Name: live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

COVID-19 salgını sırasında tesislerimizi tamamen çalışır durumda ve güvenli tutma çabaları için enstitümüzdeki (Texas Biomedical Research Institute) üyelere teşekkür ederiz. Ayrıca, protokollerimizi zaman açısından verimli bir şekilde gözden geçirdikleri için Kurumsal Biyogüvenlik Komitemize (IBC) ve spell'e (IACUC) teşekkür ederiz. Sina Dağı'ndaki Icahn Tıp Fakültesi'nden Dr. Thomas Moran'a SARS-CoV çapraz reaktif 1C7C7 nükleokapsid (N) protein monoklonal antikorunu sağladığı için teşekkür ederiz. Martinez-Sobrido'nun laboratuvarındaki SARS-CoV-2 araştırması şu anda NIAID / NIH hibeleri RO1AI161363-01, RO1AI161175-01A1 ve R43AI165089-01 tarafından desteklenmektedir; Savunma Bakanlığı (DoD) W81XWH2110095 ve W81XWH2110103'ü verir; Precision Therapeutic için San Antonio Ortaklığı; Teksas Biyomedikal Araştırma Enstitüsü Forumu; San Antonio'daki Teksas Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi; San Antonio Tıp Vakfı; ve NIAID tarafından finanse edilen İnfluenza Araştırma ve Müdahale Mükemmeliyet Merkezi (CEIRR, sözleşme # 75N93021C00014) tarafından finanse edilen İnfluenza Patogenezi ve İletimi Araştırma Merkezi (CRIPT) tarafından.

K18 hACE2 transgenik fareleri içeren protokoller, Teksas Biyomedikal Araştırma Enstitüsü (TBRI) Kurumsal Biyogüvenlik Komitesi (IBC) ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Tüm deneyler, Ulusal Araştırma Konseyi40'ın Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'ndaki önerileri takip eder. Farelerle çalışırken uygun Kişisel Koruma Ekipmanı (KKD) gereklidir.
1. K18 hACE2 transgenik f...

<ol>
	<li>V'Kovski, P., Kratzel, A., Steiner, S., Stalder, H., Thiel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronavirus+biology+and+replication:+implications+for+SARS-CoV-2.">Coronavirus biology and replication: implications for SARS-CoV-2.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (3), 155-170 (2021).</li><li>Pal, M., Berhanu, G., Desalegn, C., Kandi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus-2+(SARS-CoV-2):+An+update.">Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2): An update.</a> Cureus. 12 (3), 7423 (2020).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+genetic+recombination,+and+pathogenesis+of+coronaviruses.">Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coronaviruses.</a> Trends in Microbiology. 24 (6), 490-502 (2016).</li><li>Cui, J., Li, F., Shi, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+evolution+of+pathogenic+coronaviruses.">Origin and evolution of pathogenic coronaviruses.</a> Nature Reviews Microbiology. 17 (3), 181-192 (2019).</li><li>Lu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+characterisation+and+epidemiology+of+2019+novel+coronavirus:+implications+for+virus+origins+and+receptor+binding.">Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding.</a> Lancet. 395 (10224), 565-574 (2020).</li><li>Evans, J. P., Liu, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+host+factors+in+SARS-CoV-2+entry.">Role of host factors in SARS-CoV-2 entry.</a> Journal of Biological Chemistry. 297 (1), 100847 (2021).</li><li>Petersen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+SARS-CoV-2+with+SARS-CoV+and+influenza+pandemics.">Comparing SARS-CoV-2 with SARS-CoV and influenza pandemics.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (9), 238-244 (2020).</li><li>Alfaraj, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+predictors+of+mortality+of+Middle+East+Respiratory+Syndrome+Coronavirus+(MERS-CoV)+infection:+A+cohort+study.">Clinical predictors of mortality of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV) infection: A cohort study.</a> Travel Medicine and Infectious Disease. 29, 48-50 (2019).</li><li>Harvey, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+variants,+spike+mutations+and+immune+escape.">SARS-CoV-2 variants, spike mutations and immune escape.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (7), 409-424 (2021).</li><li>Dong, E., Du, H., Gardner, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+interactive+web-based+dashboard+to+track+COVID-19+in+real+time.">An interactive web-based dashboard to track COVID-19 in real time.</a> Lancet Infectious Diseases. 20 (5), 533-534 (2020).</li><li>Bar-On, Y. M., Flamholz, A., Phillips, R., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ARS-CoV-2+(COVID-19)+by+the+numbers.">ARS-CoV-2 (COVID-19) by the numbers.</a> Elife. 9, 57309 (2020).</li><li>Roussel, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+fear+versus+data.">SARS-CoV-2: fear versus data.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 55 (5), 105947 (2020).</li><li>Scialo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2:+One+year+in+the+pandemic.+What+have+we+learned,+the+new+vaccine+era+and+the+threat+of+SARS-CoV-2+variants.">SARS-CoV-2: One year in the pandemic. What have we learned, the new vaccine era and the threat of SARS-CoV-2 variants.</a> Biomedicines. 9 (6), 611 (2021).</li><li>. Coronavirus (COVID-19) update: FDA authorizes additional monoclonal antibody for treatment of COVID-19 Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19">https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-additional-monoclonal-antibody-treatment-covid-19</a> (2021)</li><li>Dougan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bamlanivimab+plus+Etesevimab+in+Mild+or+Moderate+Covid-19.">Bamlanivimab plus Etesevimab in Mild or Moderate Covid-19.</a> New England Journal of Medicine. 385 (15), 1382-1392 (2021).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COVID+antibody+treatments+show+promise+for+preventing+severe+disease.">COVID antibody treatments show promise for preventing severe disease.</a> Nature. 591 (7851), 513-514 (2021).</li><li>Tuccori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+the+preclinical+discovery+and+development+of+bamlanivimab+for+the+treatment+of+novel+coronavirus+infection+(COVID-19):+reasons+for+limited+clinical+use+and+lessons+for+the+future.">An overview of the preclinical discovery and development of bamlanivimab for the treatment of novel coronavirus infection (COVID-19): reasons for limited clinical use and lessons for the future.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. , 1-12 (2021).</li><li>Phan, A. T., Gukasyan, J., Arabian, S., Wang, S., Neeki, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergent+inpatient+administration+of+casirivimab+and+imdevimab+antibody+cocktail+for+the+treatment+of+COVID-19+pneumonia.">Emergent inpatient administration of casirivimab and imdevimab antibody cocktail for the treatment of COVID-19 pneumonia.</a> Cureus. 13 (5), 15280 (2021).</li><li>O'Brien, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+REGEN-COV+antibody+combination+in+early+SARS-CoV-2+infection.">Subcutaneous REGEN-COV antibody combination in early SARS-CoV-2 infection.</a> medRxiv. , (2021).</li><li>Beigel, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remdesivir+for+the+treatment+of+Covid-19+-+Final+report.">Remdesivir for the treatment of Covid-19 - Final report.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1813-1826 (2020).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+convalescent+plasma+therapy+on+time+to+clinical+improvement+in+patients+with+severe+and+life-threatening+COVID-19:+A+randomized+clinical+trial.">Effect of convalescent plasma therapy on time to clinical improvement in patients with severe and life-threatening COVID-19: A randomized clinical trial.</a> Journal of the American Medical Association. 324 (5), 460-470 (2020).</li><li>Polack, F. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+the+BNT162b2+mRNA+Covid-19+vaccine.">Safety and efficacy of the BNT162b2 mRNA Covid-19 vaccine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (27), 2603-2615 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Pfizer-BioNTech+COVID-19+vaccine+-+United+States,+December+2020.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Pfizer-BioNTech COVID-19 vaccine - United States, December 2020.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 69 (50), 1922-1924 (2020).</li><li>Oliver, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advisory+committee+on+immunization+practices'+interim+recommendation+for+use+of+Janssen+COVID-19+vaccine+-+United+States,+February+2021.">The advisory committee on immunization practices' interim recommendation for use of Janssen COVID-19 vaccine - United States, February 2021.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 70 (9), 329-332 (2021).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emission+spectra+of+bioluminescent+reporters+and+interaction+with+mammalian+tissue+determine+the+sensitivity+of+detection+in+vivo.">Emission spectra of bioluminescent reporters and interaction with mammalian tissue determine the sensitivity of detection in vivo.</a> Journal of Biomedical Optics. 10 (4), 41210 (2005).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescent+and+bioluminescent+bireporter+Influenza+A+Virus+to+evaluate+viral+infections.">A novel fluorescent and bioluminescent bireporter Influenza A Virus to evaluate viral infections.</a> Journal of Virology. 93 (10), 00032 (2019).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-competent+fluorescent-expressing+influenza+B+virus.">Replication-competent fluorescent-expressing influenza B virus.</a> Virus Research. 213, 69-81 (2016).</li><li>Welsh, D. K., Noguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bioluminescence+imaging.">Cellular bioluminescence imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (8), (2012).</li><li>Tran, V., Moser, L. A., Poole, D. S., Mehle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+sensitive+real-time+in+vivo+imaging+of+an+influenza+reporter+virus+reveals+dynamics+of+replication+and+spread.">Highly sensitive real-time in vivo imaging of an influenza reporter virus reveals dynamics of replication and spread.</a> Journal of Virology. 87 (24), 13321-13329 (2013).</li><li>Schoggins, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+reporter+viruses+reveal+viral+dynamics+in+interferon+receptor-deficient+mice+and+sensitivity+to+interferon+effectors+in+vitro.">Dengue reporter viruses reveal viral dynamics in interferon receptor-deficient mice and sensitivity to interferon effectors in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (36), 14610-14615 (2012).</li><li>Luker, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+and+therapy+in+living+mice.">Noninvasive bioluminescence imaging of herpes simplex virus type 1 infection and therapy in living mice.</a> Journal of Virology. 76 (23), 12149-12161 (2002).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rapid+antiviral+screening+assay+based+on+eGFP+reporter+virus+of+Mayaro+virus.">Development of a rapid antiviral screening assay based on eGFP reporter virus of Mayaro virus.</a> Antiviral Research. 168, 82-90 (2019).</li><li>Kirui, J., Freed, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+validation+of+a+highly+sensitive+bioluminescent+HIV-1+reporter+vector+that+simplifies+measurement+of+virus+release.">Generation and validation of a highly sensitive bioluminescent HIV-1 reporter vector that simplifies measurement of virus release.</a> Retrovirology. 17 (1), 12 (2020).</li><li>Shang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+eGFP+enterovirus+71+for+antiviral+screening.">Development and characterization of a stable eGFP enterovirus 71 for antiviral screening.</a> Antiviral Research. 97 (2), 198-205 (2013).</li><li>Zou, G., Xu, H. Y., Qing, M., Wang, Q. Y., Shi, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+stable+luciferase+dengue+virus+for+high-throughput+screening.">Development and characterization of a stable luciferase dengue virus for high-throughput screening.</a> Antiviral Research. 91 (1), 11-19 (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+SARS-CoV-2+from+a+single+bacterial+artificial+chromosome.">Rescue of SARS-CoV-2 from a single bacterial artificial chromosome.</a> mBio. 11 (5), 02168 (2020).</li><li>Avila-Perez, G., Park, J. G., Nogales, A., Almazan, F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+recombinant+Zika+virus+from+a+bacterial+artificial+chromosome+cDNA+clone.">Rescue of recombinant Zika virus from a bacterial artificial chromosome cDNA clone.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59537 (2019).</li><li>Chiem, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bifluorescent-based+assay+for+the+identification+of+neutralizing+antibodies+against+SARS-CoV-2+variants+of+concern+in+vitro+and+in+vivo.">A bifluorescent-based assay for the identification of neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 variants of concern in vitro and in vivo.</a> Journal of Virology. , (2021).</li><li>Committee for the update of the guide for the care and use of laboratory animals., Institute for laboratory animal research (U.S) &amp; National Academies Press (U.S.). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals.+8th+edn.">Guide for the care and use of laboratory animals. 8th edn.</a> National Research Council (US). , (2011).</li><li>Ye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+SARS-CoV-2+infection+dynamic+in+vivo+using+reporter-expressing+viruses.">Analysis of SARS-CoV-2 infection dynamic in vivo using reporter-expressing viruses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (41), (2021).</li></ol>

Bu protokol, viral enfeksiyonları in vivo izlemek için muhabir genlerini eksprese eden bu rSARS-CoV-2'yi kullanmanın fizibilitesini göstermektedir. Her iki muhabir eksprese eden rekombinant virüs, SARS-CoV-2 enfeksiyonlarını in vivo olarak incelemek için mükemmel bir araç sağlar. Tanımlanan ex vivo (rSARS-CoV-2/Venüs) ve in vivo (rSARS-CoV-2/Nluc) görüntüleme sistemleri, SARS-CoV-2 enfeksiyonunun dinamiklerini, viral patogenezi anlamak ve viral enfeksiyondan sonra farkl...

Şiddetli akut solunum sendromu koronavirüs 2 (SARS-CoV-2), Coronaviridae ailesindeki Betacoronavirus soyuna ait zarflı, pozitif anlamlı, tek sarmallı bir RNA virüsüdür1. Bu viral aile Alfa, Beta, Gama ve Delta-koronavirüs1'e ayrılmıştır. Alfa ve Betakoronavirüsler esas olarak memelileri enfekte ederken, Gama ve Deltakoronavirüs neredeyse sadece kuşları enfekte eder2. Bugüne kadar, yedi koronavirüs (CoV) tür bariyerlerini aştı ve insan koronavirüsleri (HCoV) olarak ortaya çıktı: iki alfa-CoVs (HCoV-229E ve HCoV-NL63) ve beş beta-CoVs (HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, Orta Doğu solunum sendromu koronavirüs [MERS-CoV] ve SARS-CoV-2) 3,4,5,6. SARS-CoV, MERS-CoV ve SARS-CoV-2 oldukça patojeniktir ve ciddi alt solunum yolu enfeksiyonuna neden olur7. SARS-CoV-2'nin ortaya çıkmasından önce, CoV'lerin neden olduğu iki salgın salgın vardı: 2002-2003 yılları arasında Çin'in Guangdong Providence kentinde SARS-CoV, vaka ölüm oranı (CFR) yaklaşık% 9.7; ve 2012'den günümüze kadar Orta Doğu'da MERS-CoV, yaklaşık% 34'lük bir CFR ile 7,8. SARS-CoV-2, genel CFR'nin% 3.4 ila% 49 arasında bir CFR'ye sahiptir ve altta yatan koşullar daha yüksek bir CFR 8,9'a katkıda bulunur. SARS-CoV-2, Aralık 2019'da Çin'in Wuhan kentinde keşfinden bu yana, dünya çapında 242 milyondan fazla insan enfeksiyonundan ve4,9 milyondan fazla insan ölümünden 7,10,11,12 sorumludur. Özellikle, 2020'nin sonlarından bu yana, yeni SARS-CoV-2 endişe varyantları (VoC) ve ilgi çekici varyantlar (VoI), bulaşma ve antijenite 9,13 ve COVID-19 pandemisinin genel yönü dahil olmak üzere virüs özelliklerini etkilemiştir. SARS-CoV-2 enfeksiyonlarının tedavisi için şu anda sadece bir Amerika Birleşik Devletleri (ABD) bulunmaktadır. Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) terapötik antiviral (remdesivir) ve bir Acil Kullanım İzni (EUA) ilacı (baricitinib, remdesivir ile kombinasyon halinde uygulanacak)14. Ayrıca 6 onaylı EUA monoklonal antikoru vardır: REGEN-COV (birlikte uygulanan casirivimab ve imdevimab), sotrovimab, tocilizumab ve bamlanivimab ve etesevimab birlikte uygulanır 15,16,17,18,19. Şu anda sadece bir FDA onaylı profilaktik aşı olan Pfizer-BioNTech ve diğer iki profilaktik aşı (Moderna ve Janssen) EUA onaylı 20,21,22,23,24 olmuştur. Bununla birlikte, kontrolsüz enfeksiyon oranı ve VoC ve VoI'nin ortaya çıkmasıyla SARS-CoV-2 hala insan sağlığı için bir tehdit oluşturmaktadır. Bu nedenle, SARS-CoV-2 enfeksiyonunu ve halen devam eden COVID-19 pandemisini kontrol etmek için etkili profilaktik ve terapötikleri tanımlamak için acilen yeni yaklaşımlara ihtiyaç vardır.
SARS-CoV-2'yi incelemek, enfekte hücrelerde ve / veya doğrulanmış hayvan enfeksiyon modellerinde virüsün varlığını tanımlamak için zahmetli teknikler ve ikincil yaklaşımlar gerektirir. Ters genetiğin kullanımı, viral enfeksiyonların biyolojisindeki önemli soruları cevaplamak için rekombinant virüslerin üretilmesine izin vermiştir. Örneğin, ters genetik teknikler viral enfeksiyon, patogenez ve hastalık mekanizmalarını ortaya çıkarmak ve anlamak için araçlar sağlamıştır. Benzer şekilde, ters genetik yaklaşımlar, viral patogenezdeki katkılarını anlamak için viral proteinlerden yoksun rekombinant virüslerin mühendisliğinin yolunu açmıştır. Ek olarak, viral enfeksiyonların tedavisi için profilaktik ve / veya terapötik yaklaşımların belirlenmesi de dahil olmak üzere, in vitro ve in vivo uygulamalar için muhabir genlerini eksprese eden rekombinant virüsler üretmek için ters genetik teknikleri kullanılmıştır. Floresan ve biyolüminesan proteinler, hassasiyetleri, stabiliteleri ve yeni teknolojilerin geliştirilmesine dayanan kolay tespitleri nedeniyle en sık kullanılan muhabir genleridir25,26. In vitro, floresan proteinlerin enfekte hücrelerde virüslerin lokalizasyonu için daha iyi bir seçenek olarak hizmet ettiği gösterilmiştir, lusiferazlar ise niceleme çalışmaları için daha uygundur27,28,29. İn vivo, lusiferazlar tüm hayvan görüntülemede floresan proteinlere göre tercih edilirken, enfekte hücrelerin tanımlanmasında veya ex vivo görüntülemede floresan proteinler tercih edilir30,31,32. Muhabir tarafından ifade edilen rekombinant virüslerin kullanımı, flavivirüsler, enterovirüsler, alfavirüsler, lentivirüsler, arenavirüsler ve influenza virüsleri 28,33,34,35,36 dahil olmak üzere birçok ailedeki virüslerin incelenmesi için güçlü bir araç olarak hizmet etmiştir.
SARS-CoV-2'yi incelemek ve gerçek zamanlı SARS-CoV-2 enfeksiyonunu in vivo olarak karakterize etmek için ikincil yaklaşımlara duyulan ihtiyacın üstesinden gelmek için, E. coli'de tek bir kopya olarak tutulan daha önce tanımlanmış bakteriyel yapay kromozomlarımızı (BAC) tabanlı ters genetiğimizi kullanarak biyolüminesan (nanolusiferaz, Nluc) veya floresan (Venüs) proteinlerini eksprese eden replikasyon yetkin rekombinant (r) SARS-CoV-2 ürettik. bakterilerde yayılması sırasında virüs dizilerinin toksisitesini en aza indirmek için37,38. Özellikle, rSARS-CoV-2 / Nluc ve rSARS-CoV-2 / Venüs, rSARS-CoV-2 / WT benzeri patojeniteyi in vivo olarak göstermiştir. rSARS-CoV-2 / Venüs'ten gelen yüksek Venüs ekspresyonu seviyesi, enfekte K18 hACE2 transgenik farelerin akciğerlerinde viral enfeksiyonun in vivo görüntüleme sistemi (IVIS) 39 kullanılarak tespit edilmesine izin verdi. Venüs ekspresyon seviyeleri, akciğerlerde tespit edilen viral titrelerle iyi korelasyon gösterdi ve Venüs ekspresyonunun SARS-CoV-2 enfeksiyonunun geçerli bir vekili olarak kullanılmasının fizibilitesini gösterdi. rSARS-CoV-2 / Nluc kullanarak, viral enfeksiyonun dinamiklerini gerçek zamanlı olarak izleyebildik ve K18 hACE2 transgenik farelerde aynı IVIS yaklaşımını kullanarak SARS-CoV-2 enfeksiyonunu in vivo olarak uzunlamasına değerlendirebildik.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% Triton X-100</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X198-07</td>
			<td>Store at room temperature (RT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% DEAE-Dextran</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>195133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin solution, neutral buffered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>655-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>African green monkey kidney epithelial cells (Vero E6)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ami HT</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aura Imaging Software 3.2.0</td>
			<td>Spectral Instruments Imaging</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA), 35%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Corning Cellgro</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia gas machine</td>
			<td>Veterinary Anesthesia Systems, Inc.</td>
			<td>VAS 2001R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-050</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four- to six-week-old female K18-hACE2 transgenic mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Version 9.1.0</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MARS Data Analysis Software</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MB10 tablets</td>
			<td>QUIP Laboratories</td>
			<td>MBTAB1.5</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-Glo Luciferase Assay Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N1110</td>
			<td>This reagent is used to measure Nluc activity. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-009-CI</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>PHERAstar FSX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys Evolution homogenizer</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000062-PEVO0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft tissue homogenizing CK14 &#8211; 7 mL</td>
			<td>Bertin Instruments</td>
			<td>P000940-LYSK0-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 EasYFlask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN ABC-HRP Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4002</td>
			<td>ABC kit and DAB Peroxidase Substrate kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging and quantification of viral infection in k18 hace2 transgenic mice using reporter-expressing recombinant sars-cov-2

Koronavirüs hastalığı 2019 (COVID-19) pandemisine şiddetli akut solunum sendromu koronavirüs 2 (SARS-CoV-2) neden olmuştur. SARS-CoV-2, bugüne kadar dünya çapında 242 milyondan fazla enfeksiyondan ve 4,9 milyondan fazla ölümden sorumlu olmuştur. Diğer virüslere benzer şekilde, SARS-CoV-2'yi incelemek, enfekte olmuş hücrelerde ve / veya hayvan modellerinde virüs varlığını tespit etmek için deneysel yöntemlerin kullanılmasını gerektirir. Bu sınırlamanın üstesinden gelmek için, biyolüminesan (nanoluferaz, Nluc) veya floresan (Venüs) proteinlerini eksprese eden replikasyon yetkin rekombinant (r) SARS-CoV-2 ürettik. Bu muhabir eksprese eden rSARS-CoV-2, Nluc ve Venüs muhabir genlerinin ekspresyonuna dayanarak in vitro ve in vivo viral enfeksiyonların izlenmesine izin verir. Burada çalışma, daha önce tarif edilen K18 insan anjiyotensin dönüştürücü enzim 2 (hACE2) transgenik fare enfeksiyon modelinde in vivo görüntüleme sistemleri (IVIS) kullanarak SARS-CoV-2 enfeksiyonunu tespit etmek ve izlemek için rSARS-CoV-2 / Nluc ve rSARS-CoV-2 / Venüs'ün kullanımını açıklamaktadır. Bu rSARS-CoV-2/Nluc ve rSARS-CoV-2/Venüs, rSARS-CoV-2/WT benzeri patojeniteyi ve viral replikasyonu in vivo olarak göstermektedir. Önemli olarak, Nluc ve Venüs ekspresyonu, enfekte farelerde viral enfeksiyonları in vivo ve ex vivo olarak doğrudan izlememize izin verir. Bu rSARS-CoV-2/Nluc ve rSARS-CoV-2/Venüs, SARS-CoV-2'nin biyolojisini in vivo olarak incelemek, viral enfeksiyonu ve ilişkili COVID-19 hastalığını anlamak ve SARS-CoV-2 enfeksiyonuyla mücadele etmek için etkili profilaktik ve/veya terapötik tedavileri tanımlamak için mükemmel bir seçeneği temsil etmektedir.

K18 hACE2 transgenik farelerde rSARS-CoV-2/Nluc enfeksiyonu (Şekil 1 ve 2) Şekil 1A, in vivo enfeksiyonları değerlendirmek için kullanılan rSARS-CoV-2/WT (üstte) ve rSARS-CoV-2/Nluc (altta) modellerinin şematik bir temsilini göstermektedir. Şekil 1B, K18 hACE2 transgenik farelerde rSARS-CoV-2 / Nluc enfeksiyon dinamiklerini değerlendirmek için uygulanan şematik akış şemas...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2 at JoVE.com

Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Bu protokol, SARS-CoV-2 enfeksiyonlarını in vivo olarak incelemek için gereken ikincil yaklaşımların ihtiyacının üstesinden gelmek için K18 hACE2 transgenik farelerde lusiferaz ve floresan eksprese eden rekombinant (r) SARS-CoV-2 ve bir in vivo görüntüleme sistemi (IVIS) kullanarak viral enfeksiyonların dinamiklerini açıklamaktadır.

K18 hACE2 Transgenik Farelerde Viral Enfeksiyonun Canlı Görüntülenmesi ve Raporlayıcı İfade Eden Rekombinant SARS-CoV-2 Kullanılarak Ölçülmesi

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

Protokolümüz, SARS-CoV-2 enfeksiyonunun K18 insan ACE2 transgenik fare modelinde in vivo ve ex vivo canlı görüntüleme viral tespiti ve viral izleme için floresan veya ışıldayan eksprese eden rekombinant SARS-CoV-2'nin kullanımını tanımlamıştır. Bu tekniğin temel avantajı, K18 insan ACE2 transgenik fare modelinde SARS-CoV-2'nin in vivo ve ex vivo çalışmaları için viral tespitin ve izlemenin uygulanması ve fizibilitesinedir. K18 insan ACE2 transgenik fare modelinde SARS-CoV-2'nin in vivo görüntülenmesinin kullanılması, SARS-CoV-2 enfeksiyonunun in vivo tedavisi için terapötikleri değerlendirmek için mükemmel bir seçenek sunmaktadır.SARS-CoV-2 muhabirlerinin uygulanması, patojeniteyi, viral replikasyonu ve trofizmi in vivo olarak değerlendirmek için mükemmel bir seçenek sunmaktadır. SARS-CoV-2'yi eksprese eden lusiferaz ile yapılan in vivo çalışmalar için, biyolüminesans sinyalini iyileştirmek için farelerin tıraş edilmesi ve substrat enjeksiyonundan sonra hızlı görüntüleme yapılması önerilir. İn vivo görüntüleme sistemini veya IVIS'i başlatarak ve parametreleri ayarlayarak biyolüminesans izlemeye başlayın, görüntü modunu Biyolüminesans olarak tıklayın, ardından filtreyi açın ve pozlama süresini Otomatik olarak ayarlayın.Daha sonra, önceden traş edilmiş ve anestezi uygulanmış bir fareyi izolasyon odasından çıkarın ve PBS'de 1 ila 10 oranında seyreltilmiş lusiferaz substratının 100 mikrolitresini fareye retro-orbital olarak uygulamak için 25 gauge iğne kullanın. Ardından fareyi tekrar izolasyon odasına yerleştirin, izolasyon odasını hipotermiyi önlemek için bir ısıtma bileşeni ile donatılmış IVIS makinesine aktarın ve yazılım programında Al'ı seçerek görüntülemeyi başlatmak için IVIS görüntüleyici kapağını kapatın. Elde edilen biyolüminesans görüntülerini analiz etmek için, hassas sinyali belirlemek ve akıyı ölçmek için yazılımdaki ROI veya ilgi alanı aracını kullanın.Görüntüleme yazılımını başlatın ve parametreleri ayarlayın. Görüntü modunu Floresan olarak tıklayın, uyarımı 500 nanometrede ve emisyon filtrelerini 530 nanometrede ayarlayın ve maruz kalma süresini Otomatik olarak ayarlayın.Eksize edilmiş akciğerleri iki mililitre 1X PBS içeren 6 delikli bir plakaya yerleştirin ve fazla kanı çıkarmak için durulayın. %70 etanol kullanarak numuneler arasındaki ameliyat aletlerini dezenfekte edin ve temizleyin. IVIS makinesini başlattıktan sonra, akciğerleri siyah bir tabakaya yerleştirin ve dokuları birbirinden ayırın.Daha sonra tepsiyi biyogüvenlik kabininin içindeki izolasyon odasının içine yerleştirin ve ardından izolasyon odasını IVIS'e aktarın. IVIS görüntüleyici kapağını kapatın ve görüntüleme sistemini başlatmak için Al'a tıklayın. Floresanı analiz etmek için, ROI aracını kullanın ve her bir ciğerin etrafına yatırım getirisi çekin.Her yatırım getirisini manuel olarak ölçün ve ardından verilen ortalama radyant verimlilik değerlerini kullanın ve alay virüslü farelerden çıkarın. Görüntüleme tamamlandıktan sonra, dokuları daha sonra işlenmek üzere eksi 80 santigrat derecede saklamak üzere kuru buz dondurma için bir kriyotüp içine yerleştirin. Doku homojenatlarından elde edilen süpernatı kullanarak, on kat seri seyreltme gerçekleştirin ve Vero E6 hücrelerinin akan tek katmanlarını, üçlü olarak her bir süpernatant seyreltmenin bir mililitresi ile enfekte edin.Virüsün nemlendirilmiş% 5 karbondioksit inkübatöründe 37 santigrat derecede bir saat boyunca adsorbe olmasına izin verin. Bir kez yapıldıktan sonra, hücreleri bir mililitre 1X PBS ile yıkayın ve daha sonra hücreleri, nemlendirilmiş% 5 karbondioksit inkübatöründe 72 saat boyunca 37 santigrat derecede nemlendirilmiş% 1 agar içeren% 1 agar içeren iki mililitre enfeksiyon sonrası ortamda inkübe edin. Kuluçkadan sonra, plakaları% 10 nötr tamponlu formalin içinde 24 saat boyunca dört santigrat derecede inaktive ederek tüm plakanın suya batırılmasını sağlayın.Plakaları biyogüvenlik seviyesi üçten çıkarın ve hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika boyunca bir mililitre% 0.5 Triton X-100 ile üç kez yıkayın. Daha sonra, geçirgenleştirilmiş hücreleri 37 santigrat derecede bir saat boyunca bir mililitre 2.5 sığır serum albümini veya BSA ve PBS ile bloke edin, ardından 37 santigrat derecede bir saat boyunca 2.5 BSA'da seyreltilmiş SARS-CoV nükleokapsid proteini çapraz reaktif monoklonal antikoru 1C7C7'nin mililitre başına bir mililitre bir mikrogramda inkübasyon. Hücreleri bir mililitre 1X PBS ile üç kez yıkayın ve üreticinin talimatlarına göre ABC ve diaminobenzen veya DAB, peroksidaz substrat kitlerini kullanarak plakları geliştirin, ardından viral titreleri mililitre başına plak oluşturan birimler olarak hesaplayın.Çalışmada, biyolüminesan nanolusiferaz veya Nluc'un kolayca tespit edildiği ve farelerin rSARS-CoV-2 Nluc ile enfekte olduğu, ancak rSARS-CoV-2 vahşi tip veya sahte enfekte olanların enfekte olmadığı gözlenmiştir. Kantitatif analizler, enfeksiyon sonrası farklı günlerde Nluc yoğunluğunu gösterdi. rSARS-CoV-2 Nluc ile enfekte olmuş farelerin akciğer yüzeyindeki brüt lezyonlar, rSARS-CoV-2 vahşi tip enfekte gruptakilerle karşılaştırılabilirdi.Ek olarak, viral titreler tespit edildi ve rSARS-CoV-2 Nluc ile enfekte olmuş fareler, enfeksiyondan sonraki farklı günlerde tüm organlarda rSARS-CoV-2 vahşi tipi ile enfekte olanlarla karşılaştırılabilirdi. Aynı zamanda, Nluc aktivitesi sadece rSARS-CoV-2 Nluc ile enfekte olmuş farelerin organlarında tespit edildi. Ayrı bir sahte enfekte ve virüs bulaşmış fare grubu, vücut ağırlığı ve sağkalımındaki değişiklikler için 12 gün boyunca izlendi.rSARS-CoV-2 Nluc ve rSARS-CoV-2 vahşi tipi ile enfekte olmuş fareler vücut ağırlıklarının% 25'ini kaybetti ve hepsi enfeksiyondan yedi ila sekiz gün sonra viral enfeksiyona yenik düştü. rSARS-CoV-2 Venüs enfeksiyonundan sonra, Venüs ekspresyonu, rSARS-CoV-2 Venüs ile enfekte olmuş farelerin tüm akciğerlerinde kolayca tespit edildi, ancak rSARS-CoV-2 vahşi tipi veya sahte enfekte olanlarla enfekte olmayanlar tespit edilmedi. Kantitatif analizler, Venüs yoğunluğunun enfeksiyondan iki gün sonra zirveye ulaştığını ve enfeksiyon ve enfekte farelerin akciğerleri boyunca azaldığını gösterdi.Akciğer yüzeyinin görüntüleri, rSARS-CoV-2 Venüs ile enfekte olmuş farelerin brüt lezyonlarının, rSARS-CoV-2 vahşi tip enfekte farelerinkiyle karşılaştırılabilir olduğunu ortaya koydu. Ayrıca, rSARS-CoV-2 Venüs enfeksiyonu, tüm organlarda rSARS-CoV-2 vahşi tipi ile enfekte olmuş farelerde gözlenenlerle karşılaştırılabilir viral titrelerle sonuçlandı. rSARS-CoV-2 Venüs ve rSARS-CoV-2 vahşi tipi ile enfekte olmuş fareler, vücut ağırlıklarının% 25'ini kaybetti ve enfeksiyon sonrası dokuzuncu günde hayatta kalma olmadan viral enfeksiyona yenik düştü.SARS-CoV-2'yi ifade eden muhabirin sonuçları, viral enfeksiyonun geçerli vekilleri olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, bu, SARS-CoV-2 enfeksiyonunun tedavisi için karşı önlemlerin hızlı bir şekilde tanımlanmasına ve değerlendirilmesine yol açabilir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Canlı bir Host Transgenik Leishmania Parazitlerinin in vivo Imaging

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Production and Titering of Recombinant Adeno-associated Viral Vectors

Rekombinant Adeno ilişkili Viral Vektörlerin Üretimi ve Titering

In recent years recombinant adeno-associated viral vectors (AAV) have become increasingly valuable for in vivo studies in animals, and are also currently ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

Canlı Görüntüleme ve Viral Enfeksiyon Quantification için Bir Luciferase-floresan Reporter Grip Virüsü

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

Immuno RNA-Floresan In Situ Hibridizasyonu Kullanılarak SARS-CoV-2'nin Görselleştirilmesi

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

Psödovirüs Enfeksiyonunun Yüksek Verimli Floresan Görüntülemesi Kullanılarak SARS-CoV-2 Nötralize Edici Antikorların Tespiti

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

Çok Katlı Boncuk Tabanlı Akış Analiz Sistemi için Hızlı, Çok Katlı Çift Muhabir IgG ve IgM SARS-CoV-2 Nötralizasyon Tahlil

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

HiBiT Tabanlı Bir Biyoreporter Kullanılarak SARS-CoV-2 Reseptör Bağlayıcı Etki Alanı Antikorunun Tespiti

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

Açık Kaynak Pipetleme Robotlarını Kullanan Verimli SARS-CoV-2 Kantitatif Ters Transkriptaz PCR Tükürük Teşhis Stratejisi

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

Nötralizasyon Testi Yoluyla SARS-CoV-2'ye Karşı Humoral İmmün Yanıtları İzlemek İçin Moleküler Bir Araç Olarak Psödotiplenmiş Virüsler

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...