Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

We willen de leden van ons instituut (Texas Biomedical Research Institute) bedanken voor hun inspanningen om onze faciliteiten volledig operationeel en veilig te houden tijdens de COVID-19-pandemie. We willen ook onze Institutional Biosafety Committee (IBC) en spell (IACUC) bedanken voor het herzien van onze protocollen op een tijdsefficiënte manier. We bedanken Dr. Thomas Moran van de Icahn School of Medicine op de berg Sinaï voor het verstrekken van het SARS-CoV cross-reactieve 1C7C7 nucleocapsid (N) eiwit monoklonale antilichaam. SARS-CoV-2-onderzoek in het laboratorium van Martinez-Sobrido wordt momenteel ondersteund door de NIAID / NIH-subsidies RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 en R43AI165089-01; het Ministerie van Defensie (DoD) verleent W81XWH2110095 en W81XWH2110103; het San Antonio Partnership for Precision Therapeutic; het Texas Biomedical Research Institute Forum; het Health Science Center van de Universiteit van Texas in San Antonio; de San Antonio Medical Foundation; en door het Center for Research on Influenza Pathogenesis and Transmission (CRIPT), een door NIAID gefinancierd Center of Excellence for Influenza Research and Response (CEIRR, contract # 75N93021C00014).

Protocollen met K18 hACE2 transgene muizen werden goedgekeurd door het Texas Biomedical Research Institute (TBRI) Institutional Biosafety Committee (IBC) en de Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Alle experimenten volgen de aanbevelingen in de Gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren van de Nationale Onderzoeksraad40. De juiste persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM' s) zijn vereist bij het werken met muizen.
1. Gebruik van K18 hACE2...

<ol>
	<li>V'Kovski, P., Kratzel, A., Steiner, S., Stalder, H., Thiel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronavirus+biology+and+replication:+implications+for+SARS-CoV-2.">Coronavirus biology and replication: implications for SARS-CoV-2.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (3), 155-170 (2021).</li><li>Pal, M., Berhanu, G., Desalegn, C., Kandi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus-2+(SARS-CoV-2):+An+update.">Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2): An update.</a> Cureus. 12 (3), 7423 (2020).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+genetic+recombination,+and+pathogenesis+of+coronaviruses.">Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coronaviruses.</a> Trends in Microbiology. 24 (6), 490-502 (2016).</li><li>Cui, J., Li, F., Shi, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+evolution+of+pathogenic+coronaviruses.">Origin and evolution of pathogenic coronaviruses.</a> Nature Reviews Microbiology. 17 (3), 181-192 (2019).</li><li>Lu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+characterisation+and+epidemiology+of+2019+novel+coronavirus:+implications+for+virus+origins+and+receptor+binding.">Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding.</a> Lancet. 395 (10224), 565-574 (2020).</li><li>Evans, J. P., Liu, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+host+factors+in+SARS-CoV-2+entry.">Role of host factors in SARS-CoV-2 entry.</a> Journal of Biological Chemistry. 297 (1), 100847 (2021).</li><li>Petersen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+SARS-CoV-2+with+SARS-CoV+and+influenza+pandemics.">Comparing SARS-CoV-2 with SARS-CoV and influenza pandemics.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (9), 238-244 (2020).</li><li>Alfaraj, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+predictors+of+mortality+of+Middle+East+Respiratory+Syndrome+Coronavirus+(MERS-CoV)+infection:+A+cohort+study.">Clinical predictors of mortality of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV) infection: A cohort study.</a> Travel Medicine and Infectious Disease. 29, 48-50 (2019).</li><li>Harvey, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+variants,+spike+mutations+and+immune+escape.">SARS-CoV-2 variants, spike mutations and immune escape.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (7), 409-424 (2021).</li><li>Dong, E., Du, H., Gardner, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+interactive+web-based+dashboard+to+track+COVID-19+in+real+time.">An interactive web-based dashboard to track COVID-19 in real time.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (5), 533-534 (2020).</li><li>Bar-On, Y. M., Flamholz, A., Phillips, R., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARS-CoV-2+(COVID-19)+by+the+numbers.">ARS-CoV-2 (COVID-19) by the numbers.</a> Elife. 9, 57309 (2020).</li><li>Roussel, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+fear+versus+data.">SARS-CoV-2: fear versus data.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 55 (5), 105947 (2020).</li><li>Scialo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+One+year+in+the+pandemic.+What+have+we+learned,+the+new+vaccine+era+and+the+threat+of+SARS-CoV-2+variants.">SARS-CoV-2: One year in the pandemic. What have we learned, the new vaccine era and the threat of SARS-CoV-2 variants.</a> Biomedicines. 9 (6), 611 (2021).</li><li>. Coronavirus (COVID-19) update: FDA authorizes additional monoclonal antibody for treatment of COVID-19 Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19">https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19</a> (2021)</li><li>Dougan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bamlanivimab+plus+Etesevimab+in+Mild+or+Moderate+Covid-19.">Bamlanivimab plus Etesevimab in Mild or Moderate Covid-19.</a> New England Journal of Medicine. 385 (15), 1382-1392 (2021).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COVID+antibody+treatments+show+promise+for+preventing+severe+disease.">COVID antibody treatments show promise for preventing severe disease.</a> Nature. 591 (7851), 513-514 (2021).</li><li>Tuccori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+the+preclinical+discovery+and+development+of+bamlanivimab+for+the+treatment+of+novel+coronavirus+infection+(COVID-19):+reasons+for+limited+clinical+use+and+lessons+for+the+future.">An overview of the preclinical discovery and development of bamlanivimab for the treatment of novel coronavirus infection (COVID-19): reasons for limited clinical use and lessons for the future.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. , 1-12 (2021).</li><li>Phan, A. T., Gukasyan, J., Arabian, S., Wang, S., Neeki, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergent+inpatient+administration+of+casirivimab+and+imdevimab+antibody+cocktail+for+the+treatment+of+COVID-19+pneumonia.">Emergent inpatient administration of casirivimab and imdevimab antibody cocktail for the treatment of COVID-19 pneumonia.</a> Cureus. 13 (5), 15280 (2021).</li><li>O'Brien, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+REGEN-COV+antibody+combination+in+early+SARS-CoV-2+infection.">Subcutaneous REGEN-COV antibody combination in early SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Beigel, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remdesivir+for+the+treatment+of+Covid-19+-+Final+report.">Remdesivir for the treatment of Covid-19 - Final report.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1813-1826 (2020).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+convalescent+plasma+therapy+on+time+to+clinical+improvement+in+patients+with+severe+and+life-threatening+COVID-19:+A+randomized+clinical+trial.">Effect of convalescent plasma therapy on time to clinical improvement in patients with severe and life-threatening COVID-19: A randomized clinical trial.</a> Journal of the American Medical Association. 324 (5), 460-470 (2020).</li><li>Polack, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+the+BNT162b2+mRNA+Covid-19+vaccine.">Safety and efficacy of the BNT162b2 mRNA Covid-19 vaccine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (27), 2603-2615 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Pfizer-BioNTech+COVID-19+vaccine+-+United+States,+December+2020.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Pfizer-BioNTech COVID-19 vaccine - United States, December 2020.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 69 (50), 1922-1924 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Janssen+COVID-19+vaccine+-+United+States,+February+2021.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Janssen COVID-19 vaccine - United States, February 2021.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 70 (9), 329-332 (2021).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emission+spectra+of+bioluminescent+reporters+and+interaction+with+mammalian+tissue+determine+the+sensitivity+of+detection+in+vivo.">Emission spectra of bioluminescent reporters and interaction with mammalian tissue determine the sensitivity of detection in vivo.</a> Journal of Biomedical Optics. 10 (4), 41210 (2005).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescent+and+bioluminescent+bireporter+Influenza+A+Virus+to+evaluate+viral+infections.">A novel fluorescent and bioluminescent bireporter Influenza A Virus to evaluate viral infections.</a> Journal of Virology. 93 (10), 00032 (2019).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-competent+fluorescent-expressing+influenza+B+virus.">Replication-competent fluorescent-expressing influenza B virus.</a> Virus Research. 213, 69-81 (2016).</li><li>Welsh, D. K., Noguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bioluminescence+imaging.">Cellular bioluminescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (8), (2012).</li><li>Tran, V., Moser, L. A., Poole, D. S., Mehle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+real-time+in+vivo+imaging+of+an+influenza+reporter+virus+reveals+dynamics+of+replication+and+spread.">Highly sensitive real-time in vivo imaging of an influenza reporter virus reveals dynamics of replication and spread.</a> Journal of Virology. 87 (24), 13321-13329 (2013).</li><li>Schoggins, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+reporter+viruses+reveal+viral+dynamics+in+interferon+receptor-deficient+mice+and+sensitivity+to+interferon+effectors+in+vitro.">Dengue reporter viruses reveal viral dynamics in interferon receptor-deficient mice and sensitivity to interferon effectors in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (36), 14610-14615 (2012).</li><li>Luker, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+and+therapy+in+living+mice.">Noninvasive bioluminescence imaging of herpes simplex virus type 1 infection and therapy in living mice.</a> Journal of Virology. 76 (23), 12149-12161 (2002).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rapid+antiviral+screening+assay+based+on+eGFP+reporter+virus+of+Mayaro+virus.">Development of a rapid antiviral screening assay based on eGFP reporter virus of Mayaro virus.</a> Antiviral Research. 168, 82-90 (2019).</li><li>Kirui, J., Freed, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+validation+of+a+highly+sensitive+bioluminescent+HIV-1+reporter+vector+that+simplifies+measurement+of+virus+release.">Generation and validation of a highly sensitive bioluminescent HIV-1 reporter vector that simplifies measurement of virus release.</a> Retrovirology. 17 (1), 12 (2020).</li><li>Shang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+eGFP+enterovirus+71+for+antiviral+screening.">Development and characterization of a stable eGFP enterovirus 71 for antiviral screening.</a> Antiviral Research. 97 (2), 198-205 (2013).</li><li>Zou, G., Xu, H. Y., Qing, M., Wang, Q. Y., Shi, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+luciferase+dengue+virus+for+high-throughput+screening.">Development and characterization of a stable luciferase dengue virus for high-throughput screening.</a> Antiviral Research. 91 (1), 11-19 (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+SARS-CoV-2+from+a+single+bacterial+artificial+chromosome.">Rescue of SARS-CoV-2 from a single bacterial artificial chromosome.</a> mBio. 11 (5), 02168 (2020).</li><li>Avila-Perez, G., Park, J. G., Nogales, A., Almazan, F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+recombinant+Zika+virus+from+a+bacterial+artificial+chromosome+cDNA+clone.">Rescue of recombinant Zika virus from a bacterial artificial chromosome cDNA clone.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59537 (2019).</li><li>Chiem, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bifluorescent-based+assay+for+the+identification+of+neutralizing+antibodies+against+SARS-CoV-2+variants+of+concern+in+vitro+and+in+vivo.">A bifluorescent-based assay for the identification of neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 variants of concern in vitro and in vivo.</a> Journal of Virology. , (2021).</li><li>Committee for the update of the guide for the care and use of laboratory animals., Institute for laboratory animal research (U.S) &amp; National Academies Press (U.S.). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals.+8th+edn.">Guide for the care and use of laboratory animals. 8th edn.</a> National Research Council (US). , (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+SARS-CoV-2+infection+dynamic+in+vivo+using+reporter-expressing+viruses.">Analysis of SARS-CoV-2 infection dynamic in vivo using reporter-expressing viruses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (41), (2021).</li></ol>

Dit protocol toont de haalbaarheid aan van het gebruik van deze rSARS-CoV-2-expressie van reportergenen om virale infecties in vivo te volgen. Beide reporter-expresserende recombinante virussen bieden een uitstekend hulpmiddel voor het bestuderen van SARS-CoV-2-infecties in vivo. De beschreven ex vivo (rSARS-CoV-2/Venus) en in vivo (rSARS-CoV-2/Nluc) beeldvormingssystemen vormen een uitstekende optie om de dynamiek van SARS-CoV-2-infectie, virale pathogenese te begrijpen en geïnfectee...

Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is een omhuld, positief,enkelstrengs RNA-virus dat behoort tot de Betacoronavirus-afstamming in de Coronaviridae-familie 1. Deze virale familie is onderverdeeld in Alpha-, Beta-, Gamma- en Delta-coronavirus1. Alfa- en Betacoronavirussen infecteren voornamelijk zoogdieren, terwijl Gamma- en Deltacoronavirus bijna uitsluitend vogels infecteren2. Tot op heden hebben zeven coronavirussen (CoV) soortenbarrières overschreden en zijn ze naar voren gekomen als menselijke coronavirussen (HCoV): twee alfa-CoV's (HCoV-229E en HCoV-NL63) en vijf bèta-CoV's (HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, Midden-Oosten respiratoir syndroom coronavirus [MERS-CoV] en SARS-CoV-2)3,4,5,6. SARS-CoV, MERS-CoV en SARS-CoV-2 zijn hoogpathogeen en veroorzaken ernstige infectie van de onderste luchtwegen7. Voorafgaand aan de opkomst van SARS-CoV-2 waren er twee epidemische uitbraken veroorzaakt door CoV's: SARS-CoV in Guangdong Providence, China, van 2002-2003, met een sterftecijfer (CFR) van ongeveer 9,7%; en MERS-CoV in het Midden-Oosten van 2012 tot heden, met een CFR van ongeveer 34%7,8. SARS-CoV-2 heeft een totale CFR tussen 3,4%-49%, waarbij onderliggende aandoeningen bijdragen aan een hogere CFR 8,9. Sinds de ontdekking in december 2019 is SARS-CoV-2 in Wuhan, China, verantwoordelijk voor meer dan 242 miljoen menselijke infecties en meer dan 4,9 miljoen menselijke sterfgevallen wereldwijd 7,10,11,12. Met name sinds eind 2020 hebben nieuwe SARS-CoV-2-varianten van bezorgdheid (VoC) en varianten van belang (VoI) invloed gehad op viruskenmerken, waaronder transmissie en antigeniciteit 9,13, en de algemene richting van de COVID-19-pandemie. Voor de behandeling van SARS-CoV-2-infecties is er momenteel slechts één Verenigde Staten (VS) Food and Drug Administration (FDA) therapeutisch antiviraal (remdesivir) en één Emergency Use Authorization (EUA) geneesmiddel (baricitinib, toe te dienen in combinatie met remdesivir)14. Er zijn ook 6 goedgekeurde EUA monoklonale antilichamen: REGEN-COV (casirivimab en imdevimab, samen toegediend), sotrovimab, tocilizumab en bamlanivimab en etesevimab samen toegediend 15,16,17,18,19. Er is momenteel slechts één door de FDA goedgekeurd profylactisch vaccin, Pfizer-BioNTech, en twee andere profylactische vaccins (Moderna en Janssen) zijn EUA goedgekeurd 20,21,22,23,24. Met de ongecontroleerde infectiegraad en de opkomst van VoC en VoI vormt SARS-CoV-2 echter nog steeds een bedreiging voor de menselijke gezondheid. Daarom zijn nieuwe benaderingen dringend nodig om efficiënte profylactica en therapeutica te identificeren om SARS-CoV-2-infectie en de nog steeds lopende COVID-19-pandemie onder controle te houden.
Het bestuderen van SARS-CoV-2 vereist moeizame technieken en secundaire benaderingen om de aanwezigheid van het virus in geïnfecteerde cellen en / of gevalideerde diermodellen van infectie te identificeren. Het gebruik van omgekeerde genetica heeft het mogelijk gemaakt om recombinante virussen te genereren om belangrijke vragen in de biologie van virale infecties te beantwoorden. Omgekeerde geneticatechnieken hebben bijvoorbeeld middelen geboden om de mechanismen van virale infectie, pathogenese en ziekte te ontdekken en te begrijpen. Evenzo hebben omgekeerde geneticabenaderingen de weg vrijgemaakt om recombinante virussen te manipuleren die geen virale eiwitten hebben om hun bijdrage aan virale pathogenese te begrijpen. Daarnaast zijn omgekeerde geneticatechnieken gebruikt om recombinante virussen te genereren die reportergenen tot expressie brengen voor in vitro en in vivo toepassingen, waaronder het identificeren van profylactische en / of therapeutische benaderingen voor de behandeling van virale infecties. Fluorescerende en bioluminescente eiwitten zijn de meest gebruikte reportergenen vanwege hun gevoeligheid, stabiliteit en eenvoudige detectie op basis van de verbetering van nieuwe technologieën25,26. In vitro is aangetoond dat fluorescerende eiwitten dienen als een betere optie voor de lokalisatie van virussen in geïnfecteerde cellen, terwijl luciferasen handiger zijn voor kwantificeringsstudies 27,28,29. In vivo hebben luciferasen de voorkeur boven fluorescerende eiwitten voor beeldvorming van hele dieren, terwijl fluorescerende eiwitten de voorkeur hebben voor de identificatie van geïnfecteerde cellen of ex vivo beeldvorming 30,31,32. Het gebruik van reporter-expresserende recombinante virussen heeft gediend als een krachtig hulpmiddel voor de studie van virussen in veel families, waaronder flavivirussen, enterovirussen, alfavirussen, lentivirussen, arenavirussen en influenzavirussen 28,33,34,35,36.
Om de behoefte aan secundaire benaderingen voor het bestuderen van SARS-CoV-2 en het karakteriseren van real-time SARS-CoV-2-infectie in vivo te overwinnen, hebben we replicatie-competente recombinant (r) SARS-CoV-2 gegenereerd die bioluminescente (nanoluciferase, Nluc) of fluorescerende (Venus) eiwitten tot expressie brengt met behulp van onze eerder beschreven bacteriële kunstmatige chromosomen (BAC) -gebaseerde omgekeerde genetica, die als een enkele kopie in E. coli worden onderhouden om de toxiciteit van virussequenties tijdens de verspreiding ervan in bacteriën tot een minimum te beperken 37,38. Met name rSARS-CoV-2/Nluc en rSARS-CoV-2/Venus vertoonden rSARS-CoV-2/WT-achtige pathogeniciteit in vivo. Het hoge niveau van Venus-expressie van rSARS-CoV-2 / Venus maakte het mogelijk om virale infectie in de longen van geïnfecteerde K18 hACE2 transgene muizen te detecteren met behulp van een in vivo beeldvormingssysteem (IVIS)39. De niveaus van Venus-expressie correleerden goed met virale titers gedetecteerd in de longen, wat de haalbaarheid aantoont van het gebruik van Venus-expressie als een geldig surrogaat van SARS-CoV-2-infectie. Met behulp van rSARS-CoV-2/Nluc konden we de dynamiek van virale infecties in realtime volgen en SARS-CoV-2-infectie in vivo longitudinaal beoordelen met dezelfde IVIS-benadering in K18 hACE2 transgene muizen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

De pandemie van de coronavirusziekte 2019 (COVID-19) is veroorzaakt door ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Tot op heden is SARS-CoV-2 verantwoordelijk voor meer dan 242 miljoen infecties en meer dan 4,9 miljoen doden wereldwijd. Net als andere virussen vereist het bestuderen van SARS-CoV-2 het gebruik van experimentele methoden om de aanwezigheid van virus in geïnfecteerde cellen en / of in diermodellen te detecteren. Om deze beperking te overwinnen, hebben we replicatie-competente recombinante (r) SARS-CoV-2 gegenereerd die bioluminescente (nanoluciferase, Nluc) of fluorescerende (Venus) eiwitten tot expressie brengt. Deze reporter-expressing rSARS-CoV-2 maken het mogelijk om virale infecties in vitro en in vivo te volgen op basis van de expressie van Nluc- en Venus-reportergenen. Hier beschrijft de studie het gebruik van rSARS-CoV-2/Nluc en rSARS-CoV-2/Venus om SARS-CoV-2-infectie te detecteren en te volgen in het eerder beschreven K18 humane angiotensine-converterende enzym 2 (hACE2) transgene muismodel van infectie met behulp van in vivo beeldvormingssystemen (IVIS). Deze rSARS-CoV-2/Nluc en rSARS-CoV-2/Venus tonen rSARS-CoV-2/WT-achtige pathogeniciteit en virale replicatie in vivo. Belangrijk is dat de expressie van Nluc en Venus ons in staat stelt om virale infecties in vivo en ex vivo, bij geïnfecteerde muizen, direct te volgen. Deze rSARS-CoV-2/Nluc en rSARS-CoV-2/Venus vormen een uitstekende optie om de biologie van SARS-CoV-2 in vivo te bestuderen, virale infectie en bijbehorende COVID-19-ziekte te begrijpen en effectieve profylactische en/of therapeutische behandelingen te identificeren om SARS-CoV-2-infectie te bestrijden.

rSARS-CoV-2/Nluc infectie bij K18 hACE2 transgene muizen (figuren 1 en 2) Figuur 1A toont een schematische weergave van de rSARS-CoV-2/WT (boven) en rSARS-CoV-2/Nluc (onder) die worden gebruikt om infecties in vivo te beoordelen. Figuur 1B toont het schematische stroomschema dat wordt toegepast om de rSARS-CoV-2/Nluc-infectiedynamiek in K18 hACE2 transgene muizen te beoordelen. Vier tot ...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Dit protocol beschrijft de dynamiek van virale infecties met behulp van luciferase- en fluorescentie-expresserende recombinant (r)SARS-CoV-2 en een in vivo beeldvormingssysteem (IVIS) in K18 hACE2 transgene muizen om de behoefte aan secundaire benaderingen te overwinnen die nodig zijn om SARS-CoV-2-infecties in vivo te bestuderen.

Live beeldvorming en kwantificering van virale infectie bij K18 hACE2 transgene muizen met reporter-expressing recombinant SARS-CoV-2

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

Ons protocol beschreef het gebruik van fluorescerende of luminescerend tot expressie brengende recombinant SARS-CoV-2 voor in vivo en ex vivo live imaging virale detectie en virale tracking in het K18 humane ACE2 transgene muismodel van SARS-CoV-2-infectie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is de toepassing en haalbaarheid van virale detectie en tracking voor in vivo en ex vivo studies van SARS-CoV-2 in het K18 humane ACE2 transgene muismodel. Het gebruik van de in vivo beeldvorming van SARS-CoV-2 in het K18 humane ACE2 transgene muismodel is een uitstekende optie om therapieën voor de behandeling van SARS-CoV-2-infectie in vivo te evalueren.Implementatie van verslaggevers SARS-CoV-2 is een uitstekende optie om pathogeniciteit, virale replicatie en trofisme in vivo te beoordelen. Voor in vivo studies met luciferase dat SARS-CoV-2 tot expressie brengt, wordt het scheren van de muizen en snelle beeldvorming na substraatinjectie aanbevolen om het bioluminescentiesignaal te verbeteren. Begin met bioluminescentiemonitoring door het in vivo beeldvormingssysteem of IVIS te starten en de parameters in te stellen, klik op de beeldmodus op Bioluminescentie, open vervolgens het filter en stel de belichtingstijd in op Auto.Verwijder vervolgens een reeds geschoren en verdoofde muis uit de isolatiekamer en gebruik een naald van 25 gauge om 100 microliter van het luciferasesubstraat verdund 1 tot 10 in PBS retro-orbitaal toe te dienen aan de muis. Plaats vervolgens de muis terug in de isolatiekamer, breng de isolatiekamer over naar de IVIS-machine, die is uitgerust met een verwarmingscomponent om onderkoeling te voorkomen, en sluit de IVIS-imagerdeur om beeldvorming te initialiseren door Acquire in het softwareprogramma te selecteren. Om de verkregen bioluminescentiebeelden te analyseren, gebruikt u de ROI- of regio van belang-tool in de software om het precieze signaal aan te wijzen en de flux te meten.Start de beeldbewerkingssoftware en stel de parameters in. Klik op de afbeeldingsmodus op Fluorescentie, stel excitatie in op 500 nanometer en emissiefilters op 530 nanometer en stel de belichtingstijd in op Auto. Voer necroscopie uit en verwijder longen van muizen.Plaats de uitgesneden longen in een 6-well plaat met twee milliliter 1X PBS en spoel af om overtollig bloed te verwijderen. Desinfecteer en reinig operatiegereedschappen tussen de monsters met 70% ethanol. Na het initialiseren van de IVIS-machine, plaatst u de longen op een zwart vel en scheidt u de weefsels van elkaar.Plaats vervolgens de lade in de isolatiekamer in de bioveiligheidskast en breng vervolgens de isolatiekamer over naar de IVIS. Sluit de IVIS imager deur en klik op Acquire om het imaging systeem te starten. Om fluorescentie te analyseren, gebruikt u de ROI-tool en tekent u ROI's rond elk van de individuele longen.Meet elke ROI handmatig en gebruik vervolgens de gemiddelde stralingsefficiëntiewaarden die zijn opgegeven en trek af van de nep-geïnfecteerde muizen. Zodra de beeldvorming is voltooid, plaatst u de weefsels in een cryobuis voor droogijsbevriezing om op te slaan bij min 80 graden Celsius voor latere verwerking. Gebruik maken van het superaat verkregen uit de weefselhomogenaten, voer tienvoudige seriële verdunning uit en infecteer confluente monolagen van Vero E6-cellen met één milliliter van elke supernatantverdunning in drievoud.Laat het virus een uur lang adsorberen bij 37 graden Celsius in een bevochtigde 5% kooldioxide-incubator. Als u klaar bent, wast u de cellen met één milliliter 1X PBS en incubeert u de cellen vervolgens in twee milliliter post-infectiemedia met 1% agar in de bevochtigde 5% koolstofdioxide-incubator bij 37 graden Celsius gedurende 72 uur. Na de incubatie inactiveer je de platen in 10% neutraal gebufferd formaline gedurende 24 uur bij vier graden Celsius, zodat de hele plaat onder water staat.Haal platen uit bioveiligheidsniveau drie en was de cellen drie keer met één milliliter van 0,5% Triton X-100 gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Blokkeer vervolgens de permeabiliseerde cellen met één milliliter 2,5 runderserumalbumine of BSA en PBS gedurende één uur bij 37 graden Celsius, gevolgd door incubatie in één milliliter van één microgram per milliliter van het SARS-CoV-nucleocapside-eiwit cross-reactief monoklonaal antilichaam 1C7C7 verdund in 2,5 BSA gedurende één uur bij 37 graden Celsius. Was de cellen drie keer met één milliliter 1X PBS en ontwikkel de plaques met behulp van de ABC- en diaminobenzeen, of DAB, peroxidasesubstraatkits volgens de instructies van de fabrikant en bereken vervolgens de virale titers als plaquevormende eenheden per milliliter.In de studie werd waargenomen dat de bioluminescente nanoluciferase, of Nluc, gemakkelijk werd gedetecteerd en muizen geïnfecteerd met de rSARS-CoV-2 Nluc, maar niet die geïnfecteerd met rSARS-CoV-2 wild-type of mock geïnfecteerd. De kwantitatieve analyses toonden de nluc-intensiteit op verschillende dagen na de infectie. Grove laesies op het longoppervlak van muizen geïnfecteerd met rSARS-CoV-2 Nluc waren vergelijkbaar met die in de rSARS-CoV-2 wild-type geïnfecteerde groep.Bovendien werden virale titers gedetecteerd en de rSARS-CoV-2 Nluc geïnfecteerde muizen waren vergelijkbaar met die geïnfecteerd met rSARS-CoV-2 wild-type in alle organen op verschillende dagen na infectie. Tegelijkertijd werd nluc-activiteit alleen gedetecteerd in de organen van rSARS-CoV-2 Nluc-geïnfecteerde muizen. Een aparte groep nep-geïnfecteerde en met virus geïnfecteerde muizen werd gedurende 12 dagen gecontroleerd op veranderingen in lichaamsgewicht en overleving.Muizen geïnfecteerd met rSARS-CoV-2 Nluc en rSARS-CoV-2 wild-type verloren tot 25% van hun lichaamsgewicht en bezwijken allemaal aan virale infectie tussen zeven en acht dagen na infectie. Na rSARS-CoV-2 Venus-infectie werd Venus-expressie gemakkelijk gedetecteerd in alle longen van muizen die geïnfecteerd waren met rSARS-CoV-2 Venus, maar niet die geïnfecteerd met rSARS-CoV-2 wild-type of mock geïnfecteerd. De kwantitatieve analyses toonden aan dat de Venus-intensiteit piekt op twee dagen na de infectie en afneemt in de loop van de infectie en de longen van geïnfecteerde muizen.Beelden van het longoppervlak onthulden grove laesies van muizen geïnfecteerd met rSARS-CoV-2 Venus was vergelijkbaar met die van rSARS-CoV-2 wild-type geïnfecteerde muizen. Ook resulteerde infectie met rSARS-CoV-2 Venus in vergelijkbare virale titers als die waargenomen bij muizen die geïnfecteerd waren met rSARS-CoV-2 wild-type in alle organen. De muizen geïnfecteerd met rSARS-CoV-2 Venus en rSARS-CoV-2 wild-type verloren tot 25% van hun lichaamsgewicht en bezwijken aan virale infectie op dag negen na infectie zonder overleving.De resultaten van verslaggevers die SARS-CoV-2 uitdrukken, hebben aangetoond dat ze geldige surrogaten van virale infectie zijn. Dit zou dus kunnen leiden tot een snelle identificatie en evaluatie van tegenmaatregelen voor de behandeling van SARS-CoV-2-infectie.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo imaging van transgene Leishmania parasieten in een Live Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

Productie en Titering van recombinant adeno-geassocieerde virale vectoren

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

Een Luciferase-fluorescerende reporter influenza virus voor Live beeldvorming en kwantificering van virale infectie

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

Visualisatie van SARS-CoV-2 met behulp van Immuno RNA-Fluorescentie In Situ Hybridisatie

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

Detectie van SARS-CoV-2 neutraliserende antilichamen met behulp van high-throughput fluorescerende beeldvorming van pseudovirusinfectie

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

Een Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG en IgM SARS-CoV-2 Neutralisatie assay voor een Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

Detectie van SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody met behulp van een HiBiT-gebaseerde Bioreporter

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

Efficiënte SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Speeksel diagnostische strategie met behulp van Open-Source Pipetteerrobots

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

Gepseudotypeerde virussen als moleculair hulpmiddel om humorale immuunresponsen tegen SARS-CoV-2 te volgen via neutralisatietest

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...