Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af midler fra Statens Institut for Sundhed (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889). En del af dette arbejde blev udført i McKnight Brain Institute på National High Magnetic Field Laboratory's Advanced Magnetic Resonance Imaging and Spectroscopy (AMRIS) Facility, som støttes af National Science Foundation Cooperative Agreement No. DMR-1644779 og staten Florida.

Forsøg med mus blev håndteret i overensstemmelse med University of Florida Institutional Animal Care and Use Committee (protokolnummer #201909320). Den anvendte musestamme var C57BL/6J; alle mus var hanner. Denne metode er generelt anvendelig til undersøgelser, der også bruger andre standard musestammer. Denne operation udføres optimalt af to personer, der arbejder sammen.
1. Indledende opsætning
<ol><li>Perfuselever med perfusat indeholdende Krebs-Henseleit elektrolyt...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

Denne kirurgiske procedure er udfordrende og kræver omfattende praksis for at opnå reproducerbare resultater. Isofluran og bærergas bør justeres efter behov for at opretholde dyrets levedygtighed gennem så meget af det kirurgiske indgreb som muligt. Miljø, tidspunkt på dagen, alder, vægt og flere andre faktorer vil påvirke anæstesi. Vægt, kost, belastning af mus og alder kan påvirke operationen, da fedtopbygning kan forstyrre visualiseringen af portalvenen. Når du taper poterne ned, skal du sørge for ikke a...

Ex vivo-perfusioner er afgørende i undersøgelsen af levermetabolisme, og perfusion gennem portalvenen er standarden for disse undersøgelser. For at studere levermetabolisme isoleret skal leveren resekteres fra kroppen for at undgå komplikationer som følge af metabolisme i andre organer (dvs. helkropsmetabolisme) og for at udøve kontrol over hormontilgængeligheden (insulin, glukagon osv.). Denne tilgang kan være afgørende for at forstå virkningerne af sygdomme som diabetes, NAFLD og NASH på levermetabolisme samt mekanismer for lægemiddelvirkning. Denne artikel tjener som en guide til leverresektion og perfusion. Vi har udviklet en strømlinet procedure til at udføre disse metaboliske leverundersøgelser med tilstrækkelig stringens og reproducerbarhed. Hvis operationen ikke udføres korrekt, er der udtalt variabilitet i de opnåede metaboliske data. Vi beskriver en organiseret metode til at udføre portalvenekateterisering og leverresektion i forbindelse med metaboliske undersøgelser in situ i et nuklear magnetisk resonans (NMR) spektrometer, som beskrevet i litteraturen 1,2,3,4,5.
I øjeblikket er der ingen litteratur, der beskriver en ex vivo leverperfusion ved hjælp af en glassøjle inden for en NMR. Der er heller ikke en video- eller tekstpublikation, der giver et klart eksempel på, hvordan man udfører proceduren med museleveren, specifikt demonstrerer, hvordan man kateteriserer portalvenen, resekterer en lever, overfører og hænger leveren på en glassøjle. Da den genetisk modificerede mus allestedsnærværende bruges til at studere levermetabolisme, er dette en vigtig procedure, der fortjener en komplet beskrivelse. Leverperfusionsoperationer er ikke nye, men denne artikel er en guldstandardmetode ledsaget af en video, der demonstrerer den tekniske ekspertise, der er beskrevet i dette papir for at hjælpe alle, der er interesseret i denne procedure. Den metode, der præsenteres her, vil bedst kunne anvendes på realtidsmetabolisme til at detektere funktionen og omsætningen af metabolitter i sygdomsmodeller.
Denne metode bruger en 100 cm vandkappet glassøjle, som gør det muligt for leveren at hænge i bunden af kanylen indkapslet af perfusat inde i et NMR-rør. Opvarmet vand i glaskappen bruges til at kontrollere perfusattemperaturen. En tyndlags oxygenator er under tryk med 95% / 5%O2 / CO2 til pH-kontrol. Ved hjælp af tre separate pumper indstilles perfusatsøjlehøjden, hvilket giver konstant tryk til leveren. Strømningshastigheder styres ikke ud over anvendelsen af konstant tryk (figur 1). For at bekræfte, at leveren fungerer korrekt, foretages iltmålinger sammen med strømningshastigheder. I vores hænder fører dette sæt forudsætninger til meget repeterbare NMR-eksperimenter til vurdering af levermetabolisk funktion.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

Metaboliske sygdomme som diabetes, prædiabetes, ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD) og ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH) bliver mere og mere almindelige. Ex vivo leverperfusioner giver mulighed for en omfattende analyse af levermetabolisme ved hjælp af nuklear magnetisk resonans (NMR) under ernæringsmæssige forhold, der kan kontrolleres strengt. Da silicosimuleringer fortsat primært er et teoretisk middel til at vurdere hormonvirkninger og virkningerne af farmaceutisk intervention, er den perfusionerede lever fortsat et af de mest værdifulde testsenge til forståelse af levermetabolisme. Da disse undersøgelser styrer grundlæggende indsigt i leverfysiologi, skal resultaterne være nøjagtige og reproducerbare. Den største faktor i reproducerbarheden af ex vivo leverperfusion er kvaliteten af operationen. Derfor har vi introduceret en organiseret og strømlinet metode til at udføre ex vivo museleverperfusioner i forbindelse med in situ NMR-eksperimenter. Vi beskriver også en unik applikation og diskuterer almindelige problemer, der opstår i disse undersøgelser. Det overordnede formål er at give en ukompliceret guide til en teknik, vi har forfinet gennem flere år, som vi anser for den gyldne standard for at opnå reproducerbare resultater i leverresektioner og perfusioner i forbindelse med in situ NMR-eksperimenter. Afstanden til midten af feltet for magneten samt vævets utilgængelighed til intervention under NMR-eksperimentet gør vores metoder nye.

Leverfunktionen vurderes primært ud fra iltforbrug og strømningshastighed. En strømningshastighed på 4-8 ml/min og et iltforbrug på 1 μmol/min.g er typisk. Disse foranstaltninger vil variere afhængigt af specifikke eksperimentelle forhold og biologiske forskelle.
Den nøjagtige mængde isofluran, der anvendes, afhænger af den type anæstesisystem, der anvendes, samt musens miljø og alder / vægt. Under operationen ændres isofluran og leveringsgassen ikke, selv om nogle ændringer kan...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Protokollen beskriver en ligetil metode til resektionering af en intakt muselever til metaboliske undersøgelser gennem portalveneperfusion.

Ex Vivo Leverperfusion gennem portalvenen i musen

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Denne video demonstrerer en strømlinet procedure udviklet til at udføre metaboliske leverundersøgelser med tilstrækkelig stringens og reproducerbarhed, som kan tjene som en vejledning til at udføre leverresektion for sine vivo perfusionsundersøgelser. Teknikken anvendes bedst til realtidsmetabolisme til at detektere funktionen i omsætningsmetabolitter i sygdomsmodeller. Perfusion muliggør præcis kontrol af næringsstoffer og hormoner, der er tilgængelige for leveren.Selvom teknikken ikke er rettet mod terapi, kan leverperfusioner være medvirkende til at forstå ætiologien og virkningen af sygdomme, såsom diabetes, NAFLD og NASH på levermetabolisme. Efterhånden som nye lægemidler udvikles, bliver metoder til vurdering af levercentral energimetabolisme afgørende. Denne metode kan bruges med modeller af flere sygdomme, herunder kræft og på flere forskellige stadier af sygdomsprogression.Til at begynde med skal du placere musens næse i en næsekegle efter induktion af anæstesi og tapet ned sine poter. Administrer lidokain gennem en subkutan injektion bilateralt i den forreste iliac crest region. Udfør en tåklemmetest for at bekræfte fraværet af alle smertereflekser.Udfør cøliotomi for at udsætte de indre organer ved at lave et tre centimeter bredt snit. Udvid snittet ved hjælp af en hæmostat, der trækker trækkraften ved at klemme på xiphoid-processen. Brug en applikator med bomuldsspids til at rydde de små og tyktarmen, der dækker portalvenen.Placer en silkesutur under buen af portalvenen proksimal til leveren. Placer den anden silkesutur proksimal eller distal af den ringere mesenteriske venedistal fra leveren ved hjælp af en 2-0 sutur. Når suturerne er på plads, kan du kanuere portalvenen med et 22 gauge kateter, så skråningen peger op.Indtast portalvenen i højst en 15 graders vinkel. Bind den første sutur forbi katetertapperen. Når portalvenen er kanylet, skal du forankre kateteret to til tre millimeter distal fra grenen af portalvenen med silkesuturen.Fastgør den nederste del af kateteret med den anden sutur. Bind en knude med suturen for at fastgøre kateteret til den distale del af portalvenen og det omgivende væv. Når kateteret er sikret, indsættes en sprøjte på 1 milliliter med en 27 gauge nål med en længde på 38,1 millimeter i kateteret for at skylle blod- og luftbobler.Brug en indvendig diameter på en millimeter og et silikonerør med en ydre diameter med en fast stophane til at koble perfusionskolonnen til kateteret, hvilket tillader bufferens strømning ind i leveren og markerer starten på perfusionen. Efter start af en timer skal du lindre øget vaskulært tryk ved snit ved hjælp af en saks i den ringere vena cava. Bekræft strømmen af perfusat gennem leveren ved at observere den homogene ændring i leverfarve fra lyserød eller rød til en lysegul.Når strømmen er bekræftet, skal du skære maven, tyndtarmen, tyktarmen og den højre nyre fra omgivende væv. Ved hjælp af den kirurgiske assistent manøvrerer leveren rundt om mave- og brysthulen, da kirurgen skærer gennem parietal peritoneum og thoraxvæv for at resektere leveren. Løft leveren opad og skær det resterende bindevæv, der holder leveren på plads med en saks.Manipuler langsomt leveren for at lette synet. Målingerne af strømningshastighed og iltforbrug er afgørende for at overvåge leverens sundhed og funktion. Der er ofte en lille forskel i iltforbruget mellem fodrede og fastede lever, hvilket kan tilskrives øgede energibehov pålagt af glukogenese i den faste lever.De vigtigste trin inkluderer indsættelse af kateteret i en 15 graders vinkel, visualisering af kateterspidsen, rullning af håndleddet og skuldrene, når suturen bindes, og undgår torsion på portalvenen. Det udskårne væv kan undersøges efter perfusionen med et vilkårligt antal biokemiske eller analytiske tilgange. Ex vivo-perfusioner i kombination med MR i realtid og spektroskopi muliggør måling af metaboliske fluxer i realtid.Naturligvis strækker dette sig til forstyrrelse af flux fra en kontroltilstand som reaktion på sygdommene.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Påvisning af pH-afhængige aktivitet af<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Chaperone HdeB<em&gt; In vitro</em&gt; og<em&gt; In vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Hjernemembran Fraktionering: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Tilnærmelse til vurdering af subsynaptisk protein lokalisering

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Rensning af hepatocytter og sinusformet endotelceller fra mus lever Perfusion

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

En kolorimetriske metode til måling af jernindhold i planter

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome profilering i Leishmania, menneskelige celler og mus Testis

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Dynamisk proteom og miRNA analyse af Polysomes fra isolerede mus hjertet efter Langendorff Perfusion

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Måling og fortolke ilt forbrug satser helt flyve hoved segmenter

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

En in vivo østrogenmangel muse model til screening eksogene østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Oversættelse af Ribosome affinitets rensning (TRAP) for RNA-isolation fra endotelceller in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

I Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for studiet af proteininteraktioner i Caenorhabditis elegans

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...