Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Nous tenons à remercier les membres de notre institut (Texas Biomedical Research Institute) pour leurs efforts visant à maintenir nos installations pleinement opérationnelles et sûres pendant la pandémie de COVID-19. Nous tenons également à remercier notre Comité institutionnel de biosécurité (CIB) et notre orthographe (IACUC) d’avoir examiné nos protocoles de manière rapide. Nous remercions le Dr Thomas Moran de l’École de médecine Icahn du mont Sinaï d’avoir fourni l’anticorps monoclonal de la protéine nucléocapside (N) 1C7C7 réactif croisé du SRAS-CoV. La recherche sur le SARS-CoV-2 dans le laboratoire de Martinez-Sobrido est actuellement soutenue par les subventions NIAID/NIH RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 et R43AI165089-01; le Ministère de la Défense (DoD) accorde W81XWH2110095 et W81XWH2110103; le San Antonio Partnership for Precision Therapeutic; le Texas Biomedical Research Institute Forum; le Centre des sciences de la santé de l’Université du Texas à San Antonio; la Fondation médicale de San Antonio; et par le Center for Research on Influenza Pathogenesis and Transmission (CRIPT), un centre d’excellence pour la recherche et la réponse à la grippe financé par le NIAID (CEIRR, contrat n° 75N93021C00014).

Les protocoles impliquant des souris transgéniques K18 hACE2 ont été approuvés par le Comité institutionnel de biosécurité (IBC) du Texas Biomedical Research Institute (TBRI) et le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (IACUC). Toutes les expériences suivent les recommandations du Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire du Conseil national de recherches duCanada 40. L’équipement de protection individuelle (EPI) approprié est requis lors...

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	<li>V'Kovski, P., Kratzel, A., Steiner, S., Stalder, H., Thiel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronavirus+biology+and+replication:+implications+for+SARS-CoV-2.">Coronavirus biology and replication: implications for SARS-CoV-2.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (3), 155-170 (2021).</li><li>Pal, M., Berhanu, G., Desalegn, C., Kandi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus-2+(SARS-CoV-2):+An+update.">Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2): An update.</a> Cureus. 12 (3), 7423 (2020).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+genetic+recombination,+and+pathogenesis+of+coronaviruses.">Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coronaviruses.</a> Trends in Microbiology. 24 (6), 490-502 (2016).</li><li>Cui, J., Li, F., Shi, Z. 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Ce protocole démontre la faisabilité de l’utilisation de ces gènes rapporteurs exprimant le rSARS-CoV-2 pour surveiller les infections virales in vivo. Les deux virus recombinants exprimant le rapporteur constituent un excellent outil pour étudier les infections par le SRAS-CoV-2 in vivo. Les systèmes d’imagerie ex vivo (rSARS-CoV-2/Venus) et in vivo (rSARS-CoV-2/Nluc) décrits représentent une excellente option pour comprendre la dynamique de l’infection par le SRAS-CoV-2,...

Le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SARS-CoV-2) est un virus à ARN simple brin enveloppé, à sens positif, qui appartient à la lignée des Betacoronavirus de la famille des Coronaviridae 1. Cette famille virale est divisée en Alpha-, Beta-, Gamma-, et Delta-coronavirus1. Les alpha- et betacoronavirus infectent principalement les mammifères, tandis que les Gamma- et Deltacoronavirus infectent presque exclusivement les oiseaux2. À ce jour, sept coronavirus (CoV) ont franchi les barrières des espèces et sont apparus comme des coronavirus humains (HCoV) : deux alpha-CoV (HCoV-229E et HCoV-NL63) et cinq bêta-CoV (HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, coronavirus du syndrome respiratoire du Moyen-Orient [MERS-CoV] et SARS-CoV-2)3,4,5,6. Le SRAS-CoV, le MERS-CoV et le SARS-CoV-2 sont hautement pathogènes et causent une infection grave des voies respiratoires inférieures7. Avant l’émergence du SRAS-CoV-2, il y avait deux épidémies causées par des CoV : le SARS-CoV à Guangdong Providence, en Chine, de 2002 à 2003, avec un taux de létalité d’environ 9,7 %; et merS-CoV au Moyen-Orient de 2012 à aujourd’hui, avec un CFR d’environ 34%7,8. Le SARS-CoV-2 a un CFR global compris entre 3,4% et 49%, les conditions sous-jacentes contribuant à un CFR plus élevéde 8,9. Depuis sa découverte en décembre 2019, à Wuhan, en Chine, le SARS-CoV-2 a été responsable de plus de 242 millions d’infections humaines et de plus de 4,9 millions de décès humains dans le monde 7,10,11,12. Notamment, depuis la fin de 2020, les nouvelles variantes préoccupantes (VoC) et les variantes d’intérêt (VoI) du SRAS-CoV-2 ont eu une incidence sur les caractéristiques du virus, y compris la transmission et l’antigénicité 9,13, et l’orientation générale de la pandémie de COVID-19. Pour le traitement des infections à SARS-CoV-2, il n’existe actuellement qu’un seul États-Unis (États-Unis). L’antiviral thérapeutique (remdésivir) de la Food and Drug Administration (FDA) et un médicament d’autorisation d’utilisation d’urgence (EUA) (baricitinib, à administrer en association avec le remdésivir)14. Il existe également 6 anticorps monoclonaux EUA approuvés: REGEN-COV (casirivimab et imdevimab, administrés ensemble), sotrovimab, tocilizumab et bamlanivimab et étesevimab administrés ensemble 15,16,17,18,19. Il n’existe actuellement qu’un seul vaccin prophylactique approuvé par la FDA, Pfizer-BioNTech, et deux autres vaccins prophylactiques (Moderna et Janssen) ont été approuvéspar l’EUA 20,21,22,23,24. Cependant, avec le taux d’infection incontrôlé et l’émergence de la VoC et de la VoI, le SARS-CoV-2 constitue toujours une menace pour la santé humaine. Par conséquent, de nouvelles approches sont nécessaires de toute urgence pour identifier des prophylactiques et des traitements efficaces pour contrôler l’infection par le SRAS-CoV-2 et la pandémie de COVID-19 toujours en cours.
L’étude du SARS-CoV-2 nécessite des techniques laborieuses et des approches secondaires pour identifier la présence du virus dans les cellules infectées et/ou des modèles animaux d’infection validés. L’utilisation de la génétique inverse a permis la génération de virus recombinants pour répondre à des questions importantes dans la biologie des infections virales. Par exemple, les techniques de génétique inverse ont fourni des moyens de découvrir et de comprendre les mécanismes de l’infection virale, de la pathogenèse et de la maladie. De même, les approches de génétique inverse ont ouvert la voie à la conception de virus recombinants dépourvus de protéines virales pour comprendre leur contribution à la pathogenèse virale. En outre, des techniques de génétique inverse ont été utilisées pour générer des virus recombinants exprimant des gènes rapporteurs pour des applications in vitro et in vivo, y compris l’identification d’approches prophylactiques et / ou thérapeutiques pour le traitement des infections virales. Les protéines fluorescentes et bioluminescentes sont les gènes rapporteurs les plus couramment utilisés en raison de leur sensibilité, de leur stabilité et de leur facilité de détection basée sur l’amélioration des nouvelles technologies25,26. In vitro, il a été démontré que les protéines fluorescentes constituent une meilleure option pour la localisation des virus dans les cellules infectées, tandis que les luciférases sont plus pratiques pour les études de quantification 27,28,29. In vivo, les luciférases sont préférées aux protéines fluorescentes pour l’imagerie d’animaux entiers, tandis que les protéines fluorescentes sont préférées pour l’identification des cellules infectées ou l’imagerie ex vivo 30,31,32. L’utilisation de virus recombinants exprimant le rapporteur a servi d’outil puissant pour l’étude des virus dans de nombreuses familles, y compris, entre autres, les flavivirus, les entérovirus, les alphavirus, les lentivirus, les arénavirus et les virus de la grippe 28,33,34,35,36.
Pour surmonter le besoin d’approches secondaires pour étudier le SARS-CoV-2 et caractériser l’infection par le SARS-CoV-2 en temps réel in vivo, nous avons généré des protéines recombinantes (r)SARS-CoV-2 capables de réplication qui expriment des protéines bioluminescentes (nanoluciférase, Nluc) ou fluorescentes (Vénus) en utilisant notre génétique inverse basée sur les chromosomes artificiels bactériens (BAC) précédemment décrite, qui sont maintenues en une seule copie chez E. coli afin de minimiser la toxicité des séquences virales lors de sa propagation chez les bactéries37,38. Notamment, rSARS-CoV-2/Nluc et rSARS-CoV-2/Venus ont montré une pathogénicité de type rSARS-CoV-2/WT in vivo. Le niveau élevé d’expression de Vénus à partir de rSARS-CoV-2/Vénus a permis de détecter une infection virale dans les poumons de souris transgéniques K18 hACE2 infectées à l’aide d’un système d’imagerie in vivo (IVIS)39. Les niveaux d’expression de Vénus étaient bien corrélés avec les titres viraux détectés dans les poumons, démontrant la faisabilité d’utiliser l’expression de Vénus comme substitut valide de l’infection par le SRAS-CoV-2. En utilisant rSARS-CoV-2/Nluc, nous avons pu suivre la dynamique de l’infection virale en temps réel et évaluer longitudinalement l’infection par le SARS-CoV-2 in vivo en utilisant la même approche IVIS chez des souris transgéniques K18 hACE2.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

La pandémie de maladie à coronavirus 2019 (COVID-19) a été causée par le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SARS-CoV-2). À ce jour, le SRAS-CoV-2 a été responsable de plus de 242 millions d’infections et de plus de 4,9 millions de décès dans le monde. Comme d’autres virus, l’étude du SRAS-CoV-2 nécessite l’utilisation de méthodes expérimentales pour détecter la présence de virus dans les cellules infectées et/ou dans des modèles animaux. Pour surmonter cette limitation, nous avons généré des protéines recombinantes (r)SARS-CoV-2 capables de réplication qui expriment des protéines bioluminescentes (nanoluciférase, Nluc) ou fluorescentes (Vénus). Ces rSARS-CoV-2 exprimant le rapporteur permettent de suivre les infections virales in vitro et in vivo sur la base de l’expression des gènes rapporteurs Nluc et Venus. Ici, l’étude décrit l’utilisation de rSARS-CoV-2 / Nluc et rSARS-CoV-2 / Venus pour détecter et suivre l’infection par le SRAS-CoV-2 dans le modèle murin transgénique de l’enzyme de conversion de l’angiotensine humaine K18 (hACE2) précédemment décrit à l’aide de systèmes d’imagerie in vivo (IVIS). Ce rSARS-CoV-2/Nluc et rSARS-CoV-2/Venus montrent une pathogénicité de type rSARS-CoV-2/WT et une réplication virale in vivo. Il est important de noter que Nluc et l’expression de Vénus nous permettent de suivre directement les infections virales in vivo et ex vivo, chez des souris infectées. Ces rSARS-CoV-2/Nluc et rSARS-CoV-2/Venus représentent une excellente option pour étudier la biologie du SARS-CoV-2 in vivo, pour comprendre l’infection virale et la maladie COVID-19 associée, et pour identifier des traitements prophylactiques et/ou thérapeutiques efficaces pour lutter contre l’infection par le SARS-CoV-2.

Infection à rSARS-CoV-2/Nluc chez des souris transgéniques K18 hACE2 (figures 1 et 2) La figure 1A montre une représentation schématique des rSARS-CoV-2/WT (en haut) et rSARS-CoV-2/Nluc (en bas) utilisés pour évaluer les infections in vivo. La figure 1B montre l’organigramme schématique appliqué pour évaluer la dynamique de l’infection rSARS-CoV-2/Nluc chez les souris transg...

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Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Ce protocole décrit la dynamique des infections virales à l’aide du (r)SARS-CoV-2 recombinant exprimant la luciférase et la fluorescence et d’un système d’imagerie in vivo (IVIS) chez des souris transgéniques K18 hACE2 pour surmonter le besoin d’approches secondaires nécessaires pour étudier les infections par le SRAS-CoV-2 in vivo.

Imagerie vivante et quantification de l’infection virale chez des souris transgéniques K18 hACE2 à l’aide du SARS-CoV-2 recombinant exprimant le rapporteur

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

Notre protocole décrivait l’utilisation du SARS-CoV-2 recombinant fluorescent ou luminescent pour la détection virale par imagerie vivante in vivo et ex vivo et le suivi viral dans le modèle murin transgénique ACE2 humain K18 de l’infection par le SARS-CoV-2. Le principal avantage de cette technique est l’application et la faisabilité de la détection et du suivi viraux pour les études in vivo et ex vivo du SARS-CoV-2 dans le modèle murin transgénique ACS2 humain K18. L’utilisation de l’imagerie in vivo du SARS-CoV-2 dans le modèle murin transgénique ACE2 humain K18 représente une excellente option pour évaluer les traitements thérapeutiques pour le traitement de l’infection par le SARS-CoV-2 in vivo.La mise en œuvre de rapporteurs SARS-CoV-2 représente une excellente option pour évaluer la pathogénicité, la réplication virale et le trophisme in vivo. Pour les études in vivo avec la luciférase exprimant le SARS-CoV-2, il est recommandé de raser les souris et d’obtenir une imagerie rapide après l’injection du substrat pour améliorer le signal de bioluminescence. Commencez la surveillance de la bioluminescence en lançant le système d’imagerie in vivo, ou IVIS, et en configurant les paramètres, cliquez sur le mode image sur Bioluminescence, puis ouvrez le filtre et réglez le temps d’exposition sur Auto.Ensuite, retirez une souris déjà rasée et anesthésiée de la chambre d’isolement et utilisez une aiguille de calibre 25 pour administrer rétro-orbitalement 100 microlitres du substrat de luciférase dilué 1 à 10 dans PBS à la souris. Replacez ensuite la souris dans la chambre d’isolement, transférez la chambre d’isolement à la machine IVIS, qui est équipée d’un composant chauffant pour prévenir l’hypothermie, et fermez la porte de l’imageur IVIS pour initialiser l’imagerie en sélectionnant Acquérir dans le logiciel. Pour analyser les images de bioluminescence acquises, utilisez l’outil ROI ou région d’intérêt du logiciel pour désigner le signal précis et mesurer le flux.Lancez le logiciel d’imagerie et configurez les paramètres. Cliquez sur le mode image sur Fluorescence, réglez l’excitation à 500 nanomètres et les filtres d’émission à 530 nanomètres, et réglez le temps d’exposition sur Auto. Effectuez une nécroscopie et excisez les poumons de souris.Placer les poumons excisés dans une plaque de 6 puits contenant deux millilitres de 1X PBS et rincer pour éliminer l’excès de sang. Désinfectez et nettoyez les outils chirurgicaux entre les échantillons à l’aide d’éthanol à 70%. Après avoir initialisé la machine IVIS, placez les poumons sur une feuille noire et séparez les tissus les uns des autres.Placez ensuite le plateau à l’intérieur de la chambre d’isolement à l’intérieur de l’armoire de biosécurité, puis transférez la chambre d’isolement à l’IVIS. Fermez la porte de l’imageur IVIS et cliquez sur Acquérir pour lancer le système d’imagerie. Pour analyser la fluorescence, utilisez l’outil ROI et dessinez des ROI autour de chacun des poumons individuels.Mesurez chaque retour sur investissement manuellement, puis utilisez les valeurs moyennes d’efficacité radiante données et soustrayez des souris infectées par des simulacres. Une fois l’imagerie terminée, placez les tissus dans un cryotube pour que la congélation de la glace carbonique soit stockée à moins 80 degrés Celsius pour un traitement ultérieur. En utilisant le supernate obtenu à partir des homogénats tissulaires, effectuer une dilution en série décuplée et infecter les monocouches confluentes des cellules Vero E6 avec un millilitre de chaque dilution surnageante dans des triplicates.Laissez le virus s’adsorber pendant une heure à 37 degrés Celsius dans un incubateur humidifié à 5% de dioxyde de carbone. Une fois cela fait, lavez les cellules avec un millilitre de 1X PBS, puis incubez les cellules dans deux millilitres de milieux post-infection contenant 1% d’agar dans l’incubateur humidifié à 5% de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius pendant 72 heures. Après l’incubation, inactivez les plaques dans du formol tamponné à 10% neutre pendant 24 heures à quatre degrés Celsius, en veillant à ce que toute la plaque soit immergée.Sortez les plaques du niveau de biosécurité trois et lavez les cellules trois fois avec un millilitre de Triton X-100 à 0,5 % pendant 10 minutes à température ambiante. Ensuite, bloquez les cellules perméabilisées avec un millilitre d’albumine sérique bovine de 2,5 ou BSA et PBS pendant une heure à 37 degrés Celsius, suivie d’une incubation dans un millilitre d’un microgramme par millilitre de l’anticorps monoclonal réactif croisé 1C7C7 dilué dans 2,5 BSA pendant une heure à 37 degrés Celsius. Lavez les cellules trois fois avec un millilitre de 1X PBS et développez les plaques à l’aide des kits de substrat de peroxydase ABC et diaminobenzène, ou DAB, conformément aux instructions du fabricant, puis calculez les titres viraux sous forme d’unités formant de la plaque par millilitre.Dans l’étude, il a été observé que la nanoluciférase bioluminescente, ou Nluc, était facilement détectée et que les souris infectées par le rSARS-CoV-2 Nluc, mais pas celles infectées par le type sauvage rSARS-CoV-2 ou simulé infectées. Les analyses quantitatives ont montré l’intensité de Nluc à différents jours après l’infection. Les lésions grossières à la surface pulmonaire des souris infectées par rSARS-CoV-2 Nluc étaient comparables à celles du groupe infecté par le type sauvage rSARS-CoV-2.De plus, les titres viraux détectés et les souris infectées par le rSARS-CoV-2 Nluc étaient comparables à celles infectées par le type sauvage rSARS-CoV-2 dans tous les organes à différents jours après l’infection. Dans le même temps, l’activité de Nluc n’a été détectée dans les organes que de souris infectées par rSARS-CoV-2 Nluc. Un groupe distinct de souris infectées par un faux virus et infectées par le virus a été surveillé pendant 12 jours pour détecter tout changement de poids corporel et de survie.Les souris infectées par rSARS-CoV-2 Nluc et rSARS-CoV-2 de type sauvage ont perdu jusqu’à 25% de leur poids corporel et succombent toutes à une infection virale entre sept et huit jours après l’infection. Après l’infection de Vénus par rSARS-CoV-2, l’expression de Vénus a été facilement détectée dans tous les poumons de souris infectées par rSARS-CoV-2 Venus, mais pas celles infectées par rSARS-CoV-2 de type sauvage ou simulé infecté. Les analyses quantitatives ont montré que l’intensité de Vénus culmine deux jours après l’infection et diminue au cours de l’infection et des poumons des souris infectées.Les images de la surface des poumons ont révélé que les lésions grossières de souris infectées par rSARS-CoV-2 Venus étaient comparables à celles de souris infectées par rSARS-CoV-2 de type sauvage. En outre, l’infection par rSARS-CoV-2 Venus a entraîné des titres viraux comparables à ceux observés chez les souris infectées par le type sauvage rSARS-CoV-2 dans tous les organes. Les souris infectées par rSARS-CoV-2 Venus et rSARS-CoV-2 de type sauvage ont perdu jusqu’à 25% de leur poids corporel et succombent à une infection virale au neuvième jour après l’infection sans survie.Les résultats du déclarant exprimant le SRAS-CoV-2 se sont révélés être des substituts valides de l’infection virale. Ainsi, cela pourrait conduire à l’identification et à l’évaluation rapides des contre-mesures pour le traitement de l’infection par le SRAS-CoV-2.

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