2 vildtype eller mock inficeret. De kvantitative analyser viste, at Venus-intensiteten topper to dage efter infektion og falder i løbet af infektionsforløbet og lungerne hos inficerede mus.Billeder af lungeoverfladen afslørede grove læsioner af mus inficeret med rSARS-CoV-2 Venus var sammenlignelig med rSARS-CoV-2 vildtypeinficerede mus. Infektion med rSARS-CoV-2 Venus resulterede også i sammenlignelige virale titere til dem, der blev observeret hos mus inficeret med rSARS-CoV-2 vildtype i alle organer. Musene inficeret med rSARS-CoV-2 Venus og rSARS-CoV-2 vildtype tabte op til 25% af deres kropsvægt og bukkede under for virusinfektion på dag ni efter infektion uden overlevelse.Resultaterne fra reporter, der udtrykker SARS-CoV-2, har vist sig at være gyldige surrogater for virusinfektion. Dette kan således føre til hurtig identifikation og evaluering af modforanstaltninger til behandling af SARS-CoV-2-infektion.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

Produktion og Titering af rekombinant adeno-associeret virale vektorer

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

En luciferase-fluorescerende reporter influenza virus til levende billeddannelse og kvantificering af viral infektion

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

Visualisering af SARS-CoV-2 ved hjælp af Immuno RNA-fluorescens In Situ Hybridisering

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

Påvisning af SARS-CoV-2 neutraliserende antistoffer ved hjælp af fluorescerende billeddannelse af pseudovirusinfektion

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

En hurtig, Multiplex Dual Reporter IgG og IgM SARS-CoV-2 neutralisering Assay for en multiplexed perle-baseret Flow Analysis System

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

Påvisning af SARS-CoV-2 receptorbindende domæneantistof ved hjælp af en HiBiT-baseret bioreporter

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

Effektiv SARS-CoV-2 kvantitativ omvendt transkriptase PCR spytdiagnostisk strategi ved hjælp af open source pipetteringsrobotter

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

Pseudotypede vira som et molekylært værktøj til overvågning af humorale immunresponser mod SARS-CoV-2 via neutraliseringsanalyse

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...