Name: monitoring gut acidification in the adult drosophila intestine
Uploaded: 2021-10-11T14:00:00
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लेखकों ने स्वीकार किया है कि लेखक की प्रयोगशाला में काम के लिए समर्थन एक एचएचएमआई संकाय विद्वान पुरस्कार और यूटी साउथवेस्टर्न मेडिकल सेंटर में बच्चों के अनुसंधान संस्थान से स्टार्टअप फंड द्वारा प्रदान किया जाता है।

नोट: मानक प्रयोगशाला लाइन ओरेगन आर एक डब्ल्यूटी नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। सभी मक्खियों को मानक कॉर्नमील-गुड़ माध्यम (गुड़, आगर, खमीर, कॉर्नमील, टेगोसेप्ट, प्रोपियोनिक एसिड और पानी युक्त)...

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	<li>Hollander, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+composition+and+mechanism+of+formation+of+gastric+acid+secretion.">The composition and mechanism of formation of gastric acid secretion.</a> Science. 110 (2846), 57-63 (1949).</li><li>Forte, J. G., Zhu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apical+recycling+of+the+gastric+parietal+cell+H,+K-ATPase.">Apical recycling of the gastric parietal cell H, K-ATPase.</a> Annual Review of Physiology. 72, 273-296 (2010).</li><li>Samuelson, L. C., Hinkle, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+regulation+of+gastric+acid+secretion+through+analysis+of+genetically+engineered+mice.">Insights into the regulation of gastric acid secretion through analysis of genetically engineered mice.</a> Annual Review of Physiology. 65, 383-400 (2003).</li><li>Yao, X., Forte, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+acid+secretion+by+the+parietal+cell.">Cell biology of acid secretion by the parietal cell.</a> Annual Review of Physiology. 65, 103-131 (2003).</li><li>Driver, I., Ohlstein, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+of+regional+intestinal+stem+cell+identity+during+Drosophila+metamorphosis.">Specification of regional intestinal stem cell identity during Drosophila metamorphosis.</a> Development. 141 (9), 1848-1856 (2014).</li><li>Overend, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanism+and+functional+significance+of+acid+generation+in+the+Drosophila+midgut.">Molecular mechanism and functional significance of acid generation in the Drosophila midgut.</a> Scientific Reports. 6, 27242 (2016).</li><li>Shanbhag, S., Tripathi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+ultrastructure+and+cellular+mechanisms+of+acid+and+base+transport+in+the+Drosophila+midgut.">Epithelial ultrastructure and cellular mechanisms of acid and base transport in the Drosophila midgut.</a> Journal of Experimental Biology. 212, 1731-1744 (2009).</li><li>Dubreuil, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper+cells+and+stomach+acid+secretion+in+the+Drosophila+midgut.">Copper cells and stomach acid secretion in the Drosophila midgut.</a> International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 36 (5), 745-752 (2004).</li><li>Martorell, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+mechanisms+of+tumorigenesis+in+the+Drosophila+adult+midgut.">Conserved mechanisms of tumorigenesis in the Drosophila adult midgut.</a> PLoS ONE. 9 (2), 88413 (2014).</li><li>Strand, M., Micchelli, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+control+of+Drosophila+gut+stem+cell+proliferation:+EGF+establishes+GSSC+proliferative+set+point+&amp;+controls+emergence+from+quiescence.">Regional control of Drosophila gut stem cell proliferation: EGF establishes GSSC proliferative set point &amp; controls emergence from quiescence.</a> PLoS One. 8 (11), 80608 (2013).</li><li>Storelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+perpetuates+nutritional+mutualism+by+promoting+the+fitness+of+its+intestinal+symbiont+Lactobacillus+plantarum.">Drosophila perpetuates nutritional mutualism by promoting the fitness of its intestinal symbiont Lactobacillus plantarum.</a> Cell Metabolism. 27 (2), 362-377 (2018).</li><li>Abu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Communicating+the+nutritional+value+of+sugar+in+Drosophila.">Communicating the nutritional value of sugar in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (12), 2829-2838 (2018).</li><li>Blecker, U., Gold, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastritis+and+ulcer+disease+in+childhood.">Gastritis and ulcer disease in childhood.</a> European Journal of Pediatrics. 158 (7), 541-546 (1999).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण कदम अम्लीकरण फेनोटाइप के लिए सीसीआर की कल्पना करने के लिए आंत का उचित विच्छेदन है। तांबे की कोशिकाओं से जारी एसिड सीसीआर तक सीमित होता है जब आंत बरकरार होती है। हालांकि, ?...

कीट आंत में, तांबा कोशिकाएं स्तनधारी पेट के एसिड-उत्पादक गैस्ट्रिक पार्श्विका कोशिकाओं (जिसे ऑक्सींटिक के रूप में भी जाना जाता है) के साथ सेलुलर और कार्यात्मक समानताएं साझा करती हैं। कोशिकाओं का यह समूह आंतों के लुमेन में एसिड छोड़ता है। एसिड स्राव और शरीर रचना विज्ञान का कार्य विकासवादी रूप से संरक्षित है। डिस्चार्ज किए गए एसिड के प्रमुख घटक हाइड्रोक्लोरिक एसिड और पोटेशियम क्लोराइड हैं। कोशिकाओं में एसिड गठन का रासायनिक तंत्र कार्बोनिक एनहाइड्रेज पर निर्भर करता है। यह एंजाइम CO2 और पानी से एक बाइकार्बोनेट आयन उत्पन्न करता है, जो एक हाइड्रॉक्सिल आयन को मुक्त करता है जिसे तब पोटेशियम के बदले में प्रोटॉन पंप के माध्यम से लुमेन में छोड़ दिया जाता है। क्लोराइड और पोटेशियम आयनों को चालकता चैनलों द्वारा लुमेन में ले जाया जाता है जिसके परिणामस्वरूप हाइड्रोक्लोरिक एसिड और पोटेशियम क्लोराइड का गठन होता है, जो गैस्ट्रिक रस का मुख्य घटक है1,2,3,4।
यद्यपि एसिड गठन के तंत्र को अच्छी तरह से समझा जाता है, लेकिन एसिड स्राव को विनियमित करने वाले शारीरिक तंत्र के बारे में बहुत कम जाना जाता है। इस विधि को विकसित करने का लक्ष्य सेलुलर मार्गों को बेहतर ढंग से चित्रित करने में मदद करना है जो एसिड गठन और स्राव का समन्वय करते हैं और आंतों के शरीर विज्ञान और होमियोस्टैसिस की मध्यस्थता में एसिड की भूमिका को निर्धारित करते हैं। इस तकनीक के विकास और उपयोग के पीछे तर्क ड्रोसोफिला और गैर-मॉडल जीवों में आंत अम्लीकरण की प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए एक सुसंगत और विश्वसनीय विधि प्रदान करना है। यद्यपि ड्रोसोफिला मिडगट अम्लीकरण का निर्धारण करने के लिए एक मानक प्रोटोकॉल वर्तमान में मौजूद है2,5,6, कॉपर सेल फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते समय जंगली-प्रकार (डब्ल्यूटी) मक्खियों में अम्लीकरण की सीमा में महत्वपूर्ण परिवर्तनशीलता देखी गई थी। इस मनाया परिवर्तनशीलता के लिए आधार को समझने और लगातार परिणाम प्राप्त करने के लिए, मानक प्रोटोकॉल के कई पहलुओं को नीचे वर्णित के रूप में अनुकूलित किया गया था।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bromophenol blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>B0126</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cellSens software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Image aqusition (https://www.olympus-lifescience.com/en/software/cellsens)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D. simulans</td>
			<td>Drosophila Species Stock Center at the University of California</td>
			<td></td>
			<td>Riverside California1 (https://www.drosophilaspecies.com/)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D. erecta</td>
			<td>Drosophila Species Stock Center at the University of California</td>
			<td></td>
			<td>Dere cy1(https://www.drosophilaspecies.com/)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D. pseudoobscura</td>
			<td>Drosophila Species Stock Center at the University of California</td>
			<td></td>
			<td>Eugene, Oregon(https://www.drosophilaspecies.com/)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D. mojavensis</td>
			<td>Drosophila Species Stock Center at the University of California</td>
			<td></td>
			<td>Chocolate Mountains, California (https://www.drosophilaspecies.com/)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Inox Biology</td>
			<td></td>
			<td>Catalog# 11252-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fuji</td>
			<td>Fuji</td>
			<td></td>
			<td>Image processing (https://hpc.nih.gov/apps/Fiji.html)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td>Catalog#16005-108</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kim wipes Tissue</td>
			<td>Kimtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope and camera</td>
			<td>Olympus SZ61 microscope equipped with an Olympus D-27 digital camera</td>
			<td></td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon R</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock</td>
			<td></td>
			<td>(https://bdsc.indiana.edu/ # 2376)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Catalog #FB0875713A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered Saline (PBS)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td></td>
			<td>Catalog # SH30258.01</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus SZ51</td>
			<td></td>
			<td>Visual magnification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring gut acidification in the adult drosophila intestine

फल मक्खी midgut कई क्षेत्रों के होते हैं, जिनमें से प्रत्येक कोशिकाओं से बना है कि आंत के उचित कामकाज के लिए आवश्यक अद्वितीय शारीरिक कार्यों को पूरा करते हैं। ऐसा ही एक क्षेत्र, तांबा सेल क्षेत्र (सीसीआर), मध्य मिडगट के लिए स्थानीयकृत है और इसमें भाग में, तांबे की कोशिकाओं के रूप में जानी जाने वाली कोशिकाओं के एक समूह का हिस्सा होता है। कॉपर कोशिकाएं गैस्ट्रिक एसिड स्राव में शामिल होती हैं, एक विकासवादी रूप से संरक्षित प्रक्रिया जिसकी सटीक भूमिका को खराब तरीके से समझा जाता है। यह पेपर वयस्क ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर आंत के अम्लीकरण के लिए परख करने के लिए उपयोग किए जाने वाले वर्तमान प्रोटोकॉल में सुधार का वर्णन करता है और दर्शाता है कि इसका उपयोग मक्खियों की अन्य प्रजातियों पर किया जा सकता है। विशेष रूप से, यह पेपर दर्शाता है कि आंत अम्लीकरण मक्खी की पोषण स्थिति पर निर्भर है और इस नई खोज के आधार पर एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। कुल मिलाकर, यह प्रोटोकॉल आंत अम्लीकरण के तंत्र के अंतर्निहित सामान्य सिद्धांतों को उजागर करने के लिए ड्रोसोफिला तांबे की कोशिकाओं का अध्ययन करने की संभावित उपयोगिता को दर्शाता है।

हमने ओरेगन आर मादा मक्खियों को 20 घंटे से अधिक समय तक भूखा रखा और फिर उन्हें ~ 12 घंटे के लिए बीपीबी (2%) के साथ पूरक भोजन खिलाया, जैसा कि पहले वर्णित है7,8,9,10,11।</sup...

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Monitoring Gut Acidification in the Adult Drosophila Intestine

यहां, हम इष्टतम आउटपुट के साथ ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में आंत अम्लीकरण की निगरानी के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। हम पहले ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में आंत अम्लीकरण की निगरानी के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हैं और फिर गैर-मॉडल ड्रोसोफिला प्रजातियों में इसके उपयोग का प्रदर्शन करते हैं।

वयस्क ड्रोसोफिला आंत में आंत अम्लीकरण की निगरानी

The fruit fly midgut consists of multiple regions, each of which is composed of cells that carry out unique physiological functions required for the ...

यह मजबूत और प्रामाणिक परिणामों के साथ ड्रोसोफिला आंत अम्लीकरण की निगरानी करने के लिए सबसे तेज़ और सही प्रोटोकॉल है। यह विधि कई जीवों में आंत अम्लीकरण की भूमिका को निर्धारित करने में मदद करेगी। और यह घटना है इस तकनीक की सादगी मुख्य लाभ है।इस प्रकार, इसका उपयोग गैर-मॉडल जीवों के लिए किया जा सकता है। यह विधि सेल लाइनों और लाइव संस्कृतियों पर 3 डी सहित कई प्रणालियों के लिए एसिड रिलीज की निगरानी कर सकती है। यह तकनीक न्यूनतम प्रयास के साथ सरल है।ब्रोमोफेनॉल नीले रंग का भोजन ताजा तैयार किया जाना चाहिए। इसके अलावा, जबकि विच्छेदन आंत को नहीं फैलाया जाना चाहिए। पीएच संवेदन Bromophenol नीले या BPB डाई के साथ मक्खी भोजन की तैयारी के साथ आंत अम्लीकरण निगरानी परख के लिए व्यवस्था शुरू करो.ऐसा करने के लिए, मक्खी के भोजन को माइक्रोवेव में पिघलाएं और इसे गुनगुना होने तक ठंडा होने दें। एक मिश्रण अच्छी तरह से मिश्रण के साथ गुनगुने भोजन के एक मिलीलीटर के लिए 4% BPB का एक मिलीलीटर जोड़ें। एक पिपेट का उपयोग करके, एक पेट्री डिश के केंद्र में लगभग 200 माइक्रोलीटर के एक बिंदु में बीपीबी युक्त मक्खी भोजन जोड़ें।इसके बाद, शून्य से दो दिन पुरानी गैर-कुंवारी महिला ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर मक्खियों को इकट्ठा करें, और मक्खियों को मानक मकई भोजन भोजन पर ठीक होने की अनुमति दें। प्रयोग से पहले, मक्खियों को कमरे के तापमान पर 24 घंटे के लिए भूखा रखें, जिसमें एक प्रयोगशाला पोंछे ऊतक होता है जो लगभग दो मिलीलीटर विआयनीकृत पानी से भिगोया जाता है। ताजा तैयार फ्लाई फूड के एकल डॉट्स वाले एक पेट्री डिश में भूखे मक्खियों को स्थानांतरित करें, जो 2% बीपीबी के साथ पूरक है, ताकि मक्खियों को प्रकाश के संपर्क में रहते हुए कमरे के तापमान पर चार घंटे के लिए चारा डालने की अनुमति मिल सके।चार घंटे के बाद मक्खियों को इकट्ठा करें, फिर एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत संदंश के साथ 1X PBS में anesthetized मक्खियों की हिम्मत को शल्य चिकित्सा से अलग करने के लिए आगे बढ़ें। मक्खियों की संख्या की गणना करें जो हिम्मत में खड़े मजबूत बीपीबी दिखाते हैं, और समीकरण का उपयोग करके प्रतिशत की गणना करते हैं। विच्छेदन के बाद, पीबीएस में नमूनों को एक ग्लास स्लाइड पर माउंट करें और तैयार स्लाइड को माइक्रोस्कोप के नीचे रखें।फिर आईपीएस का उपयोग करके फोकस को समायोजित करें। एक बार हो जाने के बाद, कैमरे के लिए शटर खोलने के लिए आईपीएस को बंद कर दें। आंत विच्छेदन के बाद, कुछ ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर मादा मक्खियों को एसिड का उत्पादन करने के लिए पाया गया था जैसा कि आंत के सीसीआर में पीले रंग द्वारा इंगित किया गया था।जबकि कुछ मक्खियों की आंतें नीली थीं जो मक्खियों की विफलता को अपनी हिम्मत को अम्लीकृत करने का सुझाव देती थीं। 30 मिनट के भीतर, लगभग 20% मक्खियों ने आंत को अम्लीकृत कर दिया था। एक घंटे के बाद, 40% आंत की हिम्मत ने अम्लीकरण दिखाया, जबकि दो से तीन घंटे के भोजन के बाद, अम्लीकृत हिम्मत का प्रतिशत 60 से 70% तक बढ़ गया लगभग 90 से 95% हिम्मत अम्लीकृत हो गई जब मक्खियों को चार घंटे तक खिलाया गया।दो अलग-अलग तापमान स्थितियों के लिए आंत अम्लीकरण में कोई अंतर नहीं देखा गया था। आंत अम्लीकरण प्रोटोकॉल की दक्षता का मूल्यांकन विभिन्न ड्रोसोफिला प्रजातियों में किया गया था। सभी परीक्षण की गई प्रजातियों ने मजबूत आंत अम्लीकरण दिखाया, यह सुझाव देते हुए कि प्रोटोकॉल को अन्य जीवों पर लागू किया जा सकता है।याद रखने के लिए सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि स्टार चार घंटे के लिए खमीर और ब्रोमोफेनोल नीले रंग के साथ पेट्री प्लेट में उड़ता है। यह तकनीक आंत अम्लीकरण में शामिल बुनियादी जीव विज्ञान और सेलुलर मार्ग को समझने में मदद करेगी। यह आंत अम्लीकरण से संबंधित बीमारियों को बनाने के लिए दवा लक्ष्य की पहचान करने में भी मदद करनी चाहिए।

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वयस्क ड्रोसोफिला के मस्तिष्क से पूरे सेल रिकॉर्डिंग

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निगरानी लारवल में हार्ट फंक्शन ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर शारीरिक अध्ययन के लिए

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Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

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वयस्क से Oenocytes के विच्छेदन ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

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इंसुलिन इंजेक्शन और Hemolymph निकालना वयस्क में इंसुलिन संवेदनशीलता उपाय ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Crustacean साथ लंबी अवधि के घातक विषाक्तता टेस्ट Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

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Apoptotic सेल क्लीयरेंस की इमेजिंग के दौरान जीते<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; Embryogenesis

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

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मोजाइक सेक्स का लाइव इमेजिंग के लिए टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; फोटोरिसेप्टर कोशिकाओं

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Gavaging Adult Zebrafish

वयस्क Zebrafish Gavaging

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...