Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

우리는 COVID-19 전염병 기간 동안 시설을 완전히 운영하고 안전하게 유지하려는 노력에 대해 우리 연구소 (Texas Biomedical Research Institute)의 회원들에게 감사드립니다. 우리는 또한 우리의 프로토콜을 시간 효율적인 방식으로 검토해 주신 IBC(Institutional Biosafety Committee)와 주문(IACUC)에 감사드립니다. 우리는 SARS-CoV 교차 반응성 1C7C7 뉴클레오캡시드 (N) 단백질 모노클로날 항체를 제공해준 마운트 시나이 의과 대학의 토마스 모란 박사에게 감사드립니다. 마르티네즈-소브리도 실험실에서의 SARS-CoV-2 연구는 현재 NIAID/NIH 보조금 RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 및 R43AI165089-01에 의해 지원되고 있습니다. 국방부 (DoD)는 W81XWH2110095 및 W81XWH2110103을 부여합니다. 정밀 치료를위한 샌 안토니오 파트너십; 텍사스 생물 의학 연구소 포럼; 샌 안토니오에있는 텍사스 대학 건강 과학 센터; 샌안토니오 의료 재단; 인플루엔자 병인 및 전염 연구 센터 (CRIPT), NIAID가 자금을 지원하는 인플루엔자 연구 및 대응 우수 센터 (CEIRR, 계약 # 75N93021C00014)에 의해.

K18 hACE2 트랜스제닉 마우스와 관련된 프로토콜은 Texas Biomedical Research Institute (TBRI) Institutional Biosafety Committee (IBC) 및 IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았다. 모든 실험은 국가 연구위원회 (National Research Council)40의 실험실 동물 관리 및 사용 안내서의 권장 사항을 따릅니다. 마우스와 함께 작업 할 때 적절한 개인 보호 장비 (PPE)가 필요합니다.
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이 프로토콜은 생체 내에서 바이러스 감염을 모니터링하기 위해 이러한 rSARS-CoV-2 발현 리포터 유전자를 사용하는 타당성을 입증한다. 두 리포터 발현 재조합 바이러스는 생체 내에서 SARS-CoV-2 감염을 연구하기위한 훌륭한 도구를 제공합니다. 기술된 생체 외 (rSARS-CoV-2/금성) 및 생체내 (rSARS-CoV-2/Nluc) 이미징 시스템은 SARS-CoV-2 감염, 바이러스 병인의 역학을 이해하고 바이?...

중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2 (SARS-CoV-2)는 코로나 비리 대 (Coronaviridae) 계열1의 베타 코로나 바이러스 계통에 속하는 외피, 양성 감각, 단일 가닥 RNA 바이러스입니다. 이 바이러스 군은 알파-, 베타-, 감마-, 델타-코로나바이러스1로 나뉜다. 알파 및 베타 코로나 바이러스는 주로 포유류를 감염시키는 반면, 감마 및 델타 코로나 바이러스는 거의 독점적으로 조류를 감염시킵니다 2. 현재까지 일곱 개의 코로나바이러스(CoV)가 종 장벽을 넘어 인간 코로나바이러스(HCoV)로 등장했다: 두 개의 알파-CoV(HCoV-229E 및 HCoV-NL63)와 5개의 베타-CoV(HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, 중동호흡기 증후군 코로나바이러스[MERS-CoV], SARS-CoV-2)3,4,5,6. SARS-CoV, MERS-CoV 및 SARS-CoV-2는 병원성이 높아 심한 하부 호흡기 감염을 일으킵니다 7. SARS-CoV-2가 출현하기 전에 CoVs에 의해 야기 된 두 가지 전염병 발생이있었습니다 : 2002-2003 년 중국 광동 프로비던스의 SARS-CoV, 약 9.7 %의 치사율 (CFR); 2012 년부터 현재까지 중동의 MERS-CoV와 CFR은 약 34 % 7,8입니다. SARS-CoV-2는 3.4 % -49 % 사이의 전체 CFR을 가지며 기본 조건은 더 높은 CFR 8,9에 기여합니다. SARS-CoV-2는 2019년 12월 중국 우한에서 발견된 이래 전 세계적으로 242백만 명이 넘는 인간 감염과 4백9십만 명 이상의 인간 사망 7,10,11,12명을 담당하고 있습니다. 특히, 2020년 말부터 새로운 SARS-CoV-2 변종(VoC)과 관심 변종(VoI)은 전염 및 항원성 9,13, COVID-19 전염병의 전반적인 방향을 포함한 바이러스 특성에 영향을 미쳤습니다. SARS-CoV-2 감염의 치료를 위해 현재 미국 (미국)은 단 하나뿐입니다. 식품 의약품 안전청 (FDA) 치료 항 바이러스 (렘데시비르) 및 하나의 긴급 사용 허가 (EUA) 약물 (바리시티닙, 렘데시비르와 함께 투여되는)14. 또한 6개의 승인된 EUA 모노클로날 항체가 있다: REGEN-COV (카시리비맙 및 임데비맙, 함께 투여됨), 소트로비맙, 토실리주맙, 바멜라니비맙 및 에테세비맙이 함께 투여된15,16,17,18,19. 현재 FDA가 승인한 예방백신인 화이자-바이오엔테크는 단 하나뿐이며, 다른 두 가지 예방백신(모더나와 얀센)은 20,21,22,23,24유로 승인을 받았다. 그러나 통제되지 않은 감염률과 VoC 및 VoI의 출현으로 SARS-CoV-2는 여전히 인체 건강에 위협이되고 있습니다. 따라서 SARS-CoV-2 감염과 여전히 진행중인 COVID-19 전염병을 통제하기위한 효율적인 예방 및 치료제를 식별하기 위해 새로운 접근법이 시급히 필요합니다.
SARS-CoV-2를 연구하려면 감염된 세포 및 / 또는 검증 된 동물 감염 모델에서 바이러스의 존재를 확인하기위한 힘든 기술과 2 차 접근법이 필요합니다. 역 유전학의 사용은 바이러스 감염의 생물학에서 중요한 질문에 대답하는 재조합 바이러스의 생성을 허용했다. 예를 들어, 역유전학 기술은 바이러스 감염, 병인 및 질병의 메커니즘을 밝히고 이해하는 수단을 제공했습니다. 마찬가지로, 역유전학 접근법은 바이러스 단백질이 부족한 재조합 바이러스를 조작하여 바이러스 병인에 대한 기여도를 이해하는 길을 열었습니다. 또한, 역유전학 기술은 바이러스 감염의 치료를 위한 예방적 및/또는 치료적 접근법을 확인하는 것을 포함하여, 시험관내 및 생체내 응용을 위해 리포터 유전자를 발현하는 재조합 바이러스를 생성하는데 사용되어 왔다. 형광 및 생체발광 단백질은 그들의 민감도, 안정성 및 신기술25,26의 개선에 기초한 용이한 검출로 인해 가장 일반적으로 사용되는 리포터 유전자이다. 시험관 내에서 형광 단백질은 감염된 세포에서 바이러스의 국소화를위한 더 나은 옵션으로 작용하는 것으로 밝혀졌으며 루시페라제는 정량화 연구 27,28,29에 더 편리합니다. 생체 내에서, 루시페라제는 전체 동물 영상화를 위한 형광 단백질보다 선호되는 반면, 형광 단백질은 감염된 세포의 확인 또는 생체외 영상화(30,31,32)에 바람직하다. 리포터 발현 재조합 바이러스의 사용은 플라비바이러스, 엔테로바이러스, 알파바이러스, 렌티바이러스, 아레나바이러스 및 인플루엔자 바이러스28,33,34,35,36을 포함한 많은 패밀리에서 바이러스를 연구하기 위한 강력한 도구로 사용되었다.
SARS-CoV-2를 연구하고 생체 내에서 실시간 SARS-CoV-2 감염을 특성화하기위한 2 차 접근법의 필요성을 극복하기 위해 우리는 이전에 설명 된 박테리아 인공 염색체 (BAC) 기반 역 유전학을 사용하여 생체 발광 (nanoluciferase, Nluc) 또는 형광 (금성) 단백질을 발현하는 복제 적격 재조합 (r) SARS-CoV-2를 생성했습니다. 박테리아37,38에서 그의 전파 동안 바이러스 서열의 독성을 최소화하기 위해. 특히, rSARS-CoV-2/Nluc 및 rSARS-CoV-2/Venus는 생체 내에서 rSARS-CoV-2/WT와 유사한 병원성을 나타냈다. rSARS-CoV-2/Venus로부터의 높은 수준의 금성 발현은 생체내 영상화 시스템(IVIS)39를 사용하여 감염된 K18 hACE2 트랜스제닉 마우스의 폐에서 바이러스 감염을 검출하는 것을 허용하였다. 금성 발현의 수준은 폐에서 검출된 바이러스 역가와 잘 상관관계가 있으며, 이는 SARS-CoV-2 감염의 유효한 대리자로 금성 발현을 사용하는 타당성을 입증하였다. rSARS-CoV-2/Nluc를 사용하여 K18 hACE2 트랜스제닉 마우스에서 동일한 IVIS 접근법을 사용하여 실시간으로 바이러스 감염의 역학을 추적하고 종적으로 생체 내에서 SARS-CoV-2 감염을 종방향으로 평가할 수 있었습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

코로나 바이러스 질병 2019 (COVID-19) 전염병은 심각한 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2 (SARS-CoV-2)에 의해 발생했습니다. 현재까지 SARS-CoV-2는 전 세계적으로 242 백만 명이 넘는 감염과 4.9 백만 명 이상의 사망자를 담당했습니다. 다른 바이러스와 마찬가지로 SARS-CoV-2를 연구하려면 감염된 세포 및 / 또는 동물 모델에서 바이러스의 존재를 탐지하기 위해 실험 방법을 사용해야합니다. 이러한 한계를 극복하기 위해, 우리는 생체발광 (나노루시페라제, Nluc) 또는 형광 (금성) 단백질을 발현하는 복제 적격 재조합 (r) SARS-CoV-2를 생성하였다. 이러한 리포터-발현 rSARS-CoV-2는 Nluc 및 금성 리포터 유전자의 발현에 기초하여 시험관내 및 생체내에서 바이러스 감염을 추적할 수 있게 한다. 여기에서 연구는 앞서 기술한 K18 인간 안지오텐신-전환 효소 2(hACE2) 생체내 영상 시스템(IVIS)을 이용한 감염의 형질전환 마우스 모델에서 SARS-CoV-2 감염을 검출하고 추적하기 위해 rSARS-CoV-2/Nluc 및 rSARS-CoV-2/Venus의 사용을 기술 한다 . 이 rSARS-CoV-2/Nluc 및 rSARS-CoV-2/Venus는 생체 내에서 rSARS-CoV-2/WT와 같은 병원성 및 바이러스 복제를 보여줍니다. 중요하게도, Nluc 및 Venus 발현은 우리가 감염된 마우스에서 생체 내 및 생체외에서 바이러스 감염을 직접 추적할 수 있게 해준다. 이러한 rSARS-CoV-2/Nluc 및 rSARS-CoV-2/Venus는 생체 내에서 SARS-CoV-2의 생물학을 연구하고, 바이러스 감염 및 관련 COVID-19 질병을 이해하고, SARS-CoV-2 감염과 싸우기 위한 효과적인 예방 및/또는 치료 치료법을 식별하는 데 탁월한 옵션을 제공합니다.

K18 hACE2 트랜스제닉 마우스에서의 rSARS-CoV-2/Nluc 감염 (도 1 및 2) 도 1A는 생체내 감염을 평가하기 위해 사용된 rSARS-CoV-2/WT(상단) 및 rSARS-CoV-2/Nluc(하단)의 개략적인 표현을 보여준다. 도 1B는 K18 hACE2 트랜스제닉 마우스에서 rSARS-CoV-2/Nluc 감염 역학을 평가하기 위해 적용된 개략적인 흐름도를 보여준다....

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

이 프로토콜은 생체 내에서 SARS-CoV-2 감염을 연구하는 데 필요한 2차 접근법의 필요성을 극복하기 위해 K18 hACE2 트랜스제닉 마우스에서 루시페라아제 및 형광 발현 재조합 (r)SARS-CoV-2 및 생체내 이미징 시스템 (IVIS)을 사용하는 바이러스 감염의 역학을 기술한다.

리포터 발현 재조합 SARS-CoV-2를 이용한 K18 hACE2 트랜스제닉 마우스에서의 바이러스 감염의 라이브 이미징 및 정량화

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

우리의 프로토콜은 SARS-CoV-2 감염의 K18 인간 ACE2 트랜스제닉 마우스 모델에서 생체내 및 생체외 라이브 이미징 바이러스 검출 및 바이러스 추적을 위한 형광 또는 발광 발현 재조합 SARS-CoV-2의 사용을 기술하였다. 이 기술의 주요 장점은 K18 인간 ACE2 트랜스제닉 마우스 모델에서 SARS-CoV-2의 생체내 및 생체외 연구를 위한 바이러스 검출 및 추적의 적용 및 실현 가능성이다. K18 인간 ACE2 트랜스제닉 마우스 모델에서 SARS-CoV-2의 생체내 영상화의 사용은 생체내에서 SARS-CoV-2 감염의 치료를 위한 치료제를 평가하는 우수한 옵션을 나타낸다.기자 SARS-CoV-2의 구현은 생체 내에서 병원성, 바이러스 복제 및 영양 상태를 평가하는 훌륭한 옵션을 나타냅니다. 루시퍼라아제가 SARS-CoV-2를 발현하는 생체내 연구를 위해, 생쥐를 면도하고 기질 주입 후 신속한 이미징이 생체 발광 신호의 개선을 위해 권장된다. 생체 내 이미징 시스템 또는 IVIS를 시작하고 매개 변수를 설정하고 이미지 모드를 Bioluminescence로 클릭 한 다음 필터를 열고 노출 시간을 Auto로 설정하여 생체 발광 모니터링을 시작하십시오.다음에, 이미 면도되고 마취된 마우스를 분리 챔버로부터 제거하고, 25 게이지 바늘을 사용하여 PBS로 1 내지 10을 희석한 루시퍼라제 기질 100 마이크로리터를 마우스에 역궤도 투여한다. 그런 다음 마우스를 다시 격리 챔버에 넣고 저체온증을 방지하기 위해 가열 구성 요소가 장착 된 IVIS 기계로 격리 챔버를 옮기고 IVIS 이미저 도어를 닫아 소프트웨어 프로그램에서 획득을 선택하여 이미징을 초기화하십시오. 획득한 생체 발광 이미지를 분석하려면 소프트웨어의 ROI 또는 관심 영역 도구를 활용하여 정확한 신호를 지정하고 플럭스를 측정합니다.이미징 소프트웨어를 시작하고 매개변수를 설정합니다. 이미지 모드를 형광으로 클릭하고, 여기를 500나노미터로, 방출 필터를 530나노미터로 설정하고, 노출 시간을 Auto. 괴사검사를 실시하고 마우스에서 폐를 절제합니다.적출된 폐를 1X PBS 2밀리리터가 들어있는 6-웰 플레이트에 놓고 헹구어 과도한 혈액을 제거한다. 70 % 에탄올을 사용하여 샘플 사이의 수술 도구를 소독하고 청소하십시오. IVIS 기계를 초기화 한 후 폐를 검은 색 시트에 놓고 조직을 서로 분리하십시오.그런 다음 트레이를 생물 안전 캐비닛 내부의 격리 챔버 내부에 놓은 다음 격리 챔버를 IVIS로 옮깁니다. IVIS 이미저 도어를 닫고 획득을 클릭하여 이미징 시스템을 시작합니다. 형광을 분석하려면 ROI 도구를 활용하고 각 폐 주위에 ROI를 그립니다.각 ROI를 수동으로 측정 한 다음 주어진 평균 방사 효율 값을 사용하고 모의 감염된 마우스에서 뺍니다. 이미징이 완료되면 조직을 드라이 아이스 동결을위한 냉동 튜브에 넣고 나중에 처리 할 수 있도록 섭씨 영하 80도에 보관하십시오. 조직 균질물로부터 수득된 상등물을 이용하여, 열 배 연속 희석을 수행하고, Vero E6 세포의 합류 단층을 삼중 희석된 각 상청액 희석액의 한 밀리리터로 감염시킨다.바이러스가 가습 된 5 % 이산화탄소 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 한 시간 동안 흡착되도록하십시오. 일단 완료되면, 세포를 1X PBS의 1 밀리리터로 세척한 다음, 세포를 섭씨 37도에서 가습된 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 1%아가를 함유하는 감염 후 배지 2밀리리터에서 72시간 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 플레이트를 섭씨 4도에서 24시간 동안 10% 중성 완충 포르말린으로 불활성화시켜, 전체 플레이트가 침수되도록 한다.플레이트를 생물 안전 수준 3에서 꺼내고 실온에서 10 분 동안 0.5 % Triton X-100 1 밀리리터로 세포를 세 번 씻으십시오. 다음으로, 투과화된 세포를 섭씨 37도에서 1시간 동안 2.5 밀리리터의 소 혈청 알부민 또는 BSA 및 PBS로 차단한 다음, 섭씨 37도에서 1시간 동안 2.5 BSA로 희석된 SARS-CoV 뉴클레오캡시드 단백질 교차반응성 모노클로날 항체 1C7C7을 밀리리터당 1밀리리터의 밀리리터에서 인큐베이션하였다. 1X PBS 1 밀리리터로 세포를 세 번 세척하고 제조업체의 지시에 따라 ABC 및 디아미노벤젠 또는 DAB, 퍼옥시다제 기질 키트를 사용하여 플라크를 개발한 다음, 밀리리터당 플라크 형성 단위로서 바이러스 역가를 계산한다.이 연구에서, 생체발광 나노루시페라제 또는 Nluc가 쉽게 검출되고 rSARS-CoV-2 Nluc에 감염된 마우스가 관찰되었지만, rSARS-CoV-2에 감염된 마우스는 야생형 또는 모의에 감염되지 않았다. 정량적 분석은 감염 후 다른 날에서 Nluc 강도를 보여주었습니다. rSARS-CoV-2 Nluc에 감염된 마우스의 폐 표면에서의 총체적 병변은 rSARS-CoV-2 야생형 감염군의 병변과 필적하였다.추가적으로, 검출된 바이러스 역가 및 rSARS-CoV-2 Nluc 감염 마우스는 감염 후 상이한 날에 모든 기관에서 rSARS-CoV-2 야생형으로 감염된 마우스와 비교되었다. 동시에, Nluc 활성은 rSARS-CoV-2 Nluc 감염 마우스로부터의 장기에서만 검출되었다. 모의 감염 및 바이러스 감염 마우스의 분리된 그룹을 체중 및 생존의 변화에 대해 12일 동안 모니터링하였다.rSARS-CoV-2 Nluc 및 rSARS-CoV-2 야생형에 감염된 마우스는 체중의 최대 25 %를 잃었으며 감염 후 7 일에서 8 일 사이에 바이러스 감염에 굴복했습니다. rSARS-CoV-2 금성 감염 후, 금성 발현은 rSARS-CoV-2 금성에 감염된 마우스로부터 모든 폐에서 쉽게 검출되었지만 rSARS-CoV-2 야생형 또는 모의에 감염된 마우스는 검출되지 않았다. 정량적 분석에 따르면 금성 강도는 감염 후 이틀 만에 최고조에 달하고 감염 과정과 감염된 마우스의 폐에 걸쳐 감소합니다.폐 표면의 이미지는 rSARS-CoV-2 금성에 감염된 마우스의 총체적 병변을 밝혀 rSARS-CoV-2 야생형 감염 마우스의 병변과 비슷했다. 또한, rSARS-CoV-2 금성에 의한 감염은 모든 장기에서 rSARS-CoV-2 야생형에 감염된 마우스에서 관찰된 것과 유사한 바이러스 역가를 초래하였다. rSARS-CoV-2 금성 및 rSARS-CoV-2 야생형에 감염된 마우스는 체중의 최대 25 %를 잃었고 감염 후 아홉 일째까지 바이러스 감염에 굴복했습니다.SARS-CoV-2를 발현하는 기자의 결과는 바이러스 감염의 유효한 대리자로 나타났습니다. 따라서 이는 SARS-CoV-2 감염 치료를위한 대책의 신속한 식별 및 평가로 이어질 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

라이브 호스트에 트렌스 제닉 Leishmania의 기생충의 생체내 이미징에서

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

연구

면역학 및 감염병학

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

재조합 Adeno - 관련 바이러스성 벡터의 생산 및 Titering

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

루시퍼라제-형광 리포터 인플루엔자 바이러스 감염 의 실시간 이미징 및 정량화

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

시투 혼성화에서 면역 RNA-형광을 이용한 SARS-CoV-2의 시각화

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

의사 바이러스 감염의 높은 처리량 형광 화상 진찰을 사용하여 SARS-CoV-2 중화 항체의 검출

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

멀티플렉스 비드 기반 유량 분석 시스템을 위한 신속한 멀티플렉스 듀얼 리포터 IgG 및 IgM SARS-CoV-2 중화 분석

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

HiBiT 기반 바이오 리포터를 사용하여 SARS-CoV-2 수용체 결합 도메인 항체 검출

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

오픈 소스 피펫팅 로봇을 활용한 효율적인 SARS-CoV-2 정량적 역전사효소 PCR 타액 진단 전략

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

중화 분석을 통해 SARS-CoV-2에 대한 체액성 면역 반응을 모니터링하기 위한 분자 도구로서의 유사형 바이러스

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...