Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Gostaríamos de agradecer aos membros do nosso instituto (Texas Biomedical Research Institute) por seus esforços em manter nossas instalações totalmente operacionais e seguras durante a pandemia COVID-19. Gostaríamos também de agradecer ao nosso Comitê de Biossegurança Institucional (IBC) e ao Feitiço (IACUC) por revisar nossos protocolos de forma eficiente. Agradecemos ao Dr. Thomas Moran da Escola de Medicina Icahn do Monte Sinai por fornecer o anticorpo monoclonal de proteína sars-CoV 1C7C7 (N) proteína. A pesquisa SARS-CoV-2 no laboratório de Martinez-Sobrido é atualmente apoiada pelas bolsas NIAID/NIH RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 e R43AI165089-01; o Departamento de Defesa (DoD) concede W81XWH2110095 e W81XWH2110103; a Parceria de San Antonio para a Precision Therapeutic; o Fórum do Instituto de Pesquisa Biomédica do Texas; o Centro de Ciência da Saúde da Universidade do Texas em San Antonio; a Fundação Médica de San Antonio; e pelo Centro de Pesquisa em Patogênese e Transmissão da Influenza (CRIPT), um Centro de Excelência para Pesquisa e Resposta à Influenza (CEIRR, contrato nº 75N93021C00014).

Protocolos envolvendo camundongos transgênicos K18 hACE2 foram aprovados pelo Comitê de Biossegurança Institucional (IBC) do Texas Biomedical Research Institute (TBRI) e pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC). Todos os experimentos seguem as recomendações do Guia de Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do Conselho Nacional de Pesquisa40. Os EPI (Personal Protection Equipment, equipamento de proteção individual) apropriados para trabalhar com camundongos.
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Este protocolo demonstra a viabilidade do uso desses rSARS-CoV-2 expressando genes repórteres para monitorar infecções virais in vivo. Ambos os vírus recombinantes que expressam repórteres fornecem uma excelente ferramenta para estudar infecções pelo SARS-CoV-2 in vivo. Os sistemas de imagem ex vivo (rSARS-CoV-2/Venus) e in vivo (rSARS-CoV-2/Nluc) representam uma excelente opção para entender a dinâmica da infecção pelo SARS-CoV-2, a patogênese viral e identificar células...

Síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2) é um vírus RNA envolto, de sentido positivo e de uma única cadeia que pertence à linhagem Betacoronavírus na família Coronaviridae 1. Esta família viral é dividida em Alpha-, Beta-, Gamma-, e Delta-coronavirus1. Alfa e Betacoronavírus infectam principalmente mamíferos, enquanto Gamma e Deltacoronavirus infectam quase exclusivamente aves2. Até o momento, sete coronavírus (CoV) cruzaram barreiras de espécies e emergiram como coronavírus humanos (HCoV): dois alfa-CoVs (HCoV-229E e HCoV-NL63) e cinco beta-CoVs (HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, Síndrome Respiratória do Oriente Médio coronavírus [MERS-CoV], e SARS-CoV-2)3,4,5,6. SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2 são altamente patogênicos, causando infecção grave do trato respiratório inferior7. Antes do surgimento do SARS-CoV-2, houve dois surtos epidêmicos causados por CoVs: SARS-CoV em Guangdong Providence, China, de 2002 a 2003, com uma taxa de letalidade por casos (CFR) de cerca de 9,7%; e MERS-CoV no Oriente Médio de 2012 até hoje, com uma CFR de cerca de 34%7,8. O SARS-CoV-2 possui uma CFR global entre 3,4%-49%, com condições subjacentes contribuindo para uma CFR mais altade 8,9. Desde sua descoberta em dezembro de 2019, em Wuhan, China, o SARS-CoV-2 foi responsável por mais de 242 milhões de infecções humanas e mais de 4,9 milhões de mortes humanas em todo o mundo, 7,10,11,12. Notavelmente, desde o final de 2020, novas variantes sars-CoV-2 de preocupação (VoC) e variantes de interesse (VoI) têm impactado características do vírus, incluindo transmissão e antigenicidade 9,13, e a direção geral da pandemia COVID-19. Para o tratamento de infecções por SARS-CoV-2, atualmente existe apenas um Estados Unidos (EUA) Food and Drug Administration (FDA) antiviral (remdesivir) e um medicamento de Autorização de Uso de Emergência (EUA) (baricitinib, a ser administrado em combinação com remdesivir)14. Há também 6 anticorpos monoclonais EUA aprovados: REGEN-COV (casirivimab e imdevimab, administrados juntos), sotrovimab, tocilizumabe, e bamlanivimab e etesevimab administrados juntos 15,16,17,18,19. Atualmente, apenas uma vacina profilática aprovada pela FDA, a Pfizer-BioNTech, e duas outras vacinas profiláticas (Moderna e Janssen) foram aprovadas pela EUA 20,21,22,23,24. No entanto, com a taxa de infecção descontrolada e o surgimento de VoC e VoI, o SARS-CoV-2 ainda representa uma ameaça à saúde humana. Portanto, novas abordagens são urgentemente necessárias para identificar profiláticas eficientes e terapêuticas para controlar a infecção pelo SARS-CoV-2 e a pandemia COVID-19 ainda em curso.
Estudar o SARS-CoV-2 requer técnicas laboriosas e abordagens secundárias para identificar a presença do vírus em células infectadas e/ou modelos animais validados de infecção. O uso da genética reversa permitiu que a geração de vírus recombinantes respondesse a questões importantes na biologia das infecções virais. Por exemplo, técnicas de genética reversa forneceram meios para descobrir e entender os mecanismos de infecção viral, patogênese e doenças. Da mesma forma, abordagens genéticas reversas abriram caminho para projetar vírus recombinantes sem proteínas virais para entender sua contribuição na patogênese viral. Além disso, técnicas de genética reversa têm sido utilizadas para gerar vírus recombinantes expressando genes repórteres para aplicações in vitro e in vivo, incluindo a identificação de abordagens profiláticas e/ou terapêuticas para o tratamento de infecções virais. Proteínas fluorescentes e bioluminescentes são os genes repórteres mais comumente usados devido à sua sensibilidade, estabilidade e fácil detecção com base na melhoria das novas tecnologias25,26. In vitro, as proteínas fluorescentes têm sido mostradas como uma melhor opção para a localização de vírus em células infectadas, enquanto as luciferases são mais convenientes para estudos de quantificação 27,28,29. In vivo, as luciferases são preferidas em vez de proteínas fluorescentes para imagens animais inteiras, enquanto as proteínas fluorescentes são preferidas para a identificação de células infectadas ou ex vivo imaging 30,31,32. O uso de vírus recombinantes que expressam repórteres tem servido como uma poderosa ferramenta para o estudo de vírus em muitas famílias, incluindo, entre outros, flavivírus, enterovírus, alfavírus, lentivírus, arenavírus e vírus da gripe 28,33,34,35,36.
Para superar a necessidade de abordagens secundárias para estudar SARS-CoV-2 e caracterizar a infecção em tempo real sars-CoV-2 in vivo, geramos recombinação competente para replicação (r)SARS-CoV-2 que expressa proteínas bioluminescentes (nanoluciferase, Nluc) ou fluorescentes (Vênus) usando nossas genéticas reversas baseadas em cromossomos artificiais bacterianos (BAC), que são mantidas como uma única cópia em E. a fim de minimizar a toxicidade das sequências de vírus durante sua propagação em bactérias37,38. Notavelmente, rSARS-CoV-2/Nluc e rSARS-CoV-2/Venus mostraram patogenicidade em forma de rSARS-CoV-2/WT in vivo. O alto nível de expressão de Vênus a partir de rSARS-CoV-2/Vênus permitiu detectar infecção viral nos pulmões de camundongos transgênicos K18 hACE2 infectados usando um sistema de imagem in vivo (IVIS)39. Os níveis de expressão de Vênus correlacionavam-se bem com os títulos virais detectados nos pulmões, demonstrando a viabilidade de usar a expressão de Vênus como um substituto válido da infecção por SARS-CoV-2. Utilizando a infecção rSARS-CoV-2/Nluc, pudemos rastrear a dinâmica da infecção viral em tempo real e avaliar longitudinalmente a infecção pelo SARS-CoV-2 in vivo usando a mesma abordagem IVIS em camundongos transgênicos K18 hACE2.

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			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

A pandemia da doença coronavírus 2019 (COVID-19) foi causada por síndrome respiratória aguda grave coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Até o momento, o SARS-CoV-2 foi responsável por mais de 242 milhões de infecções e mais de 4,9 milhões de mortes em todo o mundo. Semelhante a outros vírus, estudar o SARS-CoV-2 requer o uso de métodos experimentais para detectar a presença de vírus em células infectadas e/ou em modelos animais. Para superar essa limitação, geramos proteínas recombinantes competentes para replicação (r)SARS-CoV-2 que expressa proteínas bioluminescentes (nanoluciferase, Nluc) ou fluorescentes (Vênus). Estes rSARS-CoV-2 que expressam repórteres permitem rastrear infecções virais in vitro e in vivo com base na expressão dos genes de repórteres de Nluc e Vênus. Aqui, o estudo descreve o uso de rSARS-CoV-2/Nluc e rSARS-CoV-2/Venus para detectar e rastrear a infecção pelo SARS-CoV-2 no modelo de infecção transgênica K18(IVIS) da enzima de conversão de angiotensina humana anteriormente descrita. Este rSARS-CoV-2/Nluc e rSARS-CoV-2/Venus mostram rSARS-CoV-2/WT-like patogenicidade e replicação viral in vivo. É importante ressaltar que a expressão de Niuc e Vênus nos permite rastrear diretamente infecções virais in vivo e ex vivo, em camundongos infectados. Estes rSARS-CoV-2/Nluc e rSARS-CoV-2/Venus representam uma excelente opção para estudar a biologia do SARS-CoV-2 in vivo, para entender a infecção viral e a doença COVID-19 associada, e identificar tratamentos profiláticos e/ou terapêuticos eficazes para combater a infecção pelo SARS-CoV-2.

rSARS-CoV-2/Infecção por Niuc em camundongos transgênicos K18 hACE2 (Figuras 1 e 2) A Figura 1A mostra uma representação esquemática do rSARS-CoV-2/WT (superior) e rSARS-CoV-2/Nluc (inferior) utilizado para avaliar infecções in vivo. A Figura 1B mostra o fluxograma esquemático aplicado para avaliar a dinâmica da infecção rSARS-CoV-2/Nluc em camundongos transgênicos K18 hACE2...

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Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Este protocolo descreve a dinâmica das infecções virais usando recombinação expressante (r)SARS-CoV-2 e um sistema de imagem in vivo (IVIS) em camundongos transgênicos K18 hACE2 para superar a necessidade de abordagens secundárias necessárias para estudar infecções sars-cov-2 in vivo.

Imagem ao vivo e quantificação da infecção viral em K18 hACE2 Camundongos transgênicos usando o recombinante SARS-CoV-2

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

Nosso protocolo descreveu o uso de SARS-CoV-2 recombinante fluorescente ou luminescente para detecção viral in vivo e ex vivo e rastreamento viral no modelo de camundongo transgênico ACE2 humano K18 da infecção sars-CoV-2. A principal vantagem dessa técnica é a aplicação e viabilidade da detecção e rastreamento viral para estudos in vivo e ex vivo de SARS-CoV-2 no modelo de camundongo transgênico ACE2 humano K18. O uso da imagem in vivo do SARS-CoV-2 no modelo de camundongo transgênico humano ACE2 K18 representa uma excelente opção para avaliar a terapêutica para o tratamento da infecção por SARS-CoV-2 in vivo.A implementação dos repórteres SARS-CoV-2 representa uma excelente opção para avaliar patogenicidade, replicação viral e trofema in vivo. Para estudos in vivo com luciferase expressando SARS-CoV-2, raspar os camundongos e prontas imagens após a injeção de substrato é recomendado para melhorar o sinal de bioluminescência. Inicie o monitoramento da bioluminescência iniciando o sistema de imagem in vivo, ou IVIS, e configurando os parâmetros, clique no modo de imagem para Bioluminescência e abra o filtro e defina o tempo de exposição ao Auto.Em seguida, remova um rato já raspado e anestesiado da câmara de isolamento e use uma agulha de calibre 25 para administrar retro-orbitalmente 100 microliters do substrato de luciferase diluído de 1 a 10 em PBS para o mouse. Em seguida, coloque o mouse de volta para a câmara de isolamento, transfira a câmara de isolamento para a máquina IVIS, que é equipada com um componente de aquecimento para evitar hipotermia, e feche a porta do imager IVIS para inicializar a imagem selecionando a Acquire no programa de software. Para analisar as imagens adquiridas de bioluminescência, utilize o ROI ou a ferramenta região de interesse no software para designar o sinal preciso e medir o fluxo.Inicie o software de imagem e configure os parâmetros. Clique no modo de imagem para Fluorescência, defina excitação em 500 nanômetros e filtros de emissão em 530 nanômetros e ajuste o tempo de exposição a Auto. Realize necroscopia e excise pulmões de camundongos.Coloque os pulmões excisados em uma placa de 6 poços contendo dois mililitros de 1X PBS e enxágue para remover o excesso de sangue. Desinfeta e ferramentas de cirurgia limpa entre as amostras usando 70% de etanol. Depois de inicializar a máquina IVIS, coloque os pulmões em uma folha preta e separe os tecidos um do outro.Em seguida, coloque a bandeja dentro da câmara de isolamento dentro do armário de biossegurança e, em seguida, transfira a câmara de isolamento para o IVIS. Feche a porta do imager IVIS e clique em Adquirir para iniciar o sistema de imagem. Para analisar a fluorescência, utilize a ferramenta ROI e desenhe ROIs em torno de cada um dos pulmões individuais.Meça cada ROI manualmente e, em seguida, use os valores médios de eficiência radiante dados e subtraia dos ratos infectados por simulação. Uma vez que a imagem esteja completa, coloque os tecidos em um criobotube para congelamento de gelo seco para armazenar a menos 80 graus Celsius para processamento posterior. Utilizando o supernato obtido a partir dos homogeneizadores teciduais, realize diluição serial dez vezes maior e infecte monocamadas confluentes de células Vero E6 com um mililitro de cada diluição sobrenante em triplicados.Deixe o vírus adsorb por uma hora a 37 graus Celsius em uma incubadora umidificada de 5% de dióxido de carbono. Uma vez feito, lave as células com um mililitro de 1X PBS e, em seguida, incubar as células em dois mililitros de mídia pós-infecção contendo 1% de ágar na incubadora de dióxido de carbono umidificada a 37 graus Celsius por 72 horas. Após a incubação, inative as placas em formalina tamponada 10% neutra por 24 horas a quatro graus Celsius, garantindo que toda a placa esteja submersa.Tire as placas do nível de biossegurança três e lave as células três vezes com um mililitro de 0,5% Triton X-100 por 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, bloqueie as células permeabilizadas com um mililitro de 2,5 gêmontos bovinos albumina ou BSA e PBS por uma hora a 37 graus Celsius seguido de incubação em um mililitro de um micrograma por mililitro da proteína nucleocapsida SARS-CoV anticorpo monoclonal interativo 1C7C7 diluído em 2,5 BSA por uma hora a 37 graus Celsius. Lave as células três vezes com um mililitro de 1X PBS e desenvolva as placas usando o ABC e diaminobenzeno, ou DAB, kits de substrato peroxidase de acordo com as instruções do fabricante, em seguida, calcule os títulos virais como unidades formando placas por mililitro.No estudo, observou-se que a nanoluciferase bioluminescente, ou Niuc, foi facilmente detectada e os camundongos infectados com o niuc rSARS-CoV-2, mas não aqueles infectados com rSARS-CoV-2 selvagem ou infectados simulados. As análises quantitativas mostraram intensidade de Niuc em dias diferentes após a infecção. Lesões brutas na superfície pulmonar de camundongos infectados com rSARS-CoV-2 Niuc foram comparáveis às do grupo infectado do tipo selvagem rSARS-CoV-2.Além disso, os títulos virais detectados e os camundongos infectados por RSARS-CoV-2 Niuc foram comparáveis aos infectados com rSARS-CoV-2 em todos os órgãos em dias diferentes após a infecção. Ao mesmo tempo, a atividade de Nluc só foi detectada nos órgãos de camundongos infectados por RSARS-CoV-2 Niuc. Um grupo separado de camundongos infectados por simulados e infectados por vírus foi monitorado por 12 dias para mudanças no peso e na sobrevivência do corpo.Camundongos infectados com rSARS-CoV-2 Niuc e rSARS-CoV-2 tipo selvagem perderam até 25% de seu peso corporal e todos sucumbem à infecção viral entre sete a oito dias após a infecção. Após a infecção por Vênus rSARS-CoV-2, a expressão de Vênus foi prontamente detectada em todos os pulmões de camundongos infectados com rSARS-CoV-2 Vênus, mas não aqueles infectados com rSARS-CoV-2 selvagem ou simulado infectado. As análises quantitativas mostraram que a intensidade de Vênus atinge picos de dois dias após a infecção e diminui ao longo da infecção e dos pulmões de camundongos infectados.Imagens da superfície pulmonar revelaram lesões brutas de camundongos infectados com rSARS-CoV-2 Vênus era comparável à de camundongos infectados do tipo selvagem rSARS-CoV-2. Além disso, a infecção por rSARS-CoV-2 Vênus resultou em títulos virais comparáveis aos observados em camundongos infectados com rSARS-CoV-2 tipo selvagem em todos os órgãos. Os camundongos infectados com rSARS-CoV-2 Venus e rSARS-CoV-2 wild-type perderam até 25% de seu peso corporal e sucumbiram à infecção viral até o nono dia pós-infecção sem sobrevivência.Os resultados do repórter que expressa SARS-CoV-2 mostraram-se substitutos válidos da infecção viral. Assim, isso poderia levar à rápida identificação e avaliação de contramedidas para o tratamento da infecção pelo SARS-CoV-2.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo de imagens de parasitas Leishmania transgênicas em um host ao vivo

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Imunologia e Infecção

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

Produção e titulação de adeno-associados recombinantes Vetores Virais

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

Um luciferase-vírus da gripe do repórter fluorescente para A imagem latente viva e a quantificação da infecção viral

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

Visualização de SARS-CoV-2 usando Imuno RNA-Fluorescence In Situ Hibridização

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

Detecção de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 usando imagens fluorescentes de alto rendimento da infecção por pseudovírus

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

Um teste de neutralização rápido e multiplex dual reporter IgG e IgM SARS-CoV-2 para um sistema de análise de fluxo baseado em contas multiplexadas

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

Detecção de anticorpo de domínio de ligação receptor sars-cov-2 usando um biorelato de domínio baseado em HiBiT

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

Eficiente SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizando robôs de pipetação de código aberto

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

Vírus pseudotipados como uma ferramenta molecular para monitorar respostas imunes humorais contra SARS-CoV-2 via ensaio de neutralização

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...