Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

אנו רוצים להודות לחברים במכון שלנו (מכון המחקר הביו-רפואי של טקסס) על מאמציהם לשמור על המתקנים שלנו פעילים ובטוחים באופן מלא במהלך מגיפת COVID-19. אנו רוצים גם להודות לוועדת הבטיחות הביולוגית המוסדית שלנו (IBC) ולאיות (IACUC) על סקירת הפרוטוקולים שלנו בצורה יעילה בזמן. אנו מודים לד"ר תומס מורן מבית הספר לרפואה של אייקן בהר סיני על שסיפק את הנוגדן החד-שבטי של חלבון הנוקליאוקפסיד 1C7C7 (N) המגיב SARS-CoV. מחקר SARS-CoV-2 במעבדתו של מרטינז-סוברידו נתמך כיום על ידי מענקי NIAID/NIH RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 ו-R43AI165089-01; משרד ההגנה (DoD) מעניק את W81XWH2110095 ואת W81XWH2110103; שותפות סן אנטוניו לטיפול מדויק; פורום מכון המחקר הביו-רפואי בטקסס; המרכז למדעי הבריאות של אוניברסיטת טקסס בסן אנטוניו; הקרן הרפואית של סן אנטוניו; ועל ידי המרכז לחקר פתוגנזה והעברה של שפעת (CRIPT), מרכז מצוינות במימון NIAID למחקר ותגובה לשפעת (CEIRR, חוזה # 75N93021C00014).

פרוטוקולים הכוללים עכברים מהונדסים מסוג K18 hACE2 אושרו על ידי הוועדה המוסדית לבטיחות ביולוגית של מכון המחקר הביו-רפואי בטקסס (TBRI) (IBC) והוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC). כל הניסויים פועלים על פי ההמלצות במדריך לטיפול בחיות מעבדה ולשימוש בהן של המועצה הלאומית למחקר40. צ?...

<ol>
	<li>V'Kovski, P., Kratzel, A., Steiner, S., Stalder, H., Thiel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronavirus+biology+and+replication:+implications+for+SARS-CoV-2.">Coronavirus biology and replication: implications for SARS-CoV-2.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (3), 155-170 (2021).</li><li>Pal, M., Berhanu, G., Desalegn, C., Kandi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus-2+(SARS-CoV-2):+An+update.">Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2): An update.</a> Cureus. 12 (3), 7423 (2020).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+genetic+recombination,+and+pathogenesis+of+coronaviruses.">Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coronaviruses.</a> Trends in Microbiology. 24 (6), 490-502 (2016).</li><li>Cui, J., Li, F., Shi, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+evolution+of+pathogenic+coronaviruses.">Origin and evolution of pathogenic coronaviruses.</a> Nature Reviews Microbiology. 17 (3), 181-192 (2019).</li><li>Lu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+characterisation+and+epidemiology+of+2019+novel+coronavirus:+implications+for+virus+origins+and+receptor+binding.">Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding.</a> Lancet. 395 (10224), 565-574 (2020).</li><li>Evans, J. P., Liu, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+host+factors+in+SARS-CoV-2+entry.">Role of host factors in SARS-CoV-2 entry.</a> Journal of Biological Chemistry. 297 (1), 100847 (2021).</li><li>Petersen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+SARS-CoV-2+with+SARS-CoV+and+influenza+pandemics.">Comparing SARS-CoV-2 with SARS-CoV and influenza pandemics.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (9), 238-244 (2020).</li><li>Alfaraj, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+predictors+of+mortality+of+Middle+East+Respiratory+Syndrome+Coronavirus+(MERS-CoV)+infection:+A+cohort+study.">Clinical predictors of mortality of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV) infection: A cohort study.</a> Travel Medicine and Infectious Disease. 29, 48-50 (2019).</li><li>Harvey, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+variants,+spike+mutations+and+immune+escape.">SARS-CoV-2 variants, spike mutations and immune escape.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (7), 409-424 (2021).</li><li>Dong, E., Du, H., Gardner, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+interactive+web-based+dashboard+to+track+COVID-19+in+real+time.">An interactive web-based dashboard to track COVID-19 in real time.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (5), 533-534 (2020).</li><li>Bar-On, Y. M., Flamholz, A., Phillips, R., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARS-CoV-2+(COVID-19)+by+the+numbers.">ARS-CoV-2 (COVID-19) by the numbers.</a> Elife. 9, 57309 (2020).</li><li>Roussel, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+fear+versus+data.">SARS-CoV-2: fear versus data.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 55 (5), 105947 (2020).</li><li>Scialo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+One+year+in+the+pandemic.+What+have+we+learned,+the+new+vaccine+era+and+the+threat+of+SARS-CoV-2+variants.">SARS-CoV-2: One year in the pandemic. What have we learned, the new vaccine era and the threat of SARS-CoV-2 variants.</a> Biomedicines. 9 (6), 611 (2021).</li><li>. Coronavirus (COVID-19) update: FDA authorizes additional monoclonal antibody for treatment of COVID-19 Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19">https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19</a> (2021)</li><li>Dougan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bamlanivimab+plus+Etesevimab+in+Mild+or+Moderate+Covid-19.">Bamlanivimab plus Etesevimab in Mild or Moderate Covid-19.</a> New England Journal of Medicine. 385 (15), 1382-1392 (2021).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COVID+antibody+treatments+show+promise+for+preventing+severe+disease.">COVID antibody treatments show promise for preventing severe disease.</a> Nature. 591 (7851), 513-514 (2021).</li><li>Tuccori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+the+preclinical+discovery+and+development+of+bamlanivimab+for+the+treatment+of+novel+coronavirus+infection+(COVID-19):+reasons+for+limited+clinical+use+and+lessons+for+the+future.">An overview of the preclinical discovery and development of bamlanivimab for the treatment of novel coronavirus infection (COVID-19): reasons for limited clinical use and lessons for the future.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. , 1-12 (2021).</li><li>Phan, A. T., Gukasyan, J., Arabian, S., Wang, S., Neeki, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergent+inpatient+administration+of+casirivimab+and+imdevimab+antibody+cocktail+for+the+treatment+of+COVID-19+pneumonia.">Emergent inpatient administration of casirivimab and imdevimab antibody cocktail for the treatment of COVID-19 pneumonia.</a> Cureus. 13 (5), 15280 (2021).</li><li>O'Brien, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+REGEN-COV+antibody+combination+in+early+SARS-CoV-2+infection.">Subcutaneous REGEN-COV antibody combination in early SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Beigel, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remdesivir+for+the+treatment+of+Covid-19+-+Final+report.">Remdesivir for the treatment of Covid-19 - Final report.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1813-1826 (2020).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+convalescent+plasma+therapy+on+time+to+clinical+improvement+in+patients+with+severe+and+life-threatening+COVID-19:+A+randomized+clinical+trial.">Effect of convalescent plasma therapy on time to clinical improvement in patients with severe and life-threatening COVID-19: A randomized clinical trial.</a> Journal of the American Medical Association. 324 (5), 460-470 (2020).</li><li>Polack, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+the+BNT162b2+mRNA+Covid-19+vaccine.">Safety and efficacy of the BNT162b2 mRNA Covid-19 vaccine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (27), 2603-2615 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Pfizer-BioNTech+COVID-19+vaccine+-+United+States,+December+2020.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Pfizer-BioNTech COVID-19 vaccine - United States, December 2020.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 69 (50), 1922-1924 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Janssen+COVID-19+vaccine+-+United+States,+February+2021.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Janssen COVID-19 vaccine - United States, February 2021.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 70 (9), 329-332 (2021).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emission+spectra+of+bioluminescent+reporters+and+interaction+with+mammalian+tissue+determine+the+sensitivity+of+detection+in+vivo.">Emission spectra of bioluminescent reporters and interaction with mammalian tissue determine the sensitivity of detection in vivo.</a> Journal of Biomedical Optics. 10 (4), 41210 (2005).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescent+and+bioluminescent+bireporter+Influenza+A+Virus+to+evaluate+viral+infections.">A novel fluorescent and bioluminescent bireporter Influenza A Virus to evaluate viral infections.</a> Journal of Virology. 93 (10), 00032 (2019).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-competent+fluorescent-expressing+influenza+B+virus.">Replication-competent fluorescent-expressing influenza B virus.</a> Virus Research. 213, 69-81 (2016).</li><li>Welsh, D. K., Noguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bioluminescence+imaging.">Cellular bioluminescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (8), (2012).</li><li>Tran, V., Moser, L. A., Poole, D. S., Mehle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+real-time+in+vivo+imaging+of+an+influenza+reporter+virus+reveals+dynamics+of+replication+and+spread.">Highly sensitive real-time in vivo imaging of an influenza reporter virus reveals dynamics of replication and spread.</a> Journal of Virology. 87 (24), 13321-13329 (2013).</li><li>Schoggins, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+reporter+viruses+reveal+viral+dynamics+in+interferon+receptor-deficient+mice+and+sensitivity+to+interferon+effectors+in+vitro.">Dengue reporter viruses reveal viral dynamics in interferon receptor-deficient mice and sensitivity to interferon effectors in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (36), 14610-14615 (2012).</li><li>Luker, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+and+therapy+in+living+mice.">Noninvasive bioluminescence imaging of herpes simplex virus type 1 infection and therapy in living mice.</a> Journal of Virology. 76 (23), 12149-12161 (2002).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rapid+antiviral+screening+assay+based+on+eGFP+reporter+virus+of+Mayaro+virus.">Development of a rapid antiviral screening assay based on eGFP reporter virus of Mayaro virus.</a> Antiviral Research. 168, 82-90 (2019).</li><li>Kirui, J., Freed, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+validation+of+a+highly+sensitive+bioluminescent+HIV-1+reporter+vector+that+simplifies+measurement+of+virus+release.">Generation and validation of a highly sensitive bioluminescent HIV-1 reporter vector that simplifies measurement of virus release.</a> Retrovirology. 17 (1), 12 (2020).</li><li>Shang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+eGFP+enterovirus+71+for+antiviral+screening.">Development and characterization of a stable eGFP enterovirus 71 for antiviral screening.</a> Antiviral Research. 97 (2), 198-205 (2013).</li><li>Zou, G., Xu, H. Y., Qing, M., Wang, Q. Y., Shi, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+luciferase+dengue+virus+for+high-throughput+screening.">Development and characterization of a stable luciferase dengue virus for high-throughput screening.</a> Antiviral Research. 91 (1), 11-19 (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+SARS-CoV-2+from+a+single+bacterial+artificial+chromosome.">Rescue of SARS-CoV-2 from a single bacterial artificial chromosome.</a> mBio. 11 (5), 02168 (2020).</li><li>Avila-Perez, G., Park, J. G., Nogales, A., Almazan, F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+recombinant+Zika+virus+from+a+bacterial+artificial+chromosome+cDNA+clone.">Rescue of recombinant Zika virus from a bacterial artificial chromosome cDNA clone.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59537 (2019).</li><li>Chiem, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bifluorescent-based+assay+for+the+identification+of+neutralizing+antibodies+against+SARS-CoV-2+variants+of+concern+in+vitro+and+in+vivo.">A bifluorescent-based assay for the identification of neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 variants of concern in vitro and in vivo.</a> Journal of Virology. , (2021).</li><li>Committee for the update of the guide for the care and use of laboratory animals., Institute for laboratory animal research (U.S) &amp; National Academies Press (U.S.). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals.+8th+edn.">Guide for the care and use of laboratory animals. 8th edn.</a> National Research Council (US). , (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+SARS-CoV-2+infection+dynamic+in+vivo+using+reporter-expressing+viruses.">Analysis of SARS-CoV-2 infection dynamic in vivo using reporter-expressing viruses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (41), (2021).</li></ol>

פרוטוקול זה מדגים את ההיתכנות של שימוש בגנים אלה של rSARS-CoV-2 המבטאים את הכתבים כדי לנטר זיהומים ויראליים in vivo. שני הנגיפים הרקומביננטיים המבטאים כתבים מספקים כלי מצוין לחקר זיהומי SARS-CoV-2 in vivo. מערכות ההדמיה המתוארות ex vivo (rSARS-CoV-2/Venus) ו-in vivo (rSARS-CoV-2/Nluc) מייצגות אפשרות מצוינת לה...

תסמונת נשימתית חריפה חמורה נגיף קורונה 2 (SARS-CoV-2) הוא נגיף RNA עטוף, בעל חוש חיובי וחד-גדילי השייך לשושלת בטאקורונה-וירוס במשפחת הקורונה 1. משפחה ויראלית זו מחולקת לאלפא, בטא, גמא ודלתא-קורונה1. נגיפי אלפא ובטאקורונה מדביקים בעיקר יונקים, בעוד שנגיף גמא ודלתא-קורונה מדביק כמעט אך ורק ציפורים2. עד כה, שבעה נגיפי קורונה (CoV) חצו מחסומי מינים והתפתחו כנגיפי קורונה אנושיים (HCoV): שני אלפא-CoVs (HCoV-229E ו-HCoV-NL63) וחמישה רכבי בטא-CoVs (HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, נגיף הקורונה של תסמונת הנשימה במזרח התיכון [MERS-CoV], ו-SARS-CoV-2)3,4,5,6. SARS-CoV, MERS-CoV ו-SARS-CoV-2 הם פתוגניים מאוד, וגורמים לזיהום חמור בדרכי הנשימה התחתונות7. לפני הופעתו של SARS-CoV-2, היו שתי התפרצויות מגיפה שנגרמו על ידי CoVs: SARS-CoV בגואנגדונג פרובידנס, סין, בין השנים 2002-2003, עם שיעור תמותה ממקרי תמותה (CFR) של כ-9.7%; ו-MERS-CoV במזרח התיכון משנת 2012 ועד היום, עם CFR של כ-34%7,8. ל-SARS-CoV-2 יש CFR כולל בין 3.4%-49%, כאשר מחלות רקע תורמות ל-CFR גבוה יותרשל 8,9%. מאז גילויו בדצמבר 2019, בווהאן, סין, SARS-CoV-2 אחראי ליותר מ-242 מיליון נדבקים בבני אדם וליותר מ-4.9 מיליון מקרי מוות של בני אדם ברחבי העולם, 7,10,11,12. יש לציין כי מאז סוף 2020, וריאנטים חדשים של SARS-CoV-2 של דאגה (VoC) ווריאנטים בעלי עניין (VoI) השפיעו על מאפייני הנגיף, כולל העברה ואנטיגניות 9,13, והכיוון הכללי של מגיפת COVID-19. לטיפול בזיהומי SARS-CoV-2, יש כיום רק ארצות הברית אחת (ארה"ב) מנהל המזון והתרופות האמריקאי (FDA) טיפול אנטי-ויראלי (remdesivir) ותרופה אחת לאישור שימוש חירום (EUA) (baricitinib, שתינתן בשילוב עם remdesivir)14. ישנם גם 6 נוגדנים חד שבטיים מאושרים של EUA: REGEN-COV (casirivimab ו- imdevimab, הניתנים יחד), sotrovimab, tocilizumab, ו- bamlanivimab ו- etesevimab המנוהלים יחד 15,16,17,18,19. נכון לעכשיו יש רק חיסון מניעתי אחד שאושר על ידי ה-FDA, פייזר-ביונטק, ושני חיסונים מניעתיים אחרים (מודרנה וג'נסן) אושרו על ידי EUA 20,21,22,23,24. עם זאת, עם שיעור ההדבקה הבלתי מבוקר והופעתם של VoC ו- VoI, SARS-CoV-2 עדיין מהווה איום על בריאות האדם. לכן, יש צורך דחוף בגישות חדשות כדי לזהות מניעה וטיפולים יעילים לשליטה בהדבקת SARS-CoV-2 ובמגפת COVID-19 שעדיין נמשכת.
חקר SARS-CoV-2 דורש טכניקות מייגעות וגישות משניות כדי לזהות את נוכחות הנגיף בתאים נגועים ו/או מודלים מאומתים של זיהום בבעלי חיים. השימוש בגנטיקה הפוכה איפשר ליצירת וירוסים רקומביננטיים לענות על שאלות חשובות בביולוגיה של זיהומים ויראליים. לדוגמה, טכניקות של גנטיקה הפוכה סיפקו אמצעים לחשוף ולהבין את המנגנונים של זיהום ויראלי, פתוגנזה ומחלות. באופן דומה, גישות לגנטיקה הפוכה סללו את הדרך להנדס וירוסים רקומביננטיים חסרי חלבונים נגיפיים כדי להבין את תרומתם בפתוגנזה נגיפית. בנוסף, נעשה שימוש בטכניקות של גנטיקה הפוכה כדי ליצור וירוסים רקומביננטיים המבטאים גנים מדווחים ליישומי in vitro ו-in vivo, כולל זיהוי גישות מניעתיות ו/או טיפוליות לטיפול בזיהומים נגיפיים. חלבונים פלואורסצנטיים וביולומינסצנטיים הם הגנים המדווחים הנפוצים ביותר בשל הרגישות, היציבות והזיהוי הקל שלהם בהתבסס על שיפור טכנולוגיות חדשות25,26. במבחנה, חלבונים פלואורסצנטיים הוכחו כאפשרות טובה יותר ללוקליזציה של וירוסים בתאים נגועים, בעוד שלוציפראזות נוחות יותר למחקרי כימות 27,28,29. In vivo, לוציפראזות עדיפות על פני חלבונים פלואורסצנטיים להדמיה של בעלי חיים שלמים, בעוד שחלבונים פלואורסצנטיים מועדפים לזיהוי תאים נגועים או הדמיית ex vivo 30,31,32. השימוש בנגיפים רקומביננטיים המבטאים כתבים שימש ככלי רב עוצמה לחקר וירוסים במשפחות רבות, כולל, בין היתר, פלבי-וירוסים, אנטרו-וירוסים, אלפא-וירוסים, לנטי-וירוסים, נגיפי ארנה ונגיפי שפעת 28,33,34,35,36.
כדי להתגבר על הצורך בגישות משניות לחקר SARS-CoV-2 ולאפיון זיהום SARS-CoV-2 בזמן אמת in vivo, יצרנו רקומביננטים (r)SARS-CoV-2 המוכשרים לשכפול המבטאים חלבונים ביולומינסנטיים (ננולוסיפראז, Nluc) או פלואורסצנטיים (Venus) באמצעות הגנטיקה ההפוכה המבוססת על כרומוזומים מלאכותיים חיידקיים (BAC) שתוארו קודם לכן, המתוחזקים כעותק יחיד ב- E. coli על מנת למזער את הרעילות של רצפי הנגיף במהלך התפשטותו בחיידקים37,38. יש לציין כי rSARS-CoV-2/Nluc ו-rSARS-CoV-2/Venus הראו פתוגניות דמוית rSARS-CoV-2/WT in vivo. הרמה הגבוהה של ביטוי נוגה מ-rSARS-CoV-2/Venus אפשרה זיהוי זיהום נגיפי בריאות של עכברים מהונדסים K18 hACE2 נגועים באמצעות מערכת הדמיה in vivo (IVIS)39. רמות הביטוי של נוגה תאמו היטב עם טיטרים נגיפיים שזוהו בריאות, והדגימו את ההיתכנות של שימוש בביטוי נוגה כפונדקאית תקפה של זיהום SARS-CoV-2. באמצעות rSARS-CoV-2/Nluc, הצלחנו לעקוב אחר הדינמיקה של זיהום נגיפי בזמן אמת ולהעריך באופן אורכי את זיהום SARS-CoV-2 in vivo באמצעות אותה גישת IVIS בעכברים מהונדסים K18 hACE2.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

מגיפת מחלת נגיף הקורונה 2019 (COVID-19) נגרמה על ידי תסמונת נשימתית חריפה חמורה נגיף קורונה 2 (SARS-CoV-2). עד כה, SARS-CoV-2 היה אחראי ליותר מ-242 מיליון זיהומים וליותר מ-4.9 מיליון מקרי מוות ברחבי העולם. בדומה לנגיפים אחרים, חקר SARS-CoV-2 דורש שימוש בשיטות ניסיוניות כדי לזהות נוכחות של נגיף בתאים נגועים ו/או במודלים של בעלי חיים. כדי להתגבר על מגבלה זו, יצרנו רקומביננטים בעלי יכולת שכפול (r)SARS-CoV-2 המבטאים חלבונים ביולומינסנטיים (ננולציפראז, נלוק) או פלואורסצנטיים (נוגה). rSARS-CoV-2 אלה המבטאים כתבים מאפשרים לעקוב אחר זיהומים נגיפיים במבחנה וב-in vivo בהתבסס על ביטוי הגנים של Nluc ו-Venus reporter. כאן המחקר מתאר את השימוש ב- rSARS-CoV-2/Nluc ו- rSARS-CoV-2/Venus כדי לזהות ולעקוב אחר זיהום SARS-CoV-2 במודל העכברים הממירים את האנגיוטנסין האנושי K18 שתואר קודם לכן 2 (hACE2) של זיהום באמצעות מערכות הדמיה in vivo (IVIS). rSARS-CoV-2/Nluc ו-rSARS-CoV-2/Venus מראים פתוגניות דמוית rSARS-CoV-2/WT ושכפול נגיפי in vivo. חשוב לציין כי ביטויי Nluc ו-Venus מאפשרים לנו לעקוב ישירות אחר זיהומים נגיפיים ב-vivo וב-ex vivo, בעכברים נגועים. rSARS-CoV-2/Nluc ו-rSARS-CoV-2/Venus מייצגים אפשרות מצוינת לחקור את הביולוגיה של SARS-CoV-2 in vivo, להבין זיהום ויראלי ומחלת COVID-19 הקשורה אליו, ולזהות טיפולים מניעתיים ו/או טיפוליים יעילים למאבק בזיהום SARS-CoV-2.

זיהום rSARS-CoV-2/Nluc בעכברים מהונדסים K18 hACE2 (איורים 1 ו-2) איור 1A מראה ייצוג סכמטי של rSARS-CoV-2/WT (למעלה) ו-rSARS-CoV-2/Nluc (למטה) המשמשים להערכת זיהומים in vivo. איור 1B מציג את תרשים הזרימה הסכמטית שהוחל כדי להעריך את הדינמיקה של זיהום rSARS...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

פרוטוקול זה מתאר את הדינמיקה של זיהומים נגיפיים באמצעות לוציפראז ופלואורסצנציה המבטאת רקומביננט (r)SARS-CoV-2 ומערכות הדמיה in vivo (IVIS) בעכברים מהונדסים K18 hACE2 כדי להתגבר על הצורך בגישות משניות הנדרשות לחקר זיהומי SARS-CoV-2 in vivo.

הדמיה חיה וכימות של זיהום נגיפי בעכברים מהונדסים K18 hACE2 באמצעות דיווח-מבטא רקומביננטי SARS-CoV-2

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

הפרוטוקול שלנו תיאר את השימוש ב-SARS-CoV-2 רקומביננטי פלואורסצנטי או בעל ביטוי זוהר לזיהוי נגיפי הדמיה חיה in vivo ו-ex vivo ולמעקב ויראלי במודל העכבר המהונדס האנושי K18 של זיהום SARS-CoV-2. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא היישום וההיתכנות של זיהוי ומעקב נגיפי למחקרי in vivo ו- ex vivo של SARS-CoV-2 במודל העכבר המהונדס האנושי K18 ACE2. השימוש בהדמיית in vivo של SARS-CoV-2 במודל העכבר המהונדס האנושי K18 ACE2 מייצג אפשרות מצוינת להערכת טיפולים לטיפול בזיהום SARS-CoV-2 in vivo.יישום של כתבים SARS-CoV-2 מייצגים אפשרות מצוינת להעריך פתוגניות, שכפול נגיפי וטרופיזם in vivo. עבור מחקרי in vivo עם לוציפראז המבטא SARS-CoV-2, מומלץ לגלח את העכברים ולהדמיה מהירה לאחר הזרקת מצע כדי לשפר את אות הביולומינסנציה. התחל ניטור bioluminescence על ידי הפעלת מערכת ההדמיה in vivo, או IVIS, והגדרת הפרמטרים, לחץ על מצב התמונה ל- Bioluminescence ואז פתח את המסנן והגדר את זמן החשיפה ל- Auto.לאחר מכן, הסר עכבר שכבר מגולח ומורדם מתא הבידוד והשתמש במחט 25 מדים כדי לתת בדיעבד 100 מיקרוליטרים של מצע לוציפראז מדולל 1 עד 10 ב- PBS לעכבר. לאחר מכן החזירו את העכבר לתא הבידוד, העבירו את תא הבידוד למכונת IVIS, המצוידת ברכיב חימום למניעת היפותרמיה, וסגרו את דלת הדמיית IVIS כדי לאתחל את ההדמיה על ידי בחירת Acquire בתוכנה. כדי לנתח את תמונות bioluminescence שנרכשו, השתמש בכלי ROI או באזור העניין בתוכנה כדי לייעד את האות המדויק ולמדוד את השטף.הפעל את תוכנת ההדמיה והגדר את הפרמטרים. לחץ על מצב התמונה לפלואורסצנציה, הגדר עירור ב- 500 ננומטר ומסנני פליטה ב- 530 ננומטר, והגדר את זמן החשיפה ל- Auto. בצע נמק וריאות בלו מעכברים.הניחו את הריאות שנכרתו בצלחת של 6 בארות המכילה שני מיליליטרים של 1X PBS ושטפו אותה כדי להסיר עודפי דם. יש לחטא ולנקות את כלי הניתוח בין הדגימות באמצעות 70% אתנול. לאחר אתחול מכונת IVIS, הניחו את הריאות על יריעה שחורה והפרידו את הרקמות זו מזו.לאחר מכן הניחו את המגש בתוך תא הבידוד בתוך ארון הבטיחות הביולוגית ולאחר מכן העבירו את תא הבידוד ל-IVIS. סגור את דלת הצילום של IVIS ולחץ על רכישה כדי ליזום את מערכת ההדמיה. כדי לנתח פלואורסצנציה, השתמש בכלי ההחזר על ההשקעה וצייר ROIs סביב כל אחת מהריאות הבודדות.מדוד כל החזר השקעה באופן ידני ולאחר מכן השתמש בערכי היעילות הקורנים הממוצעים שניתנו והפחת מהעכברים הנגועים בדמה. לאחר השלמת ההדמיה, הניחו את הרקמות בקריו-צינורית כדי להקפיא קרח יבש כדי לאחסן אותן במינוס 80 מעלות צלזיוס לעיבוד מאוחר יותר. תוך שימוש בסופרנאט המתקבל מההומוגנטים של הרקמה, מבצעים דילול סדרתי פי עשרה ומדביקים מונו-שכבות מפגש של תאי Vero E6 עם מיליליטר אחד של כל דילול סופרנטנטי בטריפליקטים.תנו לנגיף לספוח במשך שעה אחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בחממת פחמן דו-חמצני של 5% לחות. לאחר שסיימו, שטפו את התאים עם מיליליטר אחד של 1X PBS ולאחר מכן דגירו את התאים לשני מיליליטרים של מדיה שלאחר ההדבקה המכילה 1%אגר באינקובטור הפחמן הדו-חמצני 5% הלח ב-37 מעלות צלזיוס במשך 72 שעות. לאחר הדגירה, השביתו את הלוחות בפורמלין נייטרלי של 10% נייטרלי במשך 24 שעות בארבע מעלות צלזיוס, מה שמבטיח שהצלחת כולה שקועה.הוציאו צלחות מרמה שלוש של בטיחות ביולוגית ושטפו את התאים שלוש פעמים עם מיליליטר אחד של 0.5% טריטון X-100 למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, חסום את התאים החודרים עם מיליליטר אחד של 2.5 אלבומין בסרום בקר או BSA ו- PBS למשך שעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס ולאחר מכן הדגירה במיליליטר אחד של מיקרוגרם אחד למיליליטר של חלבון הנוקליאוקפסיד SARS-CoV נוקליאוקפסיד הנוגדן החד-שבטי המגיב 1C7C7 מדולל ב-2.5 BSA למשך שעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס. לשטוף את התאים שלוש פעמים עם מיליליטר אחד של 1X PBS ולפתח את הפלאקים באמצעות ABC ו diaminobenzene, או DAB, ערכות מצע peroxidase על פי הוראות היצרן, ולאחר מכן לחשב את titers ויראלי כיחידות יצירת רובד לכל מיליליטר.במחקר, נצפה כי הננולוסיפראז הביולומינסנטי, או Nluc, זוהה בקלות ועכברים נגועים ב- rSARS-CoV-2 Nluc, אך לא אלה שנדבקו ב- rSARS-CoV-2 מסוג בר או נגועים מדומה. הניתוחים הכמותיים הראו את עוצמת Nluc בימים שונים לאחר ההדבקה. נגעים גסים על פני הריאה של עכברים הנגועים ב-rSARS-CoV-2 Nluc היו דומים לאלה שבקבוצה הנגועה בטבע rSARS-CoV-2.בנוסף, זוהו טיטרים נגיפיים והעכברים הנגועים ב-rSARS-CoV-2 Nluc היו דומים לאלה שנדבקו ב-rSARS-CoV-2 מסוג בר בכל האיברים בימים שונים לאחר ההדבקה. במקביל, פעילות Nluc זוהתה רק באיברים מעכברים נגועים rSARS-CoV-2 Nluc. קבוצה נפרדת של עכברים נגועים מדומים ודבקים בנגיף הייתה במעקב במשך 12 יום אחר שינויים במשקל הגוף ובהישרדותו.עכברים שנדבקו ב-rSARS-CoV-2 Nluc וב-rSARS-CoV-2 איבדו עד 25% ממשקל גופם וכולם נכנעו לזיהום נגיפי בין שבעה לשמונה ימים לאחר ההדבקה. לאחר זיהום נוגה rSARS-CoV-2, ביטוי נוגה זוהה בקלות בכל הריאות מעכברים שנדבקו ב-rSARS-CoV-2 Venus, אך לא מאלה שנדבקו ב-rSARS-CoV-2 מסוג פראי או מדומה שנדבקו. הניתוחים הכמותיים הראו כי עוצמת נוגה מגיעה לשיאה יומיים לאחר ההדבקה ויורדת במהלך ההדבקה והריאות של עכברים נגועים.תמונות של פני הריאה חשפו נגעים גסים של עכברים הנגועים ב-rSARS-CoV-2 נוגה היה דומה לזה של עכברים נגועים מסוג rSARS-CoV-2. כמו כן, זיהום עם rSARS-CoV-2 Venus הביא לתגובות נגיפיות דומות לאלה שנצפו בעכברים שנדבקו ב-rSARS-CoV-2 מסוג בר בכל האיברים. העכברים שנדבקו ב-rSARS-CoV-2 Venus וב-rSARS-CoV-2 איבדו עד 25% ממשקל גופם ונכנעו לזיהום נגיפי ביום התשיעי לאחר ההדבקה ללא הישרדות.התוצאות של כתבת המבטאת SARS-CoV-2 הראו שהן פונדקאיות תקפות של זיהום ויראלי. לפיכך, זה עלול להוביל לזיהוי והערכה מהירים של אמצעי נגד לטיפול בזיהום SARS-CoV-2.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

בתחום ההדמיה vivo של טפילים טראנסגנטי שושנת יריחו שורה חיים

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

ייצור Titering של Adeno הקשורים ווקטורים רקומביננטי ויראלי

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

לוציפראז-כתבת פלורסנט וירוס שפעת עבור הדמיה חיה וכימות של זיהום נגיפי

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

הדמיה של SARS-CoV-2 באמצעות אימונו RNA-פלואורסצנטיות בהכלאה Situ

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

זיהוי נוגדנים מנטרלים SARS-CoV-2 באמצעות הדמיה פלואורסצנטית בתפוקה גבוהה של זיהום פסאודווירוס

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

בדיקת נטרול מהירה, מולטיפלקס כפולה IgG ו- IgM SARS-CoV-2 עבור מערכת ניתוח זרימה מבוססת חרוזים מרובי קסים

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

זיהוי נוגדן דומיין מחייב קולטן SARS-CoV-2 באמצעות ביו-דו"ח מבוסס HiBiT

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

יעיל SARS-CoV-2 כמותי הפוך Transcriptase PCR רוק אסטרטגיה אבחון באמצעות רובוטים צנרת קוד פתוח

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

וירוסים מדומים ככלי מולקולרי לניטור תגובות חיסוניות הומורליות נגד SARS-CoV-2 באמצעות בדיקת נטרול

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...