Name: establishment of a mouse severe acute pancreatitis model using retrograde injection of sodium taurocholate into the biliopancreatic duct
Uploaded: 2022-04-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Mouse Severe Acute Pancreatitis Model using Retrograde Injection of Sodium Taurocholate into the Biliopancreatic Duct at JoVE.com

Wir sind dankbar für die Unterstützung durch die folgenden Stipendien: ein Translational Research Grant des NCRCH [2020WSA01], ein KJXW Scientific Grant der Suzhou Commission of Health for Young Scholars [KJXW2020002], ein Wissenschafts- und Technologieplan der Stadt Suzhou (SKY2021038 und SKJY2021050), ein Zuschuss aus dem Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions (PAPD) und ein Primary Research & Social Development Plan der Provinz Jiangsu (BE2018659).

Alle Tierversuche wurden von der Tierethikkommission der Universität Soochow genehmigt. Alle chirurgischen Eingriffe wurden unter Vollnarkose durchgeführt. Analgetika wurden nicht verwendet, um Störungen des natürlichen Krankheitsverlaufs nach früheren Literaturen zu vermeiden28,29. Die Genehmigung für die fehlende Analgesie wurde auch von der Tierethikkommission der Soochow-Universität erteilt.
1. Vorbereitung</p...

<ol>
	<li>Lee, P. J., Papachristou, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+acute+pancreatitis.">New insights into acute pancreatitis.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 16 (8), 479-496 (2019).</li><li>Mandalia, A., Wamsteker, E. J., DiMagno, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+understanding+and+managing+acute+pancreatitis.">Recent advances in understanding and managing acute pancreatitis.</a> F1000Research. 7, 959 (2018).</li><li>Banks, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+of+acute+pancreatitis-2012:+revision+of+the+Atlanta+classification+and+definitions+by+international+consensus.">Classification of acute pancreatitis-2012: revision of the Atlanta classification and definitions by international consensus.</a> Gut. 62 (1), 102-111 (2013).</li><li>Munir, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+immunomodulatory+therapy+for+severe+acute+pancreatitis.">Advances in immunomodulatory therapy for severe acute pancreatitis.</a> Immunology Letters. 217, 72-76 (2020).</li><li>Peery, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+gastrointestinal+disease+in+the+United+States:+2012+update.">Burden of gastrointestinal disease in the United States: 2012 update.</a> Gastroenterology. 143 (5), 1179-1187 (2012).</li><li>Hines, O. J., Pandol, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+severe+acute+pancreatitis.">Management of severe acute pancreatitis.</a> BMJ. 367, 6227 (2019).</li><li>James, T. W., Crockett, S. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Orabi, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cluster+of+differentiation+38+(CD38)+mediates+bile+acid-induced+acinar+cell+injury+and+pancreatitis+through+cyclic+ADP-ribose+and+intracellular+calcium+release.">Cluster of differentiation 38 (CD38) mediates bile acid-induced acinar cell injury and pancreatitis through cyclic ADP-ribose and intracellular calcium release.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (38), 27128-27137 (2013).</li><li>Fanczal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPM2-mediated+extracellular+Ca(2+)+entry+promotes+acinar+cell+necrosis+in+biliary+acute+pancreatitis.">TRPM2-mediated extracellular Ca(2+) entry promotes acinar cell necrosis in biliary acute pancreatitis.</a> Journal of Physiology. 598 (6), 1253-1270 (2020).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caffeine+protects+against+experimental+acute+pancreatitis+by+inhibition+of+inositol+1,4,5-trisphosphate+receptor-mediated+Ca2++release.">Caffeine protects against experimental acute pancreatitis by inhibition of inositol 1,4,5-trisphosphate receptor-mediated Ca2+ release.</a> Gut. 66 (2), 301-313 (2017).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dehydrocholic+acid+ameliorates+sodium+taurocholate-induced+acute+biliary+pancreatitis+in+mice.">Dehydrocholic acid ameliorates sodium taurocholate-induced acute biliary pancreatitis in mice.</a> Biology and Pharmaceutical Bulletin. 43 (6), 985-993 (2020).</li><li>Hagiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antithrombin+III+prevents+cerulein-induced+acute+pancreatitis+in+rats.">Antithrombin III prevents cerulein-induced acute pancreatitis in rats.</a> Pancreas. 38 (7), 746-751 (2009).</li><li>Hagiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Danaparoid+sodium+prevents+cerulein-induced+acute+pancreatitis+in+rats.">Danaparoid sodium prevents cerulein-induced acute pancreatitis in rats.</a> Shock. 32 (1), 94-99 (2009).</li><li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taurocholate-induced+pancreatitis:+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice.">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li><li>Barlass, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+worsens+the+severity+and+prevents+pancreatic+regeneration+in+mouse+models+of+acute+pancreatitis.">Morphine worsens the severity and prevents pancreatic regeneration in mouse models of acute pancreatitis.</a> Gut. 67 (4), 600-602 (2018).</li><li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+NSAIDs+treatment+for+acute+pancreatitis+in+animal+studies+and+clinical+trials.">A systematic review of NSAIDs treatment for acute pancreatitis in animal studies and clinical trials.</a> Clinical Research in Hepatology and Gastroenterology. 44, 100002 (2020).</li><li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy.">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals in Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li><li>Junyuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin+protects+against+intestinal+barrier+disruption+and+inflammation+in+acute+necrotizing+pancreatitis+through+TLR4/MyD88/p38MAPK+and+ERS+inhibition.">Quercetin protects against intestinal barrier disruption and inflammation in acute necrotizing pancreatitis through TLR4/MyD88/p38MAPK and ERS inhibition.</a> Pancreatology. 18 (7), 742-752 (2018).</li><li>Waldron, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Orai+Ca(2+)+channel+inhibitor+CM4620+targets+both+parenchymal+and+immune+cells+to+reduce+inflammation+in+experimental+acute+pancreatitis.">The Orai Ca(2+) channel inhibitor CM4620 targets both parenchymal and immune cells to reduce inflammation in experimental acute pancreatitis.</a> Journal of Physiology. 597 (12), 3085-3105 (2019).</li><li>Petersen, O. H., Gerasimenko, J. V., Gerasimenko, O. V., Gryshchenko, O., Peng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+calcium+and+ATP+in+the+physiology+and+pathology+of+the+exocrine+pancreas.">The roles of calcium and ATP in the physiology and pathology of the exocrine pancreas.</a> Physiological Reviews. 101 (4), 1691-1744 (2021).</li></ol>

Das TC-induzierte SAP-Modell ist ein hervorragendes Forschungsinstrument. Wie in dieser Studie gezeigt, ist dieses Modell in allgemeinen Labors sehr einfach zu realisieren, ohne spezielle Geräte zu verwenden. In Kombination mit Histologie und biochemischer Analyse bietet es einen kosten- (kostengünstige Reagenzien) und zeitsparenden (24 h Zeitfenster) Ansatz zur Induktion und Bewertung von AP. Die Anpassung der TC-Konzentration bietet auch die Möglichkeit, milde und moderate AP zu erzeugen. Perides et al. verwendeten ...

Akute Pankreatitis (AP) ist eine akute Entzündung der Bauchspeicheldrüse, die durch eine Obstruktion des Hauptgangs der Bauchspeicheldrüse mit anschließender duktaler Dehnung und Pankreas-Autodigestion durch ihre abnormal aktivierten Enzyme gekennzeichnet ist. Zu seinen klinischen Manifestationen gehören lokale oder systemische Entzündungen, Bauchschmerzen und eine Erhöhung der Serumamylase1,2. Gemäß der Schweregradklassifikation3 kann AP in leichten, mittelschweren und schweren Formen auftreten, und unter ihnen ist die schwere akute Pankreatitis (SAP) aufgrund ihrer hohen Sterblichkeitsrate von mehr als 30%4 die besorgniserregendste Erkrankung. In den Vereinigten Staaten ist AP einer der häufigsten Gründe für einen Krankenhausaufenthalt und betrifft über 200.000 Patienten5. Darüber hinaus nimmt apen, insbesondere SAP, jährlich zu und betrifft jüngere Altersgruppen6. Allerdings mangelt es in der aktuellen klinischen Praxis an wirksamen Behandlungsmöglichkeiten6,7. Daher ist es notwendig, die molekularen Mechanismen zu erforschen, die an AP beteiligt sind, um so die Verbesserung der Behandlung zu erleichtern.
Gut etablierte experimentelle Tiermodelle sind erforderlich, um die an AP beteiligten Mechanismen zu untersuchen und die Wirksamkeit verschiedener Behandlungsmodalitäten zu bewerten. Mit der leichten Zugänglichkeit von transgenen und Knockout-Stämmen und ihrer geringen Größe, die die für die In-vivo-Bewertung erforderlichen Dosen von Medikamenten minimiert, werden Mäuse für die AP-Forschung bevorzugt. Daher wurden mehrere Modelle von AP an Mäusen entwickelt8,9.
Niederau et al. arbeiteten aus einem Rattenmodell mit leichter Pankreatitis, das durch die intravenöse Verabreichung von Caerulein10 induziert wurde, ein SAP-Mausmodell mit aznarer Zellnekrose, die mit demselben Medikament und injektionsweg induziert wurde11. Obwohl dieses Modell mehrere Vorteile besitzt, darunter Nichtinvasivität, schnelle Induktion, breite Reproduzierbarkeit und Anwendbarkeit, besteht der Hauptnachteil darin, dass in den meisten Fällen nur eine milde Form von AP entwickelt wird, wodurch seine klinische Relevanz eingeschränkt wird. Alkohol gilt als einer der wichtigsten ätiologischen Faktoren von AP; Foitzik et al. berichteten jedoch, dass es nur in Kombination mit anderen Faktoren wie exokriner Hyperstimulation eine Pankreasverletzung verursacht12. Obwohl alkoholinduzierte AP-Modelle, die über verschiedene Verabreichungswege entwickelt wurden, und Arzneimitteldosen berichtet wurden13,14,15, ist ihr Hauptnachteil die Schwierigkeit, sie zu reproduzieren. Die intraperitoneale Verabreichung von L-Arginin kann bei Mäusen auch AP induzieren16; Seine geringe klinische Relevanz behindert jedoch seine Anwendung. Taurocholat, ein Gallensalz, wurde erstmals 1965 von Creutzfeld et al. vorgeschlagen, um einen Zustand zu induzieren, der der menschlichen AP über pankreatische Ganginfusion ähnelt17. Obwohl kontroversen über ihre klinische Relevanz in der Pathophysiologie bestehen18,19, bleibt die Taurocholat-induzierte Pankreatitis ein unverzichtbares Modell für SAP.
Da dieses Modell einfach zu realisieren ist und auch bei Mäusen wirksam ist, ist es heute eines der am häufigsten verwendeten AP-Modelle für Kleintier-In-vivo-Studien. Perides et al. verwendeten Natriumtaurocholat (TC), um SAP bei Mäusen zu induzieren20 und lieferten Einblicke in das Verständnis seiner Pathologie. In Kombination mit genetischen Modifikationstechniken hat uns dieses Modell ermöglicht, mehrere spezifische Gene zu bestätigen, die an AP beteiligt sind. Zum Beispiel zeigten Bicozo et al., dass ein Knockout des CD38-Gens vor einem Modell der TC-Infusions-Pankreatitis schützte und die Mechanismen auf Veränderungen in der intrazellulären Ca2+-Signalgebung zurückführte21. Fanczal et al. untersuchten die physiologischen Implikationen der TRPM2-Expression in der Plasmamembran von Pankreas-Acinar- und duktalen Zellen der Maus und zeigten einen reduzierten Schweregrad von TC-induziertem SAP bei TRPM2-Knockout-Mäusen22. Darüber hinaus bietet dieses Modell auch eine einfache und effektive Möglichkeit, viele neuartige Medikamente in vivo zu testen. Diese Methode ermöglichte beispielsweise die Validierung der therapeutischen Wirkungen von Koffein23, Dehydrocholsäure24 und verschiedenen Antioxidantien und Antikoagulanzien25,26. Diese Evidenz zeigt die Vielseitigkeit des TC-induzierten SAP-Modells. Obwohl Wittel et al. ein ähnliches Mausmodell27 beschrieben, könnte ein Mangel an Details zu den Implementierungsverfahren dazu führen, dass die Ergebnisse nicht reproduziert werden können. In diesem Artikel konzentrieren wir uns auf Methoden mit einer einfachen hausgemachten Mikrospritze und untersuchen TC-induziertes SAP und bieten damit eine mögliche Anleitung nicht nur für die weitere Untersuchung der Pathogenese und Behandlung von AP, sondern auch für eine perfekt anpassungsfähige experimentelle Methode für viele andere Substanzen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5% iodophor</td>
			<td>Shanghai Likang Disinfectant</td>
			<td>310102</td>
			<td>4 mL/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% sodium chloride</td>
			<td>Sinopharm Group Co., Ltd.</td>
			<td>10019318</td>
			<td>0.8 mL/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% Pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3761</td>
			<td>0.2 -0.25 mL/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 &#956;L flat tip Microliter syringe</td>
			<td>Gaoge, Shanghai</td>
			<td>A124019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td>Beyotime, Nantong, China</td>
			<td>P0099-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% sodium taurocholate (TC)</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S100834-5g</td>
			<td>10 &#956;L/SAP mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (1/2 circle)</td>
			<td>Cheng-He</td>
			<td>20093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% alcohol</td>
			<td>Sinopharm Group Co., Ltd.</td>
			<td>10009218</td>
			<td>4 mL/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (3/8 circle)</td>
			<td>Cheng-He</td>
			<td>19064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALT Activity Assay Kit</td>
			<td>EPNK, Anhui, China</td>
			<td>ALT0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amylase Assay Kit</td>
			<td>EPNK, Anhui, China</td>
			<td>AMY0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled small bulldog clamp with 12 mm jaw (3 cm)</td>
			<td>Cheng-He</td>
			<td>HC-X022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aspen shavings or shreds for mouse bedding</td>
			<td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology</td>
			<td>VR03015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AST Activity Assay Kit</td>
			<td>EPNK, Anhui, China</td>
			<td>AST0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Urea Nitrogen (BUN) Assay Kit</td>
			<td>EPNK, Anhui, China</td>
			<td>BUN0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mouse</td>
			<td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology</td>
			<td>213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine Assay Kit</td>
			<td>EPNK, Anhui, China</td>
			<td>CRE0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feature microtome blade</td>
			<td>Beyotime, Nantong, China</td>
			<td>E0994</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Forceps (9.5 cm, Curved)</td>
			<td>JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.</td>
			<td>JC3901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipase Assay Kit</td>
			<td>Jiancheng, Nanjing, China</td>
			<td>A054-2-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica biosystem, Germany</td>
			<td>RM2245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mindray biochemistry analyzer</td>
			<td>Mindray, Shenzhen, China</td>
			<td>BS-420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPO Assay Kit</td>
			<td>Jiancheng, Nanjing, China</td>
			<td>A044-1-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal mouse chow</td>
			<td>Trophic, Nantong, China</td>
			<td>LAD 1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Beyotime, Nantong, China</td>
			<td>C0221A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight micro-bulldog clamp with 5 mm jaw (1.5 cm)</td>
			<td>JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.</td>
			<td>W40130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight or curved forceps (11.0 cm)</td>
			<td>Cheng-He</td>
			<td>HC-X091A or HC-X090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Scissors (10.0 cm)</td>
			<td>Cheng-He, Ningbo, China</td>
			<td>HC-J039102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific, USA</td>
			<td>Multifuge X1R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a mouse severe acute pancreatitis model using retrograde injection of sodium taurocholate into the biliopancreatic duct

Die Prävalenz der akuten Pankreatitis (AP), insbesondere der schweren akuten Pankreatitis (SAP), nimmt in jüngeren Altersgruppen jährlich zu. In der aktuellen klinischen Praxis mangelt es jedoch an wirksamen Behandlungen. Mit der leichten Zugänglichkeit von transgenen und Knockout-Stämmen und ihrer geringen Größe, die minimale Dosen von Medikamenten ermöglicht, die für die In-vivo-Bewertung erforderlich sind, wird ein gut etabliertes experimentelles Modell an Mäusen für die AP-Forschung bevorzugt. Darüber hinaus ist SAP induziert durch Natriumtaurocholat (TC) derzeit eines der am weitesten verbreiteten und am besten charakterisierten Modelle. Dieses Modell wurde auf neuartige Therapien und mögliche molekulare Ereignisse während des AP-Prozesses untersucht. Hier stellen wir die Generierung eines AP-Mausmodells unter Verwendung von Natriumtarocholat und einer einfachen hausgemachten Mikrospritze vor. Darüber hinaus stellen wir auch die Methodik für die anschließende Histologie und serologische Untersuchung zur Verfügung.

Durch sorgfältiges Befolgen der obigen Anweisungen erhielten wir eine mittlere Operationsdauer von ca. 40 min. Die Mäuse waren leicht inaktiv und hatten nach der Operation etwa 0,5-1,75 g, 0,85-1,85 g und 0,5-4,73 g Angewicht verloren (Abbildung 2).
Vom Zeitpunkt des Abschlusses der Operation bis 24 Stunden nach der Operation, als sich die Krankheit entwickelte, wurden die Mäuse inaktiv und zeigten langsame Reaktionen und Aktionen.
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Establishment of a Mouse Severe Acute Pancreatitis Model using Retrograde Injection of Sodium Taurocholate into the Biliopancreatic Duct

Ein Mausmodell der schweren akuten Pankreatitis wird hierin beschrieben. Das hier vorgestellte Verfahren ist sehr schnell, einfach und zugänglich und ermöglicht so möglicherweise die Untersuchung der molekularen Mechanismen und verschiedener therapeutischer Interventionen bei akuter Pankreatitis auf bequeme Weise.

Etablierung eines Mausmodells für schwere akute Pankreatitis mittels retrograder Injektion von Natriumtaurocholat in den Gallengang

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a ...

Das übergeordnete Ziel dieses Videos ist es, ein Mausmodell der akuten Pankreatitis durch retrograde Injektion von Natriumtaurocholat in den Gallengang zu etablieren. Alle Tierversuche wurden von der Tierethikkommission der Universität Soochow genehmigt. Alle chirurgischen Eingriffe wurden unter Vollnarkose durchgeführt.Analgetika wurden nicht verwendet, um den natürlichen Verlauf der Krankheit nicht zu beeinträchtigen, was durch frühere Literaturen belegt und von der Tierethikkommission der Soochow-Universität genehmigt wurde. Fasten Sie die Maus acht bis 12 Stunden vor der Operation. 5% Natriumtautocholat-Lösungsfilter durch einen 0,22-Mikrofilter zubereiten.Autoklavieren Sie die chirurgischen Instrumente und Materialien, einschließlich Pinzette, Schere, Klingenhalter, Nadelhalter, hämostatischen Clip, Gefäßklemmen und die sterilen Vorhänge. Die Mikrospritze wurde durch Bestrahlung sterilisiert. Induzieren Sie mit der Maus eine Vollnarkose mit intraperitonealer Injektion von 1% Pentobarbital-Natriumlösung in einer Dosierung von 50 Milligramm pro Kilogramm.Befestigen Sie die Maus in Rückenlage auf einer bestrahlten Schaumstoff-Flachplatte mit dem Klebeband. Entfernen Sie das Fell einer Maus mit einer Enthaarungscreme von der Xiphoid-Prozessebene bis zur Verbindungslinie der bilateralen vorderen oberen Beckenwirbelsäule, wobei die linke und rechte Seite parallel zur vorderen Achsellinie verlaufen. Wischen Sie die Haut zwei- bis dreimal mit 0,5% Iodophor ab und lassen Sie sie jeweils ein bis zwei Minuten trocknen.Bedecken Sie die Maus mit sterilen Vorhängen. Hautschicht aufschneiden und dann subkutan öffnen. Machen Sie einen ungefähr zwei bis drei Zentimeter langen medianen Bauchschnitt.Lokalisieren Sie den Zwölffingerdarm von links nach rechts entlang des Magens. Ziehen Sie den Zwölffingerdarm vorsichtig mit einer chirurgischen Pinzette und einem mit Desinfektionsmittel getränkten Wattestäbchen nach außen und auf die linke Seite, um die Bauchspeicheldrüse, den Gallengang und die Zwölffingerdarmpapille freizulegen. Verwenden Sie 8-0 Nähte, um durch die Verbindung zwischen dem Zwölffingerdarm und der Bauchspeicheldrüse um die Papille zu gehen, ziehen Sie die Naht auf die linke Seite des Mauskörpers, um den Zwölffingerdarm zu fixieren.Ziehen Sie die Haut und den unteren Rand der Leber vorsichtig zur Seite. Klemmen Sie den gemeinsamen Lebergang. Piercen Sie den Mikroinjektor retrograd in den distalen Gallengang.Befestigen Sie die Nadelspitze in der Nähe der Zwölffingerdarmpappe mit einer Klemme. Infundieren Sie 10 Mikroliter 5% Natriumtirocholat mit einer Geschwindigkeit von 5 Mikrolitern pro Minute in den Gallengang. Halten Sie den Gallengang 5 Minuten lang geschlossen, um einen stabilen Druck zu erreichen.Entfernen Sie die Klemmen. Ziehen Sie den Mikroinjektor heraus, entfernen Sie die andere Klemme und befestigen Sie die Naht. Stellen Sie den Zwölffingerdarm in die ursprüngliche anatomische Position zurück und überprüfen Sie die Blutung.Schließen Sie die Wunde mit 6-0 Nähten. Entfernen Sie den sterilen Vorhang. Desinfizieren Sie den Schnitt mit 0,5% Iodophor.Erholen Sie die Tiere aus der Narkose auf einem 37 Grad Celsius heißen Wärmeleitpad. 0,8 Milliliter 0,9% Kochsalzlösung subkutan zur Flüssigkeitssupplementierung verabreichen. 24 Stunden nach der Operation wird die Maus mit Pentobarbital-Natrium unter Verwendung der gleichen Dosis und Injektionsroute betäubt.Sammeln Sie das Vollblut aus der Bauchaorta und drehen Sie es 15 Minuten lang bei 1.500 x g, um das Serum für serologische Tests zu isolieren. Sammeln Sie die Bauchspeicheldrüse und das Lungengewebe zur histologischen Beurteilung. Tauchen Sie die Bauchspeicheldrüse für 24 Stunden in 4% Paraformaldehydlösung ein.Dehydrieren Sie in einer Reihe von Alkoholkonzentrationen und betten Sie sie in Paraffin ein. Verwenden Sie ein Mikrotom, um 5 mikrodicke Pankreasgewebeabschnitte vorzubereiten. Führen Sie eine H & E-Färbung zur histologischen Beurteilung der Bauchspeicheldrüse durch.Die Mäuse waren leicht inaktiv und hatten 24 Stunden nach der Operation im Vergleich zur Voroperation einen Gewichtsverlust. Die Überlebensraten der Kontroll- und SAP-Mäuse lagen 72 Stunden nach der Operation bei 100% bzw. 72,7%. Nach den H& E-Färbeergebnissen aus Pankreasschnitten konnte bei SAP-Mäusen eine Pulpanekrose des Pankreasgewebes beobachtet werden, während bei Kontrollmäusen keine signifikanten Veränderungen festgestellt werden konnten.Darüber hinaus wurden bei SAP-Mäusen im Vergleich zu Kontrollmäusen signifikant erhöhte Konzentrationen von Amylase, Lipase, Bauchspeicheldrüse und Lungen-MPO-Aktivität gefunden. Darüber hinaus wurden signifikant erhöhte Spiegel der Leber- und Nierenindizes einschließlich ALT, AST, BUN und Kreatinin gefunden. Durch retrograde Injektion von Natriumtaurocholat in den Gallengang konnte bei Mäusen eine schwere akute Pankreatitis induziert werden.Gute Exposition des Gallengangs, um die erfolgreiche Punktion zu gewährleisten. Achten Sie während der Punktion auf den entsprechenden Winkel und die entsprechende Kraft, um eine Punktion des Gallengangs zu vermeiden. Das hier beschriebene TC-induzierte SAP-Modell ist ein geeignetes Modell, um die Mechanismen einer schweren akuten Pankreatitis zu untersuchen.Es ist ein wirtschaftliches Modell mit weniger teuren Reagenzien und dieses Video hilft, den unerfahrenen Chirurgen schneller zu trainieren.

Research

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Medicine

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