Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door financiering van de National Institutes of Health (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889). Een deel van dit werk werd uitgevoerd in het McKnight Brain Institute in de Advanced Magnetic Resonance Imaging and Spectroscopy (AMRIS) Facility van het National High Magnetic Field Laboratory, die wordt ondersteund door de National Science Foundation Cooperative Agreement No. DMR-1644779 en de staat Florida.

Experimenten met muizen werden behandeld in overeenstemming met de University of Florida Institutional Animal Care and Use Committee (protocolnummer # 201909320). De gebruikte muizenstam was C57BL/6J; alle muizen waren mannelijk. Deze methode is over het algemeen ook toepasbaar voor studies met andere standaard muizenstammen. Deze operatie wordt optimaal uitgevoerd door twee personen die samenwerken.
1. Initiële set-up
<ol><li>Perfuseer levers met perfusaat dat Krebs-Hensel...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

Deze chirurgische ingreep is een uitdaging en vereist uitgebreide oefening om reproduceerbare resultaten te bereiken. Isofluraan en dragergas moeten indien nodig worden aangepast om de levensvatbaarheid van het dier te behouden gedurende zoveel mogelijk van de chirurgische ingreep. Omgeving, tijd van de dag, leeftijd, gewicht en verschillende andere factoren zullen de anesthesie beïnvloeden. Gewicht, dieet, muizenstam en leeftijd kunnen van invloed zijn op de operatie, omdat vetopbouw het visualiseren van de poortader k...

Ex vivo perfusies zijn cruciaal in de studie van het levermetabolisme en perfusie via de poortader is de standaard voor deze studies. Om het levermetabolisme afzonderlijk te bestuderen, moet de lever uit het lichaam worden gereseceerd om complicaties als gevolg van het metabolisme in andere organen (d.w.z. het metabolisme van het hele lichaam) te voorkomen en om controle uit te oefenen over de beschikbaarheid van hormonen (insuline, glucagon, enz.). Deze aanpak kan essentieel zijn voor het begrijpen van de effecten van ziekten zoals diabetes, NAFLD en NASH op het levermetabolisme, evenals mechanismen voor de werking van geneesmiddelen. Dit artikel dient als een gids voor hepatische resectie en perfusie. We hebben een gestroomlijnde procedure ontwikkeld om deze metabole leverstudies met voldoende nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid uit te voeren. Als de operatie niet correct wordt uitgevoerd, is er een uitgesproken variabiliteit in de verkregen metabole gegevens. We beschrijven een georganiseerde methode om portaladerkatheterisatie en leverresectie uit te voeren in de context van metabole studies in situ in een kernspinresonantie (NMR) spectrometer, zoals beschreven in de literatuur 1,2,3,4,5.
Momenteel is er geen literatuur die een ex vivo leverperfusie beschrijft met behulp van een glazen kolom binnen een NMR. Evenmin is er een video- of tekstpublicatie die een duidelijk voorbeeld geeft van hoe de procedure met de lever van de muis moet worden uitgevoerd, met name door te demonstreren hoe de poortader moet worden gekatheteriseerd, een lever kan worden gereseceerd, overgedragen en de lever aan een glazen kolom kan worden opgehangen. Omdat de genetisch gemodificeerde muis alomtegenwoordig wordt gebruikt voor het bestuderen van het levermetabolisme, is dit een essentiële procedure die een volledige beschrijving verdient. Leverperfusieoperaties zijn niet nieuw, maar dit artikel is een gouden standaardmethode vergezeld van een video die de technische uitmuntendheid demonstreert die in dit artikel wordt beschreven om iedereen die geïnteresseerd is in deze procedure te helpen. De hier gepresenteerde methode zou het beste kunnen worden toegepast op real-time metabolisme om de functie en omzet van metabolieten in ziektemodellen te detecteren.
Deze methode maakt gebruik van een 100 cm wateromhulde glazen kolom, waardoor de lever aan de onderkant van de canule kan hangen, ingekapseld door perfusaat in een NMR-buis. Verwarmd water in de glazen mantel wordt gebruikt om de perfusaattemperatuur te regelen. Een dunne laag oxygenator wordt onder druk gezet met 95%/5% O2/CO2 voor pH-controle. Door gebruik te maken van drie afzonderlijke pompen wordt de perfusaatkolomhoogte ingesteld, die zorgt voor een constante druk op de lever. De stroomsnelheden worden niet geregeld na de toepassing van constante druk (figuur 1). Om te bevestigen dat de lever naar behoren functioneert, worden zuurstofmetingen uitgevoerd samen met stroomsnelheden. In onze handen leidt deze set van randvoorwaarden tot zeer herhaalbare NMR-experimenten voor de beoordeling van de leverstofwisselingsfunctie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

Metabole ziekten zoals diabetes, pre-diabetes, niet-alcoholische leververvetting (NAFLD) en niet-alcoholische steatohepatitis (NASH) komen steeds vaker voor. Ex vivo leverperfusies maken een uitgebreide analyse van het levermetabolisme mogelijk met behulp van nucleaire magnetische resonantie (NMR), in voedingsomstandigheden die rigoureus kunnen worden gecontroleerd. Omdat silico-simulaties een voornamelijk theoretisch middel blijven om hormoonwerkingen en de effecten van farmaceutische interventie te beoordelen, blijft de geperfuseerde lever een van de meest waardevolle testbanken voor het begrijpen van het levermetabolisme. Omdat deze studies basisinzichten in de leverfysiologie begeleiden, moeten de resultaten nauwkeurig en reproduceerbaar zijn. De grootste factor in de reproduceerbaarheid van ex vivo leverperfusie is de kwaliteit van de chirurgie. Daarom hebben we een georganiseerde en gestroomlijnde methode geïntroduceerd om ex vivo leverperfusies van muizen uit te voeren in de context van in situ NMR-experimenten . We beschrijven ook een unieke toepassing en bespreken veelvoorkomende problemen die in deze onderzoeken worden aangetroffen. Het algemene doel is om een ongecompliceerde gids te bieden voor een techniek die we in de loop van meerdere jaren hebben verfijnd en die we beschouwen als de gouden standaard voor het verkrijgen van reproduceerbare resultaten in hepatische resecties en perfusies in de context van in situ NMR-experimenten. De afstand tot het midden van het veld voor de magneet en de ontoegankelijkheid van het weefsel voor interventie tijdens het NMR-experiment maakt onze methoden nieuw.

De leverfunctie wordt voornamelijk beoordeeld aan de hand van het zuurstofverbruik en de stroomsnelheid. Een debiet van 4-8 ml/min en zuurstofverbruik van 1 μmol/min.g is typisch. Deze maatregelen zullen variëren afhankelijk van specifieke experimentele omstandigheden en biologische verschillen.
De exacte hoeveelheid isofluraan die wordt gebruikt, is afhankelijk van het type anesthesiesysteem dat wordt gebruikt, evenals de omgeving en leeftijd / gewicht van de muis. Tijdens de operatie veran...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Het protocol beschrijft een eenvoudige methode voor het resectie van een intacte muizenlever voor metabolische studies door middel van poortaderperfusie.

Ex Vivo Leverperfusie door de poortader in muis

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Deze video demonstreert een gestroomlijnde procedure die is ontwikkeld om metabole leverstudies uit te voeren met voldoende nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid, die als leidraad kan dienen voor het uitvoeren van leverresectie voor de vivo perfusiestudies. De techniek kan het beste worden toegepast op real-time metabolisme om de functie te detecteren, in omzetmetabolieten in ziektemodellen. Perfusie maakt nauwkeurige controle van voedingsstoffen en hormonen beschikbaar voor de lever mogelijk.Hoewel de techniek niet gericht is op therapie, kunnen leverperfusies een belangrijke rol spelen bij het begrijpen van de etiologie en impact van ziekten, zoals diabetes, NAFLD en NASH op het levermetabolisme. Naarmate nieuwe geneesmiddelen worden ontwikkeld, worden methoden voor het beoordelen van het centrale energiemetabolisme van de lever essentieel. Deze methode kan worden gebruikt met modellen van verschillende ziekten, waaronder kankers en in verschillende stadia van ziekteprogressie.Plaats om te beginnen de neus van de muis in een neuskegel na de inductie van anesthesie en plak de poten af. Dien lidocaïne toe via een subcutane injectie bilateraal in het voorste iliacale kamgebied. Voer een teenknijptest uit om de afwezigheid van alle pijnreflexen te bevestigen.Voer celiotomie uit om de inwendige organen bloot te leggen door een drie centimeter brede incisie te maken. Breid de incisie uit met behulp van een hemostaat die de tractie trekt door op het xiphoid-proces te klemmen. Gebruik een applicator met katoenen punt om de dunne en dikke darm die de poortader bedekt, te verwijderen.Plaats een zijden hechting onder de boog van de poortader proximaal aan de lever. Plaats de tweede zijden hechting proximaal of distal van de inferieure mesenteriale ader distal uit de lever met behulp van een 2-0 hechting. Zodra de hechtingen op hun plaats zijn, cannuleer je de poortader met een 22 gauge katheter, waardoor de schuine kant naar boven gericht blijft.Betreed de poortader in een hoek van niet meer dan 15 graden. Bind de eerste hechting langs de kathetertapper. Nadat de poortader is gecannuleerd, verankert u de katheter twee tot drie millimeter distal van de tak van de poortader met de zijdehechting.Zet het onderste deel van de katheter vast met de tweede hechting. Bind een knoop met de hechtdraad om de katheter vast te zetten aan het distale deel van de poortader en het omliggende weefsel. Nadat de katheter is vastgezet, plaatst u een spuit van één milliliter met een naald van 27 gauge met een lengte van 38,1 millimeter in de katheter om bloed en luchtbellen te spoelen.Gebruik een siliconenbuis met een binnendiameter van één millimeter en een siliconenbuis met een vaste stopkraan om de perfusiekolom aan de katheter te koppelen, waardoor de buffer in de lever kan stromen en het begin van de perfusie wordt gemarkeerd. Verlicht na het starten van een timer de verhoogde vasculaire druk door incisie met behulp van een schaar in de inferieure vena cava. Bevestig de stroom van perfusaat door de lever door de homogene verandering in leverkleur van roze of rood naar lichtgeel te observeren.Zodra de stroom is bevestigd, snijdt u de maag, dunne darm, dikke darm en de rechternier uit het omliggende weefsel. Manoeuvreer met behulp van de chirurgische assistent de lever rond de buik- en borstholte terwijl de chirurg door het pariëtale peritoneum en thoracale weefsel snijdt om de lever te reseceren. Til de lever naar boven en knip de resterende bindweefsels die de lever op zijn plaats houden met een schaar.Manipuleer langzaam de lever voor het gemak van het zicht. De metingen van het debiet en het zuurstofverbruik zijn van vitaal belang voor het bewaken van de gezondheid en functie van de lever. Er is vaak een klein verschil in zuurstofverbruik tussen gevoede en nuchtere levers, wat kan worden toegeschreven aan de verhoogde energiebehoefte die wordt opgelegd door glucogenese in de nuchtere lever.De belangrijkste stappen zijn het inbrengen van de katheter in een hoek van 15 graden, het visualiseren van de kathetertip, het rollen van de pols en schouders bij het binden van de hechtdraad en het vermijden van torsie op de poortader. Het weggesneden weefsel kan na de perfusie worden bestudeerd met een willekeurig aantal biochemische of analytische benaderingen. Ex vivo perfusies in combinatie met real-time MRI en spectroscopie maken het mogelijk om metabole fluxen in real-time te meten.Uiteraard strekt dit zich uit tot verstoring van de flux vanuit een controletoestand als reactie op de ziekten.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detectie van de pH-afhankelijke activiteit van<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Chaperone HdeB<em&gt; In Vitro</em&gt; en<em&gt; In Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Breinmembraanfractie: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Aanpak om de subsynaptische eiwit lokalisatie te beoordelen

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Zuivering van hepatocyten en sinusvormige endotheliale cellen van lever muis perfusie

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Een colorimetrische methode voor het meten van ijzergehalte in planten

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysoom profilering in Leishmania, menselijke cellen en muis Testis

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Dynamische Proteomic en miRNA analyse van Polysomes van geïsoleerde muis hart na Langendorff perfusie

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Meten en interpreteren van zuurstof verbruik geheel vliegen hoofd segmenten

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

Een in vivo oestrogeen deficiëntie muis model voor het screenen van exogene oestrogeen behandelingen van cardiovasculaire disfunctie na de menopauze

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Het vertalen van ribosome Affiniteits zuivering (TRAP) voor RNA-isolatie van endotheel cellen in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting voor de studie van eiwitinteracties in Caenorhabditis elegans

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...