Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Vorremmo ringraziare i membri del nostro istituto (Texas Biomedical Research Institute) per i loro sforzi nel mantenere le nostre strutture pienamente operative e sicure durante la pandemia di COVID-19. Vorremmo anche ringraziare il nostro Comitato istituzionale per la biosicurezza (IBC) e spell (IACUC) per aver rivisto i nostri protocolli in modo efficiente in termini di tempo. Ringraziamo il Dr. Thomas Moran della Icahn School of Medicine del Mount Sinai per aver fornito l'anticorpo monoclonale della proteina nucleocapsside (N) cross-reattivo 1C7C7 SARS-CoV. La ricerca SARS-CoV-2 nel laboratorio di Martinez-Sobrido è attualmente supportata dalle sovvenzioni NIAID / NIH RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 e R43AI165089-01; il Dipartimento della Difesa (DoD) concede W81XWH2110095 e W81XWH2110103; la San Antonio Partnership for Precision Therapeutic; il Texas Biomedical Research Institute Forum; l'Università del Texas Health Science Center di San Antonio; la San Antonio Medical Foundation; e dal Center for Research on Influenza Pathogenesis and Transmission (CRIPT), un Centro di eccellenza per la ricerca e la risposta all'influenza finanziato dal NIAID (CEIRR, contratto # 75N93021C00014).

I protocolli che coinvolgono topi transgenici K18 hACE2 sono stati approvati dal Texas Biomedical Research Institute (TBRI) Institutional Biosafety Committee (IBC) e dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Tutti gli esperimenti seguono le raccomandazioni contenute nella Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio del Consiglio Nazionale delleRicerche 40. Il dispositivo di protezione individuale (DPI) appropriato è necessario quando si lavora con i topi.
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Questo protocollo dimostra la fattibilità dell'utilizzo di questi geni reporter che esprimono rSARS-CoV-2 per monitorare le infezioni virali in vivo. Entrambi i virus ricombinanti che esprimono reporter forniscono uno strumento eccellente per studiare le infezioni da SARS-CoV-2 in vivo. I sistemi di imaging ex vivo (rSARS-CoV-2/Venus) e in vivo (rSARS-CoV-2/Nluc) descritti rappresentano un'ottima opzione per comprendere le dinamiche dell'infezione da SARS-CoV-2, la patogenesi virale e...

La sindrome respiratoria acuta grave coronavirus 2 (SARS-CoV-2) è un virus a RNA avvolto, a senso positivo, a singolo filamento che appartiene al lignaggio Betacoronavirus della famiglia Coronaviridae 1. Questa famiglia virale è divisa in Alpha-, Beta-, Gamma-, e Delta-coronavirus1. Gli alfa e i betacoronavirus infettano principalmente i mammiferi, mentre il gamma e il deltacoronavirus infettano quasi esclusivamente gli uccelli2. Ad oggi, sette coronavirus (CoV) hanno attraversato le barriere delle specie ed sono emersi come coronavirus umani (HCoV): due alfa-CoV (HCoV-229E e HCoV-NL63) e cinque beta-CoV (HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, coronavirus della sindrome respiratoria del Medio Oriente [MERS-CoV] e SARS-CoV-2)3,4,5,6. SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2 sono altamente patogeni, causando gravi infezioni del tratto respiratorio inferiore7. Prima dell'emergere di SARS-CoV-2, ci sono stati due focolai epidemici causati da CoV: SARS-CoV a Guangdong Providence, in Cina, dal 2002 al 2003, con un tasso di mortalità dei casi (CFR) di circa il 9,7%; e MERS-CoV in Medio Oriente dal 2012 ad oggi, con un CFR di circa il 34%7,8. SARS-CoV-2 ha un CFR complessivo tra il 3,4% e il 49%, con condizioni sottostanti che contribuiscono a un CFR 8,9 più elevato. Dalla sua scoperta nel dicembre 2019, a Wuhan, in Cina, SARS-CoV-2 è stato responsabile di oltre 242 milioni di infezioni umane e oltre 4,9 milioni di morti umane in tutto il mondo 7,10,11,12. In particolare, dalla fine del 2020, le nuove varianti di preoccupazione (VoC) e le varianti di interesse (VoI) di SARS-CoV-2 hanno avuto un impatto sulle caratteristiche del virus, tra cui la trasmissione e l'antigenicità 9,13, e sulla direzione generale della pandemia di COVID-19. Per il trattamento delle infezioni da SARS-CoV-2, attualmente esiste un solo Stati Uniti (USA) Food and Drug Administration (FDA) antivirale terapeutico (remdesivir) e un farmaco di autorizzazione all'uso di emergenza (EUA) (baricitinib, da somministrare in combinazione con remdesivir)14. Ci sono anche 6 anticorpi monoclonali EUA approvati: REGEN-COV (casirivimab e imdevimab, somministrati insieme), sotrovimab, tocilizumab e bamlanivimab ed etesevimab somministrati insieme 15,16,17,18,19. Attualmente esiste un solo vaccino profilattico approvato dalla FDA, Pfizer-BioNTech, e altri due vaccini profilattici (Moderna e Janssen) sono stati approvati dall'EUA 20,21,22,23,24. Tuttavia, con il tasso di infezione incontrollato e l'emergere di VoC e VoI, SARS-CoV-2 rappresenta ancora una minaccia per la salute umana. Pertanto, sono urgentemente necessari nuovi approcci per identificare profilattici e terapie efficienti per controllare l'infezione da SARS-CoV-2 e la pandemia di COVID-19 ancora in corso.
Lo studio di SARS-CoV-2 richiede tecniche laboriose e approcci secondari per identificare la presenza del virus in cellule infette e/o modelli animali di infezione convalidati. L'uso della genetica inversa ha permesso la generazione di virus ricombinanti per rispondere a domande importanti nella biologia delle infezioni virali. Ad esempio, le tecniche di genetica inversa hanno fornito mezzi per scoprire e comprendere i meccanismi di infezione virale, patogenesi e malattia. Allo stesso modo, gli approcci di genetica inversa hanno spianato la strada all'ingegnerizzazione di virus ricombinanti privi di proteine virali per comprendere il loro contributo nella patogenesi virale. Inoltre, sono state utilizzate tecniche di genetica inversa per generare virus ricombinanti che esprimono geni reporter per applicazioni in vitro e in vivo, compresa l'identificazione di approcci profilattici e/o terapeutici per il trattamento delle infezioni virali. Le proteine fluorescenti e bioluminescenti sono i geni reporter più comunemente usati grazie alla loro sensibilità, stabilità e facilità di rilevamento basata sul miglioramento delle nuove tecnologie25,26. In vitro, le proteine fluorescenti hanno dimostrato di servire come opzione migliore per la localizzazione dei virus nelle cellule infette, mentre le luciferasi sono più convenienti per gli studi di quantificazione 27,28,29. In vivo, le luciferasi sono preferite rispetto alle proteine fluorescenti per l'imaging di animali interi, mentre le proteine fluorescenti sono preferite per l'identificazione di cellule infette o l'imaging ex vivo 30,31,32. L'uso di virus ricombinanti che esprimono reporter è servito come un potente strumento per lo studio dei virus in molte famiglie, tra cui, tra gli altri, flavivirus, enterovirus, alfavirus, lentivirus, arenavirus e virus dell'influenza 28,33,34,35,36.
Per superare la necessità di approcci secondari per studiare SARS-CoV-2 e caratterizzare l'infezione da SARS-CoV-2 in tempo reale in vivo, abbiamo generato una riproduzione ricombinante (r)SARS-CoV-2 competente per la replicazione che esprime proteine bioluminescenti (nanoluciferasi, Nluc) o fluorescenti (Venere) utilizzando la nostra genetica inversa basata su cromosomi artificiali batterici (BAC) precedentemente descritta, che viene mantenuta come una singola copia in E. coli al fine di ridurre al minimo la tossicità delle sequenze virali durante la sua propagazione nei batteri37,38. In particolare, rSARS-CoV-2/Nluc e rSARS-CoV-2/Venus hanno mostrato patogenicità simile a rSARS-CoV-2/WT in vivo. L'alto livello di espressione di Venere da rSARS-CoV-2 /Venere ha permesso di rilevare l'infezione virale nei polmoni di topi transgenici K18 hACE2 infetti utilizzando un sistema di imaging in vivo (IVIS)39. I livelli di espressione di Venere si correlavano bene con i titoli virali rilevati nei polmoni, dimostrando la fattibilità dell'uso dell'espressione di Venere come valido surrogato dell'infezione da SARS-CoV-2. Utilizzando rSARS-CoV-2/Nluc, siamo stati in grado di tracciare la dinamica dell'infezione virale in tempo reale e valutare longitudinalmente l'infezione da SARS-CoV-2 in vivo utilizzando lo stesso approccio IVIS nei topi transgenici K18 hACE2.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

La pandemia di coronavirus 2019 (COVID-19) è stata causata dalla sindrome respiratoria acuta grave coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Ad oggi, SARS-CoV-2 è stato responsabile di oltre 242 milioni di infezioni e più di 4,9 milioni di morti in tutto il mondo. Analogamente ad altri virus, lo studio del SARS-CoV-2 richiede l'uso di metodi sperimentali per rilevare la presenza di virus in cellule infette e/o in modelli animali. Per superare questa limitazione, abbiamo generato una ricombinante (r)SARS-CoV-2 competente per la replicazione che esprime proteine bioluminescenti (nanoluciferasi, Nluc) o fluorescenti (Venus). Questi rSARS-CoV-2 che esprimono reporter consentono di tracciare le infezioni virali in vitro e in vivo sulla base dell'espressione dei geni reporter Nluc e Venus. Qui lo studio descrive l'uso di rSARS-CoV-2 / Nluc e rSARS-CoV-2 / Venere per rilevare e tracciare l'infezione da SARS-CoV-2 nell'enzima murino transgenico K18 K18 umano di conversione dell'angiotensina 2 (hACE2) precedentemente descritto utilizzando sistemi di imaging in vivo (IVIS). Questo rSARS-CoV-2/Nluc e rSARS-CoV-2/Venus mostrano patogenicità rSARS-CoV-2/WT-like e replicazione virale in vivo. È importante sottolineare che l'espressione di Nluc e Venere ci consente di tracciare direttamente le infezioni virali in vivo ed ex vivo, nei topi infetti. Questi rSARS-CoV-2/Nluc e rSARS-CoV-2/Venus rappresentano un'opzione eccellente per studiare la biologia di SARS-CoV-2 in vivo, per comprendere l'infezione virale e la malattia COVID-19 associata e per identificare efficaci trattamenti profilattici e / o terapeutici per combattere l'infezione da SARS-CoV-2.

Infezione da rSARS-CoV-2/Nluc in topi transgenici K18 hACE2 (Figure 1 e 2) La Figura 1A mostra una rappresentazione schematica di rSARS-CoV-2/WT (in alto) e rSARS-CoV-2/Nluc (in basso) utilizzati per valutare le infezioni in vivo. La Figura 1B mostra il diagramma di flusso schematico applicato per valutare la dinamica dell'infezione da rSARS-CoV-2/Nluc nei topi transgenici K18 hACE2. Top...

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Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Questo protocollo descrive la dinamica delle infezioni virali utilizzando la luciferasi e la fluorescenza che esprimono la ricombinante (r)SARS-CoV-2 e un sistema di imaging in vivo (IVIS) in topi transgenici K18 hACE2 per superare la necessità di approcci secondari necessari per studiare le infezioni da SARS-CoV-2 in vivo.

Imaging dal vivo e quantificazione dell'infezione virale in topi transgenici K18 hACE2 utilizzando SARS-CoV-2 ricombinante che esprime reporter

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

Il nostro protocollo ha descritto l'uso di SARS-CoV-2 ricombinante fluorescente o luminescente per il rilevamento virale di imaging live in vivo ed ex vivo e il tracciamento virale nel modello murino transgenico ACE2 umano K18 dell'infezione da SARS-CoV-2. Il vantaggio principale di questa tecnica è l'applicazione e la fattibilità del rilevamento e del tracciamento virale per studi in vivo ed ex vivo di SARS-CoV-2 nel modello murino transgenico ACE2 umano K18. L'uso dell'imaging in vivo di SARS-CoV-2 nel modello murino transgenico DI ACE2 umano K18 rappresenta un'opzione eccellente per valutare le terapie per il trattamento dell'infezione da SARS-CoV-2 in vivo.L'implementazione dei reporter SARS-CoV-2 rappresenta un'opzione eccellente per valutare la patogenicità, la replicazione virale e il trofismo in vivo. Per gli studi in vivo con luciferasi che esprime SARS-CoV-2, si raccomanda la rasatura dei topi e l'imaging tempestivo dopo l'iniezione del substrato per migliorare il segnale di bioluminescenza. Iniziare il monitoraggio della bioluminescenza avviando il sistema di imaging in vivo, o IVIS, e impostando i parametri, fare clic sulla modalità immagine su Bioluminescenza, quindi aprire il filtro e impostare il tempo di esposizione su Auto.Quindi, rimuovere un topo già rasato e anestetizzato dalla camera di isolamento e utilizzare un ago calibro 25 per somministrare retro-orbitalmente 100 microlitri del substrato della luciferasi diluiti da 1 a 10 in PBS al topo. Quindi riposizionare il mouse nella camera di isolamento, trasferire la camera di isolamento alla macchina IVIS, dotata di un componente di riscaldamento per prevenire l'ipotermia, e chiudere lo sportello dell'imager IVIS per inizializzare l'imaging selezionando Acquisisci nel programma software. Per analizzare le immagini di bioluminescenza acquisite, utilizzare lo strumento ROI o regione di interesse nel software per designare il segnale preciso e misurare il flusso.Avviare il software di imaging e impostare i parametri. Fare clic sulla modalità immagine su Fluorescenza, impostare l'eccitazione a 500 nanometri e i filtri di emissione a 530 nanometri e impostare il tempo di esposizione su Auto. Condurre necroscopia e asportare i polmoni dai topi.Posizionare i polmoni asportati in una piastra a 6 pozzetti contenente due millilitri di 1X PBS e risciacquare per rimuovere il sangue in eccesso. Disinfettare e pulire gli strumenti chirurgici tra i campioni utilizzando il 70% di etanolo. Dopo aver inizializzato la macchina IVIS, posizionare i polmoni su un foglio nero e separare i tessuti l'uno dall'altro.Quindi posizionare il vassoio all'interno della camera di isolamento all'interno dell'armadio di biosicurezza e quindi trasferire la camera di isolamento all'IVIS. Chiudere la porta dell'imager IVIS e fare clic su Acquisisci per avviare il sistema di imaging. Per analizzare la fluorescenza, utilizzare lo strumento ROI e disegnare ROI attorno a ciascuno dei singoli polmoni.Misurare manualmente ogni ROI e quindi utilizzare i valori medi di efficienza radiante forniti e sottrarre dai topi finti infetti. Una volta completata l'imaging, posizionare i tessuti in un criotubo per il congelamento del ghiaccio secco da conservare a meno 80 gradi Celsius per una successiva elaborazione. Utilizzando il supernato ottenuto dagli omogeneizzati tissutali, eseguire una diluizione seriale decuplicata e infettare monostrati confluenti di cellule Vero E6 con un millilitro di ciascuna diluizione surnatante in triplicati.Lasciare che il virus assorba per un'ora a 37 gradi Celsius in un incubatore di anidride carbonica umidificato al 5%. Una volta fatto, lavare le cellule con un millilitro di 1X PBS e quindi incubare le cellule in due millilitri di mezzi post-infezione contenenti l'1% di agar nell'incubatore di anidride carbonica umidificato al 5% a 37 gradi Celsius per 72 ore. Dopo l'incubazione, inattivare le piastre in formalina tamponata neutra al 10% per 24 ore a quattro gradi Celsius, assicurandosi che l'intera piastra sia sommersa.Estrarre le piastre dal livello di biosicurezza tre e lavare le cellule tre volte con un millilitro di 0,5% Triton X-100 per 10 minuti a temperatura ambiente. Successivamente, bloccare le cellule permeabilizzate con un millilitro di 2,5 albumina sierica bovina o BSA e PBS per un'ora a 37 gradi Celsius seguita da incubazione in un millilitro di un microgrammo per millilitro dell'anticorpo monoclonale cross-reattivo della proteina nucleocapside SARS-CoV 1C7C7 diluito in 2,5 BSA per un'ora a 37 gradi Celsius. Lavare le cellule tre volte con un millilitro di 1X PBS e sviluppare le placche utilizzando i kit di substrato di perossidasi ABC e diaminobenzene, o DAB, secondo le istruzioni del produttore, quindi calcolare i titoli virali come unità di formazione della placca per millilitro.Nello studio, è stato osservato che la nanoluciferasi bioluminescente, o Nluc, era facilmente rilevabile e i topi infettati con rSARS-CoV-2 Nluc, ma non quelli infettati da rSARS-CoV-2 wild-type o finto infettati. Le analisi quantitative hanno mostrato l'intensità di Nluc in diversi giorni dopo l'infezione. Le lesioni grossolane sulla superficie polmonare di topi infetti da rSARS-CoV-2 Nluc erano paragonabili a quelle del gruppo infetto da rSARS-CoV-2 wild-type.Inoltre, i titoli virali rilevati e i topi infetti da rSARS-CoV-2 Nluc erano paragonabili a quelli infettati da rSARS-CoV-2 wild-type in tutti gli organi in diversi giorni dopo l'infezione. Allo stesso tempo, l'attività di Nluc è stata rilevata solo negli organi di topi infetti da rSARS-CoV-2 Nluc. Un gruppo separato di finti topi infetti e infettati da virus è stato monitorato per 12 giorni per i cambiamenti nel peso corporeo e nella sopravvivenza.I topi infettati da rSARS-CoV-2 Nluc e rSARS-CoV-2 wild-type hanno perso fino al 25% del loro peso corporeo e tutti soccombono all'infezione virale tra sette e otto giorni dopo l'infezione. Dopo l'infezione da Venere rSARS-CoV-2, l'espressione di Venere è stata prontamente rilevata in tutti i polmoni da topi infetti da rSARS-CoV-2 Venere, ma non quelli infettati da rSARS-CoV-2 wild-type o finto infetti. Le analisi quantitative hanno mostrato che l'intensità di Venere raggiunge il picco a due giorni dopo l'infezione e diminuisce nel corso dell'infezione e dei polmoni dei topi infetti.Le immagini della superficie polmonare hanno rivelato lesioni grossolane di topi infetti da rSARS-CoV-2 Venere era paragonabile a quella di topi infetti da rSARS-CoV-2 wild-type. Inoltre, l'infezione da rSARS-CoV-2 Venus ha provocato titoli virali comparabili a quelli osservati nei topi infetti da rSARS-CoV-2 wild-type in tutti gli organi. I topi infettati da rSARS-CoV-2 Venus e rSARS-CoV-2 wild-type hanno perso fino al 25% del loro peso corporeo e soccombono all'infezione virale entro il nono giorno dopo l'infezione senza sopravvivenza.I risultati del reporter che esprime SARS-CoV-2 hanno dimostrato di essere validi surrogati dell'infezione virale. Pertanto, ciò potrebbe portare a una rapida identificazione e valutazione delle contromisure per il trattamento dell'infezione da SARS-CoV-2.

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