Name: preparation of bead-supported lipid bilayers to study the particulate output of t cell immune synapses
Uploaded: 2022-04-01T13:30:00
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हम रचनात्मक वैज्ञानिक चर्चाओं के लिए हमारे प्रयोगशाला के सदस्यों और रुमेटोलॉजी समुदाय के कैनेडी इंस्टीट्यूट के आभारी हैं, विशेष रूप से हमारे प्रवाह साइटोमेट्री सुविधा प्रबंधक जोनाथन वेबर। इस काम को वेलकम ट्रस्ट प्रिंसिपल रिसर्च फेलोशिप 100262Z / 12 / Z, ERC उन्नत अनुदान (SYNECT AdG 670930), और रुमेटोलॉजी रिसर्च (KTRR) के लिए कैनेडी ट्रस्ट (सभी तीन एमएलडी) द्वारा वित्त पोषित किया गया था। PFCD EMBO दीर्घकालिक फैलोशिप (ALTF 1420-2015, यूरोपीय आयोग (LTFCOFUND2013, GA-2013-609409) और मैरी Sklodowska-Curie Actions) और एक ऑक्सफोर्ड-ब्रिस्टल मायर्स स्क्विब फैलोशिप के साथ संयोजन के रूप में समर्थित था।

1. मात्रात्मक प्रवाह cytometry के साथ सेल सतह प्रोटीन घनत्व का मापन
<ol><li>0.22 μm-फ़िल्टर मानव प्रवाह cytometry बफर (hFCB) EDTA (एक अंतिम 2 mM एकाग्रता के लिए) और मानव एबी सीरम (एक अंतिम 10% के लिए) बाँझ फॉस्फेट-buffered खारा (PBS), पीएच 7.4 ( <s...

<ol>
	<li>Cespedes, P. F., Beckers, D., Dustin, M. L., Sezgin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+membrane+systems+to+reconstitute+immune+cell+signaling.">Model membrane systems to reconstitute immune cell signaling.</a> FEBS Journal. 288 (4), 1070-1090 (2021).</li><li>Choudhuri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polarized+release+of+T-cell-receptor-enriched+microvesicles+at+the+immunological+synapse.">Polarized release of T-cell-receptor-enriched microvesicles at the immunological synapse.</a> Nature. 507 (7490), 118-123 (2014).</li><li>Saliba, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composition+and+structure+of+synaptic+ectosomes+exporting+antigen+receptor+linked+to+functional+CD40+ligand+from+helper+T+cells.">Composition and structure of synaptic ectosomes exporting antigen receptor linked to functional CD40 ligand from helper T cells.</a> elife. 8, 47528 (2019).</li><li>Barcia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+polarization+of+IFN-gamma+at+Kupfer+and+non-Kupfer+immunological+synapses+during+the+clearance+of+virally+infected+brain+cells.">In vivo polarization of IFN-gamma at Kupfer and non-Kupfer immunological synapses during the clearance of virally infected brain cells.</a> Journal of Immunology. 180 (3), 1344-1352 (2008).</li><li>Huse, M., Lillemeier, B. F., Kuhns, M. S., Chen, D. S., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+use+two+directionally+distinct+pathways+for+cytokine+secretion.">T cells use two directionally distinct pathways for cytokine secretion.</a> Nature Immunology. 7 (3), 247-255 (2006).</li><li>Kupfer, A., Mosmann, T. R., Kupfer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polarized+expression+of+cytokines+in+cell+conjugates+of+helper+T+cells+and+splenic+B+cells.">Polarized expression of cytokines in cell conjugates of helper T cells and splenic B cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88 (3), 775-779 (1991).</li><li>Kupfer, H., Monks, C. R., Kupfer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+splenic+B+cells+that+bind+to+antigen-specific+T+helper+(Th)+cells+and+face+the+site+of+cytokine+production+in+the+Th+cells+selectively+proliferate:+immunofluorescence+microscopic+studies+of+Th-B+antigen-presenting+cell+interactions.">Small splenic B cells that bind to antigen-specific T helper (Th) cells and face the site of cytokine production in the Th cells selectively proliferate: immunofluorescence microscopic studies of Th-B antigen-presenting cell interactions.</a> Journal of Experimental Medicine. 179 (5), 1507-1515 (1994).</li><li>Reichert, P., Reinhardt, R. L., Ingulli, E., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+in+vivo+identification+of+TCR+redistribution+and+polarized+IL-2+production+by+naive+CD4+T+cells.">Cutting edge: in vivo identification of TCR redistribution and polarized IL-2 production by naive CD4 T cells.</a> Journal of Immunology. 166 (7), 4278-4281 (2001).</li><li>Gerard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+T+cell-T+cell+synaptic+interactions+drive+the+differentiation+of+protective+CD8++T+cells.">Secondary T cell-T cell synaptic interactions drive the differentiation of protective CD8+ T cells.</a> Nature Immunology. 14 (4), 356-363 (2013).</li><li>Dustin, M. L., Starr, T., Varma, R., Thomas, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supported+planar+bilayers+for+study+of+the+immunological+synapse.">Supported planar bilayers for study of the immunological synapse.</a> Current Protocols in Immunology. , (2007).</li><li>Counting cells using a hemocytometer. Abcam Available from: <a target="_blank" href="https://www.abcam.com/protocols/counting-cells-using-a-haemocytometer">https://www.abcam.com/protocols/counting-cells-using-a-haemocytometer</a> (2021)</li><li>Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+compensation+for+flow+cytometry:+visualization+artifacts,+limitations,+and+caveats.">Spectral compensation for flow cytometry: visualization artifacts, limitations, and caveats.</a> Cytometry. 45 (3), 194-205 (2001).</li><li>Dam, T., Junghans, V., Humphrey, J., Chouliara, M., Jonsson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling+in+T+cells+is+induced+by+binding+to+nickel-chelating+lipids+in+supported+lipid+bilayers.">Calcium signaling in T cells is induced by binding to nickel-chelating lipids in supported lipid bilayers.</a> Frontiers in Physiology. 11, 613367 (2020).</li><li>Nguyen, R., Perfetto, S., Mahnke, Y. D., Chattopadhyay, P., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+spillover+spreading+for+comparing+instrument+performance+and+aiding+in+multicolor+panel+design.">Quantifying spillover spreading for comparing instrument performance and aiding in multicolor panel design.</a> Cytometry A. 83 (3), 306-315 (2013).</li><li>C&#233;spedes, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+antigen-presenting+cells+reveal+the+diversity+and+functional+specialisation+of+extracellular+vesicles+composing+the+fourth+signal+of+T+cell+immunological+synapses.">Synthetic antigen-presenting cells reveal the diversity and functional specialisation of extracellular vesicles composing the fourth signal of T cell immunological synapses.</a> bioRxiv. , (2021).</li><li>Yoon, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+non-activated+lymphocytes+using+three-dimensional+refractive+index+tomography+and+machine+learning.">Identification of non-activated lymphocytes using three-dimensional refractive index tomography and machine learning.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6654 (2017).</li><li>Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distributions+of+autofluorescence+after+compensation:+Be+panglossian,+fret+not.">Distributions of autofluorescence after compensation: Be panglossian, fret not.</a> Cytometry A. 89 (4), 398-402 (2016).</li><li>Maecker, H. T., Trotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+controls,+instrument+setup,+and+the+determination+of+positivity.">Flow cytometry controls, instrument setup, and the determination of positivity.</a> Cytometry A. 69 (9), 1037-1042 (2006).</li><li>Balint, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supramolecular+attack+particles+are+autonomous+killing+entities+released+from+cytotoxic+T+cells.">Supramolecular attack particles are autonomous killing entities released from cytotoxic T cells.</a> Science. 368 (6493), 897-901 (2020).</li><li>Cespedes, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+expression+of+the+hRSV+nucleoprotein+impairs+immunological+synapse+formation+with+T+cells.">Surface expression of the hRSV nucleoprotein impairs immunological synapse formation with T cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (31), 3214-3223 (2014).</li></ol>

BSLBs मॉडल APC झिल्ली के साथ प्रेरित टी कोशिकाओं के कण आउटपुट का अध्ययन करने के लिए बहुमुखी उपकरण हैं। विधि का लचीलापन जटिल और न्यूनीकरणवादी झिल्ली रचनाओं के पुनर्गठन को टीएसवी और सुपरमोलेक्यूलर हमले के क?...

इम्यूनोलॉजिकल सिनैप्स (आईएस) एक महत्वपूर्ण आणविक संरचना है जो भौतिक संपर्क में लगी कोशिकाओं के इंटरफ़ेस पर बनाई गई है जो जुक्सट्राइन जानकारी के विनियमित आदान-प्रदान की सुविधा प्रदान करती है। साहित्य में विभिन्न आईएस का वर्णन किया गया है, और सबूतों के बढ़ते शरीर से पता चलता है कि ये आणविक केंद्र सेलुलर नेटवर्क की एक संरक्षित विशेषता हैं। बी कोशिकाओं, प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं, डेंड्रिटिक कोशिकाओं, मैक्रोफेज और टी कोशिकाओं सहित विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिकाएं, अल्पकालिक संपर्कों की असेंबली के माध्यम से जानकारी का आदान-प्रदान करती हैं। Multiomic अध्ययन ल्यूकोसाइट्स और स्ट्रोमल कोशिकाओं के उपन्यास सबसेट की समझ को आगे बढ़ा रहे हैं रोगजनक सेलुलर नेटवर्क ड्राइविंग और अज्ञात कार्यों के साथ सतह प्रोटीन व्यक्त करते हैं। सिंथेटिक एपीसी के रूप में, बीएसएलबी टी कोशिकाओं द्वारा सक्रिय संकेतों के एकीकरण में व्यक्तिगत प्रोटीन की कार्यात्मक भूमिका की प्रत्यक्ष जांच की अनुमति देते हैं, अर्थात् एंटीजन और कोस्टिमुलेशन / कोरप्रेशन, और सिग्नल चार के रूप में संदर्भित प्रभावकारी कणों की परिणामी रिहाई।
यह पेपर मॉडल एपीसी की सतह संरचना की नकल करने के लिए बीएसएलबी का उपयोग करते समय विचार करने के लिए प्रोटोकॉल और महत्वपूर्ण तकनीकी बिंदुओं का वर्णन करता है। एपीसी पर प्रतिरक्षा रिसेप्टर्स और अन्य सतह प्रोटीन के मात्रात्मक माप के लिए प्रोटोकॉल इन मापा मात्राओं वाले सिंथेटिक एपीसी के पुनर्गठन के लिए प्रोटोकॉल के साथ प्रस्तुत किए जाते हैं। फिर, टी कोशिकाओं और बीएसएलबी को सह-संवर्धित करने के लिए आवश्यक चरणों को प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग करके ट्रांस-सिनैप्टिक कण हस्तांतरण के मात्रात्मक माप के लिए प्रोटोकॉल के साथ प्रस्तुत किया जाता है। सबसे उल्लेखनीय रूप से, बीएसएलबी टीएसवी की प्लाज्मा झिल्ली-व्युत्पन्न आबादी का अध्ययन करने की सुविधा प्रदान करते हैं, जिसे सिनैप्टिक एक्टोसोम (एसई) कहा जाता है। टी-सेल एंटीजन रिसेप्टर-समृद्ध (टीसीआर +) एसई को टीसीआर ट्रिगरिंग 2 के जवाब में बहाया जाता है और कुशलतापूर्वक बीएसएलबी 3 द्वारा कब्जा कर लिया जाता है, जो एंटीजन के एगोनिस्टिक गुणों और मॉडलकिए गए झिल्ली संरचना का आकलन करने के लिए एक उत्कृष्ट रीडआउट का प्रतिनिधित्व करता है। CD63+ एक्सोसोम और सुपरमोलेक्यूलर अटैक पार्टिकल्स (SMAPs) भी उत्तेजित टी कोशिकाओं द्वारा जारी किए जाते हैं और BSLBs द्वारा कब्जा कर लिया जाता है। उन्हें सक्रियण के अतिरिक्त रीडआउट और टी कोशिकाओं द्वारा परिणामी एक्सोसाइटिक और लाइटिक ग्रेन्युल स्राव के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। टी सेल के इंटरैक्टिंग पोल के लिए एक्सोसाइटिक पुटिकाओं की लामबंदी भी साइटोकिन्स की दिशात्मक रिहाई की सुविधा प्रदान करती है, जैसे आईएल -2, आईएफएन -γ, और आईएल -10 सक्रियण 4,5,6,7,8 के जवाब में। यद्यपि टी-सेल जारी साइटोकिन्स को बीएसएलबी पर भी पता लगाया जा सकता है, वर्तमान में इम्यूनोलॉजिकल सिनेप्स में साइटोकाइन रिलीज के मात्रात्मक विश्लेषण को मान्य करने के लिए एक अधिक समर्पित अध्ययन विकास के अधीन है।
यह पूछने के लिए कि विशिष्ट झिल्ली रचनाएं टी कोशिकाओं के सिनैप्टिक आउटपुट को कैसे प्रभावित करती हैं, इसके लिए लक्ष्य झिल्ली घटक के शारीरिक घनत्व को परिभाषित करने की आवश्यकता होती है। सेल सतह प्रोटीन के फ्लो साइटोमेट्री-आधारित परिमाणीकरण इस प्रोटोकॉल में एक आवश्यक कदम हैं और इसकी आवश्यकता होती है: 1) प्रति एंटीबॉडी (एफ / पी) फ्लोरोक्रोम की ज्ञात संख्या के साथ एंटीबॉडी का उपयोग, और 2) बेंचमार्क मोती मापा माध्य प्रतिदीप्ति तीव्रता (एमएफआई) से फ्लोरोक्रोम अणुओं को इंटरपोल करने के लिए एक मानक संदर्भ प्रदान करते हैं।
इन बेंचमार्क मानकों में पांच मनका आबादी होती है, जिनमें से प्रत्येक में समतुल्य घुलनशील फ्लोरोक्रोम (एमईएसएफ) की बढ़ती संख्या होती है, जो मनमाने ढंग से प्रतिदीप्ति का पता लगाने की गतिशील सीमा को फैलाती है। ये मानक आबादी असतत प्रतिदीप्ति चोटियों की उपज, सरल रैखिक प्रतिगमन द्वारा एमईएसएफ में मनमाने ढंग से प्रतिदीप्ति इकाइयों के रूपांतरण की सुविधा प्रदान करती है। परिणामी एमईएसएफ का उपयोग तब एंटीबॉडी एफ / पी मानों के साथ प्रति सेल बाउंड अणुओं की औसत संख्या की गणना करने के लिए किया जाता है (या बाद के चरणों में बीएसएलबी)। पता लगाए गए अणुओं की औसत संख्या के लिए अनुमानित सेल सतह क्षेत्रों का अनुप्रयोग तब अणुओं / μm2 के रूप में शारीरिक घनत्व की गणना को सक्षम बनाता है। इस परिमाणीकरण प्रोटोकॉल को टी कोशिकाओं पर प्रोटीन घनत्व के माप और झिल्ली रचनाओं के जैव रासायनिक पुनर्गठन के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है जो होमोटाइपिक टी सेल सिनेप्स (यानी, टी-टी synapses9) के गठन की मध्यस्थता करता है। यदि आवश्यक हो, तो प्रति अणु फ्लोरोक्रोम की ज्ञात संख्या के साथ लेबल किए गए पुनः संयोजक लक्ष्यों का उपयोग करके एंटीबॉडी बाइंडिंग की संयोजकता का अनुमान लगाया जा सकता है। फिर, एंटीबॉडी-बाइंडिंग वैलेंसी की गणना एक ही बीएसएलबी आबादी के लिए एक ही समय में बाध्य फ्लोरोसेंट प्रोटीन और परिमाणीकरण एंटीबॉडी (दो अलग-अलग परिमाणीकरण फ्लोरोक्रोम और एमईएसएफ मानकों का उपयोग करके) की संख्या की तुलना करके की जा सकती है।
एपीसी झिल्ली के पुनर्गठन के लिए सिलिका मोतियों 1 पर समर्थित लिपिड बाईलेयर (एसएलबी) की असेंबली की आवश्यकता होती है। विभिन्न फॉस्फोलिपिड प्रजातियों वाले लिपोसोम स्टॉक का उपयोग एक बहुमुखी लिपिड-बाईलेयर मैट्रिक्स बनाने के लिए किया जा सकता है, जो विभिन्न बाध्यकारी रसायन विज्ञान के साथ पुनः संयोजक प्रोटीन की एंकरिंग को सक्षम करता है (लिपोसोम की तैयारी 10 में विस्तृत है)। एक बार जब प्रासंगिक लिगैंड "कोशिकाओं पर" के शारीरिक घनत्व (या घनत्व) को परिभाषित किया जाता है, तो एक ही प्रवाह साइटोमेट्री प्रोटोकॉल को लक्ष्य शारीरिक घनत्व के साथ बीएसएलबी को कोट करने के लिए आवश्यक पुनः संयोजक प्रोटीन की एकाग्रता का अनुमान लगाने के लिए अनुकूलित किया जाता है। दो अलग-अलग एंकरिंग सिस्टम का उपयोग या तो संयोजन में या अलग-अलग किया जा सकता है।
सबसे पहले, एसएलबी जिसमें Ni2 + का अंतिम 12.5 mol% होता है - फॉस्फोलिपिड्स युक्त लगभग 10,000 हिज़-टैग बाइंडिंग साइटों को प्रति वर्ग माइक्रोन 10 प्रदान करने के लिए पर्याप्त है और सबसे व्यावसायिक रूप से उपलब्ध प्रोटीन के साथ BSLBs को सजाने के लिए अच्छी तरह से काम करता है, जिसका शारीरिक घनत्व इस अधिकतम लोडिंग क्षमता से अधिक नहीं है। दूसरी लोडिंग प्रणाली बायोटिन युक्त फॉस्फोलिपिड्स (मोल के रूप में) का उपयोग करती है ताकि स्ट्रेप्टाविडिन पुलों के माध्यम से बायोटिनिलेटेड एंटी-सीडी 3 ई फैब (या एचएलए / एमएचसी मोनोमर्स) को लोड किया जा सके। इन दो बीएसएलबी सजावट विधियों का संयोजन तब सिंथेटिक एपीसी के रूप में बीएसएलबी की लचीली सिलाई को सक्षम बनाता है। अत्यधिक जटिल एपीसी सतह रचनाओं के लिए, फॉस्फोलिपिड्स और प्रोटीन के मोल% को हाथ में प्रश्न के रूप में कई प्रोटीन लोड करने के लिए बढ़ाया जा सकता है। एक बार प्रोटीन की कार्यशील सांद्रता और बायोटिनिलेटेड फॉस्फोलिपिड्स के मोल% को परिभाषित करने के बाद, बीएसएलबी को मल्टीपैरामीट्रिक प्रवाह साइटोमेट्री के साथ टी कोशिकाओं के सिनैप्टिक आउटपुट से पूछताछ करने के लिए इकट्ठा किया जा सकता है।

preparation of bead-supported lipid bilayers to study the particulate output of t cell immune synapses

एंटीजन-प्रस्तुत करने वाली कोशिकाएं (एपीसी) शारीरिक संपर्क में लगी टी कोशिकाओं के लिए तीन सक्रिय संकेत प्रस्तुत करती हैं: 1) एंटीजन, 2) कोस्टिमुलेशन / कोरप्रेसन, और 3) घुलनशील साइटोकिन्स। टी कोशिकाएं सक्रियण के जवाब में दो प्रकार के प्रभावक कणों को जारी करती हैं: ट्रांस-सिनैप्टिक पुटिकाओं (टीएसवी) और सुपरमोलेक्यूलर हमले के कण, जो क्रमशः अंतरकोशिकीय दूतों को स्थानांतरित करते हैं और साइटोटॉक्सिसिटी की मध्यस्थता करते हैं। इन संस्थाओं को टी कोशिकाओं के साथ शारीरिक संपर्क में लगे एपीसी द्वारा जल्दी से आंतरिक किया जाता है, जिससे उनका लक्षण वर्णन चुनौतीपूर्ण हो जाता है। यह पेपर इन ट्रांस-सिनैप्टिक कणों को पकड़ने और विश्लेषण करने के लिए एंटीजन-प्रस्तुत सेल (एपीसी) मिमेटिक्स के रूप में मनका-समर्थित लिपिड बाईलेयर्स (बीएसएलबी) का निर्माण और उपयोग करने के लिए प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। इसके अलावा वर्णित सेल सतहों पर प्रोटीन घनत्व के पूर्ण माप के लिए प्रोटोकॉल, इस तरह के शारीरिक स्तरों के साथ BSLBs के पुनर्गठन, और टी कोशिकाओं द्वारा सिनैप्टिक कण रिलीज पर नज़र रखने के लिए प्रवाह साइटोमेट्री प्रक्रिया। इस प्रोटोकॉल को व्यक्तिगत प्रोटीन, जटिल लिगैंड मिश्रण, रोगज़नक़ वायरस निर्धारकों और टी कोशिकाओं के प्रभावकारी आउटपुट पर दवाओं के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, जिसमें सहायक टी कोशिकाएं, साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइट्स, नियामक टी कोशिकाएं और चिमेरिक एंटीजन रिसेप्टर-एक्सप्रेसिंग टी कोशिकाएं (CART) शामिल हैं।

सेल सतह पर पूर्ण प्रोटीन परिमाणीकरण के लिए FCM लिगेंड के शारीरिक घनत्व को प्रस्तुत करने वाले बीएसएलबी के पुनर्गठन के लिए मॉडलिंग सेल सबसेट पर कुल प्रोटीन घनत्व के अनुमान की आवश्यकता होती है। BSLBs क...

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Preparation of Bead-supported Lipid Bilayers to Study the Particulate Output of T Cell Immune Synapses

यहां हम मनका-समर्थित लिपिड बाईलेयर्स का उपयोग करके सिंथेटिक एंटीजन-प्रस्तुत करने वाली कोशिकाओं के चरणबद्ध पुनर्गठन के लिए प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं और सक्रिय टी कोशिकाओं से सिनैप्टिक आउटपुट से पूछताछ करने के लिए उनके उपयोग करते हैं।

मनका-समर्थित लिपिड बाईलेयर्स की तैयारी टी सेल प्रतिरक्षा Synapses के कण आउटपुट का अध्ययन करने के लिए

Antigen-presenting cells (APCs) present three activating signals to T cells engaged in physical contact: 1) antigen, 2) costimulation/corepression, and 3) ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Competitive Homing Assays to Study Gut-tropic T Cell Migration

प्रतियोगी घर वापस आना Assays आंत रेखा टी सेल प्रवासन अध्ययन

In order to exert their function lymphocytes need to leave the blood and migrate into different tissues in the body. Lymphocyte adhesion to endothelial ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

के परजीवी wasps के लिए एक परिचय<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; और Antiparasite इम्यून रिस्पांस

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

के इमेजिंग एचआईवी -1 लिफाफा प्रेरित virological Synapse और सिंथेटिक लिपिड bilayers पर संकेतन

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

अलगाव और अनुभवहीन सीडी 4 टी lymphocytes की Th17 भेदभाव

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

लिम्फ नोड stromal सेल मूल के अध्ययन के लिए लिम्फ नोड वसा पैड काइमेरा का सृजन

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

चूहे में allogeneic सीडी 4 टी सेल प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए तेल त्वचा का प्रत्यारोपण

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

माउस भोले सीडी 4<sup&gt; +</sup&gt; टी सेल अलगाव और<em&gt; इन विट्रो</em&gt; टी सेल सबसेट में भेदभाव

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

विधियों का अध्ययन करने के लिए न्यूट्रोफिल में लिपिड बदलाव और न्युट्रोफिल कोशिकी जाल के बाद के गठन

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

Retroviral Transduction of Helper T Cells as a Genetic Approach to Study Mechanisms Controlling their Differentiation and Function

एक आनुवंशिक दृष्टिकोण के रूप में अध्ययन करने के लिए सहायक टी कोशिकाओं की रेट्रोवायरल पारगमन तंत्र उनके भेदभाव और फंक्शन को नियंत्रित करना

Helper T cell development and function must be tightly regulated to induce an appropriate immune response that eliminates specific pathogens yet prevents ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

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Vivo में मानव टी सेल याद प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक चूषण छाला प्रोटोकॉल

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...