Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Vi vil gjerne takke medlemmer ved instituttet vårt (Texas Biomedical Research Institute) for deres innsats for å holde anleggene våre i full drift og trygge under COVID-19-pandemien. Vi vil også takke vår Institutional Biosafety Committee (IBC) og spell (IACUC) for å gjennomgå protokollene våre på en tidseffektiv måte. Vi takker Dr. Thomas Moran ved Icahn School of Medicine på Mount Sinai for å ha gitt SARS-CoV tverrreaktivt 1C7C7 nukleocapsid (N) proteinmonokron antistoff. SARS-CoV-2 forskning i Martinez-Sobridos laboratorium støttes for tiden av NIAID/NIH-tilskuddene RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 og R43AI165089-01; Forsvarsdepartementet (DoD) gir W81XWH2110095 og W81XWH2110103; San Antonio-partnerskapet for presisjonsterapeutisk; Texas Biomedical Research Institute Forum; University of Texas Health Science Center i San Antonio; San Antonio Medical Foundation; og av Center for Research on Influenza Pathogenesis and Transmission (CRIPT), et NIAID-finansiert Senter for fremragende forskning og respons (CEIRR, kontrakt # 75N93021C00014).

Protokoller som involverer K18 hACE2 transgene mus ble godkjent av Texas Biomedical Research Institute (TBRI) Institutional Biosafety Committee (IBC) og Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Alle eksperimenter følger anbefalingene i Veiledning for pleie og bruk av forsøksdyr i Det nasjonale forskningsrådet40. Riktig personlig verneutstyr (PVU) er nødvendig når du arbeider med mus.
1. Bruk av K18 hACE2 transgene mus
<ol><li>Kjøp og...

<ol>
	<li>V'Kovski, P., Kratzel, A., Steiner, S., Stalder, H., Thiel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronavirus+biology+and+replication:+implications+for+SARS-CoV-2.">Coronavirus biology and replication: implications for SARS-CoV-2.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (3), 155-170 (2021).</li><li>Pal, M., Berhanu, G., Desalegn, C., Kandi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus-2+(SARS-CoV-2):+An+update.">Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2): An update.</a> Cureus. 12 (3), 7423 (2020).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+genetic+recombination,+and+pathogenesis+of+coronaviruses.">Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coronaviruses.</a> Trends in Microbiology. 24 (6), 490-502 (2016).</li><li>Cui, J., Li, F., Shi, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+evolution+of+pathogenic+coronaviruses.">Origin and evolution of pathogenic coronaviruses.</a> Nature Reviews Microbiology. 17 (3), 181-192 (2019).</li><li>Lu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+characterisation+and+epidemiology+of+2019+novel+coronavirus:+implications+for+virus+origins+and+receptor+binding.">Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding.</a> Lancet. 395 (10224), 565-574 (2020).</li><li>Evans, J. P., Liu, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+host+factors+in+SARS-CoV-2+entry.">Role of host factors in SARS-CoV-2 entry.</a> Journal of Biological Chemistry. 297 (1), 100847 (2021).</li><li>Petersen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+SARS-CoV-2+with+SARS-CoV+and+influenza+pandemics.">Comparing SARS-CoV-2 with SARS-CoV and influenza pandemics.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (9), 238-244 (2020).</li><li>Alfaraj, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+predictors+of+mortality+of+Middle+East+Respiratory+Syndrome+Coronavirus+(MERS-CoV)+infection:+A+cohort+study.">Clinical predictors of mortality of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV) infection: A cohort study.</a> Travel Medicine and Infectious Disease. 29, 48-50 (2019).</li><li>Harvey, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+variants,+spike+mutations+and+immune+escape.">SARS-CoV-2 variants, spike mutations and immune escape.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (7), 409-424 (2021).</li><li>Dong, E., Du, H., Gardner, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+interactive+web-based+dashboard+to+track+COVID-19+in+real+time.">An interactive web-based dashboard to track COVID-19 in real time.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (5), 533-534 (2020).</li><li>Bar-On, Y. M., Flamholz, A., Phillips, R., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARS-CoV-2+(COVID-19)+by+the+numbers.">ARS-CoV-2 (COVID-19) by the numbers.</a> Elife. 9, 57309 (2020).</li><li>Roussel, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+fear+versus+data.">SARS-CoV-2: fear versus data.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 55 (5), 105947 (2020).</li><li>Scialo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+One+year+in+the+pandemic.+What+have+we+learned,+the+new+vaccine+era+and+the+threat+of+SARS-CoV-2+variants.">SARS-CoV-2: One year in the pandemic. What have we learned, the new vaccine era and the threat of SARS-CoV-2 variants.</a> Biomedicines. 9 (6), 611 (2021).</li><li>. Coronavirus (COVID-19) update: FDA authorizes additional monoclonal antibody for treatment of COVID-19 Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19">https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19</a> (2021)</li><li>Dougan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bamlanivimab+plus+Etesevimab+in+Mild+or+Moderate+Covid-19.">Bamlanivimab plus Etesevimab in Mild or Moderate Covid-19.</a> New England Journal of Medicine. 385 (15), 1382-1392 (2021).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COVID+antibody+treatments+show+promise+for+preventing+severe+disease.">COVID antibody treatments show promise for preventing severe disease.</a> Nature. 591 (7851), 513-514 (2021).</li><li>Tuccori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+the+preclinical+discovery+and+development+of+bamlanivimab+for+the+treatment+of+novel+coronavirus+infection+(COVID-19):+reasons+for+limited+clinical+use+and+lessons+for+the+future.">An overview of the preclinical discovery and development of bamlanivimab for the treatment of novel coronavirus infection (COVID-19): reasons for limited clinical use and lessons for the future.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. , 1-12 (2021).</li><li>Phan, A. T., Gukasyan, J., Arabian, S., Wang, S., Neeki, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergent+inpatient+administration+of+casirivimab+and+imdevimab+antibody+cocktail+for+the+treatment+of+COVID-19+pneumonia.">Emergent inpatient administration of casirivimab and imdevimab antibody cocktail for the treatment of COVID-19 pneumonia.</a> Cureus. 13 (5), 15280 (2021).</li><li>O'Brien, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+REGEN-COV+antibody+combination+in+early+SARS-CoV-2+infection.">Subcutaneous REGEN-COV antibody combination in early SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Beigel, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remdesivir+for+the+treatment+of+Covid-19+-+Final+report.">Remdesivir for the treatment of Covid-19 - Final report.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1813-1826 (2020).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+convalescent+plasma+therapy+on+time+to+clinical+improvement+in+patients+with+severe+and+life-threatening+COVID-19:+A+randomized+clinical+trial.">Effect of convalescent plasma therapy on time to clinical improvement in patients with severe and life-threatening COVID-19: A randomized clinical trial.</a> Journal of the American Medical Association. 324 (5), 460-470 (2020).</li><li>Polack, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+the+BNT162b2+mRNA+Covid-19+vaccine.">Safety and efficacy of the BNT162b2 mRNA Covid-19 vaccine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (27), 2603-2615 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Pfizer-BioNTech+COVID-19+vaccine+-+United+States,+December+2020.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Pfizer-BioNTech COVID-19 vaccine - United States, December 2020.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 69 (50), 1922-1924 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Janssen+COVID-19+vaccine+-+United+States,+February+2021.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Janssen COVID-19 vaccine - United States, February 2021.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 70 (9), 329-332 (2021).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emission+spectra+of+bioluminescent+reporters+and+interaction+with+mammalian+tissue+determine+the+sensitivity+of+detection+in+vivo.">Emission spectra of bioluminescent reporters and interaction with mammalian tissue determine the sensitivity of detection in vivo.</a> Journal of Biomedical Optics. 10 (4), 41210 (2005).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescent+and+bioluminescent+bireporter+Influenza+A+Virus+to+evaluate+viral+infections.">A novel fluorescent and bioluminescent bireporter Influenza A Virus to evaluate viral infections.</a> Journal of Virology. 93 (10), 00032 (2019).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-competent+fluorescent-expressing+influenza+B+virus.">Replication-competent fluorescent-expressing influenza B virus.</a> Virus Research. 213, 69-81 (2016).</li><li>Welsh, D. K., Noguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bioluminescence+imaging.">Cellular bioluminescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (8), (2012).</li><li>Tran, V., Moser, L. A., Poole, D. S., Mehle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+real-time+in+vivo+imaging+of+an+influenza+reporter+virus+reveals+dynamics+of+replication+and+spread.">Highly sensitive real-time in vivo imaging of an influenza reporter virus reveals dynamics of replication and spread.</a> Journal of Virology. 87 (24), 13321-13329 (2013).</li><li>Schoggins, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+reporter+viruses+reveal+viral+dynamics+in+interferon+receptor-deficient+mice+and+sensitivity+to+interferon+effectors+in+vitro.">Dengue reporter viruses reveal viral dynamics in interferon receptor-deficient mice and sensitivity to interferon effectors in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (36), 14610-14615 (2012).</li><li>Luker, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+and+therapy+in+living+mice.">Noninvasive bioluminescence imaging of herpes simplex virus type 1 infection and therapy in living mice.</a> Journal of Virology. 76 (23), 12149-12161 (2002).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rapid+antiviral+screening+assay+based+on+eGFP+reporter+virus+of+Mayaro+virus.">Development of a rapid antiviral screening assay based on eGFP reporter virus of Mayaro virus.</a> Antiviral Research. 168, 82-90 (2019).</li><li>Kirui, J., Freed, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+validation+of+a+highly+sensitive+bioluminescent+HIV-1+reporter+vector+that+simplifies+measurement+of+virus+release.">Generation and validation of a highly sensitive bioluminescent HIV-1 reporter vector that simplifies measurement of virus release.</a> Retrovirology. 17 (1), 12 (2020).</li><li>Shang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+eGFP+enterovirus+71+for+antiviral+screening.">Development and characterization of a stable eGFP enterovirus 71 for antiviral screening.</a> Antiviral Research. 97 (2), 198-205 (2013).</li><li>Zou, G., Xu, H. Y., Qing, M., Wang, Q. Y., Shi, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+luciferase+dengue+virus+for+high-throughput+screening.">Development and characterization of a stable luciferase dengue virus for high-throughput screening.</a> Antiviral Research. 91 (1), 11-19 (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+SARS-CoV-2+from+a+single+bacterial+artificial+chromosome.">Rescue of SARS-CoV-2 from a single bacterial artificial chromosome.</a> mBio. 11 (5), 02168 (2020).</li><li>Avila-Perez, G., Park, J. G., Nogales, A., Almazan, F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+recombinant+Zika+virus+from+a+bacterial+artificial+chromosome+cDNA+clone.">Rescue of recombinant Zika virus from a bacterial artificial chromosome cDNA clone.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59537 (2019).</li><li>Chiem, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bifluorescent-based+assay+for+the+identification+of+neutralizing+antibodies+against+SARS-CoV-2+variants+of+concern+in+vitro+and+in+vivo.">A bifluorescent-based assay for the identification of neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 variants of concern in vitro and in vivo.</a> Journal of Virology. , (2021).</li><li>Committee for the update of the guide for the care and use of laboratory animals., Institute for laboratory animal research (U.S) &amp; National Academies Press (U.S.). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals.+8th+edn.">Guide for the care and use of laboratory animals. 8th edn.</a> National Research Council (US). , (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+SARS-CoV-2+infection+dynamic+in+vivo+using+reporter-expressing+viruses.">Analysis of SARS-CoV-2 infection dynamic in vivo using reporter-expressing viruses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (41), (2021).</li></ol>

Denne protokollen viser muligheten for å bruke disse rSARS-CoV-2 uttrykkende reportergenene for å overvåke virusinfeksjoner in vivo. Begge reporter-uttrykkende rekombinante virus gir et utmerket verktøy for å studere SARS-CoV-2 infeksjoner in vivo. De beskrevne ex vivo (rSARS-CoV-2/Venus) og in vivo (rSARS-CoV-2/Nluc) bildesystemer representerer et utmerket alternativ for å forstå dynamikken i SARS-CoV-2 infeksjon, viral patogenese og å identifisere infiserte celler / organer p...

Alvorlig akutt respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) er et innhyllet, positivt sans, enkeltstrenget RNA-virus som tilhører Betacoronavirus-slekten i Coronaviridae-familien 1. Denne virale familien er delt inn i Alpha-, Beta-, Gamma- og Delta-coronavirus1. Alfa- og betacoronavirus smitter hovedsakelig pattedyr, mens Gamma- og Deltacoronavirus infiserer nesten utelukkende fugler2. Til dags dato har syv koronavirus (CoV) krysset artsbarrierer og dukket opp som menneskelige koronavirus (HCoV): to alfa-COVs (HCoV-229E og HCoV-NL63) og fem beta-coVs (HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, Midtøsten respiratorisk syndrom coronavirus [MERS-CoV], og SARS-CoV-2)3,4,5,6. SARS-CoV, MERS-CoV og SARS-CoV-2 er svært patogene, noe som forårsaker alvorlig nedre luftveisinfeksjon7. Før fremveksten av SARS-CoV-2 var det to epidemiske utbrudd forårsaket av COVs: SARS-CoV i Guangdong Providence, Kina, fra 2002-2003, med en dødsrate (CFR) på ca. 9,7%; og MERS-CoV i Midtøsten fra 2012 til i dag, med en CFR på ca 34%7,8. SARS-CoV-2 har en samlet CFR mellom 3,4% -49%, med underliggende forhold som bidrar til en høyere CFR 8,9. Siden oppdagelsen i desember 2019, i Wuhan, Kina, har SARS-CoV-2 vært ansvarlig for over 242 millioner menneskelige infeksjoner og mer enn 4,9 millioner menneskelige dødsfall over hele verden 7,10,11,12. Spesielt siden slutten av 2020 har nye SARS-CoV-2-varianter av bekymring (VoC) og varianter av interesse (VoI) påvirket viruskarakteristikker, inkludert overføring og antigenisitet 9,13, og den generelle retningen av COVID-19-pandemien. For behandling av SARS-CoV-2-infeksjoner er det for tiden bare ett USA (USA) Food and Drug Administration (FDA) terapeutisk antiviral (remdesivir) og en Emergency Use Authorization (EUA) legemiddel (baricitinib, som skal administreres i kombinasjon med remdesivir)14. Det er også 6 godkjente EUA monoklonale antistoffer: REGEN-COV (casirivimab og imdevimab, administrert sammen), sotrovimab, tocilizumab og bamlanivimab og etesevimab administrert sammen 15,16,17,18,19. Det er for tiden bare en FDA-godkjent profylaktisk vaksine, Pfizer-BioNTech, og to andre profylaktiske vaksiner (Moderna og Janssen) har blitt EUA godkjent 20,21,22,23,24. Men med den ukontrollerte infeksjonsraten og fremveksten av VoC og VoI utgjør SARS-CoV-2 fortsatt en trussel mot menneskers helse. Derfor er det nødvendig med nye tilnærminger for å identifisere effektiv profylaktikk og terapeutisk behandling for å kontrollere SARS-CoV-2-infeksjon og den fortsatt pågående COVID-19-pandemien.
Å studere SARS-CoV-2 krever arbeidskrevende teknikker og sekundære tilnærminger for å identifisere tilstedeværelsen av viruset i infiserte celler og / eller validerte dyremodeller av infeksjon. Bruken av omvendt genetikk har gjort det mulig for generering av rekombinante virus å svare på viktige spørsmål i biologien til virusinfeksjoner. For eksempel har omvendte genetikkteknikker gitt midler til å avdekke og forstå mekanismene for virusinfeksjon, patogenese og sykdom. På samme måte har omvendt genetikk tilnærminger banet vei for å konstruere rekombinante virus som mangler virusproteiner for å forstå deres bidrag i viral patogenese. I tillegg har omvendte genetikkteknikker blitt brukt til å generere rekombinante virus som uttrykker reportergener for in vitro- og in vivo-applikasjoner, inkludert identifisering av profylaktiske og / eller terapeutiske tilnærminger for behandling av virusinfeksjoner. Fluorescerende og bioluminescerende proteiner er de mest brukte reportergenene på grunn av deres følsomhet, stabilitet og enkle deteksjon basert på forbedring av ny teknologi 25,26. In vitro, fluorescerende proteiner har vist seg å tjene som et bedre alternativ for lokalisering av virus i infiserte celler, mens luciferaser er mer praktiske for kvantifiseringsstudier 27,28,29. In vivo, luciferaser foretrekkes fremfor fluorescerende proteiner for hele dyreavbildning, mens fluorescerende proteiner foretrekkes for identifisering av infiserte celler eller ex vivo-avbildning 30,31,32. Bruken av reporter-uttrykkende rekombinante virus har fungert som et kraftig verktøy for studiet av virus i mange familier, inkludert blant annet flavivirus, enterovirus, alfavirus, lentivirus, arenavirus og influensavirus 28,33,34,35,36.
For å overvinne behovet for sekundære tilnærminger for å studere SARS-CoV-2 og karakterisere sars-cov-2-infeksjon i sanntid, vi har generert rekombinante rekombinante (r)SARS-CoV-2 som uttrykker bioluminescent (nanoluciferase, Nluc) eller fluorescerende (Venus) proteiner ved hjelp av våre tidligere beskrevne bakterielle kunstige kromosomer (BAC)-basert omvendt genetikk, som opprettholdes som en enkelt kopi i E. coli for å minimere toksisitet av virussekvenser under forplantning i bakterier37,38. Spesielt viste rSARS-CoV-2/Nluc og rSARS-CoV-2/Venus rSARS-CoV-2/WT-lignende patogenisitet in vivo. Det høye nivået av Venus-uttrykk fra rSARS-CoV-2/Venus tillot å oppdage virusinfeksjon i lungene til infiserte K18 hACE2 transgene mus ved hjelp av et in vivo-bildesystem (IVIS)39. Nivåene av Venus-uttrykk korrelerte godt med virale titere som ble oppdaget i lungene, og demonstrerte muligheten for å bruke Venus-uttrykk som en gyldig surrogat av SARS-CoV-2-infeksjon. Ved hjelp av rSARS-CoV-2/Nluc var vi i stand til å spore dynamikken i virusinfeksjon i sanntid og i lengderetningen vurdere SARS-CoV-2 infeksjon in vivo ved hjelp av samme IVIS-tilnærming i K18 hACE2 transgene mus.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

Koronavirussykdommen 2019 (COVID-19) pandemien har vært forårsaket av alvorlig akutt respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Til dags dato har SARS-CoV-2 vært ansvarlig for over 242 millioner infeksjoner og mer enn 4,9 millioner dødsfall over hele verden. I likhet med andre virus krever studier av SARS-CoV-2 bruk av eksperimentelle metoder for å oppdage tilstedeværelsen av virus i infiserte celler og / eller i dyremodeller. For å overvinne denne begrensningen genererte vi rekombinante rekombinante (r)SARS-CoV-2 som uttrykker bioluminescent (nanoluciferase, Nluc) eller fluorescerende (Venus) proteiner. Disse reporter-uttrykkende rSARS-CoV-2 tillater sporing av virusinfeksjoner in vitro og in vivo basert på uttrykket av Nluc og Venus reporter gener. Her beskriver studien bruk av rSARS-CoV-2/Nluc og rSARS-CoV-2/Venus for å oppdage og spore SARS-CoV-2-infeksjon i det tidligere beskrevne K18 humane angiotensinkonverterende enzymet 2 (hACE2) transgen musemodell av infeksjon ved hjelp av in vivo avbildningssystemer (IVIS). Denne rSARS-CoV-2/Nluc og rSARS-CoV-2/Venus viser rSARS-CoV-2/WT-lignende patogenisitet og viral replikasjon in vivo. Viktigst, Nluc og Venus uttrykk tillater oss å direkte spore virusinfeksjoner in vivo og ex vivo, i infiserte mus. Disse rSARS-CoV-2/Nluc og rSARS-CoV-2/Venus representerer et utmerket alternativ for å studere biologien til SARS-CoV-2 in vivo, for å forstå virusinfeksjon og tilhørende COVID-19 sykdom, og for å identifisere effektive profylaktiske og/ eller terapeutiske behandlinger for å bekjempe SARS-CoV-2-infeksjon.

rSARS-CoV-2/Nluc-infeksjon hos K18 hACE2 transgene mus (figur 1 og 2) Figur 1A viser en skjematisk representasjon av rSARS-CoV-2/WT (øverst) og rSARS-CoV-2/Nluc (nederst) som brukes til å vurdere infeksjoner in vivo. Figur 1B viser det skjematiske flytskjemaet som brukes til å vurdere rSARS-CoV-2/Nluc infeksjonsdynamikk hos K18 hACE2 transgene mus. Fire til seks uker gamle kvinnelige ...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Denne protokollen beskriver dynamikken i virusinfeksjoner ved hjelp av luciferase- og fluorescens-uttrykkende rekombinante (r)SARS-CoV-2 og et in vivo-bildebehandlingssystem (IVIS) i K18 hACE2 transgene mus for å overvinne behovet for sekundære tilnærminger som kreves for å studere SARS-CoV-2 infeksjoner in vivo.

Levende avbildning og kvantifisering av virusinfeksjon hos K18 hACE2 transgene mus ved hjelp av Reporter-Expressing Rekombinant SARS-CoV-2

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

Vår protokoll beskrev bruken av fluorescerende eller luminescerende uttrykkende rekombinant SARS-CoV-2 for in vivo og ex vivo live imaging viral deteksjon og viral sporing i K18 human ACE2 transgen mus modell av SARS-CoV-2 infeksjon. Den største fordelen med denne teknikken er anvendelse og gjennomførbarhet av viral deteksjon og sporing for in vivo- og ex vivo-studier av SARS-CoV-2 i K18 human ACE2 transgen musmodell. Bruken av in vivo-avbildningen av SARS-CoV-2 i K18 human ACE2 transgen musmodell representerer et utmerket alternativ for å evaluere terapeutisk behandling av SARS-CoV-2 infeksjon in vivo.Implementering av reportere SARS-CoV-2 representerer et utmerket alternativ for å vurdere patogenitet, viral replikasjon og trofisk in vivo. For in vivo-studier med luciferase som uttrykker SARS-CoV-2, anbefales barbering av musene og rask avbildning etter substratinjeksjon for å forbedre bioluminescenssignalet. Start bioluminescensovervåking ved å starte in vivo-bildesystemet, eller IVIS, og sett opp parametrene, klikk på bildemodusen til Bioluminescence og åpne deretter filteret og sett eksponeringstiden til Auto.Deretter fjerner du en allerede barbert og bedøvet mus fra isolasjonskammeret og bruker en 25 gauge nål til å retro-orbitalt administrere 100 mikroliter av luciferase substrat fortynnet 1 til 10 i PBS til musen. Plasser deretter musen tilbake i isolasjonskammeret, overfør isolasjonskammeret til IVIS-maskinen, som er utstyrt med en varmekomponent for å forhindre hypotermi, og lukk IVIS-bildeluken for å initialisere bildebehandling ved å velge Acquire i programvaren. For å analysere de oppkjøpte bioluminescensbildene, bruk ROI eller region av interesseverktøy i programvaren for å betegne det nøyaktige signalet og måle fluxen.Start bildebehandlingsprogramvaren og konfigurer parameterne. Klikk på bildemodus til Fluorescence, sett eksitasjon på 500 nanometer og utslippsfiltre på 530 nanometer, og sett eksponeringstiden til Auto. Utfør nekrokopi og slukk lunger fra mus.Legg utskilte lunger i en 6-brønns plate som inneholder to milliliter 1X PBS og skyll for å fjerne overflødig blod. Desinfiser og rengjør kirurgiverktøy mellom prøvene ved hjelp av 70% etanol. Etter initialisering av IVIS-maskinen, plasser lungene på et svart ark og skille vevet fra hverandre.Plasser deretter brettet inne i isolasjonskammeret inne i biosikkerhetsskapet og overfør deretter isolasjonskammeret til IVIS. Lukk IVIS-imager-døren og klikk på Acquire for å starte bildesystemet. For å analysere fluorescens, bruk ROI-verktøyet og tegn ROIer rundt hver av de enkelte lungene.Mål hver avkastning manuelt, og bruk deretter de gjennomsnittlige radianteffektivitetsverdiene gitt og trekk fra de mock-infiserte musene. Når avbildningen er fullført, plasserer du vevet i en kryotube for tørrisfrysing for å lagre på minus 80 grader Celsius for senere behandling. Ved hjelp av de overnaturlige oppnådd fra vevet homogenater, utføre ti ganger seriell fortynning og infisere confluent monolayers av Vero E6 celler med en milliliter av hver overnatant fortynning i triplikater.La viruset adsorbere i en time ved 37 grader Celsius i en fuktet 5% karbondioksidinkubator. Når du er ferdig, vask cellene med en milliliter 1X PBS og inkuber deretter cellene i to milliliter postinfeksjonsmedier som inneholder 1% agar i den fuktede 5% karbondioksidinkubatoren ved 37 grader Celsius i 72 timer. Etter inkubasjonen inaktiverer du platene i 10% nøytral bufret formalin i 24 timer ved fire grader Celsius, og sikrer at hele platen er nedsenket.Ta plater ut av biosikkerhet nivå tre og vask cellene tre ganger med en milliliter på 0,5% Triton X-100 i 10 minutter ved romtemperatur. Deretter blokkerer du de permeabiliserte cellene med en milliliter 2,5 bovint serumalbumin eller BSA og PBS i en time ved 37 grader Celsius etterfulgt av inkubasjon i en milliliter av en mikro milliliter av SARS-CoV nukleocapsid protein kryssreaktivt monoklonalt antistoff 1C7C7 fortynnet i 2,5 BSA i en time ved 37 grader Celsius. Vask cellene tre ganger med en milliliter 1X PBS og utvikle plakkene ved hjelp av ABC og diaminobenzen, eller DAB, peroksidase substratsett i henhold til produsentens instruksjoner, og beregn deretter virale titere som plakkdannende enheter per milliliter.I studien ble det observert at den bioluminescerende nanoluciferase, eller Nluc, lett ble oppdaget og mus smittet med rSARS-CoV-2 Nluc, men ikke de som er smittet med rSARS-CoV-2 wild-type eller mock infisert. De kvantitative analysene viste Nluc-intensitet på ulike dager etter infeksjon. Grove lesjoner på lungeoverflaten av mus smittet med rSARS-CoV-2 Nluc var sammenlignbare med de i rSARS-CoV-2 villtype infisert gruppe.I tillegg var virale titere oppdaget og rSARS-CoV-2 Nluc infiserte mus sammenlignbare med de som var smittet med rSARS-CoV-2 wild-type i alle organer på forskjellige dager etter infeksjon. Samtidig ble Nluc aktivitet bare oppdaget i organene fra rSARS-CoV-2 Nluc infiserte mus. En egen gruppe mock infiserte og virus infiserte mus ble overvåket i 12 dager for endringer i kroppsvekt og overlevelse.Mus smittet med rSARS-CoV-2 Nluc og rSARS-CoV-2 villtype mistet opptil 25% av kroppsvekten og alle bukker under for virusinfeksjon mellom syv til åtte dager etter infeksjon. Etter rSARS-CoV-2 Venus infeksjon, Venus uttrykk ble lett oppdaget i alle lunger fra mus infisert med rSARS-CoV-2 Venus, men ikke de som er smittet med rSARS-CoV-2 wild-type eller mock infisert. De kvantitative analysene viste at Venus intensitet topper seg på to dager etter infeksjon og avtar i løpet av infeksjonen og lungene til infiserte mus.Bilder av lungeoverflaten avslørte grove lesjoner av mus infisert med rSARS-CoV-2 Venus var sammenlignbare med rSARS-CoV-2 villtype infiserte mus. Også infeksjon med rSARS-CoV-2 Venus resulterte i sammenlignbare virale titere med de som ble observert hos mus som er smittet med rSARS-CoV-2 wild-type i alle organer. Musene smittet med rSARS-CoV-2 Venus og rSARS-CoV-2 villtype mistet opptil 25% av kroppsvekten og bukker under for virusinfeksjon ved dag ni etter infeksjon uten overlevelse.Resultatene fra reporter som uttrykker SARS-CoV-2 har vist seg å være gyldige surrogater av virusinfeksjon. Dette kan dermed føre til rask identifisering og evaluering av mottiltak for behandling av SARS-CoV-2-infeksjon.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

Produksjon og Titering av rekombinant Adeno-assosiert virale vektorer

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

En luciferase-fluorescerende reporter influensa virus for Live Imaging og kvantifisering av viral infeksjon

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

Visualisering av SARS-CoV-2 ved hjelp av Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

Påvisning av SARS-CoV-2 Nøytraliserende antistoffer ved bruk av fluorescerende avbildning av pseudovirusinfeksjon med høy gjennomstrømning

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

En rask, Multiplex Dual Reporter IgG og IgM SARS-CoV-2 nøytraliseringsanalyse for et Multiplexed Bead-basert flytanalysesystem

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

Påvisning av SARS-CoV-2 reseptorbindende domeneantistoff ved hjelp av en HiBiT-basert bioreporter

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

Effektiv SARS-CoV-2 kvantitativ omvendt transkripsjon PCR spytt diagnostisk strategi ved hjelp av åpen kildekode pipettering roboter

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

Pseudotypede virus som et molekylært verktøy for å overvåke humorale immunresponser mot SARS-CoV-2 via nøytraliseringsanalyse

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...